Лабораторная диагностика туберкулеза микробиология

Лабораторная диагностика. Для диагностики туберкулеза применяют все ме­тоды: бактериоскопический, бактериологический, серологический, биологический, аллергические пробы, ПЦР. При бактериоскопическом исследовании исходного материала (мокрота, моча, гной, спинномозговая жидкость, испражнения) необхо­димо учитывать, что содержание в нем микобактерий может быть незначительным, выделение их эпизодическим и в нем могут быть измененные варианты возбудителя, в том числе L-формы. Поэтому для повышения вероятности обнаружения микобак­терий туберкулеза используют методы концентрирования их с помощью центрифу­гирования или флотации, а также фазово-контрастной (для обнаружения L-форм) и люминесцентной микроскопии (в качестве флуорохромов используют аурамин, аурамин-родамин, акридиновый оранжевый и др.).

Биологический метод — заражение морских свинок — является одним из на­иболее чувствительных. Считается, что заражающая доза возбудителя для них со­ставляет несколько клеток. Морские свинки могут быть использованы и для обна­ружения L-форм туберкулезных бактерий, но в этом случае необходимо сделать несколько последовательных заражений, так как L-формы обладают меньшей ви­рулентностью и вызывают у свинок доброкачественную форму туберкулеза, которая в случае реверсии L-форм в исходное состояние может перейти в генерализо­ванный процесс.

Из числа серологических реакций для диагностики туберкулеза предложены РСК, РПГА, реакции преципитации, методы иммуноферментного анализа (в том числе точечного), радиоиммунный метод, иммуноблотинг, реакция агрегат-гемаг- глютинации (для обнаружения ЦИК) и др. Использование различных антигенов позволяет обнаруживать наличие определенных антител. Для совершенствования серологических методов диагностики туберкулеза важное значение имеет получение моноклональных антител к различным антигенам микобактерий. Это позволит вы­явить те специфические эпитопы туберкулезных бактерий и соответственно те анти­тела к ним, обнаружение которых имеет наибольшее диагностическое значение, а также позволит создать коммерческие тест-системы для иммунодиагностики ту­беркулеза.

Среди всех методов микробиологической диагностики туберкулеза решающим все же остается бактериологический. Он необходим не только для постановки диа­гноза болезни, но и для контроля эффективности химиотерапии, своевременной оценки чувствительности микобактерий к антибиотикам и химиопрепаратам, диа­гноза рецидивов туберкулеза, степени очищения больного организма от возбудителя и выявления его измененных вариантов, особенно L-форм. Исследуемый материал перед посевом необходимо обрабатывать слабым раствором серной кислоты (6— 12 %) для устранения сопутствующей микрофлоры. Выделение чистых культур ми­кобактерий ведут с учетом скорости их роста, пигментообразования и синтеза ниа- цина. Дифференциацию между отдельными видами микобактерий осуществляют на основании их биологических свойств, как указано выше. Вопрос о вирулентности микобактерий решается с помощью биологических проб и на основании обнаруже­ния корд-фактора. Для этой цели предложены цитохимические реакции. Они осно­ваны на том, что вирулентные микобактерии (содержащие корд-фактор) прочно связывают красители — нейтральный красный или нильский голубой — и при до­бавлении щелочи сохраняют цвет краски, а раствор и невирулентные микобактерии изменяют свою окраску.

Для более быстрого выделения возбудителя туберкулеза предложен метод мик­рокультур. Суть его состоит в том, что на предметное стекло наносят исследуемый материал, обрабатывают его серной кислотой, отмывают, стекло помещают в цит- ратную лизированную кровь и инкубируют при температуре 37 "С. Уже через 3— 4 сут. рост микобактерий на стекле проявляется в виде микроколоний, которые к 7—10-му дню достигают максимального развития, а микобактерии хорошо выявля­ются при микроскопии. При этом вирулентные микобактерии образуют змеевидные колонии, а невирулентные растут в виде аморфных скоплений.

Для обнаружения L-форм используют культуральный, биологический и иммунофлуоресцентный методы. В связи с широким распространением лекарствен- ноустойчивых штаммов микобактерий возникла необходимость усилить контроль за этим процессом. С этой целью, а также для более точной идентификации и дифференциации микобактерий используют молекулярно-генетические методы, в частности, метод типирования штаммов, основанный на выявлении различий в структуре генома микобактерий — геномная дактилоскопия. Метод заключается в обнаружении в геноме микобактерии ряда повторяющихся нуклеотидных последовательностей и анализе полиморфизма длин фрагментов рестрикции. В качестве зонда (праймера) обычно используют IS6110 (англ. insertion sequence — вставочная последовательность). В хромосоме микобактерии, как правило, имеется несколько копий элемента IS6110, которые отличаются высокой стабильностью своего местоположения, что позволяет точно идентифицировать различные штаммы.

Биологический способ обнаружения L-форм заключается в серии последователь­ных пассажей на морских свинках.

Для иммунофлуоресцентного метода используют диагностические сыворотки, содержащие меченные флуорохромом антитела к антигенам L-форм.

9. Бактериологическая диагностика туберкулеза. Схема дифференцирования мико­бактерий в ходе их выделения. Специфическая профилактика туберкулёза. Вакцина БЦЖ, состав, способы применения. Химиотерапия туберкулеза.

Среди всех методов микробиологической диагностики туберкулеза решающим все же остается бактериологический. Он необходим не только для постановки диа­гноза болезни, но и для контроля эффективности химиотерапии, своевременной оценки чувствительности микобактерий к антибиотикам и химиопрепаратам, диа­гноза рецидивов туберкулеза, степени очищения больного организма от возбудителя и выявления его измененных вариантов, особенно L-форм. Исследуемый материал перед посевом необходимо обрабатывать слабым раствором серной кислоты (6— 12 %) для устранения сопутствующей микрофлоры. Выделение чистых культур ми­кобактерий ведут с учетом скорости их роста, пигментообразования и синтеза ниа- цина. Дифференциацию между отдельными видами микобактерий осуществляют на основании их биологических свойств, как указано выше. Вопрос о вирулентности микобактерий решается с помощью биологических проб и на основании обнаруже­ния корд-фактора. Для этой цели предложены цитохимические реакции. Они осно­ваны на том, что вирулентные микобактерии (содержащие корд-фактор) прочно связывают красители — нейтральный красный или нильский голубой — и при до­бавлении щелочи сохраняют цвет краски, а раствор и невирулентные микобактерии изменяют свою окраску.

По патогенным свойствам род Mycobacterium подразделяют на две группы:

1) па­тогенные и условно-патогенные (потенциально патогенные)

2) сапрофита. Для их ускоренной предварительной дифференциации учитывают прежде всего три при­знака: а) скорость и условия роста; б) способность к пигментообразованию; в) спо­собность синтезировать никотиновую кислоту (ниацин).

По скорости роста род Mycobacterium подразделяют на три группы:

1) Быстрорастущие — крупные видимые колонии появляются ранее 7-го дня инкубации (18 видов).

2) Медленнорастущие — крупные видимые колонии появляются после 7-ми и бо­лее дней инкубации (20 видов).

3) Микобактерии, которые требуют специальных условий для роста или не растут на искусственных питательных средах. К этой группе относятся два вида: М. leprae и М. lepraemurium.

По способности к пигментообразованию микобактерии также делят на 3 группы:

1) Фотохромогенные — образуют пигмент лимонно-желтого цвета при росте на свету.

2) Скотохромогенные — образуют пигмент оранжево-желтого цвета при инкуби­ровании в темноте.

3) Нефотохромогенные — пигмента не образуют (независимо от наличия света), иногда культуры имеют светло-желтоватую окраску.

К патогенным и потенциально патогенным относится 24 вида.

Профилактика. Помимо проведения широких социально-экономических меро­приятий, направленных на улучшение жизни населения, раннего и своевременного выявления больных туберкулезом и оказания им эффективной лечебной помощи, большое значение имеет плановая массовая вакцинация против туберкулеза. Она осуществляется вакциной БЦЖ, полученной А. Кальметтом и Ш. Гереном из ослаб­ленного многолетними пересевами штамма М. bovis. Вакцинации подлежат все ново­рожденные дети на 5—7-й день жизни. Вакцину, содержащую 0,05 мг сухих живых бактерий в объеме ОД мл, вводят внутрикожно. Ревакцинацию проводят в возрасте 7—12—17—22 и 27—30 лет только лицам, отрицательно реагирующим на внутри- кожную пробу Манту (5 ТЕ/0,1 мл).

Лечение. Консервативное лечение туберкулеза проводят с помощью антибиоти­ков и химиопрепаратов. Препараты I ряда (более ранние) включают производные парааминосалициловой кислоты (ПАСК), гидразида изоникотиновой кислоты (ГИНК) — изотиазид (тубазид), фтивазид и др. и препараты группы стрептомицина. Препараты II ряда — циклосерин, канамицин, флоримицин, рифампицин и другие антибиотики. У микобактерий к химиопрепаратам, в особенности I ряда, часто на­блюдается устойчивость, поэтому лечение должно сопровождаться контролем сте­пени чувствительности их к применяемым препаратам.

10. Возбудитель лепры. Морфологические и культуральные особенности. Лаборатор­ная диагностика. Аллергические пробы и их диагностическое значение. Химио­терапия лепры.

Лепра — высококонтагиозное и одновре­менно низкопатогенное хроническое заболевание, при котором субклиническая инфекция — обычное явление, в то время как клинические проявления отмечаются только у небольшого числа инфицированных лиц. Характеризуется длительным течением, специфическим поражением кожи, слизистых оболочек, периферических нервов и различных внутренних органов. Возбудитель — Mycobacterium leprae — был открыт в 1874 г. А. Хансеном. До сих пор никому не удавалось получить рост возбу­дителя проказы на искусственных питательных средах. Палочка лепры является строгим внутриклеточным паразитом тканевых макрофагов (гистиоцитов), моно- нуклеарных фагоцитов и других клеток. Ее удается культивировать только в орга­низме мышей, крыс и особенно при внутривенном заражении большими дозами (до 10 8 клеток) броненосцев (армадиллов), у которых она вызывает специфический ге­нерализованный процесс и накапливается в огромном количестве в пораженных тканях (лимфатические узлы, печень, селезенка). В связи с этим морфологические свойства возбудителя лепры описаны по его картине в лепрозных тканях.

М. leprae — прямая или слегка изогнутая палочка с закругленными концами, ди­аметром 0,3—0,5 мкм и длиной 1,0—8,0 мкм. Спор, капсул не образует, жгутиков не имеет, грамположительна. По химическому составу сходна с М. tuberculosis, облада­ет спирто- и кислотоустойчивостью, поэтому ее окрашивают по методу Циля—

Нильсена. М. leprae обладает большим полиморфизмом: в лепромах (лепрозных бу­горках) встречаются зернистые, кокковидные, булавовидные, нитевидные, ветвя­щиеся и другие необычные формы. В пораженных клетках они образуют шаровид­ные плотные скопления, в которых микобактерии располагаются параллельно друг другу, напоминая расположение сигар в пачке.

Главные особенности болезни во многом определяются следующими свойствами возбудителя:

1) Очень медленное размножение в организме является причиной продолжитель­ного инкубационного периода (в среднем 3—7 лет, иногда до 15—20 и более лет) и хронического течения болезни у людей и подопытных животных.

2) М. leprae регулярно вовлекает в процесс нервную ткань и приводит к инвалид­ности, а это имеет большое экономическое значение для эндемичных регионов.

3) Оптимальная температура для размножения возбудителя менее 37 °С. Следо­вательно, наиболее поражаемы охлаждаемые ткани человека и подопытных живот­ных (у броненосцев температура тела 30—35 °С).

4) М. leprae способны вызывать иммунологическую толерантность у людей с лепроматозной формой болезни, и такие больные являются главным источником заражения людей лепрой.

Определяющим фактором формирования типа болезни и исхода первичного за­ражения служит степень напряженности естественного иммунитета против лепры, которая выявляется с помощью лепроминовой пробы. Положительная реакция на лепромин свидетельствует о наличии достаточно высокого естественного иммуните­та к М. leprae. Нарушение клеточного иммунитета при лепроматозном типе болезни проявляется прежде всего в том, что фагоцитоз имеет незавершенный характер: ми­кобактерии лепры не только не разрушаются макрофагами, но именно в них они ак­тивно размножаются. Кроме того, лимфоциты у таких больных не подвергаются бласттрансформации и не подавляют миграции макрофагов (у больных туберкуло- идным типом эти реакции положительны). Иммунитет к лепре зависит от многих факторов, и при его снижении возможно обострение процесса и отягощение течения болезни.

Лабораторная диагностика. Из всех микробиологических методов диагностики используется главным образом бактериоскопический. Материалом для исследова­ния являются слизь или соскобы со слизистой оболочки носа, скарификаты из пора­женного участка кожи, кусочки пораженного органа или ткани, из которых готовят гистологические срезы. Мазки и срезы окрашивают по Цилю—Нильсену. Для диф­ференциации №. leprae от М. tuberculosis используют биологическую пробу на белых мышах, для которых М. leprae не патогенна.

Лечение. Больные лепрой, в зависимости от ее типа, подвергаются лечению или в специальных противолепрозных учреждениях (лепрозориях), или в амбулаториях по месту жительства. В лепрозории госпитализируют первично выявленных боль­ных, у которых имеются распространенные кожные высыпания, возбудитель обна­руживается бактериоскопически; а также больных, находящихся на постоянном учете, в случае обострения или рецидива болезни. Амбулаторно можно лечить боль­ных с ограниченными кожными проявлениями, у которых при бактериоскопии воз­будитель не обнаруживается.

Лечение должно носить комплексный характер с одновременным использовани­ем 2—3 различных антилепрозных химиопрепаратов, а также общеукрепляющих и стимулирующих иммунную систему средств. Наиболее активными химиопрепара- тами являются: производные сульфонового ряда — диафенилсульфон, солюсуль- фон, диуцифон и др.; рифампицин, лампрен, этионамид и др. Курс химиотерапии должен быть не менее 6 мес., при необходимости проводят несколько курсов, чере­дуя препараты.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Туберкулез - общее инфекционное заболевание с преимущественной локализацией процесса в легких. При туберкулезе также поражаются лимфатические узлы, серозные оболочки, пищеварительный тракт, урогенитальная система, кожа, кости и суставы (туберкулез внелегочной локализации).

Материал для исследования: мокрота, слизь с задней стенки глотки, промывные воды бронхов и желудка, моча, спинномозговая жидкость, плевральный экссудат, гной из абсцессов и др.

Больной собирает мокроту в чистую баночку или карманную плевательницу. Лучшие результаты дают исследования мокроты, выделенной больным в течение полусуток. На баночку наклеивают бумажку с фамилией и инициалами больного, заполняют специальный сопроводительный бланк (фамилия и инициалы больного, диагноз, группа диспансерного учета, цель исследования) и направляют в лабораторию.

В микробиологической диагностике туберкулеза используют бактериоскопический, бактериологический и биологический методы, а также комплекс иммунологических исследований.

Бактериоскопический метод

Туберкулезные микобактерииокрашиваются в красный цвет, все остальные элементы мокроты и другие бактерии — в синий. Туберкулезные микобактерии имеют вид тонких, слегка изогнутых палочек различной длины с утолщениями на концах или посередине, располагаются группами и поодиночке.

При окраске по Цилю—Нильсену в красный цвет окрашиваются также кислотоустойчивые сапрофиты. Они находятся в почве, воде, молоке, масле, сметане, коже здоровых людей, желудке и т.д. При окраске по Цилю—Нильсену их трудно отличить от МБТ. Кислотоустойчивые сапрофитные бактерии окрашиваются в вишневокрасный цвет, но теряют свою окраску при длительном обесцвечивании солянокислым спиртовым раствором (от 3 ч до суток) или 0,01% раствором гипохлорита калия (КС10). Кислотоустойчивые сапрофиты в отличие от МБТ толстые, грубые, короткие, незернистые, иногда со вздутиями на концах, заостренные или веретенообразные, располагаются чаще кучками. Необходимо помнить, что аэробный микроорганизм Нокардиа (Nocardia asteroides), имеющий нежные, палочковидные, разветвляющиеся волокна диаметром 1 мкм, попадает в легкие при вдыхании воздуха и также затрудняет бактериоскопическую диагностику.

Кислотоустойчивая сапрофитная флора отличается от МБТ культуральными и биохимическими свойствами.

Положительное заключение выдают при обнаружении микобактерии туберкулеза в препарате после просмотра не менее 100 полей зрения: обязательно указывают число микробов в поле зрения. Отрицательный результат микроскопии необязательно должен свидетельствовать об отсутствии микобактерии в исследуемом материале.

Метод люминесцентной микроскопии

Препараты мокроты и промывных вод бронхов можно исследовать люминисцентным методом.

Принцип. Туберкулезные микобактерии, окрашенные ауромином-родамином, люминесцируют под влиянием ультрафиолетовых лучей в виде светящихся золотистых палочек (метод менее трудоемкий и более быстрый, чем предыдущие).

Мазки-препараты приготовляют из осадка, полученного методом накопления, фиксируют проведением через пламя. Мазки окрашивают в течение 15 мин смесью растворов флюорохромных красителей: на 1000 мл дистиллированной воды 1,0 ауромина 00 и 0,1 родамина С. После окраски мазок обесцвечивают 3% раствором соляно-кислого спирта в течение 30 сек, промывают водой. Если фон мазка сильно флюоресцирует, следует применить в качестве гасителя 0,25% водный раствор метиленового синего, промыть мазок водой, подсушить и микроскопировать в люминесцентном микроскопе. Микобактерии светятся золотисто-желтым светом на темно-зеленом фоне. Положительный ответ выдается, если в препарате обнаружено не меньше 4—5 палочек. При наличии 1—2 палочек в препарате анализ следует повторить.

Окраска ауромином-родамином, кроме того, выявляет нежизнеспособные МБТ. При окраске по Цилю—Нильсену они не выявляются, поэтому для оценки прогноза все аурамин-родамин позитивные пробы должны быть окрашены также и по Цилю—Нильсену.

Окрашивание ауромином-родамином имеет следующие преимущества перед окраской по Цилю—Нильсену:

1. кислотоустойчивые бациллы имеют большее сродство к ауромин-родаминовой окраске;

2. весь мазок может быть просмотрен при небольшом увеличении;

3. на темном фоне во флюоресцентном микроскопе МБТ выделяются более четко, и это позволяет быстрее и точнее просмотреть весь мазок.

При люминесценции кислотоустойчивые сапрофиты имеют бледно-желтый или зелено-желтый оттенок свечения, отличающийся от золотисто-оранжевого свечения МБТ.Исследуемую мокроту переносят в чашку Петри, с помощью препаровальных игл или пинцета выбирают гнойные комочки и переносят их на середину предметного стекла, накрывают комочек другим предметным стеклом и растирают материал между стеклами. Спинномозговую жидкость отстаивают в холодильнике и готовят мазки из нежной пленки фибрина. Мочу центрифугируют и делают мазки из осадка. Препараты обесцвечивают не только кислотой, но и спиртом для дифференциации от M.smegmatis, которые могут находиться в моче здоровых лиц.

Гомогенизация. Собрать в банку суточное количество мокроты и добавить равный объем 1% NaOH, закрыть стерильной резиновой пробкой и встряхивать в шюттель-аппарате до полного разжижения мокроты. Обычно для этого требуется 10-15 мин. Гомогенизированную мокроту переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют при 3000 оборотов в минуту в течение 10-15 мин. Жидкость сливают в раствор хлорамина, осадок нейтрализуют 1-2 каплями 10% раствора НСl, из осадка приготовляют мазки, окрашивают по Цилю-Нильсену и микроскопируют.

Флотация. Мокроту переливают в колбу, прибавляют равный объем 1% раствора NaOH, закрывают резиновой пробкой и встряхивают в шюттель-аппарате до полного разжижения. Колбу помещают в водяную баню 55°С и нагревают в течение 30 мин. а затем добавляют 1-2 капли ксилола или бензина, встряхивают 10 мин, доливают дистиллированную воду до горлышка колбы и оставляют при комнатной температуре на 25-30 мин.

Углеводород всплывает на поверхность и увлекает адсорбированные микобактерии. Образуется тонкий слой углеводорода и возбудителей туберкулеза в горлышке колбы в виде сливкообразного кольца.

На хорошо нагретую водяную баню кладут обычное стекло 20х20 см и на нем раскладывают предметные стекла для мазков. Проволочной петлей в форме улитки берут материал флотационного кольца и наносят на предметные стекла, по мере подсыхания материала добавляют новую порцию взвеси. Наслоение материала по принципу толстой капли на одно и то же место делают 3-4 раза, каждую каплю подсушивают, прежде чем наносят следующую.

Готовые, хорошо высушенные препараты промывают эфиром (огнеопасно!), подсушивают, фиксируют, окрашивают и бактериоскопируют.

Исследование промывных вод бронхов или желудка выполняют после нейтрализации материала 1-2 мл 0.5% раствора NaOH.

Флотация повышает на 10% обнаружение микобактерии туберкулеза в патологическом материале.

Бактериоскопическим методом удается обнаружить возбудителя туберкулеза при содержании в 1 мл патологического материала более тысячи микобактерии.

Бактериологический метод

Все материалы для исследования бактериологическим методом, как правило, содержат постоянную микрофлору, что практически делает невозможным выделить микобактерии в чистой культуре без предварительной обработки материалов. Исключением из этого правила является стерильно взятая спинномозговая жидкость.

С целью уничтожения сопутствующей микрофлоры и гомогенизации мокроты, гноя и других материалов применяют 10% раствор серной кислоты или 10% раствор трехзамещенного фосфорнокислого натрия 1:1.

Жидкие материалы центрифугируют 30-40 мин, осадок обрабатывают серной кислотой в течение 20-30 мин, устанавливают рН среды в пределах 7,2-7,6 и высевают на среду Левенштейна - Йенсена и среду Финн-2. Засеянные среды инкубируют в термостате при температуре 37°С 3-4 недели. Пробирки со средами, в которые исследуемый материал вносили петлей и втирали в поверхность среды, размещают вертикально; в тех случаях, когда посевы делают пастеровской пипеткой, пробирки помещают в термостат в полугоризоптальном положении на 2-3 сут, а затем вертикально. Все пробки заливают расплавленным парафином или закрывают целлофановым колпачком и уплотняют резиновым кольцом.

Посевы просматривают раз в неделю. Все пробирки, в которых обнаружен рост посторонней микробной флоры, удаляют. Рост микобактерий туберкулеза обычно обнаруживается на 3-й неделе, но иногда через 2,5-3 мес.

Микобактерии туберкулеза формируют колонии на плотных питательных средах с характерными признаками. Они как правило, сухие, морщинистые, грубые (напоминают бородавки), обычно в R-форме. S-форма колоний с пигментацией желтого или оранжевого цвета при влажном росте свойственна другим микобактериям.

При учете результатов следует фиксировать обильность и сроки появления роста микобактерий. Эти показатели, определяемые в динамике, имеют эпидемиологическое и прогностическое значение.

Культуры микобактерий туберкулеза, выращенные на питательных средах, микроскопируют. В мазках, окрашенных по Цилю - Нильсену, образуются скопления кислотоустойчивых типичных микобактерий.

В молодых культурах, выделенных из организма больных, леченных антибактериальными препаратами, обнаруживают микроорганизмы с измененной формой (короткие палочки, неправильной формы шары).

В некоторых случаях исследуемый материал высевают на 3-4 пробирки жидкой питательной среды с плазмой крови донора или сывороткой крупного рогатого скота.

Результаты посева учитывают через 10 дней. Берут одну пробирку и стерилизуют, из осадка готовят мазки, фиксируют, окрашивают и микроскопируют. Отрицательный результат выдают только после инкубирования посевов в термостате в течение месяца. Посторонние микроорганизмы в таких питательных средах растут, размножаются в первые дни культивирования и вызывают помутнение жидкости.

Микобактерии, выращенные на жидкой питательной среде, пересевают в пробирки с плотной средой. В таких случаях положительные результаты возрастают, но продолжительность исследования увеличивается.

Микобактерии могут размножаться и образовывать микроколонии на стекле. Для этой цели готовят полоски обычного стекла 10 см длиной и 0,9-1 см шириной, моют, обезжиривают, сушат и стерилизуют.

Мокроту больного выливают в чашку Петри, выбирают гнойные комочки, наносят их на полоску стекла и растирают другой такой же полоской так, чтобы получились два мазка, занимающие 2/3 длины стекла. Стекла кладут на стерильную бумагу и подсушивают. Сухие мазки погружают на 15-20 мин в пробирки с 2% раствором серной кислоты, а затем 2-3 раза промывают дистиллированной водой и помещают в жидкую синтетическую или кровяную среду, в которую добавляют 10 ЕД/мл пенициллина. Мазок должен быть полностью покрыт питательной средой. Инкубируют в термостате при 37-38°С. Результаты учитываются на 1-й. 15-й и 30-й день. Каждый раз один такой мазок вынимают из пробирки, высушивают, фиксируют, окрашивают по Цилю - Нильсену или аурамином и микроскопируют. Положительными будут посевы, в которых на стекле выявляются микроскопические колонии в виде "жгутиков", "кос" и "пауков".

Определение лекарственной устойчивости
микобактерий туберкулеза

Лекарственную устойчивость микобактерий туберкулеза определяют с помощью бактериологических методов перед началом лечения, затем спустя 3 мес и далее при продолжающемся выделении бактерий туберкулеза через каждые б мес. Это делают путем выращивания микобактерий на питательных средах с различным содержанием препарата, к которому определяют устойчивость, и на тех же средах без добавления его (контроль).

Определение лекарственной устойчивости может быть: а) прямое - посев соответственно обработанного патологического материала (мокрота, гной и т.д.) на среды, содержащие лекарственные препараты; б) непрямое - пересев предварительно выделенных чистых культур микобактерий туберкулеза на среды, содержащие лекарственные препараты.

Прямой способ более эффективен, но им можно пользоваться, если микобактерии обнаруживаются в материале бактериоскопически и содержатся в значительном количестве (1-5 палочек в поле зрения). Наиболее распространенными методами определения лекарственной устойчивости являются:

1) культивирование на плотных яичных средах;

2) микрокультивирование на стеклах;

3) глубинные посевы на полусинтетические среды;.

Результаты исследования учитывают по истечении определенного срока выращивания, достаточного для получения обильного роста в контрольных пробирках.

В остальных пробирках в зависимости от концентрации препарата и степени устойчивости к нему данного штамма микобактерии туберкулеза рост может быть различной интенсивности или к этому времени отсутствовать.

Лекарственно чувствительные штаммы дают рост в пределах определенных концентраций, различных для каждого препарата.

Штаммы, которые дают рост при соответственно более высоком содержании препаратов, относят к лекарственно устойчивым. Устойчивость определяют по макроросту на плотных и по микроросту на жидких средах. Устойчивость данного штамма в целом выражается той максимальной концентрацией антибактериального препарата (количество микрограммов в 1 мл питательной среды), при которой еще наблюдается рост, приближающийся к росту в контроле.

В части случаев выявляется обильный типичный рост микобактерии в присутствии той или другой концентрации антибактериального препарата, а на среде, содержащей более высокие концентрации этого же препарата, рост может быть скудным в виде единичных макро- или микроколоний, что указывает на размножение только некоторых, более резистентных, особей данного штамма. В таких случаях отмечают как максимальную концентрацию препарата, при которой еще размножается основная устойчивая масса микробных особей, так и предельную - при скудном росте ("относительная устойчивость" см. таб.).

Туберкулез давно перестал быть самой распространенной болезнью, но все еще представляет большую опасность для людей. Примерно треть населения является носителем бактерии-возбудителя, которая может передаваться от человека к человеку по воздуху. Поэтому крайне важно вовремя диагностировать туберкулез и принимать все меры для его излечения. Подробнее о лабораторной диагностике туберкулеза, микробиологии этого заболевания и о его лечение вы сможете прочесть в этой статье.

Туберкулез

Что представляет собой туберкулез? Эту болезнь вызывает особая бактерия Mycobacterium tuberculosis. Она преодолевает защиту иммунной системы и начинает бесконтрольно размножаться. В результате инфекция поражает легкие человека, вызывая распад тканей и приводя к серьезному поражению внутреннего органа. В определенный период развития заболевания человек становится заразным, при этом никаких явных симптомов у него может не появляться некоторое время. Так как туберкулез передается по воздуху, такой больной становится опасен для множества людей и прежде, чем болезнь обнаружат, успевает заразить множество здоровых людей. Более того, почти треть всех людей на нашей планете имеет в своем организме бактерии, вызывающие туберкулез. Просто их иммунитет достаточно силен для того, чтобы сдерживать их рост. Такие пассивные носители не могут заразить других до того момента, пока болезнь не перейдет в острую форму. Туберкулез может передаваться не только от человека к человеку, но и через зараженные продукты, в частности, мясо птиц и животных. Для того чтобы избежать эпидемии среди населения, существует метод лабораторной диагностики туберкулеза ГОСТ 26072-89, который позволяет вовремя выявить наличие возбудителя.

В некоторых странах туберкулез распространен больше, чем в других, и влиять на это могут разные факторы. Например, распространение ВИЧ может вызывать также и рост инфицирования туберкулезом, поскольку вторичный иммунодефицит человека делает организм больного открытым для всех болячек. Например, в США наибольшее распространение туберкулез достиг в 1985 году. К 1993 году благодаря мощной государственной поддержке число случаев заражения удалось снизить, но количество больных во всем мире до сих пор вызывает тревогу. Лабораторная диагностика туберкулеза у взрослых крайне важна, так как позволяет на начальной стадии выявить разные формы туберкулеза. В результате пациент получает достаточное лечение, а люди, контактирующие с ним, избегают опасности заражения.

Методы диагностики туберкулеза

Это заболевание опасно. Его очень трудно выявить только с помощью одного метода исследования. Поэтому чаще всего врачи прибегают к дифференциальной диагностике туберкулеза, которая включает в себя несколько способов и позволяет точно установить диагноз. Какие основные методы диагностики можно выявить?

• Флюорография позволяет выявить наличие заболевания по измененному рисунку легких.
• Сбор анамнеза – изучение истории болезни пациента, его жалоб, анкетирование. Сам по себе данный метод не является основанием для постановки диагноза, но опытный специалист вкупе с другими способами может достаточно быстро выяснить причину плохого самочувствия.
• Осмотр пациента – прослушивание легких и перкуссия позволяют выявить хрипы и другие расстройства дыхания.
• Лабораторная диагностика проводится на основе анализов и направлена на выявление возбудителя и атипичных реакций организма (например, воспаления).

Лабораторная и инструментальная диагностика туберкулеза у детей – это достаточно сложная задача, поскольку диагноз сложно подтвердить при помощи микроскопического исследования, а симптомы часто бывают размыты и схожи с другими болезнями. Вот почему детям в школе и в детских садах часто ставят пробу Манту, которая показывает, есть ли иммунный ответ на введенные бактерии.

Лабораторная диагностика туберкулеза

Этот метод является разновидностью клинической диагностики и позволяет выявить наличие заболевания по изменению в химических и количественных составляющих тканей человека. Для лабораторной диагностики могут браться в качестве материалов для исследования следующие жидкости:

Современные методы лабораторной диагностики туберкулеза предполагает использование всех способов одновременно в том случае, если необходим быстрый и четкий ответ. Ведь в некоторых ситуациях счет может идти на часы. Своевременно поставленный диагноз может помочь назначить верное лечение и спасти жизнь пациенту. Лабораторная диагностика туберкулеза включает несколько методов, каждый из которых обладает своими плюсами и минусами.

Микроскопический метод

Микроскопический метод позволяет установить наличие в организме бактерий при помощи реагентов, которые при контакте с возбудителем туберкулеза окрашиваются в определенный цвет. Например, если в организме найдена Mycobacterium tuberculosis в превышающем норму количестве, то контраст становится красного цвета. Для ускорения процедуры микроскопии иногда используют люминесцентный метод, который позволяет выявить возбудителя гораздо быстрее. В этом случае чужеродные организмы подсвечиваются синим или зеленым светом. Несмотря на плюсы в виде быстрого результата и относительно простоты, микроскопический метод не считается идеальным. Он редко показывает точный результат. Если человек болен туберкулезом, но число возбудителей недостаточно для того, чтобы отразиться на цвете контраста, то болезнь запросто можно пропустить. Тем не менее, такой метод все еще используют в некоторых государственных учреждениях.

Бактериологический метод

Среди лабораторных методов диагностики туберкулеза следует отметить бактериологический способ, так как он используется чаще всего. Для данного анализа в качестве исследуемого материала берется мокрота из легких, которая всегда присутствует при туберкулезе легких. Поскольку в ней содержится множество бактерий и грибов, то для идентификации определенной группы микроорганизмов может потребоваться до восьми недель. В течение этого времени лаборант обычно выполняет следующие процедуры:

• Выделяет бактерии из первоначальной пробы.
• Высеивает бактерии и выращивает чистую культуру, изучая ее свойства. Именно этот процесс занимает дольше всего времени, так как микроорганизмам требуется время для размножения.
• Детально исследует клетки.

Для того чтобы бактерии не погибли, их помещают в особую питательную среду, в которой они чувствуют себя точно так же, как и в человеческом организме. Когда чаще всего применяется бактериологический метод? Обычно его используют в тех случаях, когда диагноз уже предварительно установлен и лишь нуждается в дополнительном подтверждении. Бактериологический метод является одним из самых точных способов, но, к сожалению, скорость ответа оставляет желать лучшего.

Проба Манту

Проба Манту – это наиболее ранний вид диагностики туберкулеза. Он был изобретен еще в 1908 году. Это простой и быстрый способ понять, есть ли у человека туберкулез. В больших коллективах (особенно детских) больной может послужить источником заражения для всех остальных. Вот почему проба Манту чаще всего ставится профилактически детям раз в год. При наличии симптомов туберкулеза туберкулин может быть введен повторно.

Во время исследования под кожу в руке пациента вводят антиген возбудителя туберкулеза. Он не является опасным для организма человека и уж конечно же не может заразить его. Процедура проводится с помощью специальной маленькой иглы и практически не вызывает никаких болевых ощущений. Если в вашем организме есть возбудители туберкулеза, то на месте укола образуется большое красное пятно, превышающее принятые нормы. Специалист обычно измеряет его с помощью линейки. Если патология обнаружена, то человека отправляют на дополнительное обследование. Само по себе увеличение реакции Манту не может считаться основанием для постановки диагноза. Но и слишком маленький размер Манту также не является положительным результатом, так как это может указывать на проблемы с иммунитетом.

Для того чтобы метод исследования показал как можно более четкий результат, после подкожного введения туберкулиновой пробы нужно соблюдать несколько правил:

• не чесать место укола;
• не мочить его.

Если же рекомендации не были соблюдены, то об этом обязательно нужно рассказать врачу, так как это может исказить результаты исследований.

Серологический метод

Серологические методы диагностики туберкулеза пришли к нам также из XX века. Однако после многочисленных испытаний ученые осознали, что в отличие от всех остальных инфекций, серологический метод в отношении туберкулеза не обладает нужной чувствительностью и не может гарантировать точную постановку диагноза. Именно поэтому после анализа методов лабораторной диагностики туберкулеза серологический способ не был рекомендован специалистами для массового применения. Возможно, в ближайшем будущем будут созданы более дешевые и эффективные способы серологической диагностики, которые будут способны выявлять специфические антигены туберкулеза, но пока что в медицине применяют другие методы.

Метод ПЦР на данный момент считается одним из самых эффективных лабораторных методов ранней диагностики туберкулеза. Что он собой представляет? Полиразмерная цепная реакция позволяет добиться значительного увеличения некоторых фрагментов ДНК и оценить визуально ее составляющие. Этот метод разработал в 1983 году ученый Кэри Мюллис, и в XXI веке он продолжает использоваться во всем мире. Кроме простого увеличения, ПЦР позволяет производить и некоторые другие манипуляции, которые также способны дать определенную информацию об организме человека.

ПЦР отлично зарекомендовал себя в качестве диагностического способа, поэтому его часто применяют как отдельно, так и в комплексе с другими исследованиями. Для анализа браться может любая жидкость, но чаще всего исследуется слюна или мокрота пациента. Если речь идет о менингите, вызванном туберкулезом, то в этом случае для анализа берут спинномозговую жидкость. Главный плюс данного метода заключается в том, что он обладает высокой чувствительностью и позволяет выявить даже минимальную концентрацию туберкулезной палочки. Кроме того, результат можно получить очень быстро – обычно ответ появляется в течение суток.

Цитология и гистология

К сожалению, во врачебной практике довольно часто встречаются такие случаи, в которых на лицо наличие клинической картины туберкулеза, рентген также показывает изменения в структуре тканей, но по анализам невозможно установить точную причину недомогания. Тем временем без лабораторного подтверждения невозможно грамотно назначить лечение. В этих случаях для исследования может быть использован гистологический или цитологический метод.

Гистологическое исследование представляет собой анализ ткани, который проводится под большим увеличением. Для постановки диагноза чаще всего берут биопсию из легких. Забор тканей происходит с помощью небольшого среза. Данная операция может быть довольно болезненной, поэтому ее делают только при наличии четких показаний.

Цитологическое исследование мокроты считается во многих случаях обязательным при постановке диагноза. Высушенные и предварительно окрашенные мазки рассматривают под большим увеличением. У больных туберкулезом на них можно рассмотреть гнойно-слизистые образования, чуждые здоровым легким. Также отмечается скопление моноцитоидных мононуклеаров. Две этих методики – цитология и гистология обладают высокой информативностью для специалистов, но при этом не требуют больших материальных или временных затрат, поэтому применяются достаточно часто.

Симптомы туберкулеза

Вы можете быть носителем бактерии, вызывающей туберкулез, но если ваш иммунитет при этом довольно сильный, то вы не заболеете. Так называемый скрытый туберкулез не является заразным и не представляет опасности для окружающих. Но для самого больного скрытая форма туберкулеза не является хорошим вариантом, так как может стать активной в любой момент. Такой человек является своеобразной бомбой замедленного действия, которая может активироваться в любой момент. Вот почему лечение одинаково и для скрытой, и для активной формы. Какие основные симптомы туберкулеза?

• Кашель, который не проходит более трех недель.
• Кровянистые выделения из легких (кашель с кровью).
• Потеря веса без особых причин.
• Боль в груди и при дыхании.
• Повышенная температура.
• Потливость и слабость.
• Озноб.
• Потеря аппетита.

Туберкулез может воздействовать не только на легкие, но и на другие внутренние органы: например, на почки, позвоночник и мозг. Если туберкулез распространяется вне легких, то симптомы могут различаться в зависимости от места локализации бактерий. Например, туберкулез позвоночника может заставить вас чувствовать боли в спине, а туберкулез почек приводить к повышенному мочеиспусканию. Однако чаще всего туберкулез начинается именно в легких, поэтому симптомы у пациентов схожи между собой.

Причины и профилактика

Анализ бактериологических методов лабораторной диагностики туберкулеза показывает, что данный способ является весьма эффективным для лечения и предупреждения развития активной формы туберкулеза. Но не всегда удается найти эффективное лечение, особенно на поздних стадиях болезни. Поэтому врачи предпочитают предупреждать болезнь и настаивают на различных профилактических методах. Что может вызвать развитие туберкулеза?

Он появляется лишь от одной микобактерии, которая передается от больного во время разговора, чихания или смеха. Этого оказывается достаточно для того, чтобы собеседник подхватил болезнь. Но шансы заразиться от незнакомца минимальны. Гораздо большую опасность представляют люди, которые не знают о своем заболевании, но находятся с вами в близком контакте. Однако вы можете предпринять следующие меры для предотвращения развития заболевания:

• Избегайте общественных мест и скоплений людей.
• Носите специальную маску.
• Периодически проверяйтесь.

Все перечисленные методы работают лишь на треть. Поскольку все мы живем в окружении других людей, полностью избежать контакта с ними не представляется возможным. Ношение маски может снизить риск заражения. Поэтому все, что на самом деле в наших руках – это заботиться о своем здоровье и вовремя подмечать настораживающие симптомы. Особенно следует быть осторожными людям, которые имеют следующие заболевания:

• сахарный диабет;
• ВИЧ;
• рак;
• болезни почек;
• критично низкую массу тела.

Своевременная дифференциальная диагностика туберкулеза помогает увеличить шансы на полное выздоровление и защищает ваших близких от заражения.

Факты

Вот несколько фактов о туберкулезе, которые заставят вас задуматься.

• Туберкулез входит в тройку основных причин смерти пациентов в возрасте от 15 до 44 лет.
• По оценкам ВОЗ примерно девять миллионов человек в год болеют туберкулезом, из них три миллиона никогда не узнают о своей болезни.
• Симптомы туберкулеза, такие как потливость, потеря веса и невысокая температура могут быть слабо выражены на протяжении многих месяцев, за время которых люди могут заразить около 10-15 человек.
• Туберкулез – это патоген, который может передаваться от человека к человеку исключительно по воздуху.

Лечение

Диагностика и лечение туберкулеза крайне важно для поддержания здоровья. Ведь без лечения 2/3 больных умирают. Однако при своевременном приеме препаратов болезнь является излечимой в 100 % случаев. На ранних стадиях применяются антибиотики, а на поздних может потребоваться и операция. В некоторых случаях бактерии туберкулеза могут мутировать в инфекцию, которая окажется невосприимчивой к стандартным лекарствам. Тогда потребуется более длительное лечение препаратами нового поколения, которые доступны далеко не во всех странах. Также после излечения нередко наступают рецидивы, которые требуют повторного курса лекарств. Микроорганизмы туберкулеза чрезвычайно устойчивы и могут быть уничтожены только специальными и довольно сильными препаратами. При помощи народной медицины и других альтернативных методов вылечить это серьезное заболевание нельзя.

Клиническая диагностика туберкулеза обязательно должна проводиться регулярно даже при отсутствии каких-либо симптомов. Своевременное обследование может предотвратить многие проблемы, связанные со здоровьем.