Ротавирусы методические рекомендации по лабораторной диагностике
3.1.1. ПРОФИЛАКТИКА ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ. КИШЕЧНЫЕ ИНФЕКЦИИ
Эпидемиологический надзор, лабораторная диагностика и профилактика ротавирусной инфекции
Дата введения: с момента утверждения
1. Методические указания разработаны Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю.В.Демина); ФГУН НИИЭМ им.Пастера Роспотребнадзора (Л.А.Кафтырева, Л.В.Лялина, Г.Ф.Трифонова, О.И.Кубарь, В.В.Малышев, С.А.Егорова, Д.А.Макаров); ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора (А.Т.Подколзин); ФГУН Нижегородский НИИЭМ им. академика Н.П.Блохиной Роспотребнадзора (Е.И.Ефимов, Н.А.Новикова); Управлением Роспотребнадзора по г.Санкт-Петербургу (А.Н.Афанасьева), ФБУН НИИ Дезинфектологии Роспотребнадзора (Л.Г.Пантелеева).
2. УТВЕРЖДЕНЫ Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 29 июля 2011 г.
3. ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ с 29 июля 2011 г.
4. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.
1. Область применения
1. Область применения
1.1. Настоящие методические указания определяют организацию и порядок проведения эпидемиологического надзора, санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий в отношении ротавирусной инфекции (РВИ), а также порядок сбора, упаковки, хранения, транспортирования и проведения лабораторных исследований клинического материала в целях выявления этиологического агента и проведения его субтипирования.
1.2. Настоящие методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор (контроль), а также для специалистов лечебно-профилактических организаций, осуществляющих лабораторную диагностику РВИ, независимо от их организационно-правовой формы и формы собственности.
2. Термины и сокращения
ВГА - вирусный гепатит А.
ДДУ - детские дошкольные учреждения.
ЖКТ - желудочно-кишечный тракт.
ИФА - иммуноферментный анализ.
КРС - крупный рогатый скот.
ЛПО - лечебно-профилактические организации.
ОКИ - острые кишечные инфекции.
ОГ - острый гастрит.
ОГЭ - острый гастроэнтерит.
ОГЭК - острый гастроэнтероколит.
ОЭ - острый энтерит.
ОЭК - острый энтероколит.
ООС - объекты окружающей среды.
ПАВ - поверхностно-активные вещества.
ПЦР - полимеразная цепная реакция.
РВ - ротавирусы.
РВИ - ротавирусная инфекция.
Рота-Аг - ротавирусный антиген.
3. Общие положения
3.1. Ротавирусная инфекция - антропонозное, высококонтагиозное, острое, инфекционное заболевание, характеризующееся преимущественным поражением ЖКТ, общей интоксикацией, дегидратацией, нередко наличием респираторного (катарального) синдрома в начальном периоде болезни.
3.2. В Международную классификацию болезней Десятого пересмотра "Ротавирусный энтерит" входит в блок "кишечные инфекции" под кодом А08.0.
3.3. Возбудитель относится к семейству Reoviridae подсемейству Sedoreovirinae роду Rotavirus, который включает значительное число сходных по морфологии и антигенной структуре вирусов, способных вызывать гастроэнтериты у млекопитающих и птиц.
3.4. Вирион РВ имеет диаметр 65-75 нм и состоит из электронно-плотного центра (сердцевины) и двух белковых оболочек - внутреннего и наружного капсидов. Сердцевина содержит внутренние белки и фрагментированную РНК, состоящую из 11 сегментов, которые кодируют продукцию белков: шесть структурных (VP1-VP7) и пять неструктурных (NSP1-NSP5). Основным компонентом внутреннего капсида является структурный белок VP6 (основная группоспецифическая антигенная детерминанта РВ). В зависимости от его строения РВ подразделяют на 7 серологических групп: А, В, С, D, Е, F, G. Наружный капсид вириона образован двумя структурными белками, к которым в организме инфицированного человека вырабатываются вируснейтрализующие антитела, - VP7 (G-протеин) и VP4 (Р-протеин). Эти белки обеспечивают адсорбцию вируса и его проникновение в эпителиоциты тонкого кишечника человека и определяют серотип вируса (G и Р серотипы).
3.5. К патогенным для человека РВ, способным вызвать ОКИ, относятся вирусы серогруппы А, В, С. В 98% случаев РВИ у человека (детей и взрослых) вызывают РВ серогруппы А. РВ группы С распространены повсеместно и вызывают в основном спорадическую заболеваемость. РВ группы В имеют эндемичное распространение в некоторых странах Юго-Восточной Азии и способны вызывать групповые заболевания, в том числе среди взрослого населения.
3.6. В серогруппе А выделяют 14 G-серотипов и 11 Р-серотипов РВ. G-серотип зависит от строения VP7 белка наружного капсида (детерминирован девятым сегментом РНК). Р-серотип зависит от строения VP4 белка наружного капсида (детерминирован четвертым сегментом РНК).
3.7. Установлено, что РВ десяти G-серотипов (1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 12) и семи Р-серотипов (Р1, 2А, 3, 4, 5А, 8, 11) могут вызывать заболевания людей. Другие G-серотипы (7, 11, 13, 14) и Р-серотипы (6, 7, 9, 10) выделяются только у животных.
3.8. В последнее десятилетие кроме методов, используемых для серотиповой характеристики, широко применяются методы, позволяющие получить генетическую характеристику РВ (генотипирование). По современной номенклатуре G-серотипы и G-генотипы имеют идентичное цифровое обозначение, а Р-серотипы соответствуют следующим Р-генотипам: например Р-серотип 1В соответствует Р-генотипу 4; 2А - 6; 1А - 8; 3 - 9; 4 - 8; 8 - 11.
3.9. Патогенные для животных и птиц серовары РВ не способны вызывать ОКИ у человека. Известны редкие случаи выделения от людей штаммов РВ, являющихся реассортантами между РВ человека и животных (РВ свиней, кроликов, КРС). Такие эпизоды зафиксированы в регионах с развитым животноводством.
3.10. Среди РВ серогруппы А, способных вызывать заболевание у человека, выделяют:
- повсеместно распространенные серотипы (P1A[8]G1, P1A[8]G3, P1A[8]G4, P1A[8]G9, P1B[4]G2, P2A[6]G9);
- серотипы, имеющие региональное распространение (P1A[8]G5, P1B[4]G8, P2A[6]G1-4,8, P5[3]G3);
- малораспространенные серотипы.
Данное разделение является условным и на протяжении последних лет некоторые серотипы, имевшие ранее малую распространенность (например, P2A[6]G12), получили широкое региональное распространение.
3.11. РВ относительно стабильны в окружающей среде. По устойчивости к хлорсодержащим дезинфектантам, препаратам на основе перекиси водорода и другим средствам, выживаемости во внешней среде: не погибают при обычном хлорировании воды в головных водопроводных сооружениях, выживают в водопроводной воде до 60 дней, на различных объектах внешней среды - от 10 до 30 дней (в зависимости от температуры, влажности воздуха и наличия загрязнений органической природы), их не разрушает многократное замораживание. УФ-излучение в дозе 9 вт/м инактивирует РВ через 15 мин. В фекалиях РВ сохраняются от нескольких недель до 7 месяцев, на фруктах - от 5 до 30 дней, на тканях из хлопка и шерсти - от 12 до 45 дней, на различных поверхностях - до 10 дней, а с органическими загрязнениями - до 16 дней. РВ устойчивы к эфиру, хлороформу, детергентам, гипохлориту - в низких концентрациях; к воздействию ультразвука. Они быстро инактивируются фенольными соединениями, крезолом, формалином. РВ утрачивает инфекционность при кипячении, обработке сильными кислотами и щелочами (инфекционная активность сохраняется в диапазоне рН 3-9). Протеолитические ферменты ЖКТ (панкреатин, трипсин, эластаза) усиливают инфекционную активность РВ, что используется при культивировании вируса в культуре клеток. Белковая структура РВ разрушается в растворах ПАВ, прогревание при 70 °С инактивирует вирус в течение 10 мин, при 80 °С - в течение 1 мин.
4. Эпидемиология
4.1. Основным резервуаром и источниками РВ является человек: лица, переносящие манифестные или субманифестные формы заболевания. Максимальная концентрация возбудителя в фекалиях (до 10 -10 вирионов/мл фекалий) наблюдается в первые 3-5 дней заболевания.
4.2. При спорадической заболеваемости среди неорганизованных детей раннего возраста роль источника чаще выполняют взрослые или дети старшего возраста, переносящие инфекцию в субманифестной форме. В организованных детских коллективах возникновение групповых очагов нередко связано с наличием в них детей-вирусовыделителей после перенесенных манифестных форм заболевания.
4.3. Средняя продолжительность заболевания обычно составляет 5-7 дней. Длительность выделения РВ после исчезновения клинических признаков заболевания может продолжаться до 30-40 дней.
4.4. Инфицирующая доза для детей раннего возраста очень мала (10-10 вирионов); при развитии повторных заболеваний у лиц старшего возраста она существенно выше (10 -10 вирионов).
4.5. Инкубационный период - от 10 ч до 7 дней, чаще - 1-3 дня.
4.6. Основной механизм передачи возбудителя РВИ - фекально-оральный; в редких случаях может реализовываться аэрозольный механизм передачи инфекции.
4.7. Основной механизм передачи возбудителя реализуется контактно-бытовым, водным или пищевым путем. В настоящее время ведущая роль принадлежит контактно-бытовому пути передачи возбудителя.
4.8. Для РВИ в умеренном климатическом поясе характерен сезонный подъем заболеваемости в холодный период года, с максимальными показателями в зимне-весенние месяцы (с ноября по май). Спорадические случаи инфекции выявляются в течение всего года.
4.9. После перенесенного заболевания в сыворотке крови и кишечных секретах появляются антитела к основным антигенам (VP7 и VP4) возбудителя. Однако приобретенный после заболевания или применения живых вакцин иммунитет не предотвращает новые случаи заболевания, но способствует их более легкому клиническому течению. При заболеваниях, вызванных РВ серогруппы А различных антигенных типов (серотипов), наблюдается иммунный ответ, более выраженный в отношении гомологичных и менее выраженный в отношении негомологичных антигенных типов.
4.10. Для РВИ характерны следующие эпидемиологические особенности:
4.10.1. Во всех странах при различных уровнях санитарно-эпидемиологического благополучия населения к возрасту 5 лет около 95% детей переносят РВИ. Во многих странах для оценки активности циркуляции РВ на территории кроме показателей заболеваемости оценивают возрастное распределение случаев манифестного течения РВИ в группе детей младше 5 лет.
4.10.2. РВ поражают население разных возрастных групп, однако преимущественно болеют дети в возрасте до 3 лет и пожилые люди старше 60 лет. Наиболее тяжело протекает у детей первичное инфицирование. Повторные заболевания РВИ сопровождаются менее выраженными клиническими проявлениями или переносятся бессимптомно.
4.10.3. В семейных очагах дети младшего возраста, как правило, заболевают РВИ с клинически выраженными проявлениями. Вовлеченные в очаг дети старшего возраста и взрослые могут переносить заболевание в бессимптомной форме.
5. Эпидемиологический надзор
5.1. Эпидемиологический надзор за ротавирусной инфекцией (РВИ) - это система мониторинга динамики эпидемического процесса, факторов и условий, влияющих на его распространение, анализ и обобщение полученной информации с целью разработки научно обоснованной системы профилактических мер.
5.2. Эпидемиологический надзор за РВИ включает:
- мониторинг заболеваемости населения;
- наблюдение за циркуляцией ротавирусов (РВ), включая результаты исследования проб из объектов окружающей среды и материала от больных;
- изучение биологических свойств РВ (серотипов/генотипов), выделенных из объектов окружающей среды и от людей (больные, контактные) в референс-центрах;
- оценку качества и эффективности проводимых санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий;
- прогнозирование эпидемиологической ситуации.
5.3. Задачи эпидемиологического надзора за ротавирусной инфекцией:
- непрерывная оценка интенсивности эпидемического процесса, масштабов распространения и социально-экономической значимости инфекции;
- изучение тенденций эпидемического процесса, оценка темпов роста (прироста, снижения заболеваемости);
- выявление территорий (регионов, областей, районов, населенных пунктов) с высоким уровнем заболеваемости и риском инфицирования;
- определение контингентов населения, имеющих наибольший риск инфицирования и заболевания;
- выявление причин и условий, определяющих тенденции, уровень и структуру заболеваемости РВИ на территории;
- оценка содержания, масштабов, качества, своевременности и эффективности осуществляемых профилактических и противоэпидемических мероприятий для их оптимальной корректировки, планирования последовательности и сроков реализации;
- разработка прогнозов эпидемиологической ситуации.
5.4. Система эпидемиологического надзора за ОКИ, в том числе РВИ, основана на результатах эпидемиологической, клинической и лабораторной диагностики. Эпидемиологическая диагностика включает два тесно связанных между собой и дополняющих друг друга компонента - оперативный (ежедневный) и ретроспективный эпидемиологический анализ заболеваемости. Система надзора за РВИ должна быть адаптирована к существующей системе надзора за ОКИ, базироваться на данных эпидемиологического анализа лабораторно подтвержденных случаев заболевания и бессимптомной инфекции, а также результатах исследования проб из объектов внешней среды в соответствии с действующими нормативно-методическими документами.
В результате проведения эпидемиологического анализа заболеваемости РВИ на конкретной территории за определенный отрезок времени формулируется эпидемиологический диагноз, включающий общую оценку эпидемиологической ситуации, определение территорий (объектов), групп, времени и факторов риска, способствовавших росту заболеваемости, анализ качества и эффективности проведенных санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий.
Эпидемиологический надзор за РВИ проводится территориальными органами, осуществляющими государственный санитарно-эпидемиологический надзор, независимо от ведомственной принадлежности.
6. Мониторинг заболеваемости населения
6.1.1. Диагноз РВИ при спорадической заболеваемости устанавливается на основании клинических, эпидемиологических данных и обязательного лабораторного подтверждения (обнаружение маркеров ротавирусов методом ИФА, ПЦР или другими методами, разрешенными к применению на территории Российской Федерации в установленном порядке).
6.1.2. В групповых очагах ОКИ (при регистрации 5 и более взаимосвязанных случаев заболеваний) исследования на РВ проводятся по клиническим и эпидемиологическим показаниям. Больным из очагов групповых заболеваний ОКИ, в которых имеются лабораторно подтвержденные случаи РВИ, диагноз "ротавирусная инфекция" может быть установлен на основании клинико-эпидемиологического анамнеза.
6.1.3. Окончательный диагноз должен включать: клиническую форму заболевания, тяжесть течения, осложнение и результаты лабораторного обследования на РВ (при спорадической заболеваемости). У лиц с бессимптомной инфекцией диагноз устанавливается на основании результатов проведенного лабораторного исследования и эпидемиологических данных.
6.1.4. Госпитализация лиц, заболевших РВИ, проводится по клиническим и эпидемиологическим показаниям. При легких формах клинического течения заболевания лечение может осуществляться в амбулаторных условиях.
6.2.1. Лабораторные исследования проводятся в соответствии с действующими нормативными правовыми документами с применением диагностических препаратов, разрешенных к применению на территории Российской Федерации в установленном порядке.
6.2.2. Лабораторные исследования на РВ осуществляют лаборатории, организации, структурные подразделения, имеющие санитарно-эпидемиологическое заключение на выполнение работ с микроорганизмами III-IV групп патогенности.
6.2.3. Лабораторным подтверждением диагноза РВИ является обнаружение антигенов или РНК ротавирусов в образцах биоматериала, как правило фекалий.
УТВЕРЖДАЮ
Министр здравоохранения Российской Федерации
УТВЕРЖДАЮ
Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
М.А. Мурашко
А.Ю. Попова
Временные методические рекомендации
ПРОФИЛАКТИКА, ДИАГНОСТИКА И ЛЕЧЕНИЕ НОВОЙ КОРОНАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ (2019-nCoV)
Версия 1 (29.01.2020)
Введение
1. Этиология и патогенез…. . 2
2. Эпидемиологическая характеристика…. 4
3. Диагностика коронавирусной инфекции . 6
3.1. Алгоритм обследования пациента с подозрением на новую
коронавирусную инфекцию, вызванную 2019-nCoV…. 6
3.2. Клинические особенности коронавирусной инфекции . 9
3.3. Лабораторная диагностика коронавирусной инфекции . 10
4. Лечение коронавирусной инфекции . 12
4.1. Этиотропная терапия…. 12
4.2. Патогенетическая терапия…. 14
4.3. Симптоматическая терапия . 17
4.4. Особенности клинических проявлений и лечения заболевания у
детей…. 17
4.4.1. Особенности клинических проявлений…. 17
4.4.2. Особенности лечения…. 20
4.5. Терапия неотложных состояний при коронавирусной инфекции…. 24
4.5.1. Интенсивная терапия острой дыхательной недостаточности….
4.5.1.1 Проведение неинвазивной и искусственной вентиляции легких….
4.5.1.2 Проведение экстракорпоральной мембранной оксигенации….
4.5.2. Лечение пациентов с септическим шоком…. 26
5. Профилактика коронавирусной инфекции…. 27
5.1. Специфическая профилактика коронавирусной инфекции…. 27
5.2. Неспецифическая профилактика коронавирусной инфекции…. 28
5.3. Медикаментозная профилактика коронавирусной инфекции…. 30
6. Маршрутизация пациентов и особенности эвакуационных мероприятий больных или лиц с подозрением на новую коронавирусную инфекцию, вызванную 2019-nCoV…. 30
6.1. Маршрутизация пациентов и лиц с подозрением на новую коронавирусную инфекцию, вызванную 2019-nCoV…. 30
6.2. Особенности эвакуационных мероприятий больных или лиц с подозрением на новой коронавирусную инфекцию, вызванную 2019— nCoV, и общие принципы госпитализации больного, подозрительного на заболевание коронавирусной инфекцией . 34
Приложение 1-4. 44
1
ВВЕДЕНИЕ
Появление в декабре 2019 г. заболеваний, вызванных новым коронавирусом (2019-nCoV), поставило перед специалистами в области охраны здравоохранения и врачами трудные задачи, связанные с быстрой диагностикой и клиническим ведением больных c этой инфекцией. В настоящее время сведения об эпидемиологии, клинических особенностях, профилактике и лечении этого заболевания ограничены. Известно, что наиболее распространенным клиническим проявлением нового варианта коронавирусной инфекции является пневмония, у значительного числа пациентов зарегистрировано развитие острого респираторного дистресс— синдрома (ОРДС).
Рекомендации, представленные в документе, в значительной степени базируются на фактических данных, опубликованных специалистами ВОЗ, китайского и американского центра по контролю за заболеваемостью, а также Европейского Центра по контролю за заболеваемостью в материалах по лечению и профилактике этой инфекции.
Методические рекомендации предназначены для врачей лечебно— профилактических учреждений инфекционного профиля, а также врачей— реаниматологов отделений интенсивной терапии инфекционного стационара.
1. ЭТИОЛОГИЯ И ПАТОГЕНЕЗ
Коронавирусы (Coronaviridae) – это большое семейство РНК— содержащих вирусов, способных инфицировать человека и некоторых животных. У людей коронавирусы могут вызвать целый ряд заболеваний – от легких форм острой респираторной инфекции до тяжелого острого респираторного синдрома (ТОРС). В настоящее время известно о циркуляции среди населения четырех коронавирусов (HCoV-229E, -OC43, -NL63 и —
HKU1), которые круглогодично присутствуют в структуре ОРВИ, и, как правило, вызывают поражение верхних дыхательных путей легкой и средней тяжести.
По результатам серологического и филогенетического анализа коронавирусы разделяются на три рода: Alphacoronavirus, Betacoronavirus и Gammacoronavirus. Естественными хозяевами большинства из известных в настоящее время коронавирусов являются млекопитающие.
До 2002 года коронавирусы рассматривались в качестве агентов, вызывающих нетяжелые заболевания верхних дыхательных путей (с крайне редкими летальными исходами). В конце 2002 года появился коронавирус (SARS-CoV), возбудитель атипичной пневмонии, который вызывал ТОРС у людей. Данный вирус относится к роду Betacoronavirus. Природным резервуаром SARS-CoV служат летучие мыши, промежуточные хозяева – верблюды и гималайские циветты. Всего за период эпидемии в 37 странах по миру зарегистрировано более 8000 случаев, из них 774 со смертельным исходом. С 2004 года новых случаев атипичной пневмонии, вызванной SARS-CoV, не зарегистрировано.
В 2012 году мир столкнулся с новым коронавирусом MERS (MERS— CoV), возбудителем ближневосточного респираторного синдрома, также принадлежащему к роду Betacoronavirus. Основным природным резервуаром коронавирусов MERS-CoV являются верблюды. С 2012 года зарегистрировано 2494 случая коронавирусной инфекции, вызванной вирусом MERS-CoV, из которых 858 закончились летальным исходом. Все случаи заболевания географически ассоциированы с Аравийским полуостровом (82% случаев зарегистрированы в Саудовской Аравии). В настоящий момент MERS-CoV продолжает циркулировать и вызывать новые случаи заболевания.
Новый коронавирус 2019-nCoV (временное название, присвоенное Всемирной организацией здравоохранения 12 января 2020 года) представляет собой одноцепочечный РНК-содержащий вирус, относится к семейству Coronaviridae, относится к линии Beta-CoV B. Вирус отнесен ко II группе патогенности, как и некоторые другие представители этого семейства (вирус SARS-CoV, MERS-CoV).
Коронавирус 2019-nCoV предположительно является рекомбинантным вирусом между коронавирусом летучих мышей и неизвестным по происхождению коронавирусом. Генетическая последовательность 2019— nCoV сходна с последовательностью SARS-CoV по меньшей мере на 70%.
Патогенез новой коронавирусной инфекции изучен недостаточно. Данные о длительности и напряженности иммунитета в отношении 2019— nCoV в настоящее время отсутствуют. Иммунитет при инфекциях, вызванных другими представителями семейства коронавирусов, не стойкий и возможно повторное заражение.
2. ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА
Пути передачи инфекции: воздушно-капельный (при кашле, чихании, разговоре), воздушно-пылевой и контактный. Факторы передачи: воздух, пищевые продукты и предметы обихода, контаминированные 2019-nCoV.
Установлена роль инфекции, вызванной2019-nCoV, как инфекции, связанной с оказанием медицинской помощи. По состоянию на 23.01.2020 в одной из больниц г. Ухань выявлено 15 подтвержденных случаев заболевания среди врачей, контактировавших с больными 2019-nCoV.
Стандартное определение случая заболевания новой коронавирусной инфекции 2019-nCoV
Подозрительный на инфекцию, вызванную 2019-nCoV, случай:
— наличие клинических проявлений острой респираторной инфекции, бронхита, пневмонии в сочетании со следующими данными эпидемиологического анамнеза:
— посещение за последние 14 дней до появления симптомов эпидемиологически неблагополучных по 2019-nCoV стран и регионов (главным образом г. Ухань, Китай);
— наличие тесных контактов за последние 14 дней с лицами, находящимися под наблюдением по инфекции, вызванной новым коронавирусом2019-nCoV, которые в последующем заболели;
— наличие тесных контактов за последние 14 дней с лицами, у которых лабораторно подтвержден диагноз 2019-nCoV.
Вероятный случай инфекции, вызванной 2019-nCoV:
— наличие клинических проявлений тяжелой пневмонии, ОРДС, сепсиса в сочетании с данными эпидемиологического анамнеза (см. выше).
Подтвержденный случай инфекции, вызванной 2019-nCoV:
1.Наличие клинических проявлений острой респираторной инфекции, бронхита, пневмонии в сочетании с данными эпидемиологического анамнеза (см. выше).
2. Положительные результаты лабораторных тестов на наличие РНК 2019-nCoV методом ПЦР.
3. ДИАГНОСТИКА КОРОНАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ
3.1. АЛГОРИТМ ОБСЛЕДОВАНИЯ ПАЦИЕНТА С ПОДОЗРЕНИЕМ НА НОВУЮ КОРОНАВИРУСНУЮ ИНФЕКЦИЮ, ВЫЗВАННУЮ 2019-NCOV
Диагноз устанавливается на основании клинического обследования,
данных эпидемиологических анамнеза и результатов лабораторных исследований.
1. Подробная оценка всех жалоб, анамнеза заболевания,
эпидемиологического анамнеза. При сборе эпидемиологического анамнеза обращается внимание на посещение в течение 14 дней до первых симптомов, эпидемически неблагополучных по 2019-nCoV стран и регионов (в первую очередь г. Ухань, Китай), наличие тесных контактов за последние 14 дней с лицами, подозрительными на инфицирование2019-nCoV, или лицами, у которых диагноз подтвержден лабораторно.
2. Физикальное обследование, обязательно включающее:
— оценку видимых слизистых оболочек верхних дыхательных путей,
— аускультацию и перкуссию легких,
— пальпацию лимфатических узлов,
— исследование органов брюшной полости с определением размеров печени и селезенки,
— термометрию,
с установлением степени тяжести состояния больного.
3. Лабораторная диагностика общая:
-выполнение общего (клинического) анализа крови с определением уровня эритроцитов, гематокрита, лейкоцитов, тромбоцитов, лейкоцитарной формулы;
-биохимический анализ крови (мочевина, креатинин, электролиты, печеночные ферменты, билирубин, глюкоза, альбумин). Биохимический анализ крови не дает какой-либо специфической информации, но обнаруживаемые отклонения могут указывать на наличие органной дисфункции, декомпенсацию сопутствующих заболеваний и развитие осложнений, имеют определенное прогностическое значение, оказывают влияние на выбор лекарственных средств и/или режим их дозирования;
-исследование уровня С-реактивного белка (СРБ) в сыворотке крови. Уровень СРБ коррелирует с тяжестью течения, распространенностью воспалительной инфильтрации и прогнозом при пневмонии;
— пульсоксиметрия с измерением SpO2 для выявления дыхательной недостаточности и оценки выраженности гипоксемии. Пульсоксиметрия является простым и надежным скрининговым методом, позволяющим выявлять пациентов с гипоксемией, нуждающихся в респираторной поддержке и оценивать ее эффективность;
— пациентам с признаками острой дыхательной недостаточности (ОДН) (SрO2 менее 90% по данным пульсоксиметрии) рекомендуется исследование газов артериальной крови с определением PaO2, PaCO2, pH, бикарбонатов, лактата;
— пациентам с признаками ОДН рекомендуется выполнение коагулограммы с определением протромбинового времени, международного нормализованного отношения и активированного частичного тромбопластинового времени.
4. Лабораторная диагностика специфическая:
4. ЛЕЧЕНИЕ КОРОНАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ
В высокоразвитых странах более 60% острых гастроэнтеритов вызывают вирусы из семейства Reoviridae. Среди них доминируют ротавирусы. Род Rotavirus включает ротавирусы человека и вирусы, вызывающие диареи у животных. Последние для человека непатогенные. Ротавирусы человека вызывают, в основном, гастроэнтериты у детей до трех лет и пожилых людей. Возбудитель передается фекально-оральным способом при бытовых контактах. Высокая устойчивость вирусов во внешней среде способствует развитию вспышек гастроэнтеритов особенно в зимний период (до 90%). За белковыми антигенами ротавирусы разделяют на 4 серовариантив.
Материал для лабораторной диагностики
Материалом для лабораторной диагностики служат стул и кровь. Пробы кала принимают в первые часы и дни болезни в стерильные пенициллиновые флаконы и направляют в вирусологической лаборатории в контейнерах со льдом. Готовят 10-20% суспензию в растворе Хэнкса, центрифугируют 30 мин при 3000 об / мин. Центрифугат переносят в стерильный флакон, добавляют фреон 113 или 1000 ЕД / мл пенициллина и 500 ЕД / мл стрептомицина, помещают в холодильник на 10-12 часов. Кровь для серологических реакций принимают в первые 2-3 дня болезни и через 12-14 дней. Лабораторная диагностика вирусных диарей основывается на быстром обнаружении вирусов в кале с помощью электронной и иммунной электронной микроскопии, реакции непрямой гемагглютинации с антительным эритроцитарным вирусных диагностикумом. Используют также иммуноферментный анализ в твердофазном варианте реакцию коаглютинации, метод клонированных РНК-зондов и полимеразной цепной реакции. В первые дни болезни содержание ротавирусов в копроматериалах достигает 106-108 в 1 г, поэтому их обнаружение при прямой электронной микроскопии возможно без дополнительной концентрации. Каплю исследуемого материала наносят на специальные пленки из нитроцеллюлозы и микроскопируют при увеличении 50000. Метод чувствительный и надежный, позволяет быстро обнаружить вирус и исследовать его морфологию. При обнаружении 5-6 вирионов практически в каждом поле зрения можно достоверно подтвердить диагноз ротавирусного гастроэнтерита. Еще большее диагностическое значение имеет метод имуноелектроннои микроскопии. Принцип ее заключается в том, что иммунную противовирусную сыворотку добавляют к освещенной низкоскоростным центрифугированием суспензии фекалий, выдерживают 60 мин при комнатной температуре и еще 12 ч при 4 ° С, затем центрифугируют при 15000 об / мин для осаждения вирусных частиц и иммунных комплексов. Осадок ресуспендируют в 2-3 каплях дистиллированной воды, контрастируют в фосфорно-вольфрамовой кислоты и исследуют под электронным микроскопом. В препаратах обнаруживают характерные скопления ротавирусов. Высокая эффективность метода практически не зависит от исходной концентрации вирусов в исследуемых пробах.
Вирусологические исследования с целью выделения ротавирусов в культурах клеток или на лабораторных животных в рутинных вирусологических лабораториях не проводится. Наиболее широко в диагностике вирусных гастроэнтеритов используют иммуноферментный анализ. Принцип его заключается в том; что лунки полистироловых планшет сначала сенсибилизують антителами против ротавирусов, а затем добавляют в них освещенную суспензию фекалий, инкубируют 1 ч в термостате. Образован в лунках комплекс антиген-антитело после трехкратного промывания фосфатным буфером проявляют внесением антиглобулиновои сыворотки, конъюгированных с ферментом. После инкубации в термостате добавляют хромогенных субстратов до появления окрашенного продукта реакции. Учет результатов проводят с помощью иммуноферментного анализатора. В небольших лабораториях достаточно часто проводят реакцию обратной непрямой гемагглютинации с использованием антительного ротавирусного эритроцитарного диагностикума. Она проста по методике постановки, хотя и менее чувствительна по сравнению с реакцией ензиммичених антител. В практику лабораторной диагностики вирусных инфекций вводят также тест коаглютинации для индикации ротавирусного антигена в кале больных. На предметное стекло наносят каплю взвеси стафилококков (штамм Cowan 1), сенсибилизированных ротавирусной сывороткой, и добавляют каплю освещенного центрифугированием копроматериалу. При наличии ротавирусов через 30-60 с возникает агглютинация нагруженных антителами стафилококков. Очень чувствительным способом быстрой диагностики вирусных гастроэнтеритов является метод выявления вирусоспецифические РНК с помощью молекулярной гибридизации. Он основан на гибридизации меченых РНК-зондов, фиксированных на нитроцеллюлозные фильтрах. Мечение осуществляют биотином или ферментом, что значительно упрощает и удешевляет метод по сравнению с радиоизотопными метками.
Анализ ротавирусной РНК
Анализ ротавирусной РНК, несмотря на его дороговизну, все шире внедряется в практику, особенно после разработки метода полимеразной цепной реакции. Последняя является чувствительным и специфическим методом диагностики, который, безусловно, является диагностическим тестом нового поколения, так называемым "золотым стандартом". Однако постановка этой реакции все еще требует высокой квалификации исследователя, дорогих реактивов и сложной аппаратуры.
Серологическая диагностика направлена на выявление специфических антител в парных сыворотках, взятых с двухнедельным интервалом. Для этой цели используют различные нейтрализационных или преципитацийни тесты и непрямую реакцию иммунофлюоресценции. Но в последнее время широко применяют иммуноферментный анализ. Раньше для серодиагностики широко ставили РСК с использованием в качестве антигена предварительно отобранные фекалии больных гастроэнтерит или ротавирусы телят. Но по своей чувствительностью и специфичностью она значительно уступает метода иммуноферментного анализа. Для выявления специфических антител к ротавирусов ставят также реакцию торможения непрямой гемагглютинации с парными сыворотками. Гастроэнтериты у детей могут также вызвать калицивирусы, астровирусы и вирусы Норволк. Все они выделяются с испражнениями в первые 2-3 дня заболевания, не размножаются в культурах клеток или слабо репродуцируются без цитопатического действия. Для лабораторной диагностики гастроенетеритив, вызванных данными вирусами, используют, в основном, метод иммунной электронной микроскопии. Других методов диагностики, доступных для вирусологических лабораторий, пока нет.
Читайте также:
