Отбор сыворотки для исследования на вич

Приложение 1
к приказу МЗ РТ
от 22 декабря 1992 г. N 1035

Рекомендации
для лечебно-профилактических учреждений по сбору образцов сыворотки крови для исследования на ВИЧ и HBs-Ag, доставки их в лаборатории диагностики СПИД и оформлению сопроводительного документа

1. Сбор образцов сыворотки крови

Лаборатории по диагностике СПИД при постановке иммуноферментных анализов (ИФА) и иммунолота (ИБ) работают только сывортками# крови.

Кровь от подлежащего контингента отбирается в процедурном кабинета ЛПУ в количестве 3-5 мл в чистую стерильную посуду отбор сыворотки проводится после предварительного отстаивания забранных образцов крови в течение 1,5-2 часов при комнатной температуре или в течение 1 часа при 37° в термостате. Снятие сыворотки со сгустка позже 3 часов после взятия крови недопустимо. Особенно тщательно нужно подходить к исследованию донорской крови. Длительное хранение образцов крови вне холодильника практикуемое при выездах бригад для забора крови, является абсолютно недопустимо. Необходимо организовать отбор сыворотки со сгустка на пункте сбора крови.

Отбор сыворотки проводится в отдельной комнате или на специально отведенном столе отдельным для каждой порции крови наконечником с помощью груши. Недопустимым является отбор разных образцов сыворотки со сгустка крови одной пипеткой. Для лучшего отделения сыворотки рекомендуется обведение сформировавшегося сгустка крови индивидуальной стеклянной палочкой или пипеткой. Необходимо избегать попадания эритроцитов в сыворотку. Нельзя отбирать сыворотку переливая ее из пузырька в пузырек. Это приводит к бактериальному загрязнению исследуемого материала, увеличивает риск аварии. Недопустима доставка в лабораторию СПИД гемолизированных и хилезных сывороток. Это увеличивает риск ложноположительных или же ложноотрицательных результатов.

Сыворотка должна быть доставлена в лабораторию в течение 5 (пяти) дней от даты забора крови при условии хранения сыворотки при температуре 4-8°С. Пробирки и флаконы с кровью или сывороткой должны быть герметично закрыты резиновыми пробками.

Медицинские работники работают в полном наборе спецодежды: хирургические халаты, шапочки, кожаная обувь, резиновые перчатки, одевается маска и очки, так как при заборе крови, отсасывании сыворотки или открывании пробки с флакона возможно разливание или разбрызгивание крови или сыворотки в виде невидимых глазу капель или аэрозоля.

Обработка оставшихся сгустков крови после отсасывания сыворотки предусматривает их обеззараживание сухой хлорной известью в соотношении 1:5. Для того, чтобы это выполнить, необходимо вытряхнуть сгустки из пробирок, а это влечет к разбрызгиванию потенциально инфицированного материала, поэтому при выполнении этой процедуры необходимо одевать маски или респираторы, защитные очки, резиновые фартучки и перчатки.

Лучше пробирки со сгустком крови замочить в 5% растворе хлорамина в течение 2 (двух) часов. Можно использовать 10% раствор хлорной извести.

Пробирки или пенициллиновые пузырьки, резиновые пробки, предназначенные для повторного использования после дезинфекции (6% перекись водорода, 3% раствор хлорамина, 70 градусный спирт) промываются проточной водой, затем дистиллированной и стерилизуются в суховоздушном стерилизаторе согласно ОСТу 42-21-2-85.

Ведется журнал учета работы суховоздушного стерилизатора (дата; режим стерилизации; наименование и количество стерилизуемого материала; упаковка материала; время стерилизации: начало, окончание, выемка; контроль стерилизации; подпись ответственного лица). В каждую партию посуды вкладываются тесты, подтверждающие наличие нужной температуры.

Если при дезинфекции посуды применяются хлоросодержащие препараты, то она должна подвергаться дополнительному кипячению для разрушения дезинфектанта.

На случай аварии должен храниться запас дезинфицирующего средства в достаточном объеме.

Необходима медицинская аптечка, в которую входят 70 градусный спирт, йод, навески марганцевокислого калия и соответствующее количество дистиллированной воды для разведения 1:10000, перевязочный материал.

2. Доставка материала в лабораторию

Образцы сыворотки крови должны быть доставлены в лабораторию диагностики СПИД в пробирках или пенициллиновых флаконах, герметично закрытых резиновыми или ватно-марлевыми, обернутыми полиэтиленовой пленкой, пробками. Пробирки или флаконы устанавливаются в штативы, которые помещают для транспортировки в плотно закрывающуюся крышками металлическую тару (контейнер, стерилизационная коробка и др.), которая не портится при дезинфекции. Оптимальной считается доставка тары с исследуемым материалом в сумках-холодильниках.

3. Сопроводительный документ

Ответственное лицо лечпрофучреждения составляет общее "Направление на исследование крови на наличие антител к ВИЧ" в 3-х экземплярах под копирку. Направление должно иметь все необходимые данные на каждого обследуемого лица по следующим графам:

- порядковый номер образцов сыворотки крови (заполняется лечпрофучреждением);

- номер регистрации (заполняется лабораторией диагностики СПИД);

- фамилия, имя, отчество (полностью);

- возраст (для детей до одного года проставляется дата рождения);

- место работы, учебы, детское дошкольное учреждение; если иностранец, то указывать гражданство (страна);

- диагноз (обязательно) и код;

- дата взятия крови;

- результат исследования (заполняется лабораторией диагностики СПИД индивидуально на каждое обследуемое лицо).

В обязательном порядке на бланке направления должны быть проставлены: печать ЛПУ, его адрес, телефон; а также должность, фамилия (разборчиво), подпись лица, направившего материал и дата отправки материала на исследование.

Все 3 (три) экземпляра направления вместе с образцами сывороток крови направляются в лабораторию диагностики СПИД. После завершения анализов один экземпляр направления оставляется в лаборатории и два - возвращаются в лечпрофучреждение. В лечпрофучреждении - один экземпляр списка лиц, обследованных на ВИЧ и HBs-Ag хранится в общей папке у ответственного лица за эту работу, а второй экземпляр - разрезается и подшивается в медицинский документ обследуемого лица индивидуально.

При невыполнении данных требований, лаборатория должна отказать в приеме сывороток на исследование.

При получении из лаборатории результата: "Повторить забор крови на ВИЧ", лечпрофучреждением проводится повторный забор крови у пациента в кратчайшие сроки и сыворотка в количестве не менее 3 мл отправляется в лабораторию диагностики СПИД. На пробирке с сывороткой должна быть указана фамилия, имя, отчество пациента и пометка "Повтор". Соответствующее направление оформляется на отдельном бланке в 3-х экземплярах под копирку с пометкой "Повтор" и должно иметь все необходимые данные согласно вышеизложенным требованиям по его заполнению.

Недопустимым является включение сведений о повторно обследуемом лице в общий список очередной партии материала. Если получение повторной сыворотки является невозможным (по объективным причинам: выезд, категорический отказ и т.д.), информация об этом должна быть доставлена в лабораторию диагностики СПИД в кратчайшие сроки на бланке с пометкой "Повтор".

>
Рекомендации по соблюдению противоэпидемического режима в лабораториях диагностики ВИЧ-инфекции для врачей-лаборантов и эпидемиологов.

Содержание
Приказ Министерства здравоохранения РТ от 22 декабря 1992 г. N 1035 "Об улучшении организации и качества проведения скрининговых.

Откройте актуальную версию документа прямо сейчас или получите полный доступ к системе ГАРАНТ на 3 дня бесплатно!

Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.

ПРИЛОЖЕНИЕ № 1
к приказу Минздравмедпрома РФ от 16.08.1994 г. № 170

Методические указания по организации лечебно-диагностической помощи и диспансерного наблюдения за больными ВИЧ-инфекцией и СПИДом

Основным методом лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции является обнаружение антител к вирусу с помощью иммуноферментного анализа.

Антитела к ВИЧ появляются у 90-95% зараженных в течение 3-х месяцев после заражения, у 5-9% — через 6 месяцев от момента заражения и у 0,5-1% — в более поздние сроки. Наиболее ранний срок обнаружения антител — 2 недели от момента заражения. В терминальной фазе СПИД количество антител может значительно снижаться, вплоть до полного их исчезновения.

Серологическая диагностика инфекции ВИЧ на первом этапе строится на выявлении суммарного спектра антител против антигенов ВИЧ с помощью твердофазного иммуноферментного анализа. На втором этапе методом иммунного блоттинга (Western blot) проводится определение антител к отдельным белкам вируса.

Забор крови производится из локтевой вены в чистую сухую пробирку в количестве 3-5 мл. У новорожденных можно брать пуповинную кровь. Полученный материал не рекомендуется хранить более 12 часов при комнатной температуре и более 1 суток в холодильнике при +4-8° С. Наступающий гемолиз может повлиять на результаты анализа. Лучше всего сразу после взятия крови отобрать из нее сыворотку. Сыворотка отделяется центрифугированием или обводкой крови по стенке пробирки пастеровской пипеткой, либо стеклянной палочкой. Отделенная сыворотка переносится в чистую (лучше стерильную) пробирку, флакон или пластиковый контейнер, и в таком виде она может хранится до 7 дней при температуре +4-8° С.

При работе следует соблюдать правила техники безопасности, приведенные в "Инструкции по противоэпидемическому режиму в лабораториях диагностики СПИД" № 42-28/38-90 от 5 июля 1990 года.

Для проведения лабораторных исследований с помощью ферментных методов необходимо иметь следующее оборудование:

спектрофотометр;
отмыватель планшетов;
термостат;
автоматические пипетки;
наконечники к автоматическим пипеткам;
центрифуги;
холодильники;
тест-системы.

В настоящее время в России рекомендовано к применению достаточное количество тест-систем для выявления антител к ВИЧ. Все они основаны на общем принципе иммуноферментного анализа.

Нагрузка на бригаду иммуноферментного анализа должна составлять до 400 исследований в смену, при условии оснащения современным автоматическим оборудованием и до 180-200 исследований, оснащенных отечественным рутинным оборудованием.

Принцип иммуноферментного анализа основан на выявлении комплекса антиген-антитело с помощью фермента (пероксидаза, щелочная фосфатаза и др.) по изменению окраски специфического субстрата. Основной компонент твердофазных иммуноферментных тест-систем — полистироловый планшет с лунками или полистироловые шарики, на поверхности которых сорбирован антиген: вирусный лизат, рекомбинантные белки или синтетические антигенные детерминанты. Из всех модификаций твердофазного иммуноферментного анализа для диагностики инфекции, вызываемой ВИЧ, наиболее широко применяются непрямой и конкурентный варианты.

Предварительно приготовленный согласно инструкции, прилагаемой к набору, исследуемый материал (сыворотка, плазма) вносится в лунку планшета. Если этого требует методика, планшет предварительно отмывается. Несколько лунок планшета заполняются контрольными сыворотками, содержащими и не содержащими антитела к ВИЧ. При работе с контрольными сыворотками необходимо строго соблюдать инструкции по применению диагностической тест-системы, т.к. интерпретация результатов зависит от значений оптической плотности контрольных сывороток. Планшет с внесенными контрольными сыворотками и исследуемым материалом инкубируется при условиях, указанных в инструкции, прилагаемой к диагностическому набору.

Если специфические антитела присутствуют в сыворотке, они образуют комплекс с антигеном, сорбированным на поверхности лунок планшета. Несвязавшиеся с антигеном антитела удаляются при отмывке планшета.

Затем во все лунки планшета вносят конъюгат-антитела против иммуноглобулинов человека, меченые ферментом (пероксидаза, щелочная фосфатаза и др.). При последующей инкубации происходит образование комплекса антиген-антитело-конъюгат. Несвязавшийся конъюгат удаляется во время отмывки планшета. Наиболее широко применяемым индикаторным ферментом для иммуноферментного анализа является пероксидаза хрена. Субстратом для нее является перекись водорода. Эта реакция протекает без видимых проявлений. Изменение окраски раствора происходит при окислении красителей (ортофенилендиамина или др.), который входит в состав субстратного раствора.

Краситель из восстановленной формы переходит в окисленную окрашенную форму. Таким образом, происходит окрашивание только тех лунок, в которых присутствует комплекс антиген-антитело-конъюгат. Иногда окрашивание может быть результатом неспецифического связывания иммуноглобулинов с антигенами ВИЧ. Учет реакции проводят на спектрофотометре (ридере) при длине волны, указанной в инструкции, прилагаемой к диагностическому набору. Длина волны зависит от красителя, используемого в тест-системе.

При конкурентном методе иммуноферментного анализа в лунки планшета с нанесенным антигеном одновременно вносятся исследуемые сыворотки и конъюгат. Конъюгат в данном случае — это антитела против ВИЧ, меченые ферментом. При последующей инкубации антитела, содержащиеся в сыворотке, и конъюгат вступают в конкурентное взаимодействие с иммобилизированными на твердом носителе антигеном. Если сыворотка содержит антитела, они взаимодействуют с антигеном, блокируя образование комплекса антиген-конъюгат. При отсутствии антител в сыворотке происходит образование комплекса антиген-конъюгат. Оставшиеся несвязанные компоненты после инкубации отмываются и в систему добавляется соответствующий субстрат. При наличии антител в сыворотке цветная реакция не развивается.

№ п/п	Типы дефекта	Видимые проявления	Возможные причины дефекта
1.	Высокий фон	Значение оптической плотности в лунках с отрицательным результатом превышает 0,2 ед.	неправильно приготовлено разведение сывороток; неправильно проводилась отмывка планшетов; неправильно приготовлен конъюгат; неправильно приготовлен субстрат; краситель плохого качества (раствор красителя имеет жёлтый цвет), заводской брак.
2а.	Слабый сигнал	Значение оптической плотности положительного контроля ниже минимального значения оптической плотности, указанного в инструкции, значение оптической плотности положительных сывороток не превышает 0,4 ед.	несоблюдение правил хранения тест-систем, что приводит к нарушению связи антигена с носителем; неправильное разведение контрольных сывороток; неправильное разведение конъюгата; неправильное разведение и хранение перекиси водорода; заводской брак при изготовлении тест-системы.
2б.	Слабый сигнал положительного контроля	Значение оптической плотности положительного контроля не превышает 0,4 ед.	неправильное разведение и хранение разведённых контрольных сывороток; заводской брак при изготовлении контрольной сыворотки.
3.	Отсутствие сигнала	В лунках с позитивным контролем не произошло окрашивание	не внесён конъюгат; не правильно приготовлен субстрат (не добавлена перекись водорода) не внесён антиген в лунки при изготовлении тест-системы.

При постановке иммуноферментного анализа в случае получения положительного результата анализ проводится еще 2 раза (с той же сывороткой). При получении хотя бы еще одного положительного результата сыворотка направляется в референс-лабораторию.

В настоящее время для подтверждения специфичности первичного положительного результата чаще всего используется метод иммунного блоттинга — Western blot. Принцип метода заключается в выявлении антител к определенным белкам вируса, иммобилизованным на нитроцеллюлозную мембрану. В организме человека образуются антитела к ряду компонентов вируса, данные об этих антигенах приводятся в таблице.

Группа белков	ВИЧ-1	ВИЧ-2
Белки оболочки вируса (env)	гп 160 кд, 120 кд, 41 кд	гп 140 кд, 105 кд, 36 кд
Белки сердцевины вируса (gag)	п 55 кд, 24 кд, 17 кд	п 56 кд, 26 кд, 18 кд
Ферменты вируса (pol)	п 66 кд, 51 кд, 31 кд	п 68 кд
Примечание: Молекулярный вес белков выражается в килодальтонах - кд, гп - гликопротеины, п - протеины.

Подготовка нитроцеллюлозных мембран для тест-системы производится следующим образом. На первом этапе производят разделение белков вируса иммунодефицита человека по молекулярному весу с помощью электрофореза в полиакриламидном геле. Белки мигрируют в слоях геля при наложении электрического потенциала: белки с низким молекулярным весом проходят через поры в полиакриламидном геле легче, чем белки с высоким молекулярным весом и быстрее достигают конца геля. В результате этого происходит разделение белков на отдельные полосы по молекулярному весу. Затем осуществляется электрофоретический перенос из полиакриламидного геля на поверхность нитроцеллюлозной мембраны. После этого мембрана обрабатывается блокирующим раствором во избежание неспецифического связывания иммуноглобулинов сывороток крови, затем отмывается, высушивается и разрезается на отдельные полоски, которые вкладываются в набор. Перенесенные таким образом белки выявляются на нитроцеллюлозной реплике (блоке) с помощью непрямого анализа, а именно: сыворотка или плазма инкубируются с блотом; если исследуемый материал содержит антитела к белкам ВИЧ, они связываются с антигеном, перенесенным на нитроцеллюлозную мембрану, после отмывки полоски блота инкубируются с конъюгатом; при образовании комплекса антиген-антитело, конъюгат присоединяется к нему, после отмывки от конъюгата и инкубации с субстратом происходит окрашивание тех участков нитроцеллюлозы, где произошло образование комплекса антиген-антитело-конъюгат. Полученный результат сравнивается с результатами тестирования положительной и отрицательной контрольных сывороток.

Результаты, полученные в иммунном блоттинге интерпретируются как положительные, сомнительные и отрицательные.

Название центров	Положительный результат	Сомнительный результат	Отрицательный результат
1. ВОЗ	Сочетание полос к гп 41 и гп 120, или гп 41 и гп 160, или гп 120 и гп 160	Полосы к другим антигенам ВИЧ	Отсутствие полос к какому-либо из антигенов ВИЧ
2. Российский центр по профилактике и борьбе со СПИД	Полосы хотя бы к одному из белков гп 41, гп 120, гп 160 в сочетании с другими полосами или без них	Полосы к другим антигенам ВИЧ	Отсутствие полос к какому-либо из антигенов ВИЧ
Примечание: Рекомендации Российского центра учитывают опыт работы с сывороткам детей из внутрибольничных очагов, у которых часто определялись антитела только к одному из белков оболочки вируса. Своевременная постановка диагноза у таких детей позволила быстро начать противоэпидемические мероприятия и специфическую терапию.

Вопросы стандартизации и интерпретации результатов иммунного блоттинга были рассмотрены на совещании экспертов ВОЗ в Женеве 22-23 апреля 1990 г.

Согласно этим рекомендациям при наличии реакции только из белков оболочки (гп 160, гп 120, гп 41) в сочетании или без реакции с другими белками результат считается сомнительным и рекомендуется повторное исследование, с использованием набора другой серии или другой фирмы. Если и после этого результат остается сомнительным, рекомендуется наблюдение в течение 6 месяцев (через 3 месяца). Наличие положительной реакции с п 24 может указывать на период сероконверсии. В этом случае рекомендуется, в зависимости от клинических и эпидемиологических данных, повторить исследование с образцом сыворотки, взятой через 2 недели.

Положительные реакции с белками gag и pol без наличия реакции с белками env могут отражать стадию ранней сероконверсии, либо указывать на ВИЧ-2 инфекцию или на неспецифическую реакцию. Лица с такими результатами после тестирования на ВИЧ-2 должны повторно исследоваться через 3 месяца (в течение 6 месяцев). Если через 6 месяцев вновь будут получены неопределенные результаты (отсутствие реакции с белками env ВИЧ-1 и ВИЧ-2), а также не будут выявлены факторы риска и клинические симптомы иммунодефицита, можно сделать вывод о неспецифической реакции. Наличие неспецифической реакции не дает основания для постановки диагноза ВИЧ-инфекции, но доноров, имеющих такой результат, от донорства необходимо отстранить.

Результаты серологических исследований используются эпидемиологами и практическими врачами для ранней диагностики ВИЧ-инфекции, своевременного выявления источника инфекции, скорейшего проведения противоэпидемических мероприятий и оказания помощи зараженным лицам. На основании только лабораторного анализа диагноз не может быть выставлен . Для вынесения диагностического заключения необходимо учитывать данные эпидемиологического анамнеза, иммунологических тестов и результатов клинического обследования.

1. Методические указания по организации лечебно-диагностической помощи и диспансерного наблюдения за больными ВИЧ-инфекцией и СПИДом.

Взятие, доставку и оформление материалов для проведения лабораторных исследований методом ИФА на ВИЧ-инфекцию и СПИД - индикаторные заболевания, для проведения лабораторных исследований методом ПЦР на ВИЧ - инфекцию, вирусные гепатиты В и С, а также для иммунологических исследований в КДЛ ГБУЗ РЦПБ СПИД и ИЗ производить строго в соответствии с правилами (приложение 1, 2, 3).

Наиболее частыми нарушениями указанных правил являются следующие:

1) при оформлении сопроводительной документации не указывается наименование диагностической тест-системы, ее серия, срок годности

2) не полностью указываются паспортные данные обследуемых, а также дата и место взятия материала

3) зачастую в лабораторию ГБУЗ РЦПБ СПИД и ИЗ доставляется материал, уже непригодный для исследования: сыворотки, хранившиеся дольше установленного срока хранения (для разных методов исследования сроки хранения составляют от 3 до 48 часов); проросшие, гемолизированные сыворотки, в недостаточном для исследования количестве (в зависимости от метода минимально необходимый объем материала составляет от 2 до 5 мл);

4) номера, проставленные на флаконах, не соответствуют указанным в направлении; количество проб крови не соответствует количеству, указанному в направлении;

5) неправильно производится взятие материала, в пробах крови, доставляемых для исследований методом ПЦР и для иммунологические исследований, обнаруживаются сгустки,

6) при заборе материала не всегда медицинский персонал ЛПУ обращает внимание на сроки годности пробирок.

Правила взятия и доставки крови для проведения лабораторных исследований методом ИФА на ВИЧ-инфекцию и СПИД-индикаторные заболевания.

Взятие крови производится из локтевой вены в чистую сухую пробирку в количестве 3-5 мл. У новорожденных можно брать пуповинную кровь с указанием об этом в направлении. Полученный материал не рекомендуется хранить более 12 часов при комнатной температуре и более 1 суток в холодильнике при +4-8 0С. Наступающий гемолиз может повлиять на результаты анализа. В случае невозможности доставки материала в течение суток следует сразу после взятия крови отобрать из нее сыворотку. Сыворотка отделяется центрифугированием. Отделенная сыворотка переносится в чистую (лучше стерильную) пробирку, флакон или пластиковый контейнер, и в таком виде она может храниться до 7 дней при температуре +4-8 0С. На пробирке следует указать порядковый номер, фамилию и инициалы пациента, в строгом соответствии с направлением. Для транспортировки в КДЛ диагностики ВИЧ штативы с пробирками помещают в термоконтейнер, легко подвергающийся дезинфекции. Полученный материал в КДЛ диагностики ВИЧ доставляет медицинский персонал, прошедший специальный инструктаж в установленном порядке.

Утв. МЗ СССР от 05.09.1988 г. №690

Направление №__________________

на исследование образца крови в ИФА на ВИЧ-инфекцию

В_________________________________________________________
(наименование учреждения)

Должность лица, направляющего материал___________________________________

Взятие материала для исследования производить только при предъявлении пациентами паспорта или иного документа, удостоверяющего его личность (кроме анонимного обследования).

Коды контингентов

Наименование кода

код

Доноры (крови, биологических жидкостей, органов и тканей)

Медицинский персонал, работающий с ВИЧ - инфицированными лицами и инфицированным материалом

Гомо- и бисексуалисты

Больные заболеваниями, передающимися половым путем

Лица, находящиеся в местах лишения свободы

Обследованные по клиническим показаниям

Беременные (доноры плацентарной и абортной крови)

Обследованные при эпидемиологическом расследовании

Для лабораторий диагностики ВИЧ-инфекции в обменном журнале и направлении обязательно дополнительно указываются результаты исследования (ОП сыворотки, ОП критическое), а также дата постановки, название, серия, срок годности используемой тест-системы.

Правила взятия, хранения и доставки материала для проведения исследований методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

В направлении должны быть четко указаны: учреждение, направившее материал, Ф.И.О. (полностью), год рождения, код контингента, домашний адрес, дата, точное время и место взятия материала, фамилия и подпись ответственного лица с указанием номера контактного телефона.

Правила взятия и доставки материала для проведения иммунологических исследований.

Материал должен быть доставлен в лабораторию сразу после взятия. Недопустимо замораживание биологического материала. Флаконы должны быть четко промаркированы с указанием фамилии пациента, даты и времени взятия. Маркировка флаконов должна строго соответствовать данным, указанным в направлении.

В направлении должны быть четко указаны: учреждение, направившее материал, Ф.И.О. (полностью), год рождения, код контингента, домашний адрес, дата, время и место взятия материала, фамилия и подпись ответственного лица с указанием номера контактного телефона.

Диагностика ВИЧ инфекции необходима для назначения эффективного лечения. Чтобы диагностировать СПИД, проводится стандартная процедура обследования пациента. Она состоит из 2 этапов:

сдача скрининга;
иммунный блоттинг.

Для постановки диагноза дополнительно назначают ПЦР, экспресс-тестирование.

Проведение ИФА

Начальная диагностика СПИДа основана на применении лабораторных белков ВИЧ, которые улавливают специфические антитела. После их контакта с ферментами тест-системы изменяется цвет индикатора. Затем измененная цветовая гамма обрабатывается с помощью специальной аппаратуры, которая определяет результат тестирования.

Подобная лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции показывает результат через 21 день после инфицирования. С помощью ИФА нельзя определить наличие вируса. Данный метод диагностики способствует выявлению выработки антител к вирусу. Подобный процесс может наблюдаться через 2-6 недель после заражения.

Читайте также: Х ламидиоз — фото
Подробнее о бактерии chlamydia trachomatis
Признаки хламидиоза — читайте здесь.

Специалисты различают 4 поколения ИФА-систем с разной чувствительностью. Медики чаще применяют тесты 3 и 4 поколения. Эти системы созданы на основе рекомбинантных белков либо пептидов синтетического происхождения, которые обладают значительной точностью и специфичностью. ИФА применяется для выявления, мониторинга распространения вируса, что обеспечивает безопасность при проверке донорской крови. Точность таких систем колеблется в пределах 93-99%. Большей чувствительностью обладают тесты, выпущенные в Западной Европе. Чтобы выполнить диагностику, лаборант производит забор венозной крови (5 мл). За 8 часов перед исследованием рекомендуется отказаться от принятия пищи. Исследование чаще проводится утром.

Для получения результатов теста потребуется 10 дней. Если результат отрицательный, то пациент не инфицирован. В таком случае лечение не назначается. Ложноотрицательный результат выявляется:

до 3 недель после инфицирования;
на последней стадии СПИДа при низкой иммунной системе;
при неправильной подготовке крови.

Если результат положительный, тогда пациент инфицирован. В таком случае проводят ИБ. Ложноположительный результат указывает на наличие сопутствующих заболеваний и неправильно проведенную подготовку крови. Если тестирование показано беременным, то в собранном материале врач может выявить неспецифические антитела, выработка которых не связана с вирусом. Собранный материал исследуется в референсе либо арбитражной лаборатории. Если результат повторного тестирования отрицательный, тогда первый результат — ошибочный. В таком случае ИБ не проводится.

Проведение иммунного блоттинга

Лечение СПИДа назначается при получении положительного результата иммунного блоттинга. Этот метод диагностики проводится с помощью нитроцеллюлозной полоски, на которую наносятся вирусные белки. Для ИБ используют венозную кровь, которая затем подвергается обработке. Белки, находящиеся в сыворотке, разделяются на группы с учетом их заряда и молекулярной массы. Для проведения такого процесса используется специальная аппаратура.

При наличии в исследуемом материале антител к вирусу, на полоске проявляются соответствующие линии. Положительное ИБ указывает на ВИЧ-инфицирование пациента. Сомнительный результат выявляется на начальных этапах заражения, при туберкулезе и онкологии, у беременных. В таких случаях рекомендуется повторное проведение ИБ.

Неопределенный результат ИБ указывает на наличие в иммуноблоте одного и более белков к вирусу. Подобная картина наблюдается при недавнем заражении, когда в крови находится незначительное количество антител к инфекции. В таком случае ИБ будет положительным через некоторое время. Неопределенный результат данного исследования может быть связан с отсутствием ВИЧ-инфекции при гепатитах, хронических обменных заболеваниях, в период беременности. В таком случае ИБ станет отрицательным или специалисты выявят у пациента причину неопределенного результата.

ПЦР исследование

Защитная система поражается на фоне внедрения вируса в человеческий организм. Для инкубационного периода характерен срок в 3 месяца. Поэтому после полового контакта с ВИЧ-инфицированным партнером рекомендуется пройти ПЦР-диагностику. Она позволит определить РНК вируса. Период, в течение которого рекомендуется пройти подобное исследование, составляет 8-24 месяца.

Для окончательного диагноза показана регулярная сдача крови на ВИЧ (1 раз в 3 месяца). За счет высокой чувствительности данное обследование позволяет выявить вирус через 10 дней после инфицирования. Ложноположительный результат при ПЦР можно получить и при наличии в организме пациента другой инфекции. ПЦР исследование считается дорогостоящей процедурой, так как требует наличия специального оборудования.

ПЦР назначается для выявления вируса у следующих лиц:

новорожденный, родившийся от ВИЧ-инфицированного матери;
пациенты с сомнительным ИБ.

Также данная методика показана для контроля концентрации вируса в крови и исследования донорской крови.

Быстрые методики исследования

К современным методам диагностики СПИДа специалисты относят экспресс-тесты. Для их расшифровки потребуется 10-15 мин. Иммунохроматографические тесты, основанные на капиллярном потоке, обеспечивают точные результаты. Такие системы тестирования представлены в виде специальных полосок, на которые наносится кровь либо слюна. При наличии вируса через 10 мин на тесте появляются 2 полоски:

В данном случае результат тестирования носит положительный характер. На отрицательный результат указывает появление одной контрольной полоски. Для подтверждения полученного результата проводится ИБ. На основе общий данных врач ставит диагноз, назначает лечение.

Можно выявить вирус в домашних условиях. Для этого используют специальные экспресс-наборы. OraSure Technologies1 — система, разработанная в США. Если после тестирования выявлен положительный результат, пациенту рекомендуется пройти полное обследование в медицинском центре.

Обследование ребенка

Новорожденные детки, которые родились от инфицированных матерей, срочно подвергаются обследованию. С помощью серологических методик нельзя точно выявить вирус у деток в возрасте 5-18 месяцев. Но результат такого обследования важен при проведении ИБ.

Выявить инфицирование у деток можно с помощью ПЦР. ДНК вируса выявляет специалист у детей первого месяца жизни. Чтобы установить концентрацию РНК возбудителя, специалисты определяют провирус иммунодефицита. Для исследования врач использует цельную кровь либо ее высохшее пятно. Материал помещается в пробирку с консервантом ЭДТА (пропорция 1:20). Образец необходимо хранить при температуре не выше 8°С (на протяжении 2 суток). Не допускается замораживание материала.

Для получения образца сухой крови наносят цельную жидкость на специальную бумагу. Образец можно хранить при температуре ниже 8°С. Карточки используют в течение 8 месяцев. Новорожденного ребенка необходимо осмотреть, взяв материал на исследование, в течение следующих сроков:

через 48 часов после рождения;
в возрасте 2 месяцев после рождения;
через 3-6 месяцев после рождения.

Если врач выявил ген провируса ВИЧ через несколько часов после появления младенца на свет, то произошло внутриутробное инфицирование малыша. Заразиться вирусом можно и во время родов либо при грудном вскармливании. Результаты, которые указывают на наличие ДНК вируса в 2 образцах, указывают на развитие СПИДа у ребенка. Диспансерное наблюдение не требуется, если результаты ПЦР отрицательные через 4 месяца после рождения малыша.

Если результат тестирования отрицательный, но симптоматика СПИДа присутствует, тогда рекомендуется проконсультироваться с врачом. Подобная клиника может быть спровоцирована другими заболеваниями. Единственным и 100%-ным методом диагностики вируса считается тестирование. Даже квалифицированные и опытные специалисты не могут определить вирус по проявляемой симптоматике.

Если через некоторое время результаты пациента отрицательные, то ВИЧ в организме отсутствует.

При этом не учитывается симптоматика. Но подобная клиническая картина может быть связана со СПИДофобией. В таком случае требуется помощь психолога. При необходимости ребенку или взрослому назначают соответствующее лечение.

Читайте также: