Что такое пцр кала на вирусы

Для того чтобы понять, что такое ПЦР кала, следует знать, что же такое кал. Кал — это совокупность отходов жизнедеятельности и непереваренных остатков пищи человека, которые выводятся наружу из организма человека через кишечник путем испражнения. Нормальное протекание данного процесса (выведения кала из организма) крайне важно, так как эти экскременты — не что иное, как отходы, засоряющие организм и мешающие ему нормально функционировать при их скоплении. Кроме того, по данному виду отходов можно многое узнать о самом организме. Например, по анализам кала можно узнать о пищеварительном тракте, о желчевыводящей системе, о бактериальном балансе толстой кишки, о наличии скрытых кровотечений из желудочно-кишечного тракта, а также выявить наличие нежелательных микроорганизмов в кишечнике.

Анализов кала довольно много, и каждый из них имеет свои цели назначения и несет свою информацию. Например, с помощью копрограммы можно проанализировать работу пищеварительной системы, то есть выявить ряд заболеваний желудка, кишечника, поджелудочной железы, желчного пузыря и печени. Тест на скрытую кровь показывает наличие скрытого кровотечения из различных отделов желудочно-кишечного тракта. Такой анализ проводят при подозрении таких заболеваний, как язва желудка или двенадцатиперстной кишки, а также опухолевые заболевания.

ПЦР диагностика кала применяется для диагностики инфекционных заболеваний (например, лямблиоз), в том числе и инфекций, которые передаются половым путем.

То есть с помощью ПЦР кал человека может донести важную информацию о состоянии других органов.

Преимущества анализа ПЦР кала

Преимущества у данного анализа следующие:

Прямое определение наличия возбудителей (если другие анализы выявляют только отходы жизнедеятельности паразитов, то данный метод указывает на фрагмент ДНК последних).
Высокая специфичность (при данном анализе выявляется уникальный, характерный только для данного возбудителя фрагмент ДНК).
Высокая чувствительность (ПЦР выявляет даже наличие единичной клетки вируса).
Высокая скорость получения результата (результат данного исследования можно получить уже через 4-5 часов).

Полимеразная цепная реакция кала позволяет выявить целый ряд заболеваний, среди них СПИД, гепатиты, сифилис, хламидиоз, лямблиоз и др. Лямблиоз подразумевает наличие таких паразитов, как лямблии, широко распространен. Им болеют даже дети. Это обусловлено тем, что дети редко следят за гигиеной и часто, контактируя между собой, несколько небрезгливы. Причем это такое заболевание, при котором человек может даже и не знать, что болеет. То есть эти паразиты, находясь в организме человека, могут его абсолютно не беспокоить. И в настоящее время это считается нормальным. Данное состояние не лечат, пока оно спит. Но как только оно просыпается и дает о себе знать неприятными симптомами, необходимо обратиться к специалисту. На самом деле, даже если лямблии и не беспокоят, но каким-то случайным образом выявлены, лучше пройти лечение. А детям, которые часто находятся в коллективе, ПЦР кала на лямблию можно сдавать в регулярном порядке.

Как сдавать кал на ПЦР?

Если специалист назначил данный анализ, то перед его сдачей (за несколько дней) необходимо прекратить принимать слабительные препараты, ректальные свечи, масла, а также препараты, которые влияют на окраску кала (например, препараты с богатым содержанием железа). Для сбора материала используют только специальные стерильные контейнеры с палочкой. Ополаскивать или протирать чем-либо их не рекомендуется. При сборе экскрементов надо быть предельно аккуратным, чтобы не задеть внутреннюю часть контейнера рукой. Для сдачи анализа на ПЦР в калах не должна содержаться моча. Использование вспомогательных средств (например, клизмы) при испражнении для сдачи материала запрещено. Кал собирается в день сдачи, для чего должен быть собран в контейнер с помощью специально предназначенной для этого палочкой. Контейнер необходимо заполнить не более чем на 1/3.

Вот такие простые правила необходимо соблюдать при сборе материала для сдачи анализа ПЦР кала. Казалось бы, ничего сложного, но нарушение хотя бы одного из пунктов может исказить результат исследования, что может привести к лечению несуществующих паразитов.

Копрограмма каловых масс помогает проанализировать функциональность органов пищеварения, диагностировать болезни желудочно-кишечного тракта. ПЦР кала чаще всего применяют для выявления в организме желудочно-кишечной инфекции.

Что такое анализ кала на ПЦР?

Полное название – полимеразная цепная реакция. Метод относится к молекулярно-генетическому диагностированию, дает гарантию достоверных показателей.

Смысл анализа кала на ПЦР заключается в обнаружении клеток определенных болезнетворных микробов, идентифицировании разновидностей.

Для получения правдивых данных при подготовке соблюдают следующие условия:

исключают прием антибиотиков и других лекарственных средств, схожих действиями, за три дня до момента забора биологической массы;
в этот же период не пользуются ректальными свечами, слабительными средствами и другими препаратами, влияющими на желудочно-кишечную перистальтику;
не принимают лекарства и не употребляют продукты, после которых цветовой оттенок каловых масс изменяется;
для сбора фекалий используют стерильный контейнер. Материал оперативно доставляется в лабораторию.

Заключение по ПЦР обследованию подготавливается в течение суток.

Когда рекомендуется сдавать анализ

Когда человеческий организм переживает проблемы с работоспособностью органов пищеварения, вероятной причиной этого считают присутствие паразитов – лямблий, аскаридов, Хеликобактера пилори и др.

Характерной симптоматикой, при которой назначается анализ кала методом ПЦР, считают:

признаки тошноты;
болевые ощущения тупого или острого характера в области живота;
тяжесть в полости желудка после каждого приема пищи;
отрыжки.

Данными свидетельствованиями подтверждается, что опасные микроорганизмы активизировались и начали размножаться. Пренебрегая самочувствием, человек в таком случае получает серьезные болезни – гастрит, язву и даже онкологию. В ряде случаев развиваются разные виды лимфом.

Перечисленные причины считаются поводом для посещения поликлиники, чтобы подвергнуть организм тщательному обследованию. Применяя разные методы, врачи не только выявляют причины, но и назначают нужные терапевтические курсы.

От оперативности сдачи биоматериала на проверку зависит быстрота избавления от болезни.

Исследование ПЦР на болезни ЖКТ

Существенным достоинством проверки кала считается оперативность. Анализ проводится за несколько часов, в то время как простая микробиологическая проверка длится больше суток.

Инфекционист, занимающийся болезнями инфекционного характера, назначает сдачу фекалий в случаях:

повышения температурного режима тела;
изменения оттенка кожного покрова, склер глазных яблок;
сыпи на коже;
нарушенности обычной консистенции каловых масс;
сильной утомляемости;
ощущений ломоты в теле;
рвотных рефлексов и поноса;
сильных болей в области живота.

Чаще всего инфекционные заболевания системы пищеварения случаются в летний сезон. Именно в это время редко соблюдаются требования личной гигиены, человек ест зрелые ягоды прямо с куста, пьет сырую воду. Кроме этого, рыбные и мясные изделия, несвоевременно помещенные в холодильную камеру, становятся причиной заражения. Еще один источник инфекций – насекомые, сосущие кровь.

Странно звучит, но именно чрезмерное потребление жидкости летом снижает способность человеческого организма противостоять инфекциям системы пищеварения, потому что водой сильно разбавляются желудочные соки, из-за чего снижается их бактерицидная способность.

Подобными свойствами отличается слюна человека, и следует тщательно разжевывать пищу до того момента, как она будет проглочена.

Иммунная система человека, если он полностью здоров, способна противостоять определенным инфекционным заболеваниям кишечного тракта. Но организм, часто подвергаемый стрессам и физическим нагрузкам, долго сопротивляться вредным паразитам не способен. Из этого следует, что наряду с личной гигиеной и правильным питанием стоит своевременное абстрагирование от различных переживаний.

ПЦР на лямблиоз

Данный вид заболевания способен протекать без характерной симптоматики. Человек внешне выглядит здоровым, но является носителем проблемы.

Рассмотрим, как происходит заражение лямблиозом. Возможно это благодаря прямым контактам с носителями, питью воды из открытых источников, употреблению продуктов питания, пользованию бытовыми предметами.

Но главным источником заражения лямблиозом является человек. В его организме паразиты живут в тонком кишечнике и питаются переваренной пищей, употребляемой хозяином. Способны они селиться в виде цист в толстый кишечник, выводясь вместе с биологической массой наружу. В почвенном составе лямблия способна самостоятельно прожить не более двух недель.

Пациент направляется на сдачу кала на ПЦР, если испытывает проблемы следующего характера:

быстрая усталость;
сухость кожного покрова;
бледный вид;
вздутия в животе и метеоризмы;
плохой сон;
раздраженность.

Анализ ПЦР в лаборатории выполняется редко, но с помощью такого метода более точно выявляется ДНК лямблий, даже когда они находятся в состоянии покоя и не выделяют цист.

Анализ ПЦР на глисты

Как гласят статистические данные, почти у семидесяти процентов людей в процессе обследования выявляются паразиты. Основными признаками болезни считаются:

симптоматика раздраженности кишечника, выраженная поносами, запорами, метеоризмом;
бессонница;
высыпания на кожном покрове без видимых причин;
болевые ощущения в суставах;
постоянное присутствие чувства недоедания;
переутомляемость, депрессии, общая подавленность.

Чтобы удостовериться, что органы человека не заражены яйцами глист, врач назначает сдачу биологического материала. Методика не слишком эффективная, для точного результата приходится сдавать три фекальных пробы. Но и после этого рассчитывать на точность результата не следует – паразиты могут находиться в спячке. Только анализ кала на ПЦР дает возможность выявлять паразитов, находящихся даже в неактивном образе жизни.

Как правильно собрать кал?

Желательно использовать стерильную емкость, приобретенную в любом аптечном киоске. Не прикасайтесь к чистой поверхности тары руками, чтобы не оставить там посторонних паразитов, способных внести недостоверность в материалы проверки.

Вместо специального контейнера разрешается отбирать кал в подходящую стеклянную емкость, предварительно прогретую в духовом шкафу.

Сбор кала выполняется с нескольких точек.

Подготовка к сдаче анализа

Отбор биоматериала на обследование с целью выявления лямблий не отличается от остальных анализов фекальных масс. Накануне исключается прием слабительных лекарственных средств и других препаратов, способных оказать негативное воздействие на окончательные результаты проверки и испортить клиническую картину.

Дневной рацион пациента накануне отбора пробы значения не имеет.

Как правило, забор фекалий выполняется утром. Лучше всего это делать непосредственно перед сдачей биологического материала в лабораторию, потому что хранение его запрещено.

Правила хранения кала

Хранение биоматериала исключено по причине его высыхания и порчи за счет размножения паразитов. Если нет возможности сразу отправить фекалии на проверку, рекомендуется использовать специальные консерванты Сафаралиева или Турдыева. Средство заливается в емкость, предназначенную для хранения каловых масс, отобранных на исследование, после чего туда помещают фекалии.

Точный показатель такого анализа стремится к семидесяти процентам, и результат этот не самый лучший. Отсюда следует, что сдача кала на выявление лямблий выполняется не менее трех раз. Взрослым и детям это рекомендуется выполнять ежедневно в течение трех – четырех дней, потому что подтверждение жизнедеятельности паразитов может оказаться не в каждом фекальном комке. Многократное обследование повышает уровень точности проверки до девяноста процентов.

Кроме этого, каловые массы сдаются на исследование несколько раз, когда окончен терапевтический курс от лямблиоза. С помощью этого подтверждается окончательное избавление от инфекционного заболевания. Чтобы получить достоверную картину лечебного процесса, кроме сдачи на проверку кала назначают и другие способы диагностирования. К примеру, анализ фекалий дополняется обследованием крови на антитела к лямблиям.

При возникновении подозрений на присутствие в организме вредных паразитов рекомендуется обращаться к терапевту или гастроэнтерологу, которые оформят направление на обследование в поликлинике. При отсутствии свободного времени посещают частный медицинский центр, работающий на платной основе. В первом случае анализ биологического материала выполняется бесплатно, а во втором стоимость исследования зависит от разновидности и выбранного вами медцентра.

Комплексное молекулярно-генетическое исследование, которое позволяет выявить генетический материал наиболее вероятных возбудителей острых кишечных инфекций в кале и установить этиологию заболевания.

Синонимы английские

Acute intestinal infection screening; Bacterial and viral diarrhea screening, PCR, fecal samples.

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Исследование рекомендуется проводить до начала приема антибиотиков и других антибактериальных химиотерапевтических препаратов.
Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.) и на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.

Общая информация об исследовании

Острые кишечные инфекции (ОКИ) – группа заболеваний, обусловленных вирусами, бактериями или паразитами, для которых характерен фекально-оральный механизм передачи. Общими для данных инфекций являются факторы передачи: пищевые продукты, вода, инфицированные бытовые предметы и грязные руки. Первые симптомы возникают через несколько часов или дней после инфицирования, начало резкое, с появлением частого жидкого стула, рвоты, боли в животе, признаков интоксикации (лихорадки, озноба, тошноты). Заболевание может носить групповой характер и проявиться у нескольких человек, употреблявших инфицированную пищу или воду.

Согласно официальной статистике, в России до 65-67% заболеваний этой группы составляют ОКИ неуточненной этиологии. Если возбудитель инфекции неизвестен, эффективность противоэпидемических мероприятий ограничивается. Соотношение частоты выявления вирусных и бактериальных патогенов варьируется в разных возрастах: у детей до 3 лет на долю вирусных агентов приходится 80-90% заболеваний, на долю бактериальных – 10-20%; среди взрослых пациентов доля вирусных возбудителей снижается до 30%.

Shigella species и Esherichia coli – грамотрицательные палочковидные микроорганизмы из семейства энтеробактерий. К роду Shigella относятся патогенные бактерии S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii и S. sonnei, которые являются возбудителями шигеллеза (бактериальной дизентерии). Энтероинвазивные E. coli (EIEC) очень близки с шигеллами, синтезируют и выделяют шигеллоподобный токсин, способны проникать в клетки слизистой кишечника и разрушать энтероциты, что приводит к образованию язвенных дефектов в слизистой кишечника. За значительную часть случаев "бактериологически неподтвержденной дизентерии", особенно у детей, ответственен энтероинвазивный эшерихиоз.

Бактерии рода Salmonella относятся к семейству энтеробактерий. S. typhi и S. parathyphi являются возбудителями брюшного тифа и паратифа. Существует множество серовариантов Salmonella species, способных вызвать у человека инфекцию по типу гастроэнтероколита, а также стать причиной внутрибольничных инфекций. Сальмонеллез может протекать в форме острой кишечной инфекции, тяжелой генерализированной инфекции или бессимптомного носительства. Окончательный диагноз ставится только после выделения возбудителя или обнаружения его ДНК.

Кампилобактерии являются одними из наиболее сложных для культивирования (которое требуется в ходе анализа) микроорганизмов. Это объясняется их микроаэрофильностью и возможностью подавления их роста сопутствующей флорой. Род кампилобактерий объединяет как возбудителей ОКИ (термофильные виды), так и сапрофитные и условно-патогенные виды, о чем необходимо помнить при выявлении этих микроорганизмов в клиническом материале. Применение наборов на основе ПЦР для определения термофильной группы кампилобактерий позволяет не только избежать трудоемкой и высокозатратной бактериологической работы, но и четко ограничить детекцию тех видов кампилобактерий, которые имеют этиологическую связь с острой кишечной инфекцией (С. jejuni, C. coli, C. lari, C. upsaliensis).

В соответствии с данными зарубежной литературы, норовирус – наиболее частый возбудитель вспышек ОКИ небактериальной этиологии. Эта особенность связана с низкой инфицирующей дозой и высокой устойчивостью в окружающей среде. ПЦР является "золотым стандартом" в клинической диагностике норовирусных инфекций.

Несмотря на несколько меньшую в сравнении с рота- и норовирусами распространенность, астровирусы составляют значительный пласт кишечных инфекций, у трети пациентов протекающий с явлениями колита. Ротавирусы группы А являются наиболее частой причиной спорадических заболеваний ОКИ у детей, а ДНК-содержащий аденовирус F (серотипы 40 и 41) нередко вызывает вспышки гастроэнтеритов у детей младшего возраста.

Для выявления и дифференциальной диагностики кишечных инфекций используются культуральные и молекулярно-генетические методы исследования генетического материала возбудителя в кале и определение концентрации специфических иммуноглобулинов в крови. ПЦР обладает преимуществом перед культуральными методами благодаря быстрому получению результатов, высокой специфичности и чувствительности исследования. Данный анализ позволяет со 100-процентной точностью определить возбудителя кишечного заболевания, а быстрая диагностика острых кишечных инфекций помогает избежать лишних процедур и оперативных вмешательств, своевременно начать лечение и ограничить очаг распространения инфекции.

Для чего используется исследование?

Для установления этиологического фактора острой кишечной инфекции;
для дифференциальной диагностики причин острого гастроэнтероколита (воспаления ЖКТ).

Когда назначается исследование?

При симптомах острого гастроэнтерита, вероятно, инфекционной этиологии (жидкий частый стул, рвота, лихорадка, боли в животе);
при одновременном или последовательном развитии ОКИ у нескольких членов семьи, у детей в детском учреждении или пациентов в стационаре;
при подозрении на развитие внутрибольничной кишечной инфекции (при обострении симптомов энтероколита у пациента, находящегося на лечении по поводу ОКИ).

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата:

присутствие ДНК или РНК возбудителя ОКИ; этиология в зависимости от выявленного вида возбудителя (Shigella spp., E. coli (EIEC), Salmonella spp., Campylobacter spp., Adenovirus F, Rotavirus A, Norovirus (2-й генотип), Astrovirus).

Причины отрицательного результата:

отсутствие инфицирования Shigella spp., E. coli (EIEC), Salmonella spp., Campylobacter spp., Adenovirus F, Rotavirus A, Norovirus (2-й генотип), Astrovirus.

Рекомендуется проводить исследование в первые 3 суток с начала заболевания, у госпитализированных пациентов – в первый день госпитализации.
Важно помнить, что острый энтероколит может быть обусловлен и другими инфекциями (например, амебами, лямблиями, иерсиниями, клостридиями, протеями и др.) или неинфекционными причинами (токсинами, ядовитыми веществами, острой непроходимостью кишечника, тромбозом сосудов брыжейки, воспалительными заболеваниями кишечника, острым панкреатитом, аппендицитом, целиакией, острым гепатитом, мальабсорбцией, дивертикулитом).

Кто назначает исследование?

Инфекционист, гастроэнтеролог, терапевт, педиатр.

Литература

Борисов Л. Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М.: МИА, 2005. – 736 с.
Gómez-Duarte O., Bai J., Newel E. Detection of E. coli, Salmonella spp., Shigella spp., Yersinia enterocolitica, Vibrio cholerae, and Campylobacter spp. enteropathogens by Three-reaction Multiplex PCR. Diagn Microbiol Infect Dis. 2009 January; 63(1): 1-9. PMCID: PMC2701628.

За звучной аббревиатурой ПЦР скрывается сложная и не слишком понятная для рядового пациента расшифровка — полимеразная цепная реакция. Что же такое ПЦР-диагностика, на чем она основана и почему в последнее время ее стали считать самой перспективной технологией в постановке диагнозов, касающихся инфекционных и вирусных заболеваний? Мы расскажем о преимуществах ПЦР-метода, его особенностях и этапах проведения.

ПЦР-диагностика: что это такое?

Диагностика методом ПЦР существует чуть более 30 лет. Значительно эволюционировав за это время, она зарекомендовала себя как один из наиболее точных способов выявления инфекций. В основе метода лежит принцип многократного увеличения микроскопических концентраций фрагментов ДНК возбудителя в биологической пробе пациента в искусственных условиях. В результате сложного процесса, называемого амплификацией, под воздействием ферментов и изменения температуры (от 50 до 95°С) из одной молекулы ДНК образуется две. При этом происходит копирование участка ДНК, который присутствует только у того вида патогенного микроорганизма, который интересует врача.

Цикл образования новой молекулы ДНК занимает всего около 3 минут, а тридцати-сорока циклов вполне достаточно, чтобы получить количество молекул, необходимое для достоверного визуального определения методом электрофореза.

Кроме амплификации, то есть простого увеличения числа копий молекулы ДНК, с помощью ПЦР можно производить и другие манипуляции с генетическим материалом, например, сращивать фрагменты ДНК, вводить мутации и т.д. Это позволяет использовать ПЦР не только для диагностики инфекционных и генетических заболеваний, но и для установления отцовства, клонирования и выделения новых генов.

ПЦР-диагностика проводится в специальных лабораториях с помощью амплификационного оборудования. На сегодня существует множество различных модификаций ПЦР, включая технологии с использованием не только ДНК, но и фрагментов рибонуклеиновой кислоты (РНК). В некоторых из них амплификация осуществляется при постоянной температуре, и для их проведения специальное оборудование не требуется.

Еще одна популярная модификация ПЦР — мультиплексная амплификация (МПА), которая позволяет проводить исследование сразу нескольких изучаемых фрагментов в одной пробирке. Это не только ускоряет и удешевляет проведение анализа, но и позволяет рассматривать одни фрагменты, получившиеся в результате реакции, в качестве положительных маркеров для других, что еще больше увеличивает точность исследования методом ПЦР.

В клинической медицине ПЦР-диагностика является одним из наиболее востребованных методов анализа в самых разных сферах:

Прямое определение возбудителя инфекции. Некоторые традиционные методы, такие как иммуноферментный анализ (ИФА), выделяют только белки-маркеры, которые являются продуктом жизнедеятельности возбудителей инфекции, а потому только косвенно указывают на присутствие микроорганизмов. Наличие специфического участка в ДНК, выявленное с помощью ПЦР, безошибочно или почти безошибочно указывает на присутствие конкретной инфекции.
Высокая специфичность метода . Она обусловлена тем, что в исследуемом материале выявляется фрагмент ДНК, характерный только для конкретного возбудителя инфекции. Специфичность исключает возможность ложных результатов анализа, тогда как в иммунологических методах исследований ошибки вполне вероятны из-за перекрестной реакции антигенов.
Высокая чувствительность . При помощи ПЦР-диагностики можно выявить присутствие в организме даже единичных клеток вирусов или бактерий в тех случаях, когда обычными методами сделать это практически невозможно. ПРЦ определяет наличие всего 10–100 клеток в пробе, тогда как иммунологическими и микроскопическими тестами можно определить наличие инфекции при количестве клеток не менее 103–105.
Универсальность . Сходство состава всех ДНК или РНК дает возможность применять универсальные методы лабораторных исследований, диагностируя сразу несколько возбудителей из одной биологической пробы.
Скорость получения результатов . Поскольку для проведения ПЦР-диагностики не нужен посев и выделение культуры возбудителя, то и большого количества времени на нее не требуется. Весь цикл — от забора биоматериала до получения результатов — занимает 4–5 часов.
Диагностика латентных инфекций . ПЦР-методом диагностируются трудно культивируемые и некультивируемые формы микроорганизмов, встречающиеся в тех случаях, когда заболевание протекает в скрытой форме.

Методом ПЦР можно выявлять возбудителей инфекции не только в организме человека, но и в почве, воде, продуктах питания.

Тем не менее не стоит думать, что ПЦР-диагностика не имеет недостатков. У нее есть свои ограничения, но их количество настолько незначительно, что не может отрицательно повлиять на популярность и эффективность метода:

Вероятность амплификации ДНК не только живого, но и погибшего микроорганизма . При проведении ПЦР-диагностики для контроля эффективности лечения необходимо соблюдать определенные требования. В частности, проводить ПЦР нужно после определенного промежутка времени (1–2 месяца), за который происходит полное исчезновение возбудителя инфекции в организме.
Возможность возникновения перекрестной реакции . Подбор фрагментов ДНК (праймеров) осуществляется на основе знаний о генетическом строении конкретного микроорганизма. Но теоретически такой же фрагмент может присутствовать и у других микроорганизмов, геном которых на сегодняшний день еще не расшифрован. Их присутствие в пробе может привести к ложноположительному результату анализа.
Изменчивость микроорганизмов . Эта способность возбудителей к мутации иногда приводит к тому, что некоторые их штаммы становятся неуловимыми в процессе ПЦР-анализа.

Чтобы уменьшить риски, разработаны стандарты объемов испытаний тест-систем ПЦР-диагностики, включающие проверку на перекрестные реакции и тестирование всех известных штаммов конкретного возбудителя.

ПЦР-диагностика проводится в специальной лаборатории в несколько этапов.

Забор биоматериала . Процедура, предшествующая непосредственному анализу, которая осуществляется в процедурном кабинете соответствующего профиля. Забор делается с помощью стерильного оборудования только в стерильные пробирки. Материалом для исследования могут быть:
- Эпителиальные соскобы со слизистых оболочек: из уретры, из цервикального канала, со слизистой дыхательных путей и зева, из конъюнктивы. Забор проводится с помощью специального ершика, при этом недопустимо попадание в материал следов крови.
- Моча . Собираются первые 50 г утренней мочи в стерильную емкость. Материал используется для диагностики мочеполовых инфекций.
- Мокрота . Используется для ПЦР-диагностики туберкулеза и респираторных форм микоплазмоза и хламидиоза. Мокроту собирают в стерильный флакон в количестве 15–20 мг.
- Кровь, сыворотка, плазма . С их помощью диагностируются гепатиты, герпес, ВИЧ-инфекция. Для анализа используется венозная кровь (1–1,5 мл), собранная у пациента натощак в стерильную пробирку. Хранить биоматериал можно не более суток при температуре 4°С. Замораживать кровь категорически запрещается.
- Биологические жидкости . К ним относятся слюна, сок простаты, околоплодная, плевральная, спинномозговая, суставная жидкости. Собираются при помощи пункции с использованием стерильного инструментария в количестве 0,1–1,5 мл в стерильные пробирки.
- Биоптаты , т.е. материалы, полученные путем биопсии. Обычно на анализ отправляют биоптаты двенадцатиперстной кишки или желудка, чтобы выявить хеликобактерную инфекцию. Объем материала 2–3 мм 3 .
Хранение и транспортировка биоматериала . Хранить образцы можно при комнатной температуре не более 2 часов. Если необходимо длительное хранение, то пробы помещают в холодильник с температурой 2–8°С на срок не более одних суток. Допустимо хранение некоторых биоматериалов в течение двух недель в замороженном виде при температуре -20°С. Оттаивание и повторное замораживание проб запрещено. Транспортировка, если она необходима, должна проводиться в специальных термоконтейнерах или термосах с соблюдением всех правил хранения и перевозки биоматериалов.
Выделение ДНК из образца . Способ выделения зависит от вида определяемого микроорганизма и от вида биологического образца. Если, например, анализируется соскоб эпителиальных клеток, используется так называемый метод твердофазной сорбции, заключающийся в добавлении в образец специального вещества, концентрации ДНК на сорбенте и его многократной отмывке буферным раствором.
Проведение ПЦР . Некоторое количество образца из биологической пробы переносится в специальную микроцентрифужную пробирку. Туда же добавляется амплификационная смесь, имеющая сложный состав, в объеме 25 мл. Пробирки устанавливают в программируемый термостат, и автоматическом режиме проводится амплификация. Время ее проведения зависит от заданной программы и составляет 2–3 часа. Одновременно с опытными пробами проводятся контрольные — положительные , включающие в себя контрольный препарат ДНК исследуемого возбудителя, и отрицательные , не содержащие исследуемую ДНК. Количество циклов амплификации варьирует от 30 до 40, более 40 циклов проводить не рекомендуется, так как это способствует увеличению количества неспецифических продуктов в пробе.
Регистрация результатов . Фрагмент ДНК, характерный для возбудителя инфекции, выделяют методом электрофореза в присутствии специального вещества — бромистого этидия. Его соединение с фрагментами ДНК дает светящиеся полосы при облучении ультрафиолетовым излучением. Образец помещают в камеру для электрофореза и в течение 35–40 минут проводят разделение продуктов амплификации. После этого образец просматривают в ультрафиолетовом свете — наличие оранжевой светящейся полосы свидетельствует о положительном результате.
Интерпретация результатов исследования . Результат ПЦР-диагностики может быть либо положительным, либо отрицательным. Положительный результат говорит о том, что в организме человека обнаружены следы инфекции, причем именно в данный момент времени. Количественный результат ПЦР-анализа оценить может только врач, они индивидуальны для разных типов инфекций. На основании количественного результата можно сделать вывод о степени активности заболевания и определить характер лечения.

Цена ПЦР-диагностики зависит от того, на какую конкретно инфекцию пациент планирует проверяться, от вида анализируемого материала, методики тестирования — качественной или количественной. Цена за определение одной инфекции составляет от 200 до 800 рублей в разных клиниках. Кроме того, к стоимости анализа добавится и плата за забор биоматериала — около 400 рублей. Средняя стоимость ПЦР-диагностики разных видов приведена в таблице 1.

Таблица 1 . Примерные цены на анализы ПЦР в Москве

Название анализа	Цена, руб.
Определение ДНК хламидия	750
Определение ДНК микоплазмы хоминис	540
Определение микоплазмы гениталиум	350
Определение ДНК уреаплазмы	350
Гонококк, определение ДНК	350
Определение ДНК герпеса (разные типы)	350–600
Определение ДНК кандиды	570
Вирус краснухи, определение РНК	800
Дифференцированное определение ДНК ВПЧ (разные типы)	350–1900 [1]

Читайте также: