Диагностикум клещевой пятнистой лихорадки

Аннотация научной статьи по фундаментальной медицине, автор научной работы — Рудаков Н. В., Самойленко Ирина Евгеньевна, Решетникова Т. А.

Представлен анализ современных методов лабораторной диагностики риккетсиозов группы клещевой пятнистой лихорадки (КПЛ). В связи с резким сокращением номенклатуры выпускаемых препаратов и увеличением спектра выявленных на территории России видов риккетсий необходимы новые подходы к лабораторной верификации диагнозов. Для выявления антител к риккетсиям группы КПЛ могут быть рекомендованы реакция непрямой иммунофлюоресценции и иммуноферментный анализ с антигенами соответствующих видов риккетсий. Для выявления и идентификации риккетсий группы КПЛ наиболее приемлемы ПЦР-рестрикционный анализ и ПЦР-секвенирование, для изучения патогенных видов риккетсий необходимы биологические методы исследования.

Похожие темы научных работ по фундаментальной медицине , автор научной работы — Рудаков Н. В., Самойленко Ирина Евгеньевна, Решетникова Т. А.

The problems of laboratory diagnostic of rickettsiosis of group spotted tick-bite fever in Russia

The article presents analysis of modern techniques of laboratory diagnostic of rickettsiosis of spotted tick-bite fever group. Owing to drastic shortage of list of produced preparations and increasing of specter of detected types of rickettsia in Russia the new approaches to laboratory verification of diagnoses are needed. To detect antibodies to rickettsia of spotted tick-bite fever group can be recommended such techniques as reaction of indirect immune fluorescence and immune enzyme assay with antigens of corresponding types of rickettsia . The most acceptable techniques for detecting and identifying rickettsia of spotted tick-bite fever group are polymerase chain reaction restricting analysis and polymerase chain reaction sequence analysis. The biological methods of analysis are needed to study pathogenic types of rickettsia .

Рудаков Н.в.12, Самойленко И.Е.1, Решетникова Т.А.1

проблемы лабораторной диагностики риккетсиозов группы клещевой пятнистой лихорадки в россии

Представлен анализ современных методов лабораторной диагностики риккетсиозов группы клещевой пятнистой лихорадки (КПЛ). В связи с резким сокращением номенклатуры выпускаемых препаратов и увеличением спектра выявленных на территории России видов риккетсий необходимы новые подходы к лабораторной верификации диагнозов. Для выявления антител к риккетсиям группы КПЛ могут быть рекомендованы реакция непрямой иммунофлюоресценции и им-муноферментный анализ с антигенами соответствующих видов риккетсий. Для выявления и идентификации риккетсий группы КПЛ наиболее приемлемы ПЦР-рестрикционный анализ и ПЦР-секвенирование, для изучения патогенных видов риккетсий необходимы биологические методы исследования.

Ключевые слова: риккетсии и риккетсиозы; лабораторная диагностика. RudakovN.V12, SamoilenkoI.E1, Reshetnikova T.A.'

THE PROBLEMS OF LABORATORY DIAGNOSTIC OF RICKETTSIOSIS OF GROUP SPOTTED TICK-BITE FEVER IN RUSSIA

1 The Omsk research institute of feral herd infections of Rospotrebnadzor of Russia, 644080 Omsk, Russia; 2The Omsk state medical academy of Minzdrav of Russia, 640050 Omsk, Russia

The article presents analysis of modern techniques of laboratory diagnostic of rickettsiosis of spotted tick-bite fever group. Owing to drastic shortage of list of produced preparations and increasing of specter of detected types of rickettsia in Russia the new approaches to laboratory verification of diagnoses are needed. To detect antibodies to rickettsia of spotted tick-bite fever group can be recommended such techniques as reaction of indirect immune fluorescence and immune enzyme assay with antigens of corresponding types of rickettsia. The most acceptable techniques for detecting and identifying rickettsia of spotted tick-bite fever group are polymerase chain reaction restricting analysis and polymerase chain reaction sequence analysis. The biological methods of analysis are needed to study pathogenic types of rickettsia.

Keywords: rickettsia; rickettsiosis; laboratory diagnostic

В России в соответствии с приказом Росстата от 20.12.12 № 645 внесены изменения в формы №1 и 2 "Сведения об инфекционных и паразитарных заболеваниях", с 2013 г. осуществляется регистрация двух риккетсиозов группы клещевой пятнистой лихорадки (КПЛ) - сибирского клещевого тифа (СКТ) и астраханской пятнистой лихорадки, возбудителями которых являются Rickettsia sibirica subsp. sibirica и Rickettsia conorii subsp. caspiensis соответственно. Из трех подвидов R.sibirica в России доказано наличие R.sibirica subsp.sibirica и R.sibirica subsp. BJ-90. Верифицированные случаи клещевого риккетсиоза или СКТ связаны с R.sibirica subsp. sibirica [1]. Получены данные о вероятной патогенности R.sibirica subsp. BJ-90 [2, 3]. Кроме них, в иксодовых клещах в различных регионах России выявлено еще 5 видов патогенных для человека риккетсий группы КПЛ - R.heilonjiangensis, R.aeschlmannii, R.helvetica, R.slovaca, R.raoultii, а также относящийся к группе предшественников вид клещевых риккетсий с неясной патогенностью для человека R.tarasevichiae [1]. Клинически риккетсиозы группы КПЛ обладают выраженной схожестью проявлений (кроме синдрома TIBOLA, этиологически связанного преимущественно с R.slovaca, в меньшей степени с R.raoultii), а их видоспецифическая верификация применяемыми в практике лабораторными методами неэффективна.

Лабораторная диагностика риккетсиозов группы КПЛ осуществлялась в соответствии с утвержденными методиче-

Для корреспонденции: Самойленко Ирина Евгеньевна, канд. мед. наук Адрес: 644080, Омск, пр. Мира, 7 E-mail: irinasam59@mail.ru

скими документами [4, 5]. Учитывались также Европейские рекомендации по диагностике клещевых бактериальных инфекций (далее "Европейские рекомендации") [6].

В соответствии с отечественными рекомендациями для диагностики регламентированы преимущественно серологические методы (реакция агглютинации - РА, реакция связывания комплемента - РСК, реакция непрямой гемаг-глютинации - РНГА, реакция непрямой иммунофлюоресценции - РНИФ, иммуноферментный анализ - ИФА), однако к настоящему времени не выпускается ни один коммерческий диагностикум для указанных методов.

В течение многих десятилетий РСК являлась базовым методом серологической диагностики риккетсиозов. Наличие группоспецифического полисахаридного комплекса в составе препарата растворимого антигена для РСК приводит к отсутствию четкой видовой дифференциации внутри групп СТ и КПЛ, хотя титры антител обычно бывают выше к гомологичному антигену. Метод недостаточно чувствителен в ранней фазе заболевания, даже на гиперэндемичных территориях лабораторное подтверждение диагноза СКТ не превышает 26,8% [7]. Кроме того, метод РСК требует нестандартных компонентов (эритроциты барана), существуют проблемы с учетом результатов в связи с антикомплементар-ностью сывороток и антигенов.

В соответствии с "Европейскими рекомендациями" для серологической диагностики рекомендуется реакция микрофлюоресценции (или РНИФ). РНИФ считается золотым стандартом серодиагностики риккетсиозов. Метод обладает высокой специфичностью и чувствительностью, позволяет выявлять и ]^0-антитела как вместе, так и раздельно в зависимости от применяемых конъюгатов. При риккетсиозах группы КПЛ диагностически значимые титры ]^М-антител

выявляют в конце 1-й недели, IgG-антител - в конце 2-й недели заболевания. Для ее постановки используют слайд-антигены, получаемые на культурах клеток из эталонных штаммов соответствующих видов риккетсий в специализированных риккетсиологических лабораториях (в России - Омский НИИ природно-очаговых инфекций и НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи).

Кроме того, в последние годы для серологической диагностики риккетсиозов группы КПЛ в Омском НИИ природно-очаговых инфекций предложен ИФА на основе антигена для РСК [8]. Его использование позволяет почти вдвое в сравнении в РСК повысить эффективность верификации диагноза СКТ за счет чувствительности предложенного теста. Применение ИФА с конъюгатами к разным изотипам иммуноглобулинов (IgG и IgM) позволяет дифференцировать антитела по классам иммуноглобулинов. Получен патент на изобретение № 2477860 "Способ лабораторной диагностики клещевого риккетсиоза с использованием иммуноферментного анализа для определения антител к антигену Rickettsia sibiricd' [9].

Для исследования переносчиков, в том числе снятых с человека, ранее применяли экспресс-методы - метод флюоресцирующих антител, РНГА с иммуноглобулиновым диа-гностикумом для выявления риккетсий группы КПЛ, однако диагностические препараты для них в последние годы также не выпускают. ДНК риккетсий в переносчиках можно выявлять в ПЦР с последующей идентификацией путем определения нуклеотидных последовательностей ампликона, что в настоящее время возможно лишь в ограниченном числе лабораторий. Эти методы позволяют выявлять преимущественно массовые виды риккетсий - R.raoultii в клещах рода Dermacentor, R.tarasevichae в клещах рода Ixodes, не имеющих существенного эпидемиологического значения.

Несмотря на высокую перспективность, особенно для диагностики новых риккетсиозов, методы, основанные на ПЦР, не нашли широкого применения в практике ввиду сложности и трудоемкости, а также в связи с методическими проблемами взятия и исследования клинического материала от больных (более эффективно исследование биоптатов с места присасывания клеща, а не проб крови). ПЦР не позволяет оценить риск заражения при исследовании снятого переносчика и эпидемиологическую опасность очаговой территории при исследовании иксодовых клещей из природных станций, поскольку не обладает видоспецифичностью.

Разработанная нами методика ПЦР-рестрикционного анализа может быть использована для дифференциации основных видов риккетсий, выявляемых в природных очагах. Применение рестрикционного анализа с использованием эндонуклеаз (RsaI и PstI) позволило четко дифференцировать две группы риккетсий: R. sibirica и R. sibirica subsp. BJ-90 от геновариантов R.raoultii [10].

Для изучения патогенных видов риккетсий наиболее эффективны культуральные методы. Основные риккетсиологи-ческие методы включают заражение, чаще интраперитоне-альное, чувствительных животных (морские свинки, хомячки, хлопковые и белые крысы, белые мыши), развивающихся куриных эмбрионов (в желточный мешок по Коксу), перевиваемых культур клеток (Vero, Hep-2, L929), клеток членистоногих [1].

Методы выделения и последующей идентификации рик-кетсий требуют специальной подготовки, соблюдения режимных требований (возбудители III группы патогенности). Их культивирование можно осуществлять в специализированных риккетсиологических лабораториях или лабораториях особо опасных инфекций, что ограничивает возможности использования методов выделения риккетсий в диагностических целях.

Таким образом, нами разработаны новые диагностические подходы для лабораторной диагностики риккетсиозов, основанные на применении преимущественно ИФА- и ПЦР-технологий. Для выявления и идентификации риккетсий группы КПЛ наиболее приемлемы ПЦР-рестрикционный

анализ и ПЦР-секвенирование. Для выявления антител к риккетсиям группы КПЛ в диагностических целях в настоящее время могут быть рекомендованы РНИФ и ИФА с антигенами соответствующих видов риккетсий.

Наличие общих переносчиков различных патогенов, зачастую в единой паразитарной системе, обусловливает широкую распространенность сочетанных природных очагов риккетсиозов группы КПЛ в различных сочетаниях, что следует принимать во внимание при мониторинге очагов, эпидемиологическом надзоре, диагностике и профилактике этих инфекций.

2. Jia N., Jiang J.-F., Huo Q.-B. et al. Rickettsia sibirica subspecies BJ-90 as a cause of human disease. N. Engl. J. Med. 2014; 369 (12): 1176-8.

3. Пеньевская Н.А., Рудаков Н.В., Абрамова Н.В., Рудакова С.А., Коломенский А.П. Клинико-эпидемиологический анализ результатов выявления антител к различным видам риккетсий у больных с подозрением на клещевую нейроинфекцию в северных районах Омской области. Национальные приоритеты России. Специальный выпуск «Актуальные проблемы природной очаговости болезней: матер. Всероссийская конференция с международным участием, посвященная 70-летию теории академика Е.Н. Павловского о природной очаговости болезней. Омск, 2009; 2: 192-7.

4. Методические рекомендации. Эпидемиологический надзор за клещевым риккетсиозом, иммунодиагностика заболевания и методы выявления возбудителя. Омск: МЗ СССР, 1992.

5. Методические указания МУ 3.1.1755-03. Организация эпидемиологического надзора за клещевым риккетсиозом. Москва: Федеральный центр госсанэпиднадзора России, 2004.

6. Brouqui Р., Bacellar F., Baranton G., Birtles R.J., Bjoërsdorff A., Blanco J.R. et al. Guidelines for the diagnosis of tick-borne bacterial diseases in Europe. Clin. Microbiol. Infect. 2004; 10: 1108-32.

7. Анализ деятельности центров Госсанэпиднадзора Российской Федерации по лабораторной диагностики риккетсиозов. Информационный сборник статистических и аналитических материалов. Москва; 2001.

8. Абрамова Н.В., Рудаков Н.В., Пеньевская Н.А., Седых Н.Н., Кумпан Л.В., Самойленко И.Е. и др. Апробация иммунофер-ментного анализа для серологической диагностики инфекций, вызываемых риккетсиями группы клещевой пятнистой лихорадки. Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2010; 1(50): 17-22.

9. Рудаков Н.В., Абрамова Н.В., Пеньевская Н.А., Самойленко И.Е., Шпынов С.Н., Решетникова Т.А. Способ лабораторной диагностики клещевого риккетсиоза с использованием имму-ноферментного анализа для определения антител к антигену Rickettsia sibirica. Патент РФ № 2477860 от 20.03.2013.

10. Рудакова С.А., Коломеец А.Н., Самойленко И.Е., Кузьминов А.М., Рудаков Н.В. Экспресс-индикация трансмиссивных патогенов как основа дифференцированного подхода к профилактике инфекций, передающихся иксодовыми клещами. Бюллетень СО РАМН. 2007; 4: 116-9.

1. Rudakov N.V., Shpynov S.N., Samoylenko I.E., Yastrebov V.K., Obert A.S., Kurepina N.Ju. Rickettsia and spotted fever group rickettsiosis in Siberia. Omsk: Publishing Center "Omsk Scientific Bulletin"; 2012. (in Russian)

2. Jia N., Jiang J.-F., Huo Q.-B. et al. Rickettsia sibirica subspecies BJ-90 as a cause of human disease. N. Engl. J. Med. 2014; 369 (12): 1176-8.

3. Pen'evskaja N.A., Rudakov N.V., Abramova N.V., Rudakova S.A., Kolomenskij A.P. Clinico-epidemiological analysis of the detection of antibodies to various types of rickettsiae in patients with suspected tick-borne neuroinfection in the northern districts of the Omsk region.

Russian national priorities. Special Issue on "Actual problems of the natural foci of diseases: Materialy Vserossiiskoi conferentsii with international participation marking the 70th anniversary of theory of natural foci of diseases by acad E.N. Pavlovskii. 2009; 2: 192-7. (in Russian)

4. Methodical recommendations. Epidemiological surveillance of tickborne rickettsiosis, immunodiagnosis of the disease and methods of detection the pathogen. Omsk: Minzdrav SSSR, 1992. (in Russian)

5. Guidelines MU 3.1.1755-03. Organization epidemiological surveillance of tick-borne rickettsiosis. Moscow: Russian Federal Centre for Sanitary Inspection, 2004. (in Russian)

6. Brouqui P., Bacellar F., Baranton G., Birtles R.J., Bjoërsdorff A., Blanco J.R. et al. Guidelines for the diagnosis of tick-borne bacterial diseases in Europe. Clin. Microbiol. Infect. 2004; 10: 1108-32.

7. Analysis of the activities the Sanitary Inspection centers of the Russian Federation for the laboratory diagnosis of rickettsial diseases. Information Bulletin and statistical analysis. Moscow; 2001. (in Russian)

8. Abramova N.V., Rudakov N.V., Pen'evskaja N.A., Sedyh N.N., Kumpan L.V., Samoylenko I.E. et al. The testing of immunoassay for serological diagnosis of infections caused by spotted fever group rickettsiae. Epidemiologiya i vactsinoprofilaktika. 2010; 1(50): 1722. (in Russian)

9. Rudakov N.V., Abramova N.V., Pen'evskaja N.A., Samoylenko I.E., Shpynov S.N., Reshetnikova T.A. The method of laboratory diagnosis of tick-borne rickettsiosis using an enzyme immunoassay for the detection of antibodies to the antigen of Rickettsia sibirica. Patent RF N 2477860; 2013. (in Russian)

10. Rudakova S.A., Kolomeetz A.N., Samoylenko I.E., Kuz'minov A.M., Rudakov N.V. Express indication of transmissible pathogens as the basis of the differentiated approach to the prevention of infections transmitted by Ixodes ticks. Bulleten'SO RAMN. 2007; 4: 116-9. (in Russian)

Поступила 10.06.14 Received 10.06.14

Иванова Е.И.1, Попкова С.М.1, Джиоев Ю.П.1,2, Ракова Е.Б.1, Долгих В.В.1, Савелькаева М.В.1, Немченко У.М.1, Бухарова Е.В.1, Сердюк Л.В.1

определение частоты встречаемости генов, кодирующих способность к формированию связывания пилей у аутоштаммов escherichia coli

E.coli - комменсал кишечника позвоночных. Обмен генетическим материалом разных типов бактерий между собой и с другими представителями семейства Enterobacteriaceae в кишечной экосистеме ведет к появлению вариантов нормальной кишечной палочки с генетическими признаками патогенности, что может служить теоретическим обоснованием для отнесения таких штаммов к патобионтам. Энтеропатогенная кишечная палочка (ЕРЕС) продолжает оставаться важной причиной диарей у детей в развивающихся странах. Ген, отвечающий за формирование связывания пилей, является необходимым условием для вирулентности ЕРЕС. С помощью ПЦР исследовали 316 штаммов разных типов E.coli (нормальная, со слабой ферментативной активностью, гемолитической активностью), выделенных у здоровых детей и детей с функциональными нарушениями желудочно-кишечного тракта, на наличие генов, кодирующих способность к формированию связывания пилей (bfp). Присутствие гена bfp в разных биохимических вариантах E.coli позволяет констатировать факт формирования резервуара патогенности в индигенной микробиоте кишечного биоценоза.

Ключевые слова: микробиоценоз; адгезия; Escherichia coli; ген, отвечающий за формирование связывания пилей (bfp).

IvanovaE.I.1, PopkovaS.M.1, Djioev Yu.P.12, RakovaE.B.1, Dolgikh V.V.1, SavelkaevaM.V.1, Nemtchenko U.M.1, Bukharova E.V.1, Serdiuk L.V.1

THE DETECTION OF OCCURRENCE RATE OF GENES CODING CAPABILITY TO FORM PILI BINDING IN AUTO-STRAINS OF ESCHERICHIA COLI

1The research center of problems of family health and human reproduction, 664003 Irkutsk, Russia; 2The Irkutsk state medical university, 664003 Irkutsk, Russia

E.coli is a commensal of intestine of the vertebrata. The exchange of genetic material of different types of bacteria between themselves and with other representatives of family ofEnterobacteriaceae in intestinal ecosystem results in development of types of normal colibacillus with genetic characteristics ofpathogenicity that can serve as a theoretical substantiation to attribute such strains to pathobionts. The entero-pathogenic colibacillus continues be an important cause of diarrhea in children in developing countries. The gene responsible for formation of pili binding is a necessary condition for virulence of entero-pathogenic colibacillus. The polymerase chain reaction was applied to examine 316 strains of different types of E.coli (normal, with weak enzyme activity and hemolytic activity) isolated from healthy children and children with functional disorders of gastro-intestinal tract for presence ofgenes coding capability to form pili binding. The presence of this gene in different biochemical types of E.coli permits to establish the fact of formation of reservoir ofpathogenicity in indigent microbiota of intestinal biocenosis.

Keywords: microbiocenosis; adhesion; Escherichia coli; gene coding capability to form pili binding

Учебник предназначен для студентов, аспирантов и преподавателей высших медицинских учебных заведений, университетов, микробиологов всех специальностей и практических врачей.

5-е издание, исправленное и дополненное

Книга: Медицинская микробиология, иммунология и вирусология

Группа клещевой пятнистой лихорадки

Группа клещевой пятнистой лихорадки

Сюда относятся шесть риккетсиозов, возбудителями которых являются разные виды риккетсий. Они объединены в одну группу по следующим признакам: их резервуаром и переносчиками являются иксодовые и гамазовые клещи; риккетсии размножаются в цитоплазме и в кариоплазме (ядре) эукариотных клеток; между риккетсиями, вызывающими эти риккетсиозы, существует антигенное родство, а сыворотки больных и переболевших дают перекрестные серологические реакции и положительную реакцию агглютинации с P. vulgaris OX19 и OX2. Содержание Г + Ц в ДНК риккетсий составляет 32 – 33 мол %.

Пятнистая лихорадка Скалистых гор. Этот риккетсиоз представляет собой заболевание, эндемичное для Северной и Южной Америки, протекающее в виде острой лихорадки, без первичного аффекта, но с появлением сыпи и отличающееся большим разнообразием тяжести течения в различных эндемических очагах. Свое название эта болезнь получила в связи с тем, что была обнаружена в США в районе Скалистых гор. Однако этот риккетсиоз обнаружен почти во всех штатах США, в Канаде, Мексике, Бразилии, Колумбии и других странах Центральной и Южной Америки.

Возбудитель – R. rickettsii – был обнаружен в 1909 г. Г. Риккетсом. Он представляет собой короткие палочки диаметром 0,2 – 0,3 мкм и длиной 1,5 – 2,0 мкм, менее полиморфные, чем R. prowazekii, обычно располагающиеся одиночно. Содержание Г + Ц в ДНК составляет 32,5 мол %. R. rickettsii имеют антигены, общие с антигенами риккетсий группы клещевой пятнистой лихорадки, но не имеют антигенного родства с риккетсиями других видов. Кроме того, они обладают антигенами, родственными полисахаридным антигенам P. vulgaris OX19 и OX2. Помимо указанных групповых антигенов, у риккетсий этого вида имеется и видоспецифический антиген, который позволяет дифференцировать их от всех других видов риккетсий.

Патогенность R. rickettsii связана с наличием у них, помимо эндотоксина, специфического термолабильного токсического белка. Однако штаммы R. rickettsii, выделяемые в разных географических районах Америки, сильно варьируют по своей вирулентности для человека. Для культивирования R. rickettsii используют 4 – 5-дневные куриные эмбрионы. При достаточной заражающей дозе они убивают эмбрионы через 4 – 5 дней. Оптимальная температура для культивирования 33,5 °C, после гибели эмбрионов их сохраняют еще в течение 24 ч при 32 °C. В желточном мешке эмбрионов риккетсий накапливается значительно больше, чем при заражении культур клеток. Размножение риккетсий вначале происходит в цитоплазме, а затем в ядре эукариотных клеток.

R. rickettsii менее устойчивы по сравнению с риккетсиями других видов. Их жизнеспособность выше в микроаэрофильных условиях или в присутствии восстановленного глютатиона или белка.

Морские свинки высокочувствительны к этому виду риккетсий, но вирулентность для них различных штаммов риккетсий сильно варьирует. Наиболее вирулентные штаммы вызывают у морских свинок лихорадку, скротальный феномен, кровоизлияния, некроз и смерть. Вирулентность риккетсий для человека не связана с вирулентностью их для свинок. Токсический белок риккетсий при внутривенном введении белым мышам вызывает их смерть от интоксикации.

Эпидемиология. Основным резервуаром возбудителя служат различные виды иксодовых клещей и их прокормители – дикие грызуны. Зараженные клещи являются основными хранителями риккетсий в природе, так как в их организме риккетсии сохраняются долгое время, и клещи передают их трансовариально своему потомству. В общей сложности круговорот риккетсий этого вида в разных очагах поддерживается примерно 14 видами клещей, из них 13 относятся к иксодовым: Dermacentor andersoni, D. variabilis, Ixodes dentatus и др., а один – к аргасовым (Argasidae). Питание клещей кровью на различных стадиях их развития, как правило, происходит с переменой хозяев: незрелые стадии нападают на мелких диких зверьков, а взрослые клещи – на крупных домашних животных. Человек заражается обычно через укусы взрослых инфицированных клещей на территории их природного обитания. В природных очагах пятнистой лихорадки циркулирует единый в антигенном отношении вид риккетсий, однако по степени вирулентности R. rickettsii подразделен на 4 типа: R, S, T и U, наиболее вирулентен тип R, наименее – U.

Клиника пятнистой лихорадки характеризуется большим разнообразием выраженности отдельных симптомов и различной тяжестью заболеваний. Инкубационный период в среднем 2 – 5 дней, но может варьировать от 3 до 14 дней. Болезнь начинается постепенно, иногда внезапно. Первичный аффект на месте укуса клеща отсутствует (в отличие от других клещевых риккетсиозов). Сыпь появляется на 2 – 4-й день болезни. Летальность варьировала от 5 – 10 до 80 % и выше. Применение антибиотиков для лечения существенно снизило летальность.

Постинфекционный иммунитет продолжительный и относительно стойкий. Поствакцинальный иммунитет сохраняется около года.

Лечение. Наиболее эффективны антибиотики: тетрациклины, хлорамфеникол, эритромицин и другие макролиды.

Лабораторная диагностика. Для выделения риккетсий прибегают к заражению кровью больного морских свинок (самцов), куриных эмбрионов или культур клеток. Однако основным методом диагностики пятнистой лихорадки является серологический. Применяют реакции агглютинации, РСК, РПГА, ИФМ и др. с использованием специфических риккетсиозных антигенов.

Профилактика пятнистой лихорадки Скалистых гор, как и других клещевых риккетсиозов, сводится к мерам личной защиты против нападения и присасывания клещей. Для создания искусственного иммунитета предложены различные вакцины, которые применяют по эпидемическим показаниям в эндемических очагах.

Марсельская лихорадка – одна из доброкачественных форм риккетсиозов из группы клещевых пятнистых лихорадок. Для нее характерно почти постоянное появление пятнистой сыпи на ладонях и подошвах и черных пятен, образующихся обычно на местах укуса клещей. Впервые эту болезнь описали А. Конор и А. Брух в 1910 г.

Возбудитель – R. conorii – был открыт в 1932 г. Дж. Каминопетросом и Е. Брумптом. Морфологически он сходен с R. rickettsii, но иногда наблюдаются нитевидные формы. Содержание Г + Ц в ДНК составляет 32,5 мол %. Характерной особенностью R. conorii является способность к внутриядерному размножению и более скудное размножение в цитоплазме клеток. Возбудитель хорошо размножается в культурах клеток, особенно почечного эпителия. При заражении куриных эмбрионов вызывает их гибель на 4 – 5-е сут. Иммунологически родствен R. rickettsii, R. sibirica и другим возбудителям клещевых пятнистых лихорадок, но серологически легко от них дифференцируется по видоспецифическому антигену. В организме больных индуцирует появление антител к антигенам Proteus vulgaris OX19 и OX2.

При внутрибрюшинном заражении морских свинок R. conorii вызывает у них лихорадку, которая у самцов осложняется скротальным феноменом, появляющимся с первых же дней лихорадки, но с различной степенью выраженности. Риккетсии в большом количестве обнаруживаются в клетках мезотелия влагалищной оболочки яичек.

Лечение. Наиболее эффективным является применение антибиотиков (тетрациклины, макролиды).

Профилактика. В эндемических регионах следует уничтожать бродячих собак и брать на учет всех дворовых и охотничьих собак, не реже двух раз в месяц подвергать их обработке для уничтожения клещей, проводить дезинфекцию дворов, где обитают собаки.

Возбудитель – R. sibirica – был открыт в 1938 г. П. Ф. Здродовским. Из всех видов риккетсий группы клещевой пятнистой лихорадки R. sibirica имеет наибольшее сходство с R. rickettsii, включая антигенное родство, однако они четко различаются с помощью серологических реакций, в частности РСК. Штаммы R. sibirica, выделенные в разных регионах, серологически однородны, но отличаются по степени своей патогенности. В частности, ряд штаммов, лишенных патогенности, был выделен на территории Австрии, Чехии, Словакии и в Юго-Восточной Украине. Их предложено объединить в новый вид – R. slovaca. R. sibirica хорошо размножаются в культурах клеток, особенно почечного эпителия. При заражении куриных эмбрионов вызывают их гибель на 4 – 5-й день, но размножение в желточном мешке относительно скудно. Морские свинки при внутрибрюшинном заражении отвечают развитием лихорадки и скротальным феноменом, который в хорошо выраженном случае сопровождается гиперемией и отеком мошонки. В клетках мезотелия влагалищной оболочки яичек свинки риккетсии обнаруживаются как внутри цитоплазмы, так и внутри ядра, но в умеренном количестве. Заражение свинок всегда разрешается их полным выздоровлением, а переболевшие свинки проявляют иммунитет не только к R. sibirica, но и к R. conorii и R. rickettsii.

Эпидемиология. Природные очаги этого риккетсиоза связаны с различными видами естественно инфицированных иксодовых клещей и их прокормителями: грызунами (для клещей, личинок и нимф), домашними и крупными дикими животными (для взрослых клещей). По крайней мере 9 видов иксодовых клещей являются носителями R. sibirica, и у большинства из них происходит трансовариальная передача возбудителя: Dermacentor nuttalli, D. marginatus, D. pictus, D. silvarum, Haemaphysalis punctata, H. concinna, Rhipicephalus sanguineus. Таким образом, спонтанно заражающиеся клещи, благодаря тому, что риккетсии у них сохраняются в период зимовки и передаются трансовариально, образуют резервуар возбудителя в природных очагах, а заражающиеся от них животные превращаются в его дополнительный резервуар.

Клещевой тиф сам по себе не контагиозен, он всегда связан с укусами инфицированных клещей. Это и определяет две основные особенности эпидемиологии риккетсиоза: обязательную связь заболеваемости людей с природными очагами и их сезонность, которая соответствует периоду активности взрослых клещей (апрель – октябрь). Заболевает преимущественно сельское население.

Клиника. Североазиатский риккетсиоз представляет собой доброкачественное острое лихорадочное заболевание с наличием первичного аффекта и макулопапулезной сыпи. Инкубационный период – от 2 до 7 дней, чаще равен 3 – 6 дням. Болезнь начинается с продромальных явлений (общее недомогание, познабливание), иногда внезапно, с повышением температуры за 3 – 4 дня до 40 °C и выше. Лихорадка держится 8 – 10 дней. Первичный аффект в месте укуса клеща наблюдается постоянно в виде небольшого плотного инфильтрата, который покрыт коричневой корочкой и окружен красноватой зоной. Регионарный лимфатический узел увеличен иногда до размера голубиного яйца. Сыпь розеолезно-папулезного характера с геморрагическими превращениями появляется обычно на 4 – 5-й день болезни, иногда покрывает все туловище и конечности, иногда менее обильна, часто она оставляет пигментацию. Выраженность симптомов варьирует, поэтому различают легкие, средние и тяжелые формы болезни.

Лабораторная диагностика. У больного человека возбудитель обнаруживается в крови. Для его выделения можно заражать морских свинок, куриные эмбрионы или культуру клеток, с последующей идентификацией в реакциях нейтрализации с использованием специфических антисывороток. Однако, как и при других риккетсиозах, наиболее приемлемыми являются серологические реакции (РСК, РПГА, агглютинации) с использованием специфических риккетсиозных антигенов. Титр комплементсвязывающих антител невысокий (1: 20 – 1: 160); РСК, как правило, положительна с 11-го дня болезни; она может быть использована и для ретроспективного диагноза североазиатского риккетсиоза. Положительная РПГА (титр 1: 200 и более) обнаруживается со 2-й нед. болезни и является показателем только свежего заболевания.

Лечение. Эффективно применение антибиотиков (тетрациклины, макролиды, левомицетин).

Профилактика: применение средств индивидуальной защиты от нападения клещей и уничтожение клещей во внешней среде. Специфическая профилактика не разработана.

Везикулезный риккетсиоз – доброкачественное заболевание, характеризующееся наличием первичного аффекта и своеобразной папулезно-везикулезной сыпи. Впервые оно было описано в 1946 г. Л. Суссманом и независимо от него рядом других авторов. Р. Хюбнер, П. Штампс и С. Армстронг предложили назвать эту болезнь (из-за сходства ее с ветряной оспой) риккетсиозной оспой. Аналогичное заболевание под названием везикулезный риккетсиоз было выявлено на юге Украины и подробно изучено в 1948 – 1950 гг. И. Р. Дробинским, С. М. Кулагиным и В. М. Ждановым.

Возбудитель риккетсиозной оспы – R. acari – был обнаружен в 1946 г. Р. Хюбнером, В. Джеллисоном и С. Армстронгом. Штаммы риккетсий, выделенные в 1950 г. В. М. Ждановым и С. М. Кулагиным из крови больных везикулезным риккетсиозом, получили название Dermacentroxenus murinus. Впоследствии оказалось, что риккетсиозная оспа и везикулезный риккетсиоз и соответственно их возбудители по всем своим проявлениям и свойствам тождественны, поэтому болезнь получила название везикулезного риккетсиоза, а возбудитель сохранил название R. acari. По морфологическим, тинкториальным и биологическим свойствам R. acari ничем не отличается от риккетсий других видов. По антигенной структуре очень близка к R. conorii и R. sibirica, но не имеет антигенного родства с R. prowazekii, R. typhi, Coxiella burnetii. Содержание Г + Ц в ДНК около 32,5 мол %. R. acari трудно культивируется в желточном мешке куриного эмбриона, но хорошо размножается в культурах клеток некоторых линий. Риккетсии располагаются преимущественно внутри ядер и менее интенсивно в цитоплазме.

Морские свинки легко восприимчивы к R. acari, заболевание у них проявляется в виде лихорадки длительностью 5 – 12 дней с одновременным скротальным феноменом у самцов. Инфекция у свинок протекает доброкачественно. Риккетсии обнаруживаются в крови, мозге и в мезотелии влагалищной оболочки яичек. К риккетсиям этого вида также высокочувствительны мыши. При интраназальном заражении у мышей развивается смертельная пневмония, при внутрибрюшинном – острого токсического эффекта не наблюдается, мыши погибают через 12 – 18 дней при явлениях перитонита с обильным слизистым или геморрагическим экссудатом.

Эпидемиология. Эндемические очаги везикулезного риккетсиоза связаны с циркуляцией возбудителя среди клещей-переносчиков и грызунов, на которых они паразитируют. Основным резервуаром риккетсий являются гамазовые клещи Allodermanyssus sanguineus, а также их прокормители – домовые мыши (Mus musculus) и крысы. У гамазовых клещей риккетсии сохраняются пожизненно и передаются трансовариально. Заражение человека происходит при нападении на него клещей (через укусы или при раздавливании). Очаги заболевания формируются в городах. На территории бывшего СССР природные очаги везикулезного риккетсиоза обнаружены в Молдавии, Прибалтийских странах, Белоруссии, Казахстане, на Украине и в приграничных с ней областях России.

Лабораторная диагностика. Наиболее точным методом диагностики служит выделение возбудителя из крови больных. С этой целью заражают морских свинок и белых мышей. Характерным проявлением у мышей инфекции, вызванной R. acari, является своеобразный риккетсиозный перитонит. Для серологической диагностики используется РСК со специфическим риккетсиозным антигеном. Комплементсвязывающие антитела появляются с 6 – 10-го дня болезни у 53 % больных, с 11 – 15-го дня – более чем у 83 %, их титр в течение болезни нарастает, и они могут сохраняться длительное время. Сыворотки крови больных везикулезным риккетсиозом обычно показывают более высокий титр комплементсвязывающих антител, что используется для дифференциации этого риккетсиоза от других.

Лечение. Хороший терапевтический эффект дают тетрациклины, макролиды, левомицетин.

Профилактика должна быть направлена на истребление грызунов и паразитирующих на них гамазовых клещей. Специфическая профилактика не проводится.

Клещевой тиф Северного Квинсленда (Североавстралийский клещевой риккетсиоз). Заболевание было обнаружено в 1946 г. в Северном Квинсленде (Австралия). Протекает в виде доброкачественной лихорадки со средней продолжительностью около недели, сопровождается образованием первичного аффекта в месте укуса клещей, регионарным лимфаденитом и различной по характеру сыпью.

Возбудитель (R. australis) очень похож на R. conorii, но не вызывает острого токсикоза у мышей. Может быть дифференцирован от риккетсий других видов, в том числе от R. rickettsii, R. acari и R. conorii, серологически. Размножается в ядре и цитоплазме эукариотных клеток. У морских свинок при внутрибрюшинном заражении вызывает лихорадку и скротальный феномен. Заражение человека происходит через укусы иксодовых клещей (Ixodes holocylus), паразитирующих на диких зверьках.

К группе клещевой пятнистой лихорадки относится также риккетсиоз доброкачественной формы, вызываемый R. parkeri (R. montana), выделенной из клещей Amblyomma maculatum. R. parkeri могут быть дифференцированы от других риккетсий серологически.