Пироплазмоз в ростовской области

Главная → Публикации для ветеринарных специалистов → Лекция: Бабезиоз собак. Пироплазмоз собак. Стереотипы и реальность. Диагностика и терапия.

На сегодняшний день практически нет ветеринарного врача, который бы не был знаком с бабезиозом собак (пироплазмозом собак), и поскольку он неоднократно сталкивался с бабезиозом и вылечивал его, то, наверное, он может сказать, что хорошо знает это заболевание. И действительно, в отечественной литературе сложилось несколько устойчивых стереотипов относительно бабезиоза.

Бабезиоз легко диагностируется в острую стадию заболевания.

• На собаках паразитирует только один вид бабезий (пироплазм), который не поражает другие виды животных, а пироплазмы других видов животных не поражают собак.
• Пироплазмоз передается только через укусы клещей или при переливании крови.
• На ранних стадиях заболевания пироплазмоз легко лечится.
• Не леченые собаки, как правило, погибают.
• И следствие из 5 стереотипа – для пироплазмоза нехарактерно носительство.

Конечно, у каждого специалиста есть свои мнения и догадки относительно бабезиоза, но в отсутствии молекулярной диагностики эти догадки и мнения остаются только догадками и уделом меньшинства.

В процессе разговора о роли пироплазмоза как этиологического фактора лихорадки неясного генеза мы постепенно разберем, насколько сложившиеся стереотипы в отечественной имеют место быть на самом деле.

Бабезиоз собак является широко распространенным во всем мире, клинически существенным, трансмиссивным, гемопротозойным заболеванием.

Разные виды бабезий часто называют пироплазмами, что является собирательным термином для рода бабезий и тейлерий. Эти два ряда возбудителей за последние 10 лет подверглись существенному генетическому исследованию, что привело к переклассификации и изменениям в токсономии этих паразитов. По международной классификации Babesia spp . соответствуют надсемейство Piroplasmida в пределах типа Apicomplexa .

До 1980 года никаких новых изменений в номенклатуру бабезиозов внесено не было, и только с появлением молекулярных методов диагностики и молекулярного генотипирования возбудители бабезиоза собак были переклассифицированы.

Четвертая крупная пироплазма, паразитирующая на собаках, выделена в Северной Каролине (США) от собак с клиническими и гематологическими признаками пироплазмоза. На сегодняшний день еще не классифицирована и определена как неклассифицированная крупная Babesia sp., изолят из Северной Каролины.

Последние исследования бабезиоза собак сосредоточены на определении таксономического статуса известных и недавно обнаруженных возбудителей бабезиоза, улучшении диагностических методов, раскрытия аспектов патофизиологии этого заболевания и поиск новых химиотерапевтических и иммуннопрофилактических протоколов.

Кроме того, имеют сообщения о выделении из крови собак, больных бабезиозом, три разновидности Theileria . У небольшого числа собак в Европе были выделены Theileria ( Babesia ) equi и Theileria annulata [17,18]. И у 82 собак в Южной Африке была выделена неклассифицированная Theileria sp – Южноафриканская Theileria sp. [19].

Как и при решении многих других вопросов, касающихся таксономическими, не обошлось без разногласий при классификации пирплазм собак, особенно это касается так называемых малых пироплазм. Вся классификация на сегодняшний день построена на основании генетического родства между паразитами. Однако до сих пор, мало данных по жизненному циклу этих паразитов, особенностям их строения и особенно – по идентификации векторов передач.

При световой микроскопии интроэритроцитарные стадии Babesia spp . неразличимы от Theileria spp . (у кошек Cytauxzoon имеет такие же характеристики, но данных о том, что этот род может поражать собак, нет).

Исторически роды Babesia и Theileria были разделены на основании стадий жизненного цикла и трансовариальной передачи в клещах. [20]. Среди всех пироплазм, паразитирующих на собаках и кошках, доказана экстраэритроцитарная стадия (шизогония) в жизненном цикле Cytauxzoon felis у кошек.

Противоречие заключается в том, должны ли Babesia spp . и Theileria spp . классифицироваться на основании их естественного цикла в организме собак и клещей или могут использоваться генетические данные молекулярного анализа. При молекулярных исследованиях в основном используют локус субъединицы рибосомального гена 18 S для родовых отличий пироплазм, поскольку эта часть гена достаточно устойчива к мутациям. Но другие r РНК гены, например, цитохрома b , и гены, кодирующие белки теплового шока, также использовались для родовой идентификации [6,18,21].

Установленные зоны распространения пироплазмоза собак перечислены в таблице 1; имеется всесторонняя и современная карта распространения клещевых инфекций собак Европы, Восточной и Юго-Восточной Азии [25]. Как и ожидалось, географическое распространение клещевых инфекций полностью связано с географическим распространением клещей-переносчиков этих заболеваний. Интересно отметить, что распространение Babesia gibsoni не связано с распространением каких-либо клещей, и быстрое глобальное распространение этого патогена связано с его уникальной возможностью прямой передачи от больной собаки к здоровой через укусы собак друг драгом, минуя какие-либо клещевые векторы [4,5].

На сегодняшний день Babesia vogeli является самой широко распространенной пироплазмой собак, что связано с широчайшим распространением вектора – коричневого собачьего клеща ( Rhipicephalus sanguineus ). Babesia vogeli распространена повсеместно, в тропической и субтропической области, а также и в более прохладных широтах, где кроме Babesia vogeli распространена другая большая бабезия – Babesia canis . Такое распространение может привести к микст-инфекциям ( sensu strictu ). Babesia canis передается Dermacentor spp . и имеет все более и более широкое распространение в Центральной Европе, тогда как совсем недавно считалось, что распространение ограничено Францией.

Babesia rossi является другой бабезией, распространенной в Африке (вместе с B . vogeli и B . gibsoni ). Первоначально этот агент был выделен только в Южной Африке, но на сегодняшний день есть сообщения о его выделении из других регионов Африканского континента, включая Нигерию [26] и Судан [27], где его распространяет клещ Haemaphysalis spp ., являющийся энзоотичным для этих мест.

Среди малых пироплазм наибольшее географическое распространение несомненно у B . gibsoni , азиатский штамм. Методом молекулярной идентификации он был обнаружен в различных южных, восточных и юго-восточных азиатских странах. Получил наибольшее распространение в тех странах, где практикуются незаконные собачьи бои.

До сегодняшнего дня в России световая микроскопия остается единственным методом диагностики бабезиоза у собак. Мы на основании световой микроскопии можем выделить тяжелое течение заболевания, выявить моноцитоз. Пироплазмы могут определяться как внутри эритроцитов, так и свободно, а также внутри макрофагов. Как мы считаем, здесь они оказываются в результате фагоцитоза пораженных эритроцитов.

Судить о тяжести течения по результатам световой микроскопии можно только по степени паразитемии, анемии и моноцитоза, но без клинических параллелей эти данные имеют невысокую ценность.

По данным нескольких авторов, предел чувствительности световой микроскопии приблизительно 0,001 % зараженных паразитами эритроцитов. Методом ПЦР можно обнаружить паразитов при паразитемии 50 бабезий в 1 мл крови[35] или 9 паразитов в 1 микролитре [39]. Все же, несмотря на высокую чувствительность, ПЦР будет давать отрицательные результаты, если в пределах образца не окажется ни одного паразита. Как показывает практика, ложноотрицательные результаты могут отмечаться при хроническом бабезиозе, и это очень важно иметь в виду, когда анализ проводится животным с хроническим течением, на носительство пироплазм и у бродячих животных. Группой авторов была проверена чувствительность ПЦР [41,42] в комплексном исследовании. При этом учитывались [42] клинические параметры, гематологические исследования, серологический титр. Присутствие ДНК бабезий определялось методом ПЦР каждый день после экспериментального заражения. В исследовании приняли участие 3 собаки ( n = 3) после полного клинического выздоровления, оцененного по клиническим признакам, на фоне отсутствия увеличения селезёнки, нормальной геммограммы и отсутствие пироплазм при световой микроскопии на 50 день после пика паразитемии.

Во время этого периода у клинически здоровых собак была обнаружена ДНК бабезий. Данное исследование показывает очень низкий уровень обнаружения ДНК методом ПЦР, возможно, сравнимый с хроническим пироплазмозом.

Иммуноферментный анализ на протяжении последних 30 лет был самым распространенным тестом на бабезиоз собак. [44,45]. Однако неудовлетворительная специфика из-за перекрестных реакций между Babesia spp . и другими микроорганизмами apicomplexan вносила субъективность в окончательные результаты исследования и мешала крупномасштабному применению этих методик. Надо сказать что эти коллизии обошли Российскую федерация, поскольку в ней наборы для диагностики бабезиоза серологическими и иммуноферментными методами так и не появились.

Тяжесть течения бабезиоза у собак и кошек колеблется от субклинической инфекции, развития невыраженной анемии до очень тяжелого течения заболевания с развитием синдрома мультиорганного расстройства и смерти. Факторами, определяющими тяжесть течения, является вид пироплазмы, вызвавшей заболевание, порода собаки, а также особенности физиологического состояния животного, такие как возраст, иммунный статус, наличие микст-инфекций, а также перморбидное состояние животного. Все виды пироплазм могут вызвать лихорадку, анорексию, спленомегалию, анемию и торомбоцитопению. Прямое повреждение и разрушение паразитом эритроцитов хозяина, снижение осмотической резистентности зараженных эритроцитов, окислительное и вторично иммунное повреждение мембран эритроцитов и как результат – внутрисосудистые и внесосудистые геморрагии.

Клинические особенности бабезиоза были рассмотрены с разных сторон 2. При длительном наблюдении выявлено, что из всех больших пироплазм Babesia vogeli является наименее патогенной, по крайней мере, у взрослых собак, и вызывает самые мягкие формы пироплазмоза, часто развиваются хронические формы заболевания. А самой патогенной пироплазмой является Babesia rossi в Африке [1,30,31].

У собак, зараженных Babesia rossi , часто развиваются различные осложнения, такие как гепатопатия и иммунооблусловленный гемолиз, что утяжеляет течение заболевания, но не вызывает смерть, если должным образом проводится терапия. А такие осложнения как ДВС, энцефалиты, острая почечная недостаточность и отек легких требуют ранней, агрессивной и интенсивной терапии, при этом прогноз часто остается плохим[32]. Напротив, пироплазмоз, вызываемый Babesia vogeli , часто протекает субклинически, но у щенков в возрасте до 3-4 месяцев заболевание может быть фатальным. Кроме того, такой пироплазмоз протекает тяжело у собак с иммунодепрессией, получающих химиотерапию по поводу онкологических заболеваний, у собак после хирургических вмешательств, особенно после спленэктомии.

Тяжесть течения пироплазмоза, вызванного Babesia canis , Babesia gibsoni , Theileria annae и Babesia conradae , колеблется от умеренного до тяжелого, но может наблюдаться широкий диапазон тяжести клинического состояния и осложнений, в зависимости от индивидуальный особенности животного.

Babesia conradae , как считают многие исследователи, более патогенна, чем B . gibsoni , приводит к более высокой паразитемии и выраженной анемии [14]. В Испании инфекция, вызванная Theileria annae , была связана с выраженным гемолизом и азотемией [16]. Неклассифицированная Babesia sp . в Северной Каролине была связана с неопределенными клиническими признаками, такими как летаргия, анорексия, пигментурия и умеренная лихорадка. Данные признаки были более выражены у спленэктомированных собак [54]. Результаты лабораторных исследований отражали умеренную анемию и выраженную тромбоцитопению, которую до этого наблюдали при инфекции, вызванной Babesia vogeli [54]. Были проведены гистологические исследования, которые показали, что данные пироплазмы способны вызывать гипоксическое повреждение почек (гипоксическая и гемоглобинурическая нефропатия) в виде тубулярных изменений, и гломерулонефрит по различным механизмам [55].

Клиникопат o логическое исследование собак, пораженных Theileria annae Северо-Западе Испании, показало, что у 36% собак ( n = 58) отмечалась азотемия, и у этих собак смертность была в 10 раз выше, чем у тех животных, у которых не отмечалась азотемия. [56]. К сожалению, в этих исследованиях не приведены данные, показывающие корреляцию тяжести заболевания с выраженностью азотемии, но высокий белок в моче, повышенный креатинин, гипоальбуминемия и гиперхолестеринемия у больных собак заставили авторов предположить, что наиболее вероятной причиной поражения почек у собак при инфекции Theileria annae является гломерулонефрит [56]. Вместе с тем исследования уровня азотемии у собак, зараженных B . rossi , показали, что уровень креатинина и мочевины не являлся прогностическим показателем возникновения острой почечной недостаточности с плохим прогнозом [57,58]. В недавних исследованиях эндокринных маркеров болезни установлено, что отмечается корреляция между высокой смертностью собак, больных пироплазмозом, вызванным B . rossi , и высоким уровнем кортизола и АКТГ, при одновременно низком уровне T 4 и fT 4 [59].

Клинические последствия хронического бабезиоза неясны. Имеются сообщения о том, что у большинства собак после незначительных клинических проявлений заболевания развивается преиммунное состояние, которое теоретически может закончиться иммунообусловленными осложнениями или развитием клинического заболевания в более позднее время. Вместе с тем хроническая инвазия может не иметь вообще никаких последствий для собак, а в неблагополучных районах даже приводить к устойчивости животных к пироплазмозу [60]. Вместе с тем есть данные, что у собак участвующих в боях происходи обострение хронического (или латентного) бабезиоза вызванного B . gibsoni . При этом у собаки развивается анемия и вялость, при лабораторном исследовании тромбоцитопения а тесты на B . gibsoni становятся положительными, даже если до этого давали отрицательный результат. После непродолжительного лечения наступает ремиссия до следующего серьезного стресса. Несколько таких периодов как правило приводит к тяжелому повреждению почек с развитием аутоиммунных гломерулонефритов различной морфологической формы.

Такие собаки способны заражать своих соперников по собачьим боям, в связи с чем, многие страны (например, Новая Зеландия) рассматривают вопрос об ограничении ввоза собак, носителей бабезий.

Наибольшие трудности у ветеринарных специалистов возникают в терапии хронического бабезиоза. Хронический бабезиоз может быть вызван любой бабезией, но наиболее часто его вызывает B . gibsoni .

Имидокарба дипропионат и диминазин ацетурат являются широко используемыми интипироплазменными препаратами. Но в течение многих лет использовались и другие препараты с различным терапевтическим эффектом, например, такие как квинурониума сульфат, трипан синий, пентамидин, фенамидин, парваквон ( quinuronium сульфат, trypan синий, pentamidine , phenamidine и parvaquone ).

В разных странах регистрационные комитеты ограничили применение многих из этих препаратов, так как некоторые из них, особенно diamidine производная diminazine , ассоциированы с высокой токсичностью и многими побочными эффектами. В лучшем случае эти препараты приводили к улучшению клинических признаков и редко – к элименации возбудителя из организма собаки.

Хорошие результаты при лечении пироплазмоза, вызванного маленькими пироплазмами, особенно B . gibsoni , были получены при применении – Clindamycin в дозе 25 мг/кг каждые 12 часов.

Данный препарат уменьшал паразитемию, при этом улучшались морфологические показатели в экспериментальном исследовании с заражением собак. Но препарат не удалял пироплазм из организма, и паразитемия наблюдалась еще на 108 день после обработки [61].

Сообщается об экспериментальном заражении и терапии 4 экспериментальных собак. Исследователи добились излечения собак, зараженных B . gibsoni . Предварительная терапия

diminazine в комбинации с

clindamycin , metronidazole (15 мг/кг каждые 12 часов) и

доксициклин (5 мг/кг каждые 12 часов) [62].

Успешной же оказалась терапия этих собак по следующему протоколу:

azithromycin (10 мг/кг каждые 12 часов) и

atovaquone (13.3 мг/кг каждые 8 часов) в течение 10 дней.

Эффективность лечения определялась по нормализации клинических признаков и отсутствию B . gibsoni ДНК в периферической крови. Десятидневный курс лечения заболевания, вызванного B . gibsoni , сопровождался клинической эффективностью и отсутствием побочных эффектов[41]. Вместе с тем цена на atovaquone ограничивает применение этого препарата, особенно там, где он больше всего нужен, – в азиатских странах. Более дешевые формы atovaquone с proguanil вызывают тяжелые побочные эффекты со стороны ЖКТ у собак.

К сожалению, эта комбинация препаратов также не приводит к выздоровлению у некоторых собак, при этом быстро возникает устойчевость к atovaquone , вызванная мутацией гена b -цитохрома [42,63].

Проводятся лабораторные испытания различных вытяжек из тропических растений для использования их как противобабезиозных средств, но пока никаких клинических данных по этим вопросам не сообщали 65. Пептид, полученный из вытяжки клещей Haemaphysalis longicornis , уменьшал паразитемию у мышей при пирплазмозе, вызванном B . microti , и убивал B . gibsoni непосредственно в клещах [67].

Профилактировать пироплазмоз, как и любое другое векторное заболевание, проще всего, не допуская нападения клещей на собак, но достичь этого практически невозможно, особенно в эндемичных районах.

Несколько препаратов были исследованы с целью их профилактического применения против бабезий, и ни один не дал надежных результатов. Как наиболее распространенный применялся имидокарба ( imidocarb dipropionate ) в дозе 6 мг/кг – однократная доза, которая защищает собак от B . canis до 8 недель [68], его действие усиливается при одновременном применении доксициклина в дозе 5 мг/кг/ в день, особенно против высокопатогенных B . canis . [69].

Бабезиоз собак остается важной клинической проблемой, несмотря на серьезные достижения последних лет в понимании патогенеза этого заболевания. Остаются нерешенными проблемы передачи инфекции и ее патофизиологического механизма, много нерешенных вопросов в диагностике заболевания и терапии этой инвазии, данное заболевание бросает вызов ветеринарам всего мира.

Анализ на пироплазмоз и
другие инфекции у собак и кошек в
Ростове-на-Дону и Ростовской области:

Ветеринарный диагностический центр Вита

БАБЕЗИОЗ СОБАК: НОВЫЕ ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ, МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ И КЛИНИКО-ЛАБОРАТОРНЫЕ АСПЕКТЫ

Карташов СИ., Ермаков А.М., Ключников А.Г., Миронова ПЛ., Миронова А.А., Ярошенко Н.В., Бойко В.П. Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт, г. Новочеркасск

Бабезиоз собак является широко распространенным во всем мире, клинически существенным, трансмисивным г гемопротозойным заболеванием. Только в Ростовской области зараженность собак бабезиозом в период с марта по июнь достигает 35% [1].

На сегодняшний день в отечественной ветеринарной литературе сложилось несколько устойчивых стереотипов относительно бабе-зиоза собак, вот некоторые из них: бабезиоз легко диагностируется в острую стадию заболевания: на собаках паразитирует только один вид пироплазм, который не поражает другие виды животных, а пироплазмы других видов животных не поражают собак: пироплазмоз передается только через укусы клещей или при переливании крови: на ранних стадиях заболевания пироплазмоз легко лечится, а не леченые собаки, как правило, погибают: для пироплазмоза нехарактерно носительство.

Разные виды бабезий часто называют пироплазмами, что является собирательным термином для рода бабезий и тейлерий. Эти два рода за последние 10 лет подверглись скрупулезному генетическому исследованию, что привело к изменению в классификации таксономии этих паразитов. По международной классификации роды Babesia spp. входят в семейство Babesiidae. надсемейство Piroplasmida в пределах типа Apicomplexa. кроме того, в надсемейство Piroplasmida входит также и род Theileriidae.

В англоязычной литературе по величине бабезий при световой микроскопии выделяют "большой" бабезиоз (при обнаружении в мазках крови методом световой микроскопии бабезий размерами более 3-5 urn). На сегодняшний день мы знаем, что это такие бабезий. как В. canis и В. vogeli. О "малом" бабезиозе говорят при обнаружении в мазках крови бабезий менее 3 urn. это В. gibsoni (табл 1). Несмотря на кропотливое наблюдение за паразитами в мазках крови, в течение почти ста лет. классификация бабезий не шла дальше, чем классификация их по морфологическим особенностям и размерам. Впервые предложил классифицировать возбудителей бабезиоза собак по клиническим признакам заболевания немецкий протозоолог Эдвард Рейчнов, который выявил серьезные различия в тяжести клинического течения и патогенности возбудителей, вызывающих бабезиоз во Франции и на Севере Африки. Наиболее вероятно, что сейчас эти паразиты известны как В. cams и В. rosi соответственно. До 1980-года никаких новых изменений в номенклатуру возбудителей бабези-озов внесено не было, и только с появлением молекулярных методов диагностики и молекулярного генотипирования возбудители бабезиоза собак были переклассифицированы. Последние исследования бабезиоза собак сосредоточены на определении таксономического статуса известных и недавно обнаруженных возбудителей бабезиоза. улучшении диагностических методов, раскрытия аспектов патофизиологии этого заболевания и поиск новых химиотерапевтических и им-муннопрофилактических протоколов.

Такой возбудитель бабезиоза собак как В. canis в 2000 году был повторно классифицирован в три подвида В. canis canis. В. canis rossi и В. canis vogeli [2. 3]. В 2005 году, на основании перекрестных иммунных реакций, серологического тестирования, векторной специфики и генетического родства, эти паразиты признаны независимыми видами В. canis. В. rossi и В. vogeli. Все три паразита названы большими (крупными бабезиями. по ранее предложенной морфологической классификации) (табл. 1) [2. 3].

Таблица 1. Виды пироплазм, паразитирующие на собаках

Четвертая крупная группа бабезий. паразитирующих на собаках, выделена в Северной Каролине (США) от собак с клиническими и гематологическими признаками бабезиоза. На сегодняшний день она еще не классифицирована, и определена как неклассифицированная крупная Babesia sp.. изолят из Северной Каролины (табл. 1) [2].

Большинство специалистов признают, по крайней мере, три возбудителя "малого" пироплазмоза у собак они отличаются по клиническим и генетическим характеристикам это Babesia gibsoni. Babesia conradae. В другом исследовании бабезий были выделены от больных собак на западе США и описаны в оригинальном исследовании как gibsoni [3. 4]. и Babesia microti-like. последняя позже идентифициро вана как Theileria annae [5. 6] (табл. 1).

Кроме того, имеются сообщения о выделе нии из крови собак, больных бабезиозом трех раз новидностей Theileria. У небольшого числа собак в Европе были выделены Theileria (Babesia) equi и Theileria annulate. У 82 собак в Южной Африке была выделена неклассифицированная Theileria sp - Южно-Африканская Theileria sp. [5. 6].

При световой микроскопии - интроэритроцитарные стадии Babesia spp. неразличимый от Theileria spp. Известно, что на кошках паразитирует Babesia felis и тейлерия Cytauxzoon felis. которые, при световой микроспории имеют такие же характеристики, как и бабезий собак. Однако, данных о том. что эти возбудители могут поражать собак, нет.

Как и при решении многих других вопросов касающихся таксономии, не обошлось без разногласий при классификации пироплазм собак, особенно это касается, так называемых, малых пироплазм. Исторически роды Babesia и Theileria. были разделены на основании стадий жизненного цикла и трансовариальной передачи в клещах. [2]. Противоречие заключается в том. должны ли Babesia spp. и Theileria spp. классифицироваться на основании их естественного цикла в организме собаках и клещей, или могут использоваться генетические данные молекулярного анализа. С 2000 года при классификации пироплазм предпочтение отдают генетическим аспектам возбудителей. При молекулярных исследованиях, в основном, используютлокус субъединицы рибосомального гена 18S РНК для родовых отличий пироплазм, поскольку эта часть гена достаточно устойчива к мутациям. Но другие рРНК гены, например цитохро-ма Ь. и гены, кодирующие белки теплового шока, также использовались для родовой идентификации [5. 8].

На сегодняшний день установлены зоны распространения бабезиоза собак, они перечислены в таблице 1: имеется всесторонняя и современная карта распространения клещевых инфекций собак Европы. Восточной и Юго-Восточная Азии [2]. Как и ожидалось, географическое распространение клещевых инфекций полностью связано с географическим распространением клещей - переносчиков этих заболеваний. Интересно отметить, что распространение Babesia gibsoni не связано с распространением каких-либо клещей, и быстрое глобальное распространение этого патогена, связано с его уникальной возможностью прямой передачи от больной собаки кздоровым через укусы, минуя какие-либо клещевые векторы [9. 10].

Все данные по распространению различных видов бабезий получены из зарубежной литературы и касаются распространения бабезиоза за пределами Российской Федерации. Данные по распространению различных видов бабезий в России в доступной отечественной литературе мы не нашли, что и определило цель нашего исследования.

Цель исследования: установить наличие носительства бабезиоза у собак на территории Ростовской области, выяснить векторы передачи бабезиоза и виды бабезий, паразитирующих на собаках в данном регионе.

Материал и методы исследования. Исследования были проведены на 100 собаках, поступивших в клиники Ростовской области в период с начала октября по конец ноября. Все собаки были клинически здоровы, и у них не ставился диагноз бабезиоз за весь предшествующий весенне-летний период. У животных отбиралась и стабилизировалась EDTA кровь. Исследования на бабезиоз проводили методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией.

Анализ нуклеотидных полноразмерных геномов и участков различных генов бабезий. взятых из базы данных GenBank (NCBI) последовательностей, проводили с применением пакета прикладных программ "BioEdit 6.0". Исходя из нуклеотидного состава геномов бабезий разных видов нами были выбраны участки 18S рРНК-гена. наиболее консервативные среди известных изолятов. На консервативные участки были рассчитаны родоспецифические праймеры BabspF (5' -GTTG CTTCTTAG AG GG ACTTTGG -3') и BabspR (5-GCTCTAAGCCCTGAGG AAG11 lAAG-3 ). фланкирующие участок в 282 пары нуклеотидов (п.н.).

Для идентификации вида бабезий исследовалась кровь от собак на присутствие видоспецифичных участков гена 18S рРНК. Исходя из диагностической ценности эксперимента для обнаружения кДНК конкретных видов бабезий. был выбран "стандартный" вариант ПЦР. С этой целью были сконструированы праймеры BrosF (5-CTCACCAGGTCCAGACAAACG-3) и BrosR (5-GTAGGATTGACAGATTGATAGCTC-3) к В. rossi. BcanF (5' -G ATTCTTTG GGTG GTG GTGCATG-3") и BcanR (5-CGTTCTTAGTTGGTGGAGTGAT-3) к В. cams и BvogF (5-TGTCTGGTTAATTCCGTTAAC-3 ) и BvogR (5-GAACGAGACCTTAACCTGCTAACT-3) к В. vogeli. Рассчитанные видоспе-цифичные праймеры для выявления кДНК имели высокую температуру отжига 62-64"С. это позволило объединить два этапа реакции (отжиг и элонгацию), в один. В результате удалось значительно снизить время постановки реакции, что не повлияло на ее специфичность и чувствительность. Постановку ПЦР проводили в реакционной смеси стандартного состава с использованием 10 пкМ каждого праймера. 5 мкл раствора кДНК с добавлением 3 мМ MgCI (рис. 1,2).

Рис. 1. Исследование методом ПЦР в реальном времени на родовые гены бабезий. Из 100 исследованных проб 12 оказались положительными.

Рис. 2. Исследование в ПЦР (с детекцией в электрофорезе) на видоспецифич-ные участки гена 185 рРНК бабезий.

Нами были собраны клещи с территории Ростовской области с идентификацией их вида. Результаты исследования занесены в таблицу 2.

Таблица 2. Видовой состав иксодофауны Ростовской области

Из таблицы видно, что наиболее ожидаемым видом бабезий. распространенным на территории Ростовской области, будет Babesia cams.

Из 100 собак, у которых была отобрана кровь на носительство бабезиоза. у 12 был получен положительный результаты в реакции ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией). Таким образом, носительство бабезиоза в Ростовской области составило 12%. Наибольшее распространение бабезиоз получил среди таких пород как немецкая овчарка, метисы и таксы (табл. 3).

Таблица 3. Распространение носительства бабезиоза по породам собак

Нами были проведены дальнейшие исследования материала положительного на наличие родовых генов к бабезиям. Все 12 положительных материалов были дополнительно исследованы в реакции ПЦР для определения вида возбудителя Из 12 исследованных положительных материалов клинически здоровых животных положительный тест на В. canis оказался у 9 животных, номера исследования - 1. 7 15. 28.29. 33 35. 44. 56. Что составило 9 % от числа всех исследованных животных и 75% от числа всех носителей В 4 случаях тест оказался положительным на В. vogeli номера исследования - 1. 15. 33. 35. Что составило 4 % от числа всех исследованных животных и 33.3 % от числа всех носителей На В rossi все пробы оказались отрицательными При этом все животные, зараженные В. vogeli. были заражены и В. canis Таким образом, в Ростовской области широко распространена микст инвазия В vogeli и В cams.

Вместе с тем, пробы 10 39 95 оказались отрицательными на В. vogeli. В. canis и В. rossi. что указывает, что в Ростовской области распространены не только эти бабезий но и другие виды Мы планируем продолжить исследование и в ближайшее время представить материал о распространении всех видов бабезий на территории Ростовской области

Выводы. Таким образом, на сегодняшний день бабезиоз собак остается важной клинической проблемой, несмотря на серьезные достижения последних лет в понимании патогенеза этого заболевания Остаются нерешенными вопросы передачи инфекции и ее патофизиологический механизм много нерешенных вопросов в диагностике заболевания и терапии этой инвазии открытыми остаются вопросы профилактики данного заболевания

В настоящее время выделены неклассифицированные возбудители заболевания, не до конца выявлен ареал распространения который, по всей видимости, будет продолжать расширяться из-за международного движения собак и расширения ареала клещей.

Носительство бабезиоза у собак в Ростовской области в конце периода передачи инвазии составляет 12%. при этом, инцидентность носительства В canis составляет 9% от числа всех исследованных животных, или 75% от числа носителей, микст инвазия В. canis и В. vogeli составила 4% от числа всех исследованных животных, или 33.3% от числа всех носителей, в 25% случаев идентифицировать вид бабезий не удалось.

Список литературы

1. Карташов С.Н. Диагностическое значение цитологического исследования клеток печени при пироплазмозе у собак// Карташов С.Н.. Кривко М.С.. Славинская Л.П. / Вестник Саратовского госагроуниверситета им. НИ. Вавилова. N°6. 2008г. - С 28-30.
2. Peter J Irwin. Canine babesiosis: from molecular taxonomy to control /4th International Canine Vector-Borne Disease Symposium Seville. Spain. 26-28 March 2009.
3. Kjemtrup AM.Wainwright K. Miller M. Penzhorn BL Carreno RA: Babesia conradae. sp. nov.. a small canine Babesia identified in California. Vet Parasitol 2006. 138:103-111.
4. Zahler M. Rinder H. Schein E. Gothe R: Detection of a new pathogenic Babesia microti-like species in dogs. Vet Parasitol 2000. 89:241-248.
5. Schoeman JP. Rees P. Herrtage ME: Endocrine predictors of mortality in canine babesiosis caused by Babesia canis rossi. Vet Parasitol 2007. 148:75-82.

Бабезиоз (пироплазмоз) собак остается широко распространенным во всем миретрансмисивным гемопротозойным заболеванием. Распространение бабезиоза собак в Ростовской области составило 12%. выявление В. canis - 9% из числа исследованных и 75% из числа носителей, ассоциативное течение В. canis и В. vogeli - 4% от числа исследованных и 33.3% от числа носителей, в 25% случаев пироплазмы не идентифицированы.

Ключевые слова: бабезиоз/пироплазмоз собак, молекулярная таксономия. Babesia spp.. Theileria spp.. Cytauxzoon felis. B. canis canis. B. canis rossi. B. canis vogeli.

Canine babesiosis/piroplasmosis still remains as a widely spread transmissive haemoprotozoan disease. Distribution babesiosis at dogs in the Rostov area in the end of the period of a transmission of infection makes 12 %. thus, prevalence B. canis makes 9% from number of all investigated animals and 75 %from number of carriers, double infection B. canis and B. vogeli has made 4 % from number of all investigated animals and 33.3 % from number of all carriers, in 25 % of cases to identify a kind of piroplasms not at.

Key words: Canine babesiosis/piroplasmosis. moleculartaxonomy. Babesia spp.. Theileria spp.. Cytauxzoon felis. B. cams canis. B. canis rossi. B. canis vogeli.

Сведения об авторах

Ответственный за переписку с редакцией: Бойко Василий Павлович, соискатель ГНУ СКЗНИВИ. тел. 8-918-431-32-69 г. Новочеркасск, Ростовское шоссе. ГНУ СКЗНИВИ.

Карташов Сергей Николаевич, доктор биологических наук, профессор, зав. лаборатории ГНУ СКЗНИВИ. г. Новочеркасск Ростовское шоссе. ГНУ СКЗНИВИ. 88636227105:

Ключников Александр Геннадьевич, ст.н.с СКЗНИВИ. г. Новочеркасск. Ростовское шоссе ГНУ СКЗНИВИ. 88636227105:

Миронова Людмила Павловна, доктор ветеринарных наук, г.н.с. СКЗНИВИ. г. Новочеркасск Ростовское шоссе. ГНУ СКЗНИВИ. 88636227105:

Ермаков Алексей Михайлович, доктор биологических наук, профессор, зав. лаборатории ГНУ СКЗНИВИ. г. Новочеркасск Ростовское шоссе. ГНУ СКЗНИВИ. 88636227105:

Миронова Анна Анатольевна, доктор ветеринарных наук, зав лаборатории ГНУ СКЗНИВИ. г. Новочеркасск Ростовское шоссе. ГНУ СКЗНИВИ. 88636227105:

Ярошенко Наталья Валерьевна, соискатель ГНУ СКЗНИВИ. г. Новочеркасск. Ростовское шоссе. ГНУ СКЗНИВИ.