| Приоритеты: |
Изобретение относится к медицине и другим сферам деятельности человека, связанным с опасностью распространения стафилококковой инфекции среди незащищенных групп населения (предприятия общественного питания, детские больницы, родильные дома, хирургические стационары и др.), и предназначено для лечения стафилококкового бактерионосительства в носоглотке у практически здоровых людей.
Таким образом, практическое значение приобретает разработка эффективного и безопасного метода коррекции стафилококкового бактерионосительства на слизистой верхних дыхательных путей практически у здоровых людей.
Известен целый ряд способов лечения стафилококкового бактерионосительства [3]. В практической медицине часто применяется способ лечения с использованием хлорофиллипта, который взят за прототип [4]. Носителям стафилококковой инфекции при обнаружении патогенных стафилококков в отделяемом носовой полости или ротоглотки независимо от концентрации назначался хлорофиллипт в виде 2% масляного раствора по 2 капли в каждый носовой ход 3 раза в день 6-7 дней; 1% спиртовый раствор (20-30 мл на 100 мл воды) в виде полосканий зева 3 раза в день 6-7 дней. В результате проведенного лечения происходило исчезновение патогенных стафилококков в отделяемом носовой полости в 73% случаев. Существенным недостатком предлагаемой терапии являлась индивидуальная непереносимость соединений листьев эвкалипта в виде местных и общих аллергических реакций.
Однако невысокая эффективность лечения и сохранение стафилококкового носительства вынуждает применять антибактериальную терапию. Включение антибактериальных средств в данном случае вызывает значительные изменения в бактериальном фоне организма, вызывает дисбактериоз и ведет к развитию иммунодефицитного состояния [5]. Антибактериальная терапия часто осложняется аллергическими и токсическими реакциями, что отражается на состоянии здоровья носителя стафилококка. Лечение носительства антибактериальными средствами помимо развития клиники дисбактериоза кишечника ведет к неблагоприятному для организма развитию резистентности к антибиотикам выделяемого штамма стафилококка.
Технический результат заключается в повышении эффективности лечения путем увеличения количества лиц с отсутствием патогенных микроорганизмов в микрофлоре верхних дыхательных путей, увеличения периода стерильности носовой полости и ротоглотки за счет улучшения функционирования клеток слизистых покровов потоком аэроионов, а также в уменьшении развития осложнений при лечении стафилококкового носительства.
Современные экологические условия резко ухудшили состояние аэроионификации биосферы и изменили микробные ассоциации почвы, воды, воздуха и соответственно населения. Поэтому организм современного человека характеризуется несомненным нарушением микробного баланса, включая хроническое носительство условно-патогенных микроорганизмов в верхних дыхательных путях. Важнейшее влияние на благополучие современного человека оказывает качество воздушной среды. По санитарным нормам МЗ СССР уровень концентрации аэроионов, отклонение от которых создает угрозу здоровью человека, находятся в диапазоне от 600 аэроионов (АИ) до 50000 АИ в куб. см. [6]. Вдыхаемые отрицательные ионы кислорода оседают на стенках верхних дыхательных путей, трахеи, бронхов и бронхиол. В результате их воздействия активируются ферменты, витамины, гормоны и прочие активаторы или катализаторы биохимических реакций [7]. При аэроионотерапии увеличиваются отрицательные заряды элементов крови и электрораспор между форменными элементами крови и белками плазмы. Отрицательные ионы кислорода при этом обеспечивают стабильное состояние клеток и предотвращают их электроразряд, и, следовательно, коагуляцию протоплазмы с переходом из золя в гель [8]. Аэроионы улучшают состояние лиц с сахарным диабетом, гипертонической болезнью, вегето-сосудистыми нарушениями, туберкулезом, с аллергией, энурезом, кожными заболеваниями, алопеции и другими патологическими состояниями [9, 8].
Всего предложенным способом было пролечено 60 человек, у которых были выявлены патогенные стафилококки в отделяемом верхних дыхательных путей. Отмечен выраженный клинический эффект, подтвержденный клинико-лабораторными методами исследования и длительным (10 месяцев) наблюдением после лечения.
Предпринятые нами исследования показали, что у 97% людей с носительством стафилококков в отделяемом верхних дыхательных путей в результате проведенного курса лечения наблюдались значительные изменения в бактериологическом составе носоглотки в сторону отсутствия стафилококков патогенных групп, что подтверждается данными, приведенными в таблице.
Таким образом, предложенный способ лечения стафилококкового носительства позволяет добиться увеличения количества лиц с отсутствием патогенных стафилококков в отделяемом верхних дыхательных путей, а также уменьшения развития осложнений при лечении носительства стафилококковой инфекции у лиц, не предъявляющих жалоб по состоянию здоровья.
1. Онищенко Г.Г. О состоянии заболеваемости внутрибольничными инфекционными болезнями и мерах по их снижению / Г.Г. Онищенко // Постановление Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. - М.: 2004. - №3. - С.5.
3. Диагностика и санация стафилококковых бактерионосителей: Метод. рекомендации МЗ РФ / Департамент государственного санитарно-эпидемиологического надзора. - М., 2001. - 15 с.
5. Шендеров Б.А. Антимикробные препараты и нормальная микрофлора / Б.А.Шендеров // Антибиотики и химиотерапия. - 1988. - №12. - С.921-926.
6. Санитарно-гигиенические нормы допустимых уровней ионизации воздуха производственных и общественных помещений. - СН 2152. - М., 1980, - 7 с.
7. Чижевский А.Л. Руководство по применению ионизированного воздуха в промышленности, сельском хозяйстве и медицине / А.Л.Чижевский - М.: Наука, 1959. - 56 с.
9. Лившиц М.Н. Аэроионификация: практическое применение / М.Н.Лившиц. - М.: Стройиздат, 1990. - 168 с.
10. ТУ-9224-004-45448778-02. Бактериоцидное и бактериостатическое средство / А.П.Хачатрян. - НС.03.922.П.001372.03.04 от 26.03.04. Патент №2002118732.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
![]()
Предположительным местом длительного переживания и массивного размножения S. aureus являются апокриновые железы, расположенные в передних отделах носовых ходов, а также в подмышечных ямках и паховых складках, что определяет факт преимущественного обнаружения S. aureus на этих участках кожи и слизистых оболочек. При этом именно передняя часть носовых ходов обычно рассматривается как основная экологическая ниша для S. aureus, что связано с высокой степенью сродства микроорганизмов данного вида с расположенным там эпителиоцитами.
По данным разных авторов, носительство S. aureus в носовых ходах выявляется от 1/3 до 2/3 взрослой человеческой популяции, при этом, если постоянно свободными от носительства оказываются примерно 34% обследованных, то на долю временных носителей приходится 16%, а постоянное носительство транзиторного и резидентного типов может быть диагностировано соответственно в 29 и 25% случаев [8,9]. Значение носовых ходов как основного места обитания и размножения S. aureus подтверждается и его существенным количественным присутствием в данной экологической нише. Данные по детской популяции отличаются еще большим разнообразием - от 3-4 до 62% у часто болеющих детей [1].
Антропогенное воздействие на окружающую среду оказывает сильное влияние на направленность эволюции взаимодействия паразита и хозяина. Установлено, что наряду с нарастанием резистентности паразита к техногенной нагрузке, идет и другой процесс - постепенное усиление иммунодепрессивного состояния хозяина. В максимальной степени антропогенные нарушения экологического равновесия выражены в основной среде обитания человека - атмосфере. Неблагоприятные изменения воздушной среды в наибольшей мере истощают адаптационные возможности человеческого организма [16].
Рядом исследователей [14] изучались персистентные характеристики стафилококков в местах загрязнения сероводородсодержащим газом. При этом было выявлено, что в районах с наибольшей антропогенной нагрузкой число резидентных бактерионосителей стафилококков, а также количественный показатель антилизоцимной активности микроорганизмов были наиболее высокими. Изучение уровней резидентного бактерионосительства в районе Карачаганского нефтегазоконденсатного месторождения выявило его минимальную величину в местах, наиболее удаленных от месторождения. По мере приближения к нему этот показатель возрастал, при этом была установлена корреляция между числом бактерионосителей и предельно допустимой концентрацией сероводорода и диоксида серы.
В работе, проведенной В.О. Крамарь (2008), установлено, что стафилококки, колонизирующие слизистые оболочки жителей города Волгограда, проживающих в районах с интенсивной антропогенной нагрузкой, имели более высокие персистентные характеристики, чем выделенные в условно чистом районе. Так, показатели АЛА стафилококков, выделенные в чистом районе, были минимальные (2,13±0,76 мкг/мл) и достоверно отличались от таковых в группах сравнения (экологически неблагополучный район) - 3,13±0,61мкг/мл. Способность S. aureus, циркулирующих в экологически неблагополучных районах города, инактивировать бактериальную составляющую препарата интерферон (антиинтерфероновая активность) также оказалась выше. Так, среднее значение АИА у S. aureus, выделенных в экологически благополучном районе, составило 2,91±1,81 у.е., что было достоверно ниже, чем в районе с высокой антропогенной нагрузкой (4,99±1,79 у.е.). При оценке антикомплементарной активности автором было установлено, что среднепопуляционный показатель изучаемых культур золотистого стафилококка был низким и не превышал 10 у.е.[3].
Для определения резидентного стафилококкового бактерионосительства в целях индикации атмосферного загрязнения наиболее удачным является детский контингент в возрасте 8-12 лет (Студеникин, 1989), так как отсутствие у детей контакта с производственными вредностями, вредных привычек (алкоголь, курение) облегчает подбор сопоставимых групп, а недостаточность адаптивных механизмов объясняет повышенную чувствительность детей к воздействию токсических факторов.
Учитывая вышеизложенное, О.В. Бухариным с соавторами (1997) была дополнена концепция микроэкологического мониторинга, которая включает в себя следующие положения:
1. Стафилококки (индикаторные виды для воздушной среды) усиливают персистентные свойства под воздействием химических поллютантов.
2. Дети 8-12 лет - наиболее чувствительная часть популяции для формирования бактерионосительства, могут служить биоиндикатором мониторирования.
3. По мере усиления техногенного пресса на популяцию прослойка стафилококковых (резидентных) бактерионосителей возрастает.
4. Показателем антропогенной нагрузки на организм служит коэффициент резидентного стафилококкового бактерионосительства (КРСБ), отражающий соотношение уровня стафилококкового резидентного бактерионосительства у детей в исследуемом районе и аналогичного показателя чистой (фоновой) зоны.
5. КРСБ более 3,0 отражает экологически неблагополучную ситуацию [1].
Таким образом, представленные материалы позволяют предположить, что стафилококковое бактерионосительство, оцененное по персистентным характеристикам штаммов, объективно отражает уровень техногенной нагрузки исследуемой территории, а значит, является косвенным показателем загрязнения воздушной среды.
Рецензенты:
Хижняк С.В., д.б.н., доцент, профессор кафедры ботаники, физиологии и защиты растений Красноярского государственного аграрного университета, г. Красноярск;
Винник Ю.С., д.м.н., профессор, заведующий кафедрой общей хирургии Красноярского государственного медицинского университета им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого, г. Красноярск.
Стафилококки
![]()
[Рис. 1] Золотистый стафилококк
![]()
[Рис. 2] Золотистый стафилококк
Организм здорового человека обладает значительной устойчивостью к стафилококкам. После перенесенной стафилококковой инфекции в крови появляются антитоксины. Обнаружение антитоксина свидетельствует о напряженности иммунитета к стафилококкам. Наличие в крови человека а-антитоксина в титре больше 2 ME указывает на недавно перенесенное заболевание стафилококковой этиологии.
При контакте с широко распространенными в окружающей среде стафилококками, а также в результате перенесенных заболеваний индуцируется гуморальный иммунный ответ, в результате которого образуются антитела на антигены микробных клеток, токсины и ферменты. Клеточный иммунный ответ проявляется в подавлении фагоцитоза. Устойчивость к фагоцитозу у вирулентных штаммов S. aureus, возможно, связана с их способностью образовывать капсулу in vivo, а также с продукцией коагулазы, образующей вокруг бактерий фибрин. Белок А препятствует фагоцитозу, связываясь с Fc-участками IgG. В ряде случаев наблюдается специфическая сенсибилизация организмов. Определенное значение при стафилококковых инфекциях имеют секреторные IgA, обеспечивающие местный иммунитет слизистых оболочек. Экология и эпидемиология. Стафилококки широко распространены в природе. Они обнаруживаются на коже и слизистых оболочках человека, встречаются у животных. Каждый вид стафилококка подразделяется на экологические варианты (эковары). Вид S. aureus включает 6 эковаров: А, В, С, D, Е и F. Основными хозяевами этих эковаров являются соответственно человек, свинья, домашняя птица, крупный рогатый скот, овцы, зайцы, собаки и голуби. Резервуаром золотистого стафилококка служат здоровые носители и больные с различными стафилококковыми поражениями. Наибольшую опасность в смысле распространения стафилококков представляют бактерионосители, у которых патогенные стафилококки обнаруживают на слизистой верхних дыхательных путей, особенно передних отделов носовых ходов, а также больные люди с кожными поражениями. Стафилококки достаточно резистентны к факторам окружающей среды. Они хорошо переносят высушивание, длительное время остаются жизнеспособными в пыли.
Стафилококковые инфекции
Род Staphylococcus включает шаровидные неподвижные аспорогенные грамположительные факультативно-анаэробные бактерии, принадлежащие к семейству Mисrососсасеае. В определителе бактерий Д.Берги приведены дифференциальные признаки 29 видов стафилококков. Они делятся на две группы - коагулазоположительные и коагулазоотрицательные. К первой группе относятся S. aureus, S. intermedius и S. hyicus. их роль в инфекционной патологии равнозначна. Чаще различные заболевания у людей и животных вызывает S.aureus, реже - S. hyicus. S. intermedius патогенный только для животных. На протяжении многих лет коагулазоотрицательные стафилококки считали непатогенными. Но теперь эта точка зрения изменилась. В связи с ухудшением экологической ситуации в большинстве стран и связанным с ней снижением естественного иммунитета участились случаи гнойно-септических поражений тканей и органов, вызванных коагулазоотрицательные видами, которые встречаются на коже и слизистых оболочках человека (S. epidermidis, S.auricularis , S.capitis, S.cohnii, S.haemolyticus, S.hominis, S.lentus, S.saprophyticus, S.schleiferi, S.simulans, S.wameri, S.xylosus ma in.).
Среди эпидемиологов, микробиологов и клиницистов довольно распространенное убеждение, что сегодня непатогенных стафилококков не существует. Все учащаются случаи выделения из крови, тканей и органов культур стафилококков без каких-либо маркеров патогенности. Однако, при элиминации их из организма исчезают все симптомы заболевания. Все это необходимо учитывать при проведении лабораторной диагностики стафилококковых инфекций. К сожалению, в рутинных бактериологических лабораториях нашей страны пока возможна идентификация лишь S. aureus, S. epidermidis и S.saprophyticus.
Стафилококки чаще поражают кожу, ее придатки и подкожную клетчатку. Они вызывают фурункулы, карбункулы, панариции, паронихии, абсцессы, флегмоны, маститы, лимфадениты, нагноения ран, в том числе операционных. У детей стафилококки являются возбудителями стафилодермий, эпидемических пухирчаток, импетиго. их выделяют при плевритах, бронхитах, пневмониях, перитонитах. Они могут вызвать ангины, тонзиллиты, гаймориты, отиты, конъюнктивиты, несколько реже - менингиты, абсцессы мозга, миокардиты, эндокардиты, артриты, инфекции сосудистых протезов. Очень опасные пищевые токсикоинфекции, энтероколиты, холециститы, циститы, пиелит, пиелонефрит. При проникновении в кровь или костный мозг вызывают сепсис, остеомиелит, синдром токсического шока. Однако все заболевания стафилококковой этиологии не рассматриваются как острозаразное.
При стафилококковых инфекциях исследуют гной, кровь (при сепсисе), выделения слизистых оболочек, мокроты, воспалительный экссудат, ликвор, раневое содержание, плевральный выпот, желчь, мочу. В случае подозрения на токсикоинфекцию - рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения, остатки пищи (особенно творог, молоко, пирожные, торты, кремы, мороженое и др.).. При санитарно-бактериологическом контроле исследуют смывы с рук, столов и других предметов. В бактерионосителей материал забирают тампоном отдельно из глотки и носовых ходов.
Из открытых гнойных поражений материал берут стерильным ватным тампоном после удаления раневого налета, в котором может быть сапрофитная микрофлора из воздуха, кожи и т.д.. При закрытых нарыва делают пункцию шприцем. Слизь из рото-и носоглотки берут стерильным тампоном. Мокроту и мочу забирают в стерильные пробирки, банки. Кровь (10 мл), взятую из локтевой вены, и ликвор - при пункции спинномозгового канала, с соблюдением асептики сеют у постели больного в 100 мл сахарного бульона. Кровь рекомендуют быстро (к ее свертыванию) вносить прямо из шприца во флакон с бульоном, тщательно перемешать, предотвращая образование сгустка. Пробы крови нельзя замораживать. В 25% случаев при стафилококковом сепсисе количество бактерий в крови (КОЕ) может быть меньше 1 / мл. При подозрении на такое положение необходимо сеять 25-30 мл крови.
Почти со всех исследуемых материалов (навоз, раневой содержание, экссудат, мокроты, осадок мочи и т.д.) с помощью бактериологической петли изготавливают мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. Только из крови и смывов мазки не делают так в них малое количество микроорганизмов. В типичных случаях стафилококки имеют шарообразную форму, фиолетовый цвет, располагаются несимметричными гроздьями, но встречаются и одинокие клетки, пары или тетради.
В последнее время в связи с широким использованием антибиотиков морфология стафилококков изменилась и типового их расположения в мазках из гноя часто не наблюдают. В связи с этим отличить стафилококки от стрептококков по их морфологии и взаимным расположением часто практически невозможно. Поэтому нужно делать посев, выделять чистую культуру и идентифицировать ее.
![]()
[Рис. 3] Золотистый стафилококк в чаше Петри
Материал от больных и бактерионосителей засевают немедленно или не позднее 3-4 ч после взятия при условии хранения его на холоде.В первый день петлей, шпателем или непосредственно тампоном делают посевы на кровяной агар и элективные для стафилококков среды (желтково-солевой (ЖСА) или молочно-желтково-солевой агар (МЖСА). Чашки с посевами инкубируют при 37 ° С в течение 48 часов , или сутки в термостате и дополнительно 24 ч при комнатной температуре при хорошем освещении. Если в исследуемом материале бактерий мало (данные микроскопии) - занял для обогащения делают еще в тиогликолевой среду.На второй день производят высев из сахарного бульона на указанные элективные среды, исследуют массивность роста и характер колоний после посевов других материалов. На кровяном агаре стафилококки образуют непрозрачные, слегка выпуклые колонии средних размеров с гладкой, блестящей, словно полированной поверхностью, четко очерченным краем, маслянистой консистенции. Патогенные штаммы образуют вокруг колоний прозрачные зоны гемолиза. На элективные-дифференциальных средах, как правило, вырастают только колонии стафилококков. В частности, на желтково-солевом агаре они образуют колонии с зоной помутнения вокруг них и характерным радужным венчиком по периферии (лецитовителазна реакция). На молочно-желтково-солевом агаре выявляют наличие пигмента, который может быть золотистым, палевым, белым, желтым, оранжевым и др..
Из всех типов колоний изготовляют мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют, проявляя типичные грамположительные стафилококки. Не менее двух типичных или подозрительных в отношении стафилококков колоний пересевают на скошенный агар. В первую очередь отсеивают колонии с гемолизом и те, которые дали положительную лецитовителазную реакцию. При отсутствии таких колоний исследуют не менее двух пигментированных колоний, при микроскопии которых выявили типичные стафилококки. Пробирки с посевами помещают в термостат при 37 ° С на 18-20 час.
В последующие дни проводят идентификацию выделенных чистых культур, для чего проверяют их морфологические и тинкториальные свойства (окраска по Граму), плазмокоагулюючу активность и другие свойственные стафилококков тесты.
Плазмокоагулазу выявляют путем внесения выделенной культуры в пробирку с цитратной плазмы кролика. Ее можно приготовить в любой лаборатории. У кролика из сердца берут 8 мл крови, вносят в пробирку с 2 мл 5% лимонно-кислого натрия и ставят в холодильник. После полной осадки форменных элементов плазму отсасывают в стерильную пробирку. Она может храниться в холодильнике 8-10 дней. Перед использованием ее разводят 1:5 (1 мл плазмы и 4 мл изотонического раствора хлорида натрия) и разливают в аглютинацийни стерильные пробирки по 0,5 мл. Полную петлю культуры стафилококков эмульгируют в плазме и помещают в термостат на 3 часа, затем оставляют при комнатной температуре на 18-20 часов. Предварительный учет свертывания плазмы проводят через 3 ч, окончательный - на второй день. Очень удобно пользоваться стандартной сухой цитратной плазмы кролика. Перед употреблением в ампулу добавляют 1 мл изотонического раствора хлорида натрия и после полного растворения ее разводят 1:5. Плазма человека малопригодна для постановки реакции плазмокоагуляции, поскольку в ней могут быть консерванты, лекарственные вещества, антитела, которые могут подавлять образование плазмокоагулаза.
Если выделена культура вызывает гемолиз, коагулирует плазму и дает положительную лецитовителазну реакцию, уже на третий день можно выдать результат на наличие S. aureus. Если культура обладает только плазмокоагулаза или только вителазну активность, для окончательного установления вида стафилококка необходимо определить дополнительные критерии патогенности: ферментацию маннита в анаэробных условиях, ДНК-азную активность, продукцию лизоцима, фосфатазы, а также определить чувствительность к новобиоцин.
Исследование на бактерионосительство среди медицинского персонала проводится дважды в год. При плановых бактериологических обследованиях обязательно исследуют слизь из носа. Исследования слизи из ротоглогки проводят выборочно, при наличии воспалительных процессов в зеве. Материал берут из передних отделов носа стерильным ватным тампоном и им же сеют на ЖСА не позднее, чем через 2 ч после взятия. Выделение и идентификацию S.aureus проводят так же, как и при исследовании других материалов.
При определении массивности обсеменения стафилококками слизистой носа тампон с исследуемым слизью вносят в пробирку с 0,5 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия, прополаскивают его в жидкости встряхиванием в течение 10 мин, отжимают о стенки и удаляют. Жидкость многократно перемешивают пипеткой. Отдельно пипеткой наносят 0,1 мл смыва на чашку с ЖСА и тщательно растирают шпателем. Чашки с посевами инкубируют при 37 ° С в течение 48 ч, после чего подсчитывают количество колоний. Если с 50 колонийS.aureus, выросшие, две отнесены к одному и тому же фаготип, правомерно считать, что и все остальные колонии, идентичные по морфологии и пигментом, относятся к S. aureus аналогичного фаготип.
Пример для расчета: после посева 0,1 мл смыва выросло 50 колоний S.aureus. Так, в 0,5 мл будет 50 * 5 = 250 колоний или 2,5 * 10В2.Массивность стафилококкового обсеменения, которое выражается числом 102 микробных клеток, является умеренной, при ней возбудитель в окружающую среду не выделяется. При выделении> 10в3 бактериальных клеток уровень обсемененности определяют как высокий, при котором возбудитель выделяется во внешнюю среду не только при кашле и чихании, а при спокойном дыхании. При таких обстоятельствах нужно обязательно проводить санацию бактерионосителей.
Профилактика заболеваний, вызываемых стафилококками, включает несколько направлений. К ним относятся меры борьбы с источником инфекции, которыми являются люди, страдающие гнойно-воспалительными процессами и бактерионосители, при лечении которых возникают определенные трудности. Особенно важно в комплексе профилактических мероприятий предупреждение стафилококковых заболеваний в лечебных учреждениях. Это прежде всего организация режима работы отделений больниц. Отделения, в которых находятся больные с открытыми гнойно-воспалительными процессами, должны обслуживаться отдельным персоналом. Для предупреждения возникновения стафилококковых заболеваний у лиц, подвергающихся риску травматизма или инфицирования, рекомендуется использовать метод иммунизации сорбированным анатоксином или введение иммуноглобулина.
Особая проблема - профилактика стафилококковых заболеваний у новорожденных. У них еще до настоящего времени стафилококк является одним из главных возбудителей инфекции. В данном случае в профилактику включают иммунизацию рожениц стафилококковым анатоксином, а также проведение количественного и качественного анализа обсемененности молока родильниц с целью более строго подхода к переводу новорожденного на вскармливание кипяченым грудным молоком. В норме в женском молоке содержится три класса иммуноглобулинов - IgG, IgM и IgA, которые разрушаются при кипячении.
Для лечения стафилококковых инфекций применяют антибиотики, выбор которых определяется чувствительностью выделенной культуры к определенным препаратам. Из них наибольшее значение имеют р-лактамные препараты (оксициллин, метициллин и др.). В последние годы появились метициллиноустойчивые штаммы. Их устойчивость в отличие от других штаммов не контролируется R-плазмидами, а объясняется хромосомными мутациями. Для лечения таких больных применяют ванкомицин и фторхинолоны.Кроме того, для лечения стафилококковых инфекций используют цефалоспорины 1 и 2 поколении, реже тетрациклины. При сепсисе наряду с антибиотиками вводят противостафилококковый Ig. Для лечения хронических стафилококковых инфекций (хронический сепсис, фурункулез и др.) используют анатоксин, аутовакцину, стимулирующие синтез антитоксических и антимикробных антител.
Использование: медицинская микробиология . Сущность изобретения: резидентное стафилококковое бактерионосительство определяют путем посева исследуемого материала на питательные среды с. последующим выделением чистых культур, их идентификацией и тестированием . Выделенные чистые культуры тестируют по антииммунглобулиновой активности и по ее величине определяют резидентное стафилококковое бактерионосительство. При значении антииммуноглобулиновой активности 170 мг% и выше определяют резидентное бактерионосительство, обусловленное Staphylococcus aureus а при 280 мг% и выше Staphylococcus epidermidis. 2 табл.
РЕСПУБЛИК (5!)5 С 12 Q 1/04
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4864262/13 (22) 10,09,90 (46) 15.09,92. Бюл. М 34 (71) Оренбургский государственный медицинский институт (72) О.В.Бухарин, А,Г!.Луда, Е,А.Михайлова и А.B,Áîéêo (56) "Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования", под ред. M.О.Биргера. M.: Медицина, 1982, с. 251-253.
Терновская Л,Н. "Стафилококковое носительство", Методические рекомендации, Свердловск, 1983, с. 16, Авторское свидетельство СССР
N 1449587, кл. С 12 Q 1/04, 1987. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗИДЕНТНОГО СТАФИЛОКОККОВОГО БАКТЕРИОНОСИТЕЛ ЬСТВА
Изобретение относится к медицинской микробиологии и может использоваться для выявления резидентного стафилококкового бактерионосительства в хирургических отделениях и больницах, родильных домах, при массовом обследовании населения в экологическом мониторинге.
Стафилококкам принадлежит большая роль в этиологической структуре инфекций.
Основным источником гнойной стафилококковой инфекции являются резидентные бактерио носители, Для профилактики стафилококковой инфекции весьма важным является своевременное выявление бактерионосителей этого типа с последующей санацией. Кроме того, стало известно, что
„„БЦ„„1761809 А1 (57) Использование; медицинская микробиология. Сущность изобретения: резидентное стафилококковое бактерионосительство определяют путем посева исследуемого материала на питательные среды с последующим выделением чистых культур, их идентификацией и тестированием. Выделенные чистые культуры тестируют по антииммунглобулиновой активности и по ее величине определяют резид нтное стафилококковое бактерионосительство, При значении антииммуноглобулиновой активности 170 мг% и выше определяют резидентное бактерионосительс- ьо, обусловленное
Staphylococcus aureus, а при 280 мг% и выше Staphylococcus epider nidis. 2 табл. формирование высокого уровня резидентного стафилокок:ового бактерионосительства происходит в результате техногенного загрязнения окружающей среды, Поэтому этот показатель может служить микробиологическим тестом экологического мониторинга.
Учитывая сказанное, очевидна необходимость эффективного способа диагностики резидентного стафилококкового бактерионосительства.
Известен бактериологический способ выявления носителей стафилококков. Он требует больших затрат питательных сред, лабораторной посуды, рабочего времени (72 ч), что ограничивает его использование в прак1761809 тике. особенно при необходимости единовременного обследования большого количества лиц. Кроме того, этот способ не позволяет дифференцировать "резидентных" (постоянных) и "транзиторных" (временных) бактерионосителей, тогда как именно первый тип представляет наибольшую эпидемиологическую значимость, Чтоб ы выявить "резидентных" бактерионосителей, необходимо не менее, чем трехкратное бактериологческое обследование с временным интервалом. Т.е. способ имеет низкую точность диагностики резидентного стафилококкового бактеоионосительства.
Известен способ выявления стафилококковых бактерианосителей, заключающийся а определении у выделенных стафилококков уровня антилизоцимной активности. B нем по наличию у золотистого стафилококка антилизоцимной активности, а у эпидермального по превышению ее уровня 6 мкг, дифференцируют носительские штаммы от контаминирующей микрофлоры, Способ основан на наличии у резидентных штаммов особого свойства— антилизоцимной активности, то есть способности к ингибиции лизоцима клеток, что приводит к длительному сохранению микроорганизмов в клетках хозяина. Этот способ позволяет проводить однократное обследование при диагностике резидентного стафилококкового бактерионосительства.
Однако известный способ имеет недостаточную точность диагностики резидентского стафилококкового бактерионосительства. Указанный способ не выявляет "резидентные" штаммы золотистого стафилококка, обладающие антилизоцимной активностью в 1-2 мкг, Кроме того, затруднека дифференцировка штаммов на "резидентные" и "транзиторные" эпидермального стафилококка, ошбладающие антилизоцимной активностью 4 и 5 мкг. Следствием является то, что с помощью этого способа часть резидентных бактерионосителей не выявляется, Целью изоберетения является повышение точности способа диагностики резидентного стафилококкового бактерионосительства.
Поставленная цель достигается тем, что в известном способе диагностики, включающем посев исследуемого материала на питател ьные среды с последующим выделением и идентификацией чистых культур, у.выделенных штаммов стафилококков определяют антииммуноглобулиновую активность, ilo ее наличию диагностируют ре5
50 зидентное стафилококковое бактерионосительство. Резидентное бактерионосительство диагностируется в том случае, если штамм золотистого стафилококка обладает антииммуноглобулиновой активностью 170 мг% и выше, а штамм эпидермального стафилококка — 280 мг% и выше, Новыми признаками заявляемого способа являются: определяют антииммуноглобулиновую активность у выделенных штаммов стафилококков; по ее величине у золотистого стафилококка 170 мг% и выше диагностируют резидентное стафилококковое бактерионосительство; по ее величине у эпидермального стафилококка 280 мг% и выше диагностируют резидентное стафилококковое бактерионосительство, Наличие первого нового признака в заявляемом способе позволяет выявить новый, более информативный признак резидентного стафилококкового бактерионосительства, что в итоге позволяет повысить точность диагностики данного бактерионосительства в диапазоне значений определяющего показателя, расширяя чувствительность способа на нижней границе показателя.
Второй новый признак позволяет снизить порог чувствительности диагностики бактерионосительства до 170 мг%, в результате чего повышается точность диагностики бактерионосительства при наличии штамма золотистого стафилококка, и, практически, выявляются "резидентные" бактерионосители среди обследуемых лиц.
Третий новый признак позволяет снизить порог чувствительности диагностики бактерионосительства до 280 мг%, что позволяет а итоге повысить точность диагностики бактерионосительства при наличии штамма эпидермального стафи loKQKKB и, практически, выявить всех бактерионосителей данного класса из обследуемых лиц.
Эти признаки в известных технических решениях не обнаружены.
Обнаружена статистически достоверная зависимость между способностью стафилококков длительно персистировать в макроорганизме и его свойством деградировать иммуноглобулины в биологических жидкостях, Применение заявляемых признаков предполагает определение антииммуноглобулиновой активности стафилококков, являющейся тестом персистирующих характеристик штамма и позволяющей диф1761809
20 заявляемого способа
55 ференцировать "резидентное" и "транзиторное" бактерионосительство.
Т.о.заявляемое техническое решение соответствует критерию "существенные отличия, а совокупность его известных и отличительных признаков обеспечивает получение нового положительного эффекта — повышение точности способа. Предложение данного способа стало возможным после того, как авторами была выявлена с помощью экспериментально разработанной методики антииммуноглобулиновая активность стафилококков, т.е. их способность нейтрализовать иммуноглобулины различных классов в биологических жидкостях. Высказано предположение о возможности роли этого свойства в персистирующей способности микроорганизма, где антииммуноглобулиновая активность представляет фактор, целенаправленно нейтрализующий защитные механизмы макроорганизма. Это послужило основанием для определения антииммуноглобулиновой активности наряду с другими характеристиками, в частности, антилизоцимной активностью штаммов стафилококков, выделенных у 560 обследованных лиц с целью выявления бактерионосителей. Анализ полученных данных выявил прямую зависимость между величинами антилизоцимной и антииммуноглобулиновой G u
М активностями. Причем, наиболее четко такая зависимость прослеживалась в отношении антииммуноглобулиновой G активности микроба (табл, 1).
Выяснилось, что штаммы стафилококков, обладающие высокой антилизоцимной активностью, а, следовательно, и персистирующими свойствами, обладают и высокой антииммуноглобулиновой активностью. Но при этом высокая антииммуноглобулиновая активность обнаруживалась и в части случаев, когда у штаммов эпидермального стафилококка антилизоцимная активность была
4 мкг или 5 мкг, а у золотистого стафилококка — О мкг или 2 мкг. Было решено провести трехкратное бактериологическое обследование группы лиц, у которых со слизистой носа выделены эпидермальные стафилококки с антилизоцимной активностью 4,5,6 мкг и золотистые стафилококки с антилизоцимной активностью О, 2, 3 мкг.
Трехкратное обследование показало, что штаммы резидентных бактерионосителей могут обладать различной антилизоцимной активностью — 7, 6, 5, реже 4 мкг— эпидермальный стафилококк, 3, 2, О мкг— золотистый стафилококк (табл. 2), То есть
LUTBMMbl эпидермального стафилококка, имеющие 4 и 5 кг, а золотистого — О; 2 мкг не могут быть однозначно определены как
TPG H3VITOP Hble.
Антииммуноглобулиновая активность в этом отношении оказалась более информативным показателем, так как выделенные у бактерионосителей резидентного типа штаммы эподермального стафилококка обладали антииммуноглобулиновой активностью от 289,24 ч 5,7 мг% до 352,41 +. 11,4 мг%, золотистого — от 178,28++ 6,4 до
190,31,7,5 мг%. "Транзиторные" штаммы эпидермального стафилококка имели антииммуноглобулиновую активность 112,86 ч+ 6,8-198,31 4,7 мг%, а "транзиторные" штаммы золотистого стафилококка98,64 + 9,1-148,41 + 5,8 мг%.
Сделан вывод, что антииммуноглобулиновая активность является более информативным показателем персистирующих свойств микроба, нежели антилизоцимная, и может использоваться в качестве диагностического теста резидентного бактерионосительства. Это было положено в основу
Способ осуществляется следующим образом. У обследованных со слизистой носа при посеве на питательные среды выделяют чистые культуры золотистых эпидермальных стафилококков бактериологическим способом с определением общепринятых свойств — плазмокоагулазы, гемолизина, лецитовителазы и др. Вместе с тем, у этих штаммов определяют антииммуноглобулиновую активность, Для этого берут суточную взвесь стафилококков, стандартизированную на ФЗК-М (Д-0,50, кювета ¹ 2, зеленый светофльтр). Именно такая плотность взвеси была экспериментально подобрана как выявляющая максимальное проявление антииммуноглобулиновой активности микроба. 0,1 мг этой взвеси вносят в. пробирку, куда добавляют 0,1 мл сыворотки крови с известным количеством Ig, определенных по методике Манчини. Пробирку со смесью ставят в термостат на инкубацию при 37 С в течение 30 минут. По истечение времени смесь центрифугируют при 6000 об/мин в течение 10 минут и супернатант используют для повторного определения уровня иммуноглобулинов с учетом предварительного разведения в 2 раза. Затем высчитывают разницу между уровнями иммуноглобулинов в контрольной и опытных пробах сыворотки и по ней судят об антииммуноглобулиновой активности микроба. Если уровень антииммуноглобулиновой активности золотистого стафилококка оказывается 170 мг% и выше, а эпидермального стафилококка — 280 MI% и выше, то
1761809 считают эти штаммы "резидентными" и диагностируют резидентное стафилококковое бактерионосительство, Пример 1. При обследовании на стафилоко кковое бактерионосительство у больного П.А,Д, был выделен эпидермальный стафилококк, обладающий АЛА — 5 мкг, А IgG — 283,4 мг/. Было предположено резидентное бактерионосительство. Многократные повторные посевы идентичного стафилококка подтвердили резидентный характер бактерионосительства. При атом титр бактериальной обсемененности возрастал.
Пример 2. У больного М,С,К. выделенный эпидермальный стафилококк имел следующие характеристики АЛА — 5 мкг, А IgG — 156,2 Mr о, Повторные посевы не дали аналогичного результата.
Пример 3. У больного Д.И,И, выделен золотистый стафилококк — АЛА — 0 мкг, А lgG — 171,2 м г, Предположение резидентного бактерионосител ьства подтвердилось трехкратньчм высевом идентичных стафилококков (фаготип 3 С). Титр бактеоиальной обсемененности возрастал до 10 -10 КОЕ/тампон, Пример 4. У больного К,Н,О. выделенный штамм золотистого стафилококка обладал АЛА-2 мкг, А IgG — 121,3мг . При повторных высевах идентичные стафилококки не выявлялись, отрицая транзиторное бактерионосительство, как и было предполо>кено по тесту А IgG.
Сравнивая точность диагностики заявляемого способа и прототипа примем за
100/ количество резидентных бактерионосителей, выявленных трехкратным бактериологическим способом при обследовании
560 человек. . Трехкратное бактериологическое обследование выявило 198 резидентных бактерионосителей — 100 /,, Способом прототипа удалось выявить 124 бактерионосителя — 63,2, заявляемым способом — 195 чел, или 98,4/, что на 35,2 больше нежели способом прототипа.
Следовательно заявляемый способ позволяет повысить точность способа диагностики резидентного бактерионосительства на 35,2, что позволяет проводить своевре5 менную и целенаправленную санацию бактерионосителей. Кроме того, заявляемый способ обладает дополнительными преимуществами — он более прост, чем способ прототипа. Упрощение проявляется в том, что
10 антииммуноглобулиновую активность различных уровней можно регистрировать на одной чашке Петри, т.е. одновременно исследовать до 45 штаммов с минимальными затратами материала и рабочей силы. Опре15 деление же антилизоцимной активности по способу прототипа гораздо более громоздко, так как предполагает использование нескольких чашей Петри с питательным агаром, включающим различную концентра20 цию лизоцима с целью выявления различных уровней антилизоцимной активности исследуемых штаммов.
Таким образом, использование способа позволит повысить точность диагностики
25 резидентного стафилококкового бактерионосительства, а, следовательно, и достичь положительного аффекта.
30 1. Способ определения резидентного стафилококкового бактерионосительства путем посева исследуемого материала на питательные среды с последующим выделением чистых культур, их идентификацией и
35 тестированием, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, выделенные чистые культуры тестируют по антииммуноглобулиновой активности и по ее величине определяют резидентное ста40 филококковое бактерионосительство, 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что при значении антииммуноглобулиновой активности 170 мг и выше определяют резидентное бактерионосительство, 45 обусловленное Staphylococcus aureus, а при
280 мг /, и выше — Staphylococcus
Техред М.Моргентал Корректор М.Максимишинец
Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101
Заказ 3236 Тираж Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
Читайте также:
Пожалуйста, не занимайтесь самолечением!При симпотмах заболевания - обратитесь к врачу.
