Схема микробиологической диагностики дизентерии

Дизентерия — антропонозное инфекционное заболевание, вызываемое бактериями рода Shigella,характеризующееся язвенным поражением толстого кишечника и общей интоксика­цией организма. Классификация возбудителей дизентерии (шигелл) представлена в таблице 12, методы микробиологической диагностики в схеме 13.

Таблица 13.Классификация шигелл

Виды шигелл	Серовары шигелл
Shigella dysenteriae	1-12
Shigella flexneri	1a, 1b, 2a, 2b, 3a, 3b, 4a, 4b, 5,6, var X, var Y
Shigella boydii	1-18
Shigella sonnei	-

Экспресс-методы(индикацияпатогенной E.coli или ее продуктов в исследуемом материале) ДНК-зонды или ПЦР для выявления специфического фрагмента ДНК шигелл, РИФ

Микроскопический метод при дизентерии не применяет­ся ввиду морфологического сходства шигелл с другими энтеробактериями.

Бактериологический методявляется основным методом лабораторной диагностики дизентерии.Исследуемый материалзасевают на среды Плоскирева и Эндо в чашках Петри, а также на селенитовую среду для накопления, с которой через 16— 18 ч делают пересев на указанные плотные питательные среды. Посе­вы выращивают в термостате при 37 0 С 18 — 24 часов.

На второй день изучают характер колоний. Бесцветные лактозоотрицательные гладкие колонии шигелл пере­севают на одну из полиуглеводных сред (Олькеницкого, Ресселя, Клиглера) для накопления чистой культуры. На 3-й день учитывают характер роста на полиуглеводной среде, а также пересе­вают материал на дифференциальные среды (Гисса и др.) для биохимической идентификации выделенной куль­туры. Определяют антигенную структуру выделенной культуры с помощью ОРА с целью ее идентификации до уровней вида и серовара. На 4-й день учитывают результаты биохими­ческой активности (табл. 14).

Таблица 14. Биохимические свойства шигелл

Виды шигелл	Ферментация	индол
Глюкозы	лактозы	маннита	дульцита	ксилозы	орнитина
S. dysenteriae	К	-	-	-	-	-	-
S. flexneri	К	-	к	-	-	-	-
S. boydii	К	-	к	-	±	-	-
S. sonnei	К	±	к	к +	±	к	+

Шигеллы, в отличие от эшерихий, являются неподвижными микроорганизмами, они не ферментируют лактозу, глюкозу разлагают без образования газа, не декарбоксилируют лизин. Для серотипирования сначала ставят РА на стекле со смесью сывороток против пре­обладающих в данной местности видов и вариантов шигелл, а затем РА на стекле с монорецепторными видовыми сыворотками. Определяют также чувствительность выделенной культуры к поливалентному дизентерийному бактериофагу и антибиотикам. С эпидемиологи­ческой целью определяют фаговар и колициновар выделенных шигелл. Одним из свойств шигелл является их способность вызывать кератит у морских свинок (кератоконъюнктивальная проба)

Серологический метод.Для определения антител в крови больных дизентерией (обычно хронической формой) применяют РНГА с эритроцитарны­ми шигеллезными диагностикумами. Диагностические титры: к шигеллам Флекснера у взрослых - 1:400, у детей до 3 лет - 1:100, у детей старше 3 лет - 1:200, к остальным шигеллам - 1:200. Реакцию ставят, как правило, повторно с сыворот­кой крови, взятой не менее чем через 7 дней; диагностическое значение имеет нарастание титра антител в четыре и более раз.

Экспресс-методы при дизентерии - прямая и непрямая РИФ, реакция ко-агглютинации, ИФА, РНГА с антительными эритроцитарными диагностикумами для быстрого обнаружения шигелл в исследуемом материале (обычно в фекалиях), а также ПЦР.

Самостоятельная работа студентов

1. Изучить основные этапы выделения чистой культуры шигелл. Учесть посевы на среды Плоскирева, Левина, Олькеницкого (демонстрация). Отметить наличие лактозоотрицательных бесцветных колоний на средах Плоскирева, Левина.

2. Провести контроль чистоты выделенной культуры шигелл.Со среды Олькеницкого приготовить мазок, окрасить его по Граму и промикроскопировать. Промикроскопировать и зарисовать де­монстрационные препараты возбудителей дизентерии Sh.dysenteriae, Sh.flexneri, Sh.sonnei - грамотрицательные палочки с закругленными краями;

3. Идентификация выделенной культуры шигелл:

· по антигенным свойствам – постановка и учет РА на стекле со смесью видовых агглютинирующих сывороток Sh.dysenteriae, Sh.flexneri, Sh.boydii, Sh. sonnei и культу­рой, выделенной на среде Олькенипкого. Учет РА на стекле с видовыми дизентерийными сыворотками;

· по ферментативным свойствам - учет биохимической активности и фаголизабельности выделенной культуры шигелл, (демонстрация).

5. Определение чувствительности выделенной культуры к анти­биотикам методом бумажных дисков (демонстрация).

6. Изучить биопрепараты, используемые для диагностики, лечения и профилактики бактериальной дизентерии и холеры:

· агглютинирующие адсорбированные сыворотки к шигеллам Sh.dysenteriae, Sh.flexneri, Sh.boydii, Sh.sonnei. Используются для постановки реакции агглютинации при идентификации шигелл.

· дизентерийный бактериофагтаблетированный. Используется для профилактики и лечения дизентерии.

· диагностикумы эритроцитарные из шигелл Флекснера и Зонне. Используются для постановки РНГА при серодиагностике ди­зентерии.

· вакцина дизентерийная ШИГЕЛЛВАК,из липополисахарида шигелл Зонне.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Дизентерия (шигеллез) – инфекционное заболевание, вызываемое бактериями роды Shigella, протекающее с преимущественным поражением толстой кишки.

Международная классификация шигелл построена с учетом их биохимических признаков: манит неферментирующие (Shigella dysenteriae), манит ферментирующие (S.flexneri, S.boydii, S.sonnei), а также с учетом антигенной структуры.

S.sonnei могут медленно сбраживать лактозу (в течении 2 суток).

Морфология и тинкториальные свойства.

Короткие, неподвижные Гр- палочки с закругленными концами. Не образуют спор и капсул (некоторые имеют микрокапсулу).

Факультативные анаэробы. Оптимум 37⁰, рН 7,2. Не требовательны к питательным средам. Для обогащения используют селенитовый бульон. На жидких средах – диффузное помутнение.

На плотных средах – колонии круглые, выпуклые, полупрозрачные, в случае диссоциации образуются шероховатые колонии R-формы. На МПБ – рост в виде равномерного помутнения, шероховатые формы образуют осадок. Свежевыделенные культуры шигелл Зонне обычно образуют колонии двух типов: мелкие круглые выпуклые (1 фаза) и круглые плоские (2 фаза). Характер колонии зависит от наличия (1 фаза) или отсутствия (2 фаза) плазмиды, которая также определяет вирулентность шигелл Зонне.

Оксидаза отрицательны. Маннит положительны и отрицательны.

Тест Хьюлий-Всон – ферментация глюкозы в аэробных и анаэробных условиях.

Ферментация глюкозы с образованием кислоты без газа (кроме некоторых биотипов S.flexneri).

Не ферментируют лактозу (кроме шигелл Зонне).

Обнаружены различные по специфичности О-Аг: общие для семейства, родовые, видовые, групповые и типоспецифические, а также К-Аг.

Высокая устойчивость к факторам внешней среды. Выживают в высохших испражнениях до 4-5 месяцев, в почве до 3-4 месяцев, в воде 0,5-3 месяца, в овощах и фруктах до 2 недель и т.д. При 60⁰ погибают через 15-20 минут. Чувствительны к дезинфектантам.

Способны внедряться в эпителиальные клетки, размножаться в них и вызывать их гибель. Этот эффект может быть обнаружен с помощью: введения под нижнее веко морской свинки одной петли культуры шигелл (развивается серозногнойный кератоконъюнктивит), заражение куриных эмбрионов (гибель), заражение интраназально белых мышей (пневмония). Основные факторы патогенности:

· Факторы, определяющие взаимодействие с эпителием слизистой оболочки

Факторы адгезии и колонизации (пили, белки наружной мембраны и ЛПС). Ферменты, разрушающие слизь – нейраминидаза, гиалуронидаза, муциназа.

· Факторы, обеспечивающие устойчивоть к гуморальным и клеточным механизмам защиты макроорганизма и способность шигелл размножаться в его клетках

Факторы инвазии, способствуют проникновению шигелл в энтероциты и размножению в них и в макрофагах с одновременным проявлением цитотоксического и энтеротоксического эффекта

· Способность продуцировать токсины и токсические продукты, которые обусловливают развитие собственно патологического процесса

Два типа экзотоксина: экзотоксины Шига и шигаподобные(SLT-1 и SLT-2). Токсин Шига оказывает прямое цитотоксическое действие.

Источник инфекции – больной человек. Никакие животные в природе дизентерией не болеют. В экспериментальных условиях дизентерию удается воспроизвести только у обезьян. Способ заражения фекально-оральный. Пути передачи – водный (преобладает для шигелл Флекснера), пищевой, особенно через молочные продукты (шигеллы Зонне) и контактно-бытовой (S.dysenteriae).

Патогенез и клиника.

Инкубационные период 2-5 дней, иногда меньше суток.

Формирование инфекционного очага в слизистой оболочке нисходящего отдела толстого кишечника, куда проникает возбудитель дизентерии, носит циклический характер: адгезия, колонизация, внедрение шигелл в цитоплазму энтероцитов, их внутриклеточное размножение, разрушение и отторжение эпителиальных клеток, выход возбудителей в просвет кишечника; затем начинается очередной цикл: адгезия, колонизация и т.д. В результате повторяющихся циклов воспалительный очаг разрастается, образующие язвы, соединяясь, увеличивают обнаженность кишечной стенки, в следствие чего в испражнениях появляются кровь, слизисто-гнойные комочки, полиморфно-ядерные лейкоциты.

Цитотоксины (SLT-1 и SLT-2) обуславливают разрушение клеток, энтеротоксин – диарею, эндотоксины – общую интоксикацию.

Наиболее тяжело протекает дизентерия, вызванная S.dysenteriae, наиболее легко - дизентерия Зонне.

Прочный и достаточно длительный иммунитет. Однако иммунитет носит типоспецифический характер, прочного перекрестного иммунитета не возникает.

Материал для исследования – испражнения, рвотные массы, пищевые остатки, кровь.

Основное метод – бактериологический. Схема выделения возбудителя: посев на дифференциально-диагностические среды Эндо и Плоскирева (параллельно а среду обогащения с последующим посевом на среды Эндо и Плоскирева) для выделения изолированных колоний, получение чистой культуры, изучение ее биохимических свойств и, с учетом последних, идентификация при помощи поливалентных и моновалентных диагностических агглютинирующих сывороток.

Для обнаружения антигенов в крови, моче и испражнениях могут быть использованы методы РПГА, РСК, реакция коагглютинации (в моче и испражнениях), ИФМ, РАГА (в крови). Эти методы высокоэффективны, специфичны и пригодны для ранней диагностики.

Для серологической диагностики могут быть использованы РПГА с соответствующими эритроцитарными диагностикумами, иммунофлуоресцентный метод, метод Кумбса (определение титра неполных антител).

Диагностическое значение также имеет аллергическая проба с дизентерином (раствор белковых фракций шигелл Флекснера и Зонне). Реакцию учитывают через 24 часа. Она считается положительной при наличии гиперемии и инфильтрата диаметром 10-20 мм.

Восстановление нормального водно-солевого обмена, рациональное питание, дезинтоксикация, рациональная антибиотикотерапия. Раннее применение поливалентного дизентерийного бактериофага.

Для создания искусственного иммунитета против дизентерии были использованы различные вакцины: из убитых бактерий, химические, спиртовая, но они оказались малоэффективны и сняты с производства. Поэтому проблема специфической профилактики остается нерешенной. Основной путь борьбы с заключается в улучшении системы водоснабжения и канализации, обеспечение строгих санитарно-гигиенических режимов на предприятиях пищевой, в особенности молочной промышленности, в детских учреждениях, местах общественного пользования и соблюдении личной гигиены.

Глава 20. Шигеллы - Ф. К. Черкес

Первый возбудитель дизентерии был открыт А. В. Григорьевым (1891), а в 1898 г. японский ученый Шига изучил и описал его. В последующие годы были выделены и описаны другие представители этого рода: Флекснер (1900), Зонне (1915), Штутцер - Шмитц (1917), Лардж - Сакс (1934).

Согласно Международной классификации все бактерии, вызывающие дизентерию, в честь Шига объединены в один род - шигеллы.

Морфология. Шигеллы - это небольшие (2-3 × 0,4-0,6 мкм) палочки с закругленными концами. Отличаются от остальных представителей семейства Enterobacteriaceae отсутствием жгутиков. Они не имеют спор и капсул. Грамотрицательны.

Культивирование. Шигеллы - факультативные анаэробы. Неприхотливы к питательным средам. Размножаются на МПА и МПБ при температуре 37° С и рН 7,2-7,4. Элективными и дифференциально-диагностическими средами для них являются среды Плоскирева, Эндо, ЭМС. Растут в виде небольших, полупрозрачных, сероватых, круглых колоний, размером 15-2 мм в S-форме. Исключением являются шигеллы Зонне, которые часто диссоциируют, образуя крупные, плоские, мутные, с изрезанными краями колонии R-формы (рис. 44). В жидких питательных средах шигеллы дают равномерную муть, R-формы образуют осадок.

Рис. 44. Схема бактериологического исследования при дизентерии

Ферментативные свойства. Ферментативные свойства шигелл менее выражены, чем у других представителей Enterobacteriaceae: они расщепляют углеводы без газообразования, не расщепляют лактозу и сахарозу. Исключением являются шигеллы Зонне, которые на 2-3-й сутки расщепляют эти углеводы.

Протеолитические свойства у шигелл мало выражены - образование индола и сероводорода непостоянно, молоко они свертывают, желатин не разжижают.

По отношению к манниту все шигеллы делятся на расщепляющие и нерасщепляющие маннит (табл. 37).

Таблица 37. Ферментативные свойства шигелл

Примечание. к - расщепление с образованием кислоты.

В настоящее время шигеллы Зонне делят на четыре ферментативные типа. Различаются они по способности расщеплять рамнозу и ксилозу (табл. 38).

Таблица 38. Биоварианты шигелл Зонне

Примечание. + расщепление; (+) расщепление через 3-5 дней; - не изменяется.

Токсинообразование. Шигеллы обладают эндотоксином. Исключением являются шигеллы Шиги, которые помимо эндотоксина выделяют экзотоксин, оказывающий нейротоксическое действие.

Антигенная структура и классификация. Шигеллы содержат соматические антигены, к которым относятся групповые и типовые антигены. По Международной классификации шигеллы подразделяют на четыре группы, обозначаемые латинскими большими буквами А, В, С, D.

Группа A S. dysenteriae: 1 - Григорьева - Шиги; 2 - Штутцера - Шмитца; 3-7 - Лардж - Сакса и 8-10 - провизорные. Представители этой группы имеют только типовые антигены, обозначаемые арабскими цифрами.

Группа В S. flexneri. Микробы этой группы имеют более сложную антигенную структуру - они содержат типовые антигены, обозначаемые римскими цифрами, и групповые антигены, обозначаемые арабскими цифрами. Шигеллы Флекснера имеют 6 серовариантов. Шигеллы Флекснер 6 раньше обозначали как подвид S. newcastle.

Группа С S. boydii. Имеет только типовые антигены. В этой группе 15 серологических типов.

Группа D S. sonnei имеет свой видовой антиген (табл. 39).

Таблица 39. Классификация бактерий рода Shigella

При микробиологическом исследовании в ответах указывают серовариант и подсеровариант выделенной культуры. Например, выделена культура шигелл Флекснер 1а.

Устойчивость к факторам окружающей среды. Температура 100° С убивает шигеллы мгновенно. Температура 60° С убивает их через 20-30 мин. К низким температурам шигеллы устойчивы - в речной воде они сохраняются до 3 мес, на овощах и фруктах - до 10-15 мес. Солнечный свет убивает их через 2-3 ч, а шигеллы Шиги - через 20 мин. Общеупотребительные концентрации дезинфицирующих растворов губят их через 20-30 мин. Наименее устойчивы к влиянию внешних факторов шигеллы группы А, а наиболее устойчивы шигеллы Зонне.

Восприимчивость животных. Животные не чувствительны к возбудителям дизентерии, исключением являются обезьяны. Экспериментальное заражение кроликов и белых мышей вызывает у них интоксикацию и гибель.

Источники инфекции. Человек, болеющий острой и хронической формой дизентерии, и бактерионоситель.

Пути передачи. Пищевой. Большое значение имеет водный путь, овощи, фрукты, различные предметы, обсемененные шигеллами, и мухи.

Патогенез. Попав с пищей в кишечник, шигеллы проникают в клетки эпителия слизистой оболочки толстого кишечника, где размножаются. Частично они погибают. Образующийся при разрушении бактерий эндотоксин сенсибилизирует слизистую оболочку, повышается проницаемость кровеносных сосудов, и эндотоксин всасывается в кровь, вызывая интоксикацию. Поражение слизистой оболочки сопровождается отечностью, некрозами, геморрагией. Кроме того, токсин влияет на центральную нервную систему, что приводит к трофическим расстройствам. Особенно тяжело протекает заболевание, вызванное шигеллами Шиги, которые глубоко проникают в слизистую оболочку толстой кишки, вызывая резкую гиперемию, отек и кровавый понос. Образуемый ими экзотоксин вызывает тяжелую интоксикацию.

Для возникновения заболевания имеет значение величина инфицирующей дозы.

Иммунитет. У человека имеется естественная резистентность к дизентерийной инфекции. После перенесенного заболевания иммунитет нестойкий, а после дизентерии Зонне практически отсутствует. При заболевании, вызванном шигеллами дизентерии 1 (Григорьева - Шиги) вырабатывается более стойкий антитоксический иммунитет.

Профилактика. Общие санитарно-противоэпидемические мероприятия: изоляция, ранняя диагностика, дезинфекция.

Специфическая профилактика не нашла широкого применения. Лицам, бывшим в контакте с больными, дают поливалентный дизентерийный бактериофаг.

Лечение. Комплексное, сульфаниламиды с антибиотиками. Специфического лечения нет.

1. Назовите представителей рода шигелл - возбудителей дизентерии.

2. Отношение к какому углеводу положено в основу разделения шигелл на две группы? Какие виды шигелл входят в каждую из этих групп?

3. Каковы пути проникновения шигелл и какую часть кишечника они поражают?

4. Какой вид шигелл часто растет в R-форме?

5. Какие шигеллы имеют типовые и групповые антигены?

Цель исследования: выявление и идентификация шигелл для постановки диагноза; выявление бактерионосителей; обнаружение шигелл в пищевых продуктах.

2. Секционный материал.

3. Пищевые продукты.

Способы сбора материала

Название работы: Методы микробиологической диагностики дизентерии

Категория: Практическая работа

Предметная область: Медицина и ветеринария

Описание: Цель: Изучение методов микробиологической диагностики этиотропной терапии и профилактики шигеллезов. Актуальность темы: Шигеллезы распространены повсеместно и представляют серьезную проблему в странах с низким санитарным культурным уровнем и большой частотой случаев недостаточного и некачественного питания.

Дата добавления: 2014-09-16

Размер файла: 98 KB

Работу скачали: 21 чел.

Методические указания для студентов к практическому занятию № 28.

Тема занятия: Методы микробиологической диагностики дизентерии.

Цель: Изучение методов микробиологической диагностики, этиотропной терапии и профилактики шигеллезов.

Модуль 2 . Специальная, клиническая и экологическая микробиология.

Содержательный модуль 10 . Патогенные прокариоты и эукариоты.

Тема 5: Методы микробиологической диагностики дизентерии.

Актуальность темы: Шигеллезы распространены повсеместно и представляют серьезную проблему в странах с низким санитарным культурным уровнем и большой частотой случаев недостаточного и некачественного питания. В развивающихся странах распространению инфекции благоприятствуют низкий санитарный уровень, несоблюдение правил личной гигиены, перенаселенность и большая доля детей среди населения. В Украине вспышки шигеллеза чаще встречаются в закрытых коллективах на фоне низкого уровня санитарии и гигиены, например, в детских яслях и садах, на туристических судах, в психиатрических клиниках или приютах для инвалидов. Шигеллы были причиной диареи путешественников и туристов.

Причиной групповых заболеваний можно рассматривать употребление пищевых продуктов, загрязненных по халатности торговых работников, являющихся носителями шигелл. Встречаются вспышки, связанные с употреблением питьевой воды, к заражению приводило также плавание в загрязненных водоемах. Вместе с тем пищевой и водный пути передачи играют, по-видимому, меньшую роль в распространении шигеллезов по сравнению с холерой и брюшным тифом, при которых для заражения человека обычно требуются большие дозы возбудителей. В развивающихся странах, где распространение болезни происходит преимущественно от человека человеку, носители могут быть важным резервуаром возбудителя инфекции. У больных, не принимавших антибактериальных препаратов, выделение шигелл с фекалиями обычно продолжается в течение 1—4 нед, однако в небольшой части случаев продолжается значительно дольше.

Шигеллез - острая бактериальная инфекция кишечника, вызываемая одним из четырех видов шигелл. Спектр клинических форм инфекции включает и легкую, водянистую диарею, и тяжелую дизентерию, для которой характерны схваткообразные боли в области живота, тенезмы, лихорадка и признаки общей интоксикации.

Род Shigella (получил название по имени К. Шига, который в 1898г. детально изучил и описал выделенный возбудитель бактериальной дизентерии А.В. Григорьевым) семейства Enterobacteriaceae состоит из группы тесно связанных видов бактерий, имеющих следующие свойства:

І. Морфологические : шигеллы - небольшие палочки с закругленными концами. Отличаются от остальных представителей семейства Enterobacteriaceae отсутствием жгутиков (неподвижны), не имеют спор и капсул, грамотрицательны.

ІІ. Культуральные : шигеллы – это аэробы или факультативные анаэробы; оптимальные условия культивирования — температура 37°С, рН 7,2–7,4. Растут на простых питательных средах (МПА, МПБ) в виде небольших, блестящих, полупрозрачных, сероватых, круглых колоний, размером 1,5–2 мм в S –форме. Исключением являются шигеллы Зонне, которые часто диссоциируют, образуя крупные, плоские, мутные, с изрезанными краями колонии R –формы (колонии имеют вид “виноградного листа”). В жидких питательных средах шигеллы дают равномерное помутнение, R –формы образуют осадок. Жидкой средой обогащения является селенитовый бульон.

ІІІ. Ферментативные : основными биохимическими признаками, необходимыми для идентификации шигелл при выделении чистой культуры являются следующие:

1. отсутствие газообразования при ферментации глюкозы;
2. отсутствие продукции сероводорода;
3. отсутствие ферментации лактозы в течение 48 часов.

В целом четыре вида разделяются далее примерно на 40 серотипов. По характеристикам основных соматических (О) антигенов и биохимическим свойствам выделяют следующие четыре вида или группы: S. dysenteriae (группа A, включает: Григорьева-Шиги, Штутцера-Шмитца, Лардж-Сакса), S. flexneri (группа В), S. boydii (группа С) и S. sonnei (группа D).

По отношению к манниту все шигеллы делятся на расщепляющие (шигеллы Флекснера, Бойда, Зонне) и нерасщепляющие (шигеллы Григорьева-Шиги, Штутцера-Шмитца, Лардж-Сакса) маннит.

ІV. Факторы патогенности:

1. Плазмида инвазии – обеспечивает способность шигелл вызывать инвазию с последующим межклеточным распространением и размножением в эпителии слизистой толстого кишечника;
2. Токсинообразование : Шигеллы имеют липополисахаридный эндотоксин, который по химическим и биохимическим свойствам подобен эндотоксинам других представителей семейства Enterobacteriaceae. Кроме того, S. dysenteriae тип I (палочка Шига) вырабатывает экзотоксин. С момента открытия последнего было установлено, что он обладает активностью энтеротоксина и может вызывать кишечную секрецию, равно как и оказывать цитотоксическое действие, направленное против клеток кишечного эпителия; оказывает нейротоксическое действие, которое отмечается у детей, больных шигеллезом. Шига-токсин, попадая в кровь, наряду с поражением эндотелия подслизистой поражает также гломерулы почки, вследствие чего помимо кровавого поноса развивается гемолитический уремический синдром с развитием почечной недостаточности.

V . Антигенная структура: все шигеллы обладают соматическим О-антигеном, в зависимости от строения которого происходит их подразделение на серовары.

VІ. Резистентность: Температура 100 0 С убивает шигеллы мгновенно. К низким температурам шигеллы устойчивы – в речной воде они сохраняются до 3-х месяцев, на овощах и фруктах – до 15 месяцев. При благоприятных условиях шигеллы способны к размножению в пищевых продуктах (салатах, винегретах, вареном мясе, фарше, вареной рыбе, молоке и молочных продуктах, компотах и киселях), особенно шигеллы Зонне.

1. Источник инфекции: Человек, болеющий острой и хронической формой шигеллёза; бактерионоситель.

2. Пути передачи :

• Пищевой (преимущественно для S. sonnei)
• Водный (преимущественно для S. flexneri)
• Контактно-бытовой (преимущественно для S. dysenteriae)

3. Входными воротами инфекции служит желудочно-кишечный тракт.

Патогенез и патологические изменения.

После заглатывания шигеллы колонизируют верхние отделы тонкой кишки и размножаются там, возможно, вызывая повышенную секрецию на ранней стадии инфекции. Затем шигеллы пенетрируют через М-клетки в подслизистую, где поглощаются макрофагами. Это приводит к гибели части шигелл, следствием чего является выделение медиаторов воспаления, которые и инициируют воспаление в подслизистой. Апоптоз фагоцитов позволяет другой части шигелл сохраниться и проникнуть в эпителиальные клетки слизистой через базальную мембрану. Внутри энтероцитов происходит размножение шигелл и их межклеточное распространение, следствием чего является развитие эрозий. При гибели шигелл происходит выделение шига и шигаподобных токсинов, действие которых приводит к интоксикации. Поражение слизистой оболочки сопровождается отечностью, некрозами и геморрагией, что обуславливает появление крови в испражнениях. Кроме того, токсин влияет на ЦНС, что приводит к трофическим расстройствам.

Спектр клинических проявлений шигеллезов весьма широк — от легкой диареи до тяжелой дизентерии со схваткообразными болями в области живота, тенезмами, лихорадкой и общей интоксикацией.

Инкубационный период колеблется от нескольких часов до 7 суток, чаще всего составляет 2-3 дня. Вначале у больных отмечаются водянистый стул, лихорадка (до 41°С), разлитые боли в области живота, тошнота и рвота. Наряду с этим больные жалуются на миалгии, ознобы, боли в пояснице и головную боль. В ближайшие дни от начала заболевания появляются признаки дизентерии — тенезмы, частый, скудный, кровянисто-слизистый стул. Температура тела постепенно снижается, боли могут локализоваться в нижних квадрантах живота. Интенсивность диареи достигает максимума примерно к концу 1-й недели болезни. Дизентерия с кровянистым стулом встречается чаще и появляется раньше при заболевании, вызванном S. dysenteriae тип I, чем при других формах шигеллезов.

Для шигеллеза Зонне характерно более легкое течение болезни (гастроэнтеритический или гастроэнтероколитический вариант). Лихорадочный период менее продолжительный, явления интоксикации кратковременны, а деструктивные изменения слизистой кишечника не характерны.

Шигеллезу Флекснера в основном свойственны два варианта клинического течения - гастроэнтероколитический и колитический.

Внекишечные осложнения при шигеллезах встречаются редко:

1. Осложнением шигеллезов могут быть развитие кишечного дисбактериоза.
2. Наряду с головными болями могут отмечаться признаки менингита и судорожные припадки.
3. При инфекции, вызванной S. dysenteriae тип I, описаны случаи периферической нейропатии, а во время вспышки гастроэнтерита, вызванного S. boydii, встречались случаи синдрома Гийена-Барре (полиневрит).
4. За исключением детей, страдающих дистрофией, гематогенная диссеминация возбудителя встречается относительно редко, описаны также случаи шигеллезных абсцессов и менингитов.
5. При шигеллезе возможно развитие синдрома Рейтера с артритом, стерильным конъюнктивитом и уретритом, обычно это встречается через 1- 4 нед от начала диареи у больных.
6. У детей шигеллезы сопровождаются гемолитико-уремическим синдромом, часто в сочетании с лейкозоподобными реакциями, тяжелым колитом и циркуляцией эндотоксина, однако при этом обычно бактериемию не выявляют.
7. Весьма редко встречается гнойный кератоконъюнктивит, вызванный шигеллами, попавшими в глаза в результате самозаражения загрязненными пальцами.
8. Гиповолемический шок и ДВС-синдром.
9. Перитонит, гангрена кишки, кишечное кровотечение.

Иммунитет: У человека имеется естественная резистентность к шигеллезной инфекции. После перенесенного заболевания иммунитет не стойкий, а после шигеллеза Зонне – практически отсутствует. При заболевании, вызванном шигеллами Григорьева – Шиги вырабатывается более стойкий антитоксический иммунитет. В защите от инфекции основная роль принадлежит секреторным IgA , предотвращающим адгезию, и цитотоксической антителозависимой активности интраэпителиальных лимфоцитов, которые вместе с секреторными IgA уничтожают шигеллы.

Диагностика и лабораторные исследования.

Цель исследования : выявление и идентификация шигелл для постановки диагноза; выявление бактерионосителей; обнаружение шигелл в пищевых продуктах.

Материал для исследования : испражнения, секционный материал, пищевые продукты.

Методы диагностики: микробиологический (бактериологический, микроскопический (люминисцентная); серологический; биологический; аллергопроба.

1 день исследования: Посевы следует делать из свежевыделенных фекалий или с использованием ректальных тампонов (ректальной трубкой); при отсутствии подходящих условий материал необходимо поместить в среду для транспортировки. Для этого следует использовать кишечный агар (среда Мак-Конки или Шигелла-Сальмонелла), умеренно селективный агар ксилоза-лизин-дезоксихолат, КЛД) и питательный бульон (селенитовый бульон). Если время между забором и посевом превышает 2ч, то следует воспользоваться консервирующими растворами: 20% желчный бульон, комбинированная среда Кауффманна.

• Испражнения в глицериновой смеси эмульгируют, каплю эмульсии наносят на среду и шпателем втирают её. Дифференциальными средами для шигелл являются среды Плоскирева, Эндо и ЭМС (агар с эозинметиленовым синим). Среда Плоскирева (в состав среды входят: МПА, лактоза, соли желчных кислот и индикатор – бриллиантовый зеленый) одновременно является и элективной средой для шигелл, т.к. подавляет рост кишечной палочки.
• Параллельно с прямым посевом собранный материал засевают на среду обогащения – селенитовый бульон.
• Все посевы ставят в термостат.

2 день исследования:

3 день исследования:

• Микроскопия материала со скошенного агара.
• Культуры, не ферментировавшие лактозу на среде Ресселя, подвергают дальнейшему изучению: делают мазки (окраска по Граму), проверка чистоты культуры. При наличии грамотрицательных палочек производят посев на среды Гисса, бульон с индикаторными бумажками (для выявления индола и сероводорода) и на лакмусовое молоко.
• Засеянные среды ставят в термостат на 18-24ч.

4 день исследования:

В качестве ускоренных методов при шигеллезах применяют люминисцентную микроскопию и биологическую пробу (введение вирулентных штаммов шигелл в конъюктивальный мешок (под нижнее веко) морским свинкам – к концу 1-х суток развивается конъюктивит).

Аллергическая проба Цуверкалова – внутрикожная аллергическая проба с дизентерином (введение 0,1 мл дизентерина в область предплечья – положительная реакция в случае образования инфильтрата и гиперемии). Аллергологическую диагностику в настоящее время практически не применяют. Проба Цурвекалова не отличается специфичностью, положительные реакции регистрируют не только при шигеллезе, но и при сальмонеллезе, эшерихиозе, иерсиниозах и др. ОКИ, а иногда и у здоровых лиц.

Лечение и профилактика. Для лечения и для профилактики по эпидемиологическим показаниям используется бактериофаг орального применения, антибиотики после определения антибиотикограммы; в случае возникновения дисбактериоза – препараты пробиотиков для коррекции микрофлоры. Для восполнение потерь жидкостей и электролитов - введения внутрь глюкозо-электролитного раствора.

Интерпретировать биологические свойства возбудителей шигеллезов.

Ознакомиться с классификацией шигелл.

Научиться трактовать патогенетические закономерности инфекционного процесса, вызванного шигеллами.

Определить методы микробиологической диагностики, этиотропной терапии и профилактики шигеллезов.

• Осуществить посев на питательные среды исследуемого материала.
  • Приготовить мазки и окрасить по Граму.
  • Провести микроскопию препаратов с помощью иммерсионного микроскопа.
  • Анализировать морфологические, культуральные, ферментативные признаки шигелл.

1. Характеристика возбудителей шигеллезов. Биологические свойства.

2. Классификация шигелл. Принципы, положенные в основу.

3. Эпидемиология, патогенез и клинические особенности шигеллезов.

4. Лабораторная диагностика.

5. Принципы лечения и профилактики шигеллезов.

Практические задания, которые выполняются на занятии:

1. Микроскопия демонстрационных препаратов из чистых культур возбудителей шигеллезов.

2. Работа по бактериологической диагностике шигеллезов: изучение посевов фекалий на среде Плоскирева.

3. Пересев подозрительных колоний на среду Ресселя и на МПБ для определения индолообразования и Н 2 S .

4. Зарисовка демонстрационных препаратов и схемы микробиологической диагностики шигеллезов в протокол занятия.

2. Тимаков В.Д., ЛевашевВ.С., Борисов Л.Б. Микробиология / Учебник.-2-е изд., перераб. И доп.-М.:Медицина, 1983,-512с.

3. Пяткин К.Д. Кривошеин Ю.С. Микробиология с вирусологией и иммунологией. - Киев: В и ща школа, 1992. - 431с.

4. Медицинская микробиология / Под редакцией В.И. Покровского. -М.:ГЕОТАР-МЕД, 2001.-768с.

6. Черкес Ф.К., Богоявленская Л.Б., Бельскан Н.А. Микробиология. /Под ред. Ф.К. Черкес. – М.: Медицина, 1986. – 512 с.

7. Конспект лекции.

2. Тiтов М.В. Iнфекцiйнi хвороби. - К., 1995. – 321с.

3. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни. - М.: Медицина, 1990. - 559 с.

5. Павлович С.А. Медицинская микробиология в графах: Учеб. пособие для мед. ин-тов. – Мн.: Выш. шк., 1986. – 255 с.

Краткие методические указания к работе на практическом занятии.

В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию.

Самостоятельная работа состоит из изучения классификации шигелл, разбора схемы патогенетических и клинических признаков шигеллезов. Изучение методов лабораторной диагностики шигеллезов. Студенты осуществляют посев биоматериала на питательные среды. Потом готовят микропрепараты, окрашивают их по Граму, проводят микроскопию, зарисовывают микропрепараты и дают необходимые пояснения. В состав самостоятельной работы входит также микроскопия демонстрационных препаратов и их зарисовка в протокол занятия.

В конце занятия проводится тестовый контроль и анализ итоговых результатов самостоятельной работы каждого студента.

Технологическая карта проведения практического занятия.