Методы концентрирования вирусов в воде
С введением в действие СанПин 2.1.4.559-96 "Вода питьевая", а также СанПин 2.1.5.980-2000 "Гигиенические требования к охране поверхностных вод" разработана новая нормативная база, предусматривающая контроль качества воды различного вида водопользования не только по показателям бактериального, но и вирусного загрязнения, в частности по колифагам, а также энтеровирусам.
В связи с низкой концентрацией вирусов в воде, важным первичным этапом вирусологического исследования является их концентрирование из больших объемов воды (10-100 л и более до 10 - 50 мл).
Минимальный размер патогенных вирусов составляет 0,03 микрометра, что значительно меньше размера пор микрофильтрационной мембраны. Поэтому для их выделения можно использовать низкопроизводительные мембраны (нанофильтры), либо микрофильтрационные мембраны обладающие повышенной сорбцией вирусов.
Схема установки с использованием компрессора и напорной емкости
Установка для вирусологического анализа состоит из мембранного модуля МФМ-0142 с мембраной ММПА+, напорной емкости на 10 л ( или 20л) и компрессора. Исследуемую воду заливают в напорную емкость, крышку которой тщательно закрывают и включают компрессор. С помощью компрессора в напорной емкости создается давление 1,0-1,5 Bar. В процессе фильтрации фильтрат поступает на слив, а концентрат вирусов остается на мембране модуля.
Схема установки концентрирования вирусов с перистальтическим насосом
При фильтрации значительных объемов исследуемой воды предлагается разработанная схема с перистальтическим насосом. Исследуемая вода из расходной емкости подается перистальтическим насосом на мембранный модуль МФМ-0142. Фильтрат после модуля поступает в сборник фильтрата, а концентрат остается на мембране. При фильтрации сильнозагрязненной воды установка комплектуется предфильтром в виде капсульного фильтра (миникапсула МКМ).
Стадия элюции вирусов
Используемый ранее большинством вирусологов способ элюции предусматривал изъятие мембраны из модуля и механический смыв вирусов с мембраны струей элюента из пипетки, что представляло определенную опасность инфицирования работающего персонала. Исключение риска инфицирования возможно было только при выполнении данной процедуры в условиях ламинарного бокса, что сопряжено с существенными сложностями и значительными финансовыми затратами.
В разработанном специалистами НПП "Технофильтр" способе элюция вирусов осуществляется без извлечения мембраны, т.е. в режиме закрытого модуля.
Элюция вирусов с мембраны осуществляется без разборки модуля (в закрытом режиме), путем продавливания элюента в три приема по 20 мл двумя одноразовыми шприцами. Шприцы, один из которых содержит элюент, присоединяется к стыковочным устройствам на линии воды и на линии выхода фильтрата. Все соединительные шланги оснащены быстросъемными соединениями. В каждый прием элюент продавливается через мембрану с помощью этих шприцов не менее 8÷10 раз.
Рекомендовано НИИ ЭЧ и ГОС им. А.Н. Сысина
Основные преимущества мембранного модуля МФМ-0142
Основными достоинствами фильтрующего модуля МФМ-0142 (ТУ 3614-005-32915592-2005) являются:
- возможность совмещения процессов концентрирования и элюции в одном аппарате,
- высокая эффективность концентрирования и элюции, достигаемая за счет оригинальной конструкции, обеспечивающей интенсивный массоперенос жидкости над мембраной и через неё,
- возможность осуществления щадящих условий концентрирования и десорбции вирусов (фильтрация проводится при средах близких к нейтральным без использования каких-либо реагентов),
- снижение количества элюанта до 60мл,
- обеспечение безопасности обслуживающего персонала (элюция проводится с помощью шприцев без разборки аппарата),
- простота и удобство при эксплуатации.
Особенности и преимущества мембран ММПА+
Высокая эффективность мембран ММПА+-0,2 была подтверждена при многочисленных испытаниях (фильтрация речной воды, воды из подземных источников, а так же сточных вод). В 2007 году в Нижегородском НИИ эпидемиологии и микробиологии им. И.Н. Блохиной мембраны ММПА+-0,2 были использованы в процессе концентрирования вирусов гепатита А, одного из трудно культивируемых вирусов. Были использованы искусственно приготовленные суспензии ВГА в дистиллированной воде взятых в разведении от 1·10-4 до 1·10-8 ПУЛ.
Установлено, что использование мембран ММПА+-0,2 обеспечивает повышение чувствительности метода контролирования ВГА на 2 порядка по сравнению с ранее известными методами. При этом достигается надежное удержание вируса даже при концентрациях ниже пороговой чувствительности используемого метода. Было показано, что концентрирование вирусов на мембране ММПА+-0,2 можно проводить при нейтральном рН в отличие от нитроцеллюлозных мембран, для которых достаточный уровень выделения достигается при рН ниже 4,0. Поскольку элюирование собранных вирусов не всегда удобно проводить сразу же после концентрирования важно, чтобы условия проведения процесса и сам материал фильтрата не оказывали влияния на жизнеспособность вируса (экстремальные значения рН могут инактивировать некоторые вирусы). Этим требованиям в наибольшей мере соответствует мембрана ММПА+.
Сравнительные испытания мембран ММПА+-0,2 дают основания для заключения об их превосходстве над остальными по эффективности задержания производительности и универсальности.
Ловушечное устройство состоит из насадки на водопроводный кран, к которой с помощью синтетической трубки прикреплен держатель. В держатель, состоящий из двух свинчивающихся частей с резьбой, вставляется специальная ловушка, внутри которой находится адсорбент, сорбирующий вирусы из воды. Применяемая ловушка является одноразовой, а само устройство может использоваться после стерилизации многократно в соответствии с прилагаемой инструкцией.
5.6.1. Область применения
Метод используют для концентрирования вирусов из водопроводной воды.
5.6.2. Подготовка ловушечного устройства и фильтрование воды
Перед использованием в ловушечное устройство вставляют ловушку, после чего его заворачивают в бумагу для стерилизации и стерилизуют сухим жаром при температуре 80 °С 45 мин. Ловушечное устройство с вставленной ловушкой доставляют на место отбора в стерильной упаковке. После трехкратного обжигания водопроводного крана и спуска воды в течение 15 мин устанавливают необходимую скорость ее протекания - 1 л за
1,5 мин, что составляет 40-45 л/ч. Ловушечное устройство извлекают из стерильной упаковки и устанавливают его на кран. Объем пропускаемой воды должен составить 1 000 л, что достигается при скорости тока воды 40-45 л/ч в течение 24 ч. Спустя 24 ч ловушечное устройство снимают с крана и помещают в стерильный пакет, который доставляют в вирусологическую лабораторию. После извлечения ловушки использованное ловушечное устройство подвергают обеззараживанию в 3 % растворе перекиси водорода в течение 12 ч, затем многократно (не менее 10 раз) промывают в проточной воде и высушивают для последующей стерилизации и повторного использования.
5.6.3. Элюция сконцентрированных вирусных частиц
Ловушку с адсорбентом в стерильных условиях извлекают из ловушечного устройства и помещают в чашку Петри. С помощью ножниц ловушку вскрывают, содержащийся внутри адсорбент вымывают в чашку Петри стерильной дистиллированной водой в объеме 5-10 мл. Полученную взвесь адсорбента в дистиллированной воде переносят с помощью пипетки с отпиленным концом в стеклянную колонку. Вытекающую из колонки воду собирают в стерильный пенициллиновый флакон. Элюцию вирусов осуществляют с помощью специального элюента, содержащегося в наборе. Для получения рабочего раствора концентрат разводят стерильной дистиллированной водой в соотношении 1:10 (объем элюента/объем воды). Вирус элюируют путем пропускания 3 мл элюента через адсорбент в колонке. Полученную фракцию (элюат) собирают в стерильный пенициллиновый флакон.
Использованный адсорбент заливают 3 % раствором перекиси водорода для обеззараживания на 12 ч.
С целью увеличения эффективности обнаружения вирусов в элюатах проб воды при исследовании методом ПЦР (обнаружение РНК энтеровирусов) и ИФА (обнаружение антигенов энтеровирусов) проводят дополнительное концентрирование элюатов с помощью ультрацентрифугирования либо обрабатывают элюаты полиэтиленгликолем 6000 (ПЭГ 6 000).
5.6.3.1. Ультрацентрифугирование элюата.
Ультрацентрифугирование проводят при 40 000-50 000 g в течение 2 ч с использованием угловых или бакет-роторов. В стерильную центрифужную пробирку наливают вируссодержащий элюат, а затем с помощью шприца на дно пробирки наслаивают 10-20% раствор сахарозы так, чтобы она занимала 5-10 % от объема пробирки. После центрифугирования супернатант удаляют. Осадок ресуспендируют в 0,5 мл стерильной дистиллированной воды для ПЦР-исследований или в фосфатно-солевом твинсодержащем буфере (рН 7,2) для ИФА.
5.6.3.2. Обработка элюата полиэтиленгликолем 6 000 (ПЭГ 6000).
В элюат добавляют ПЭГ 6000 и хлористый натрий, находящийся непосредственно в пробирках для центрифугирования, до конечных концентраций 10 % и 0,5М, соответственно. Смесь тщательно перемешивают до растворения ПЭГ и затем выдерживают в течение 10-12 ч при 4 °С. Образовавшуюся суспензию центрифугируют при 10000 g в течение 1 ч или при 6000 g в течение 2 ч. Супернатант удаляют, а осадок ресуспендируют в 0,5 мл стерильной дистиллированной воды для ПЦР-исследований или в фосфатносолевом твинсодержащем буфере (рН 7) - для ИФА.
Очистка вирусов обычно осуществляется в три стадии:
1) осветление клеточного лизата;
2) концентрирование вирусной суспензии;
3) собственно очистка концентрированной суспензии.
Осветление нативных культуральных жидкостей проводится с целью удаления из них остатков клеток, упрощения дальнейшей очистки, и для облегчения эффективной обработки вирусов инактивирующими агентами. Осветление осуществляется методами фильтрации и центрифугирования. Часто оба указанных метода применяются в сочетании друг с другом, причем фильтрация сопровождает непрерывное центрифугирование.
Существует много способов концентрирования и очистки вирусов. Наиболее распространенные:
1. Методы преципитации. Преципитация (осаждение) нейтральными солями или органическими растворителями была первым методом, который применялся в крупномасштабном производстве очищенных вирусов, хотя многие вирусы более или менее нестабильны в присутствии органических растворителей.
2. Адсорбция-элюирование. Разработан процесс очистки и концентрирования, основанный на адсорбции вирусных частиц к нерастворимому комплексу, образуемому высокомолекулярным полимером этиленоксидом и ионами кальция. Сформированный с частицами вируса тройной комплекс выводится из системы преципитацией, а затем выделяется из смеси центрифугированием.
3. Ультрафильтрация. Ультрафильтрация представляет собой процесс, с помощью которого смесь веществ различной молекулярной массы в жидкой фазе подвергается разделению при прохождении ее под давлением через мембраны, имеющие определенный размер пор. Разделение происходит главным образом в зависимости от размеров молекул. Ультрафильтрация очень широко применяется для концентрирования вирусов и замены водной фазы вирусных суспензий перед дальнейшей очисткой.
4. Ультрацентрифугирование в градиенте плотности. Применяется для полной очистки вирусов. Для использования градиентов плотности используют несколько сред, наиболее часто - сахарозу и хлорид цезия.
5. Метод ионообменной хроматографии. Концентрирование и очистку вирусов можно проводить с помощью колоночной ионообменной хроматографии. В качестве ионообменников обычно используют иониты, приготовленные на основе целлюлозы: ДЭАЭ, ТЭАЭ, эктеола и др.
6. Хроматография вирусов по размерам. Применяют сефадексы (молекулярные сита), которые позволяют разделить вирусы по величине частиц.
Оценка чистоты вирусных препаратов.Определение степени чистоты сложных субстанций (вирусные частицы) представляет значительные технические трудности. Гомогенный или монодисперсный, препарат вируса -это препарат, состоящий из частиц, однородных по размерам, форме, электрофоретической подвижности, плотности и антигенным свойствам. Эти критерии и лежат в основе методов, применяемых для проверки чистоты вирусных препаратов.
Для определения чистоты вирусных препаратов применяют следующие методы:
- электронная микроскопия вирусных частиц;
- центрифугирование в градиенте плотности.
В случае вирусных иммунобиологических препаратов, где очень сложная природа вирусных частиц может сделать трудными для оценки многие физико-химические критерии чистоты, главнейшей задачей очистки является удаление нежелательных иммуногенных и инфекционных материалов. В случаях, когда необходимо убедиться в отсутствии потенциальных контаминантов, таких, как сыворотка крови животных, наиболее подходящими являются серологические методы. Они в совокупности с другими физическими, химическими или биологическими тестами, придающими оценке препарата законную силу, составляют основу спецификации продукта.
Инактивация вирусов
При изготовлении некоторых препаратов (вакцин) вируссодержащую суспензию подвергают инактивации. Трудности производства инактивированных вакцин заключаются в необходимости строгого контроля за полнотой инактивации вируса. Методы инактивации делят на две общие группы: физические и химические. Наиболее часто в промышленном производстве используют химические методы.
Широкое применение в качестве инактивирующего агента получил формальдегид; для производства противоящурных вакцин во всем мире широко применяются азиридины; для инактивации вирусов ящура, болезни Ньюкасла, бешенства энцефалитов лошадей и др. используют β-пропиопактон.
Поскольку инактивирующие агенты легко реагируют с невирусными белками и некоторыми компонентами питательных сред, при выборе концентрации инактиванта необходимо учитывать степень чистоты препарата.
Физические инактивирующие агенты имеют ограниченное применение: ультрафиолетовый свет и ионизирующая радиация инактивируют нуклеиновые кислоты вирусов, при их применении необходимо учитывать, что повышение дозы облучения ведет к снижению антигеннности препарата. Тепловое воздействие на вирусы в целях уничтожения их инфекционности при сохранении иммуногенности также ограничено. Температура часто играет роль критического фактора при инактивации вирусов с применением химических средств.
Последнее изменение этой страницы: 2017-01-24; Нарушение авторского права страницы
Информация
Добавить в ЗАКЛАДКИ| Поделиться: |
Концентрирование вирусаДля выделения вирусов из воды применяют и седи-ментационные процессы. Установлено [86], что ультрацентрифугирование образцов бытовых сточных вод можно рассматривать как наиболее эффективный метод концентрирования вируса. Он позволяет чаще, чем при использовании других методов, выделять вирусы из инфицированной воды. Возможность выделения вирусов из воды с низким содержанием в ней болезнетворных агентов реальнее, по нашему мнению, при использовании материалов, обладающих адсорбционными свойствами и последующим осаждением их на центрифугах с ускорением до 15 ООО £.[ . ] Существующие методы концентрирования и изоляции вирусов из проб воды можно условно подразделить на несколько групп, сформированных по принципу используемых процессов. Это методы концентрирования вирусов с преимущественным использованием адсорбции или седиментации; метод выпаривания исследуемого образца жидкости [8]; диализ его [69], а чаще комбинацией различных процессов. Однако из-за недостаточной эффективности методы диализа и выпаривания не нашли широкого применения при проведении санитарно-вирусологических исследований.[ . ] К упоминавшемуся методу концентрирования вирусов при помощи ватно-марлевых салфеток можно было бы отнести недавно предложенный Г. А. Багдасарьян и В. Ф. Жевержеевой [3] метод пенной флотации. В качестве адсорбента вирусов применяли нативную бычью сыворотку по 0,1 мл на 100 мл испытуемой воды. Одновременно белки сыворотки крови выполняли функцию пенообразователя. При продувании исследуемого образца воды на поверхность жидкости воздухом выносилась пена, состоящая из сыворотки с адсорбированными на ней вирусами. В экспериментально зараженной воде Г. А. Багдасарьян и В. Ф. Жевержеевой удавалось сконцентрировать энтеровирусы в 50 раз. Этот метод перспективен для выделения энтеровирусов из открытых водоемов при условии значительного увеличения первоначального объема пробы.[ . ] На различных стадиях выделения вируса возникает необходимость сконцентрировать вирусный препарат и удалить из него соли или сахарозу. Для вирусов, которые стабильны при осаждении, с целью концентрирования вируса и удаления низкомолекулярных примесей обычно применяют высокоскоростное центрифугирование, а для удаления или смены солей используют обычный диализ. Для работы с нестабильными вирусами применяют некоторые другие приемы. К препарату можно добавить порошок сухого геля (например, сефадекса) или поместить препарат в мешочек для диализа, обложенный порошком сухого геля, и оставить на холоду в течение нескольких часов. Для концентрировапия больших объемов и удаления солей можно применить ультрафильтрацшо под давлением через мембранные фильтры. Испарение, которое происходит в то время, когда препарат вируса находится в мешочке для диализа и висит в токе воздуха, может вызвать потери вируса вследствие локального подсушивания стенок мешка и концентрирования в таких местах солей, имеющихся в препарате. Для концентрирования очищенных препаратов ВТМ применяются также бактериальные фильтры из пористого стекла с размером пор 1,0—1,7 мкм [1308]. Задержка вируса на фильтре зависит от концентрации соли и обусловлена, по-видимому эффектом высаливания и адсорбцией вируса на поверхности стекла. Далее вирус элюируют с фильтра водой.[ . ] Постоянный мониторинг проб воды на вирусы пока не доступен большинству местных лабораторий, контролирующих качество водоисточников. Однако существует возможность вирусологического исследования замороженных проб воды, содержащих концентрированный вирус, которые могут длительно храниться при температуре —20°С.[ . ] Факт существования разнообразных методов концентрирования вирусов из воды указывает на отсутствие единого эффективного дешевого метода, доступного для всех исследований в полевых условиях.[ . ] Б. Метод накопления в питательных средах. В концентрированную питательную среду вводят 10—60 мл анализируемой пробы [13] или большие объемы среды, приготовленной из исследуемой воды, засевают в культуры клеток [14]. Хотя концентрирование вирусов из воды до заражения в этих случаях не проводится, тем не менее определение вирусов этим методом увеличивается по сравнению с обычным посевом.[ . ] Центрифугирование при высокой скорости в течение достаточного периода времени приводит к осаждению вируса. Если при этом вирус не денатурирует, то его можно затем перевести в активной форме обратно в раствор. Этот этап выделения очень важен, так как он преследует сразу две цели. Во-первых, при этом происходит концентрирование вируса, а во-вторых, препарат вируса освобождается от низкомолекулярных примесей. Не следует применять при центрифугировании растворы вирусов в низкой концентрации, так как это приводит к значительным потерям (фиг. 3).[ . ] Эти методы требуют дальнейшей разработки с использованием ряда вирусов. Их, вероятно, можно рассматривать как полезный этап на пути первичного концентрирования вируса из осветленного клеточного экстракта.[ . ] При отборе проб для вирусологического анализа следует выполнять все требования, установленные для отбора проб для микробиологического анализа. Однако в данном случае могут потребоваться большие объемы пробы. Здесь могут потребоваться методы концентрирования пробы, однако следует помнить, что даже самые новейшие методы концентрирования вирусов в воде все еще находятся в стадии совершенствования.[ . ] Вирусологическими, бактериологическими и санитарно-химическими исследованиями процесса очистки бытовых сточных вод на лабораторных моделях сооружений подземной фильтрации и в естественных условиях ими установлено, что бытовые стоки хорошо освобождаются от вирусов. В качестве тест-организмов использовались вирусы Коксаки А5, А14 и бактериофаг кишечной палочки № 163. Хотя после искусственного инфицирования сточная жидкость содержала 105ИД50 вируса/мл, в 0,1— 1,0 мл фильтрата сточной жидкости, полученного после сооружений, обнаружить вирусы не всегда удавалось. Поэтому исследователи для концентрирования вирусов использовали ионообменники, в частности ЭДЭ-10П. Однако выделить вирусы из фильтрата позже 20 дня со времени внесения не удавалось. В то же время случаи выделения в упомянутый срок составляли не более сотых долей процента (0,042% и близкие к этому цифры).[ . ] Тем не менее еще не устранены следующие их недостатки: сложность и трудность изготовления строго калиброванных пор; малая производительность фильтров; необходимость использования больших перепадов давления; очень ограниченная концентрация микроорганизмов в жидкости (не более 100 клеток в 1 л), поскольку в противном случае фильтры быстро забиваются, так как весь задерживаемый материал собирается на верхней поверхности, а не в объеме фильтров, и их регенерация практически невозможна. Для увеличения срока службы фильтров осуществляют предфильтрацию, во время которой пытаются отделить возможно большее количество грубодисперсных примесей, что, хотя и несколько увеличивает срок службы мембран фильтра, усложняет процесс фильтрования. Производительность фильтра составляет 1000 л/ч, и его используют для концентрирования вирусов из значительных объемов воды.[ . ] Методические рекомендации по организации и проведению эпидемиологического и санитарно-вирусологического надзора за качеством воды водоисточников, питьевой воды в системе водоснабжения с целью профилактики заболеваемости гепатитом А и другими кишечными . Вид документа: Принявший орган: Госкомсанэпиднадзор России Тип документа: Нормативно-технический документ
УТВЕРЖДАЮ Председатель Государственного Комитета по санитарно-эпидемиологическому надзору РФ E.H.Беляев 11 сентября 1992 года 01-19/12-13 НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды им. А.Н.Сысина РАМН к.м.н. Недачин А.Е., к.б.н. Дмитриева Р.А., к.м.н. Доскина Т.В., к.м.н. Корнилова Н.М., Лезновенко Э.А. - разделы 1, 2, 3; приложения 1, 2. тел. 245-04-46 Нижегородский НИИ эпидемиологии и микробиологии профессор Алейник М.Д., к.м.н. Блохин К.В., к.м.н. Быстрова Т.Н., Бурков А.Н. - раздел 3, приложения 3, 5. тел. 33-86-09 НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи РАМН - профессор Васильева В.И., к.м.н. Асратян А.А., Као-Минь Нга - раздел 2. тел.193-43-01 НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН - к.м.н. Счастный Э.И. - раздел 2. тел. 190-28-69 НИИ вирусологии Узбекской АН - к.м.н. Макарова Г.И. - раздел 2, приложение 4. тел. 62-52-24 Методические рекомендации предназначены для центров санэпиднадзора и научно-исследовательских институтов В настоящее время проблема организации и осуществления контроля вирусного загрязнения водных объектов, а также воды в системе водообеспечения является одной из наиболее актуальных в связи с ростом заболеваемости населения кишечными вирусными инфекциями с фекально-оральным механизмом передачи, распространяемыми на основе реализации водного фактора, являющегося ведущим на ряде территорий страны. В этих условиях особое значение приобретают вопросы контроля и оценки качества воды водных объектов в отношении возбудителей вирусного гепатита (ВГА) в связи с отсутствием тенденции к регулированию эпидемического процесса данной инфекции, а также вызываемого ею значительного экономического ущерба. Отсутствие до настоящего времени мер эффективной профилактики в отношении вирусных гепатитов с фекально-оральным механизмом передачи диктует необходимость разработки ускоренных методов индикации их возбудителей во вредных объектах, что чрезвычайно важно для своевременного планирования и проведения комплексных санитарно-гигиенических и противоэпидемических мероприятий, направленных на ограничение циркуляции возбудителей вирусных гепатитов и других кишечных инфекций вирусной этиологии, распространяемых водным путем. Вирусологический контроль водных объектов окружающей среды, включающий определение в воде колифагов, энтеровирусов и антигена вируса гепатита А, крайне необходим в настоящее время, что нашло отражение в приказе МЗ СССР N 543 от 08.07.88 "О мерах совершенствования и организации работы вирусологических лабораторий", в котором определены задачи практических лабораторий, предусмотрены положения и основные направления работы, а также номенклатура вирусологических исследований лабораториями санитарно-эпидемиологических станций, где наряду с адено- и энтеровирусами предусматривается определение в питьевой воде и воде открытых водоемов возбудителей вирусных гепатитов с фекально-оральным механизмом передачи. Эти задачи также определены Приказом МЗ СССР N 408 от 12.07.89 "О мерах по снижению заболеваемости вирусными гепатитами в стране" (п.2.4). Однако в практике санитарно-эпидемиологической службы непосредственный вирусологический контроль водных объектов связан с рядом трудностей, таких как слабая оснащенность лабораторий, трудоемкость исследований, требующих специального и дорогостоящего оборудования, диагностикумов, культур тканей и, что является главным, недостаточной разработанностью методических приемов индикации важных вирусов: гепатита А, Е и др. В связи с вышеизложенным текущий санитарно-вирусологический контроль объектов необходимо осуществлять и с использованием косвенных показателей, что является более экономичным и дает быстрый ответ о степени эпидемической опасности водных объектов в отношении вирусного загрязнения. В соответствии с результатами, полученными по косвенным показателям, проводится прямое определение вирусов, и в том числе антигена вируса гепатита А. Кратность этих исследований определяется врачом-эпидемиологом. Определение колифагов проводится в бактериологических лабораториях центров санэпиднадзора всех уровней: районных, сельских, городских, областных, республиканских (приложение 1); определение энтеровирусов - в вирусологических лабораториях городских, областных и республиканских центров санэпиднадзора (приложения 2, 3); определение антигена ВГА - в вирусологических лабораториях областных, республиканских центров санэпиднадзора и лабораториях НИИ, имеющих соответствующее оборудование и диагностикумы. 2.1. Санитарно-гигиенические показания Проведение текущего санитарно-эпидемиологического надзора основывается на комплексной оценке санитарного состояния и коммунального благоустройства территории, а также конкретной эпидемической обстановки по заболеваемости населения кишечными инфекциями бактериальной и вирусной этиологии, включая вирусный гепатит А. Так, при анализе санитарно-гигиенического состояния контролируемых населенных пунктов определяется, насколько соответствуют изучаемые показатели качества воды регламентируемым нормативам. Постоянное неудовлетворительное санитарное состояние изучаемой территории, низкая эффективность работы очистных сооружений, а также несоответствие качества воды различных видов водопользования гигиеническим нормативам свидетельствует о формировании на данной территории ситуации, при которой возникает потенциальная возможность влияния одного или нескольких факторов на интенсивность эпидемического процесса. Подтверждением этого будут высокие и достоверно различные уровни заболеваемости гепатитом А на контролируемых территориях при наличии статистически достоверных различий между санитарно-гигиеническими показателями сравниваемых территорий. Нарушение санитарного статуса территорий, представляющее потенциальную эпидемическую опасность или ведущее к возникновению вспышек заболеваний, связанных с водообеспечением населения, происходит в основном по следующим причинам:
* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ Р 51232-98. - Примечание изготовителя базы данных.
2.2. Эпидемиологические показания В настоящее время известно, что значительная доля неидентифицированных острых кишечных инфекций (ОКИ), распространяющихся водным путем, имеют вирусное происхождение. Отмечено также, что росту заболеваемости ГА может предшествовать подъем ОКИ, что свидетельствует об активности факторов передачи, и в том числе водного, на основе которого реализуется развитие эпидемического процесса кишечных инфекций бактериальной и вирусной этиологии. Поэтому одним из важных показателей, свидетельствующих о необходимости проведения вирусологического обследования питьевой воды и воды водоисточников, является подъем заболеваемости населения, и особенно детей, ОКИ, и в первую очередь, ОКИ неидентифицированной этиологии, особенно на территориях, постоянно неблагополучных по вирусным гепатитам. Анализ вспышек ГА, связанных с водным фактором, свидетельствует о нескольких вариантах развития вспышечной заболеваемости. Описаны "колодезные", "бочковые", "арычные" вспышки, а также вспышки, связанные с авариями на водопроводе и канализации. Следует иметь в виду, что к вспышкам ГА приводила также контаминация пищевых продуктов водой, загрязненной ВГА. Наконец, зарегистрированы вспышки ГА, связанные с купанием в бассейнах и неконтролируемых водоемах. Острые водные вспышки следует разделять на вспышки с "веерообразной" передачей возбудителя сразу большому количеству людей. При одномоментном заражении весь период заболеваемости ГА ограничивается колебаниями длительности одного инкубационного периода. Такой характер вспышек наблюдается весьма редко. Гораздо чаще бывают вспышки "смешанного" типа, когда возможно взрывообразное (эксплозивное) начало с последующим эпидемическим "хвостом". В данном случае динамика заболеваемости напоминает кривую "нормального распределения" с максимумом в середине всего периода заболеваемости. Наибольшее количество случаев приходится на сроки среднего инкубационного периода, но достаточно много случаев ГА приходится на сроки, в два раза превышающие инкубационный период. При длительном действии фактора передачи определяется более растянутое течение вспышки (эпидемии), которое может намного превышать длительность 2-3 инкубационных периодов. Так как не требуется непосредственного контакта источника инфекции и заражающихся людей, то интенсивность развития и длительность вспышки определяются активностью действия фактора передачи. Поэтому возможны вяло протекающие вспышки ГА, связанные с контаминацией воды в течение достаточно длительного времени. На территориях с большим количеством источников инфекции и неудовлетворительным состоянием коммунального благоустройства, что приводит к постоянному вирусному загрязнению воды различных видов водопользования, наблюдаются хронические водные эпидемии. Хронические водные эпидемии проявляются постоянно высоким уровнем заболеваемости ГА, сезонными флуктуациями. Если острые водные вспышки достаточно легко дифференцируются, то длительное действие водного фактора, активизирующееся в определенные месяцы года, требует специальных лабораторных вирусологических исследований и, в частности, проведения исследований за 2-3 месяца до сезонного подъема заболеваемости. Лабораторный бактериологический и вирусологический анализ воды проводят при следующих эпидемиологических показаниях: 1. Нарастание уровня заболеваемости ОКИ на данной территории и в конкретных группах населения в определенные месяцы года. 2. Активное вовлечение в эпидемический процесс ОКИ, ГА детских возрастных групп населения (1-2 года, 3-6 лет), независимо от частоты контактов с окружающими; нет преимущественного поражения детей, посещающих детские дошкольные учреждения. 3. Возрастание показателей заболеваемости ГА среди групп населения (15-19, 20-29 лет и старше) в связи с более высокими инфицирующими дозами ВГА, которые реализуются при действии водного фактора передачи. Данная тенденция особенно характерна для сельских жителей и лиц, временно находящихся на территориях, гиперэндемичных по ГА. 4. Высокая эксплозивность нарастания заболеваемости на микротерриториях и территориальная неравномерность, связанная с водопользованием из открытых водоемов или резервуаров. 5. Наличие тесной корреляции между заболеваемостью дошкольников и более старших возрастных групп населения, как правило, с некоторым опережением нарастания активности эпидемического процесса ГА у школьников и в возрастной группе 16-20 лет. 6. Особенностью водных вспышек на территориях, гиперэндемичных по ГА, в связи с высокой иммунной прослойкой среди детей и взрослых являются низкие показатели очаговости в семьях. Семейные очаги, где регистрируются 2 и более случаев ГА, составляют менее 30%. 7. Во множественных семейных очагах и детских дошкольных учреждениях при воздействии водного фактора передачи инфекции до 70-75% случаев ГА регистрируется с интервалом менее 15 дней, т.е. имеет место одномоментное инфицирование всех членов семьи или коллектива. 8. На территориях, относительно благополучных по ГА, в крупных городах развитие подъема заболеваемости в одном или нескольких районах (с общим источником водоснабжения) при сравнительно низком уровне в остальных районах. 9. Возникновение внесезонных подъемов заболеваемости ГА и "растянутость" сезонного подъема без тенденции к снижению в течение межэпидемического периода. Наряду с эпидемиологическими показателями при определении роли водного фактора как вероятной причины высокой заболеваемости ГА, т.е. выявлением причинно-следственных связей, необходимо сопоставить:
Сопоставление территорий и групп риска для выявления причинно-следственных связей с водным фактором проводится на уровне среднемесячных, среднегодовых, среднемноголетних показателей заболеваемости ГА, качеством воды по микробиологическим показателям. При изучении статистической взаимосвязи между показателями санитарно-гигиенического статуса территории и заболеваемостью ГА необходимо учитывать длительность инкубационного периода ГА, для чего используется соответствующее смещение динамики ее показателей относительно санитарно-гигиенических на 2-3 месяца. Целесообразно отдельно анализировать корреляционные связи санитарно-гигиенического фона с показателями заболеваемости в начале вспышки, эпидемии или сезонного подъема (сроки не более 2-3 инкубационных периодов, т.е. приблизительно 2 месяца). В течение года центрами санэпиднадзора страны проводится текущий и по эпидпоказаниям эпидемиологический и санитарно-вирусологический контроль (табл.3.1). Эпидемиологический контроль динамики заболеваемости ГА должен включать:
Установленные показатели позволят выделить территории и группы риска, роль водного фактора в передаче возбудителя ГА. В целях определения уровней инфицированности населения ВГА целесообразно в период подъема и пика заболеваемости ГА проведение исследований по определению маркеров ВГА (антигена ВГА, антител к ВГА класса Наиболее результативным методом этиологической расшифровки водных вспышек является обнаружение антигена ВГА и анти-ВГА класса Текущий санитарно-вирусологический контроль качества воды объектов по изучаемым показателям обеспечивает своевременное обнаружение сдвига фонового уровня микробного загрязнения прежде всего по колифагам, появление единичных частиц которых в питьевой воде будет свидетельствовать о потенциальной возможности прохождения вирусного загрязнения через барьер водоочистных сооружений. В этом случае необходимо провести повторные исследования воды из данного места на колифаги и при наличии последних отобрать 10 л воды для определения в ней энтеровирусов и антигена ВГА. Как текущий, так и контроль в период "риска" (за 2-3 месяца до предполагаемого подъема заболеваемости) предусматривают обязательный анализ воды данных объектов на наличие энтеровирусов и антигена ВГА, что позволяет определить степень реальной вирусной контаминации этих объектов и судить о наличии или отсутствии потенциальной опасности возникновения эпидемической ситуации (табл.3.1). Кратность отбора проб в месяц для санитарно-вирусологического контроля воды питьевой и водоисточников на выходе с водопроводных станций и в тупиковых точках разводящей сети Читайте также:
 Пожалуйста, не занимайтесь самолечением!При симпотмах заболевания - обратитесь к врачу.
|
