При микроскопировании препаратов риккетсий не используют метод
Выделение чистой культуры аэробных бактерий
В условиях естественного обитания чистые культуры микроорганизмов встречаются довольно редко. Тем не менее, основная часть современных представлений о свойствах бактерий, а также их взаимоотношениях получена при изучении чистых культур. Поэтому совершенно необходимой задачей является выделение чистых культур различных видов бактерий, существующих в естественных условиях. Для выделения чистых культур большинства бактерий обычно затрачивается не более 2-3 суток, однако для некоторых (например, бактерии туберкулеза), этот процесс может затягиваться до 4 - 6 недель.Чистой культурой микроорганизмов называют популяцию бактерий одного вида, представляющую потомство одной клетки.
Методы, применяемые для выделения чистой культуры:
1) Методы, основанные на принципе механического разделения микроорганизмов:
а) механическое разобщение бактериальных клеток на поверхности плотных питательных сред шпателем (по Дригальскому), рассев штрихами калиброванной петлей (по Гольду) или тампоном после забора им исследуемого материала;
б) метод фильтрации, основан на пропускании исследуемого материала через специальные фильтры с определенным диаметром пор и разделение содержащихся микроорганизмов по величине. Этот метод применяется главным образом для очистки вирусов от бактерий, а также при получении фагов и токсинов (в фильтрате - чистый фаг, очищенный токсин).
2) Метод, основанный на получении серийных разведении в жидкой среде с последующим высевом на чашки с агаром (метод пластинчатых разводок по Коху).
3) Методы, основанные на биологических свойствах микроорганизмов:
а) избирательном подавлении размножения сопутствующей микрофлоры при низкой температуре для получения культур психрофильных бактерий;
в) метод прогревания: позволяет отделить спорообразующие бациллы от неспоровых форм. Прогревают исследуемый материал на водяной бане при 80°С 10-15 мин. (При этом погибают вегетативные формы, а споры сохраняются и при посеве на соответствующую питательную среду прорастают);
г) бактериостатический метод (метод ингибирования): основан на различном действии некоторых химических веществ и антибиотиков на микроорганизмы - определенные вещества угнетают рост одних микроорганизмов и не оказывают влияния на другие, например, небольшие концентрации пенициллина задерживают рост грамположительных микроорганизмов и не влияют на грамотрицательные, смесь пенициллина и стрептомицина позволяет освободить нитчатые грибы и дрожжи от бактериальной флоры, серная кислота (5% раствор) быстро убивает большинство микроорганизмов, а туберкулезная палочка выживает в этих условиях;
д) метод заражения лабораторных животных или растений: основан на способности некоторых бактерий быстро размножаться в организме чувствительных к ним лабораторных животных (биопроба); применяют в целях выделения и идентификации патогенных микроорганизмов и отделения их от сапрофитной флоры; для заражения подбирают наиболее восприимчивые к предполагаемому возбудителю инфекции виды животных или сорта растений, после появления у зараженных организмов признаков болезни их убивают и производят посев органов и тканей на питательные среды. При выделении и изучении облигатных паразитов этот метод является основным и единственным.
Методы культивирования облигатных внутриклеточных бактерий (риккетсий, хламидий) и вирусов
Для культивирования вирусов (так же, как и для других облигатных паразитов - риккетсий и хламидий) используют куриные эмбрионы, культуры тканей и лабораторных животных.
Куриный эмбрион - удобная модель для культивирования вирусов в целях получения вирусов и для приготовления диагностических, профилактических и лечебных препаратов - диагностикумов и вакцин. Куриные зародыши используют в возрасте от 8 до 12 дней, перед заражением инфекционным материалом скорлупу яйца над воздушной камерой обрабатывают 70% спиртом, обжигают, смазывают йодом (2% настойка), вторично протирают спиртом и обжигают. Вируссодержащий материал, обработанный для удаления бактериальной флоры, в асептических условиях наносят на хорион-аллантоисную оболочку или вводят в желточный мешок, аллантоисную полость, либо в амнион (ткань эмбриона). После заражения в аллантоисную полость через отверстие заливают парафин; если материалом заражают хорион-аллантоис, отверстие в скорлупе закрывают стерильным покровным стеклом, края которого замазывают парафином. После инфицирования эмбрионы помещают в термостат при 37°С. Признаки репродукции вируса проявляются особенно четко в месте заражения на хорион-аллантоисной оболочке в виде очагов поражения и геморрагий или для его обнаружения применяют специальные реакции (например, реакцию гемагглютинации - РГА).
Культуры клеток (тканей) получают из тканей животных и человека. Их делят на первичные, которые используют в течение одной генерации, и перевиваемые, которые поддерживают путем пассажей (перевивок) длительное время. Клетки перевиваемой культуры ткани готовят из нормальных (чаще эмбриональных) и злокачественных линий клеток, они способны сравнительно прочно прикрепляться к стеклу флакона, образовывать монослой клеток и многократно размножаться in vitro. Для поддержания жизнеспособности клеток применяются специальные синтетические среды (например, среда 199, среда Хэнкса), содержащие аминокислоты, витамины, глюкозу, минеральные соли с добавлением 5 -10% коровьей или лошадиной сыворотки. Трипсин используется при получении культуры клеток для дезагрегации тканей, т.е. для разобщения клеток. Репродукция вирусов в культуре клеток сопровождается так называемым цитопатическим действием (ЦПД), которое проявляется в изменении морфологии клеток и их гибели или образования синцития, а в некоторых случаях - в возникновении в инфицированных клетках клеточных включений. Характер и время проявления ЦПД зависит от вида вируса.
Для создания моделей вирусных инфекционных болезней и выделения вирусов используют лабораторных животных (белых мышей, хомяков, крыс, кроликов и др.). Чувствительность животных к вирусам зависит от вида животного и его возраста.
Культивирование риккетсийРиккетсии являются облигатными паразитами, их культивирование возможно только в живых тканях. Обычно их выращивают в желточном мешке куриного эмбриона.
Культивирование хламидийХламидии можно размножать в желточном мешке куриного эмбриона или в культурах тканей позвоночных. Размножение в куриных эмбрионах происходит в температурных границах 33 - 41°С и даже более широких, но чувствительность к обеим крайним температурам и оптимум для роста варьирует от вида к виду.
Техника посева бактерий на питательные среды, выделение и идентификация чистых культур бактерийЧистую культуру бактерий получают для проведения диагностических исследований - идентификации, которая достигается путем определения морфологических, культуральных, биохимических и других признаков микроорганизмов.
Морфологические и тинкториальные признаки бактерий изучают при микроскопическом исследовании мазков, окрашенных разными методами, и нативных препаратов.
Культуральные свойства характеризуются питательными потребностями, условиями и типом роста бактерий на плотных и жидких питательных средах. Они устанавливаются по морфологии колоний и особенностям роста культуры.
Биохимические признаки бактерий определяются набором конститутивных и индуцибельных ферментов, присущих определенному роду, виду, варианту. В бактериологической практике таксономическое значение имеют чаще всего сахаролитические и протеолитические ферменты бактерий, которые определяют на дифференциально-диагностических средах.
При идентификации бактерий до рода и вида обращают внимание на пигменты, окрашивающие колонии и питательную среду в разнообразные цвета. Например, красный пигмент образуют Serratia marccescens, золотистый пигмент – Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк), сине-зеленый пигмент – Pseudomonas aeruginosa (синегнойная палочка).
Для установления биовара (хемовара, серовара, фаговара) проводят дополнительные исследования по выявлению соответствующего маркера-определению фермента, антигена, чувствительности к фагам.
Посев уколом. Посев уколом в агар столбиком применяется для выращивания анаэробов или выявления характерного признака микроба, так как рост по уколу типичен для ряда бактерий. При посеве уколом в столбик желатины наблюдается разжижение ее бактериями, обладающими протеолитическим ферментом. Посев уколом в полужидкий агар практикуется также с целью длительного хранения культур.
При посеве уколом пробирку с агаром или столбиком желатины держат дном кверху, вынимают пробку и обжигают край пробирки. Материал, содержащий микробы, забирают обожженной на пламени платиновой иглой и прокалывают ею столбик питательной среды снизу вверх почти до самого дна пробирки
Посев петлей (посев штрихами). Берут одну чашку Петри с питательным агаром и делят ее на 4 сектора, проводя разграничительные линии на внешней стороне дна чашки. Исследуемый материал петлей вносят в первый сектор и проводят ею параллельные линии по всему сектору на расстоянии одна от другой около 5 мм. Этой же петлей, не изменяя ее положения по отношению к агару, проводят такие же линии на других секторах чашки. В том месте, где на агар попало большое количество микробных клеток, рост микроорганизмов будет в виде сплошного штриха. На секторах с небольшим количеством клеток вырастают отдельные колонии.
Выделение чистых культур бактерий по методу Дригальского. Берут 3 чашки Петри с питательной средой. В одну из чашек на питательный агар пастеровской пипеткой или петлей наносят каплю исследуемого материала и растирают стерильным шпателем по всей поверхности агара. Затем шпатель переносят во 2-ю чашку и втирают оставшуюся на шпателе культуру в поверхность питательной среды. Далее шпатель переносят в 3-ю чашку и аналогичным образом производят посев, после чего чашки помещаются в термостат. В последующем, в извлеченных из термостата чашках в зависимости от содержания микробных клеток в исследуемом материале на одной из чашек вырастают отдельные колонии различных бактерий, отличающиеся между собой по форме, цвету, величине, консистенции, пригодные для выделения чистой культуры микроорганизма. Отдельную (изолированную) "подозрительную", интересующую исследователя колонию снимают и засевают на скошенный агар. Из остатка колонии готовят микропрепарат и изучают при окраске по Граму. У выросших на скошенном агаре бактерий (как правило, одного вида) определяют биохимические, тинкториальные, антигенные свойства и делают заключение о выделенной культуре бактерий.
При выделении чистой культуры бактерий по Гольду, внесенной на один из 4-х секторов пластинчатого агара в чашке Петри, материал равномерно штрихами засевается по всему сектору и петля прожигается. Охлажденной петлей материал снимается с одного из штрихов первого сектора и переносится во второй, где производится равномерный штриховой посев, аналогичный первому. В третий и четвертый сектор посев делается соответственно из второго и третьего секторов аналогично засеву второго сектора.
После инкубации в термостате наиболее густой рост бактерий выявляется в области первых штрихов первого сектора. В каждом последующем секторе выявляется менее густой рост бактерий, чем в предыдущем, или рост отдельных колоний. Отдельную колонию отвивают на скошенный агар и идентифицируют по тинкториальным, биохимическим, серологическим свойствам.
Данный метод применяется в тех случаях, когда одновременно с выделением чистой культуры необходимо определить количество бактерий в исследуемом материале. Определение количества бактерий всех видов в 1 г (1 мл) материала производят по числу выросших на соответствующей среде колоний с учетом объема посевного материала и степени его разведения. Количество микроорганизмов в 1,0 г = n'а'b', где n - число колоний, выросших на питательной среде; а - коэффициент посевной дозы (при посеве 0,1 мл а=10, при посеве 0,05 мл а=20); b - степень разведения посевного материала.
Метод серийных разведений (пластинчатых разводок) по Кохутакже применяет для определения количества микробов в исследуемом материале, чаще всего в жидких средах.
[youtube.player]Номер патента: 105799
Текст
М 105799 С С С Р А. П, Зотов Н. Блино Заявлено 14 августа 1956 г. за556533 в 1(о),)итет полам изобретений и открытий при Совете Министров ССС Рома- едостатОПИСАНИК К АВТОРСКОПОСОБ МИКРОСКОПИ РИККЕТСИЙ ВВ практике работы по изучению и диагностике риккетсиозов и, в частности, Ку-лихорадки наибольшее значение имеют методы серологического и биологического исследований.Однако большую пользу, в особенности в случаях необходимости быстрого установления диагноза, мон(ст припсси такжс микроскопи, . коссследовапис.Для этой цели обычно используют мазки и препараты-отпечатки из органов и других материалов па предметных стеклах, подвергнутые окраске одним из употреоляемых в практике способов, в основу которых кладется основное трсоовапие: четко и контрастно выявлять и дифференцировать риккетсии от других микробов.Е 1 аиболес распространен)ыми способаи окраски мазков-препаратов па р и(котс ни явля Отся:Способ Романовского - Гимза. При этом фиксация мазков и окраска проводится по обычной методике, рекомендуемой для окраски мазков крови, бакгерий и крове- паразитов, с той разницей, что срок окрашивания в несколь часов.Способ Маккиавело, Окраска ЗОБРЕТЕН ВИДЕТЕЛЬСТВУКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯЕПАРАТАХ 0,25%-ным щелочным раствором основного фуксина прп рН 7,2 - 7,4 с ди(рферепциацией 0,5%-ным раствором лимонной кислоты и докраской 1 м-ыъ Вод)ы. ра)стВОром мстиленовой сшы(и.Способ П. Ф, Здродовского. НазВа 1 Иь)Й ав Ор предложил в сосоое Чаккиавсло заменить щелочной раствор фуксша фуксином Пфсифсра, ди(рфсренцпацшо проводить 05%-пым раствором лпмош)ой кислоты, ", для о:(рпп)ва;я фона использов)т) вз"Сто 1%-)Ого ,5 11-ный раствор з)ст, с)Овои спы(и.Два после(Их способ;окраск; ОСНОВац Л Иа ПОВЫШСППОй е(КПСЛО- тоустойчивсст) рпккетспй и представляют собой модификацию метода окраски и)слотоупорных мкробов по Ци.)ь-ЕЕсльссну.Все перечисленные способы являОтся п)рак пчсскп цеыми и пользуются заслужепыпризнан)еъ В качестве методов, позволяющих выявлять как свободно лежащие, так и внутриклсточныс формы риккетсий.В то ке время перечисленные методы окраски не лишены некоторых недостатков,Так, в отношении способановского-Гимза в качестве нМ 105799ка может быть указана длительность процедуры окраски, а в отношении способов Маккиавсло и Здродовского - большая зависимость результатов окраски от качества фуксина. При пользовании фуксином с недостаточно хорошей растворимостью эти методы, даже в опытных руках, нс всегда дают удоглстворптельныс результаты.Уместно отметить, гго пс оторсс ослабление контрастности окраски при пользовании методами Маккиивело и Здродовского может оыть, повидимому, обусговлепо тем, гго в качестве фоновой краски в эких способах используется раствор кн.- тиленовой синьки, Известно, что эта краска имеет ценное свойство - полихромазию, вследствие чего в некоторых условиях, при пользовании даже одной метилеповой синькой, возможно получить окр;шшвание различных клеточных элементов в целую гамму цветов - ог фиолетово-синего до красного,В описываемом способе определения риккетсий в препаратах отмеченные недостатки устранены.Способ имеет ту особенность, 1 то, с целью увеличения точности и сокращения длительности определения, дифференцирование производят раствором муравьиной кислоты, а дополнительную окраску фона в раствором малахитовой зслешл.Предлагаемый способ окраски риккетсий в мазках из тканей и различных выделений животных пригоден в практических условиях и не очень зависит от непостоянства качества бактериологических красителей.Мазок или препарат-отпечаток из органов делается на пред. летном стекле по возможности тонким и равномерным, высушивастся на воздухе и фиксируется на пламени горелки.Окраска производится по известной схеме: фуксин - дифференциация раствором слабой кислоты - дополнительная окраска фона контрастно работающим красителем.Непосредственно перед окраской готовят раствор фуксина. При этомОти. р ликтор 1, 1 О. й 1 азуренко на 1 л,г карболового фуксина Биля добавляется 1,5 - 2,0 ил дистиллированной воды и одна капля 1 %-ного раствора двууглекислой соды.Г 1 риготовлснньй раствор фуксина а.1 пвается на мазок. Окраска длится 78 минут.Краска смывается водой и мазок оыстро (в течение не более двух сек.) ополаскивается О, 25 Ь-нык раствором муравьиной кислоты, после чего снова хорошо промывается водой.Докраска проводится в течение 10 сек. 0.3"/о-ныы водным раствором малахитовой зелени.Л 1 азок хопопо промывается водой, просушивается между ли "тами Фидьтровальной бумаги и просматривается под иммерсией.Риккетсии окрациваются в красный,.рубиново-красный цвето и на зеленоватом фоне выделяются весьма выпукло. При этом они представляются очень хорошо контурированными, что делает возможным полностью видеть делящиеся формы и полиморфизм их. При описанном способе окраски хорошо видны риккетсии, расположенные внутри- клеточно.Посторонняя микрофлора окрашивается в темно-зеленый и зеленый цвета. Цвет клеточных элементов - зеленый, зеленоватый.Предлагаемый способ окрашиваиия риккетсий прост, доступен, процедура окраски мазка не продолжительна, непостоянство качества красителей практически на результатах окраски не сказывается.Предмет изобретенияСпособ микроскопического определения риккетсий в препаратах, подвергнутых окрашиванию раствором фуксина с последующим дифференцированием и с применением дополнительной окраски фона, о тличающийся тем, что, с целью увеличения точности и сокращения длительности определения, дифференцирование производят раствором муравьиной кислоты, а дополнительную окраску фона в раствором малахитовой зелени.Стаидчртгиа. Полн. к иеч, 26 Уг. Объем О,25 и. л. Гираж 100. Цена 25 коп.Гор. Алатырь, типография а 2 Министерства культуры Чувашской АССР, Зак, 2415
Заявка
Блинов П. Н, Зотов А. П
МПК / Метки
Код ссылки
Номер патента: 990077
. пропускают через заполненную окисью алюминия адсорбционную колонну с последующей рециркуляцией на стадию экстракции. После окончания эксперимента из 1155 г используемого трив(2-зтилгексил )-амина регенерируют 1036 г амина без структурных изменений, это соответствует потере 119 г или 10,3 в пересчете на исходный амин, Продуктами разложения третичного амина являются ди-(2-этилгек сил)- амин (10 г), 2-зтилгексиламин (0,5 г) и гидрохлорид ди-(2-этилгексил)-амин (0,2 г). Кроме того, получают 108,3 г смеси неидентифицированных веществ. Выход хлористого во дорода в течение всей продолжительности работы (1913 ч) является постоянным,П р и мр А.(сравнительный).Повторяют пример 23 с той разницей,что перед рециркуляцией аминосодержащий.
Номер патента: 1755181
. имеет место увеличение погрешности анализа,П р и м е р 41. 5 мл анализируемого 5водного раствора переносят в прибор Полежаева емкостью 10-15 мл и вносят 0,5 млраствора нитрита натрия (С = 20 мг/мл). Котводной трубке прибора последовательноприсоединяют 0-образную трубку,наполненную реагентом. Реагент представляетсобой диатомит или стеклянный порошок,.обработанный окислительной смесью,представляющей собой Зо-ный раствордвухромовокислого калия в 2,5;-ном растворе серной кислоты,К 0-образной трубке присоединяют индикаторную трубку ИТТ, Собранную систему выдерживают 4 мин при 10 С, послечего пропускают 0,4 л воздуха со скоростью 200,1 л мин, применяя в качестве побудителярасхода газоаналиэатор УГ. Затем отсоединяют индикаторную трубку, сразу.
Номер патента: 33146
. кислоты содержит еще значительные количества последней, . Промывка получающегося здесь осадка гипса поэтому представляется необходимой. В результате промывки этого осадка получается промывная вода, содержащая сравнительно неболь 3 пой процент молочной кислоты Концентрирование этой промывной воды по второму способу представляет собок работу длительную и сложную, которая не оправдывается на практике; 2) для получения высоко концентрированной молочной кислоты (80%) необходимо.;:рошкованйый лактат кальция, что опятьхаки. является вопросом рентабельйостипроизводства,Предлагаемый способ получения кон центрированнойиолочной кислоты ииеет.целью устранить указанные выше недостатки первого и второго способов и со-стоит в том, что растворы.
Номер патента: 60231
. ангидридом, Маточным растворам дают отсгояться и выпавший осадок смеси аспирина, салициловой кислоты и салицилового эфира ацетилсалициловой кислоты отфильтровывают. Осадок для удаления первых двух продуктов обрабатывают горячей водой, а остаток салицилового эфира ацетилсалици. ловой кислоты перекристаллизовывают из спирта. В дополнение к изложенному выше методу автор настоящего изобретения предлагает маточники от производства аспирина не подвергать отстаиванию, а разбавлять водой; при этом выпадает осадок салицилового эфира ацетилсалициловой кислоты, который далее очищается промывкой водой и перекристаллизацией из спирта,Пример. К 100 частям маточ- - " ника прибавляют 150 частей воды и дают отстаиваться в течение 8 час.при комнатной.
Номер патента: 126106
. анолита, причем в нижнем слое оказывается почти чистая жидкая двуокись азота,126106 Предмет изобретения 1, Способ концентрирования водных растворов азотной кислотыэлектролизом с вводом разбавленного раствора в катодное пространст - .во и окислов азота в анодное пространство и выводом концентрированной азотной кислоты из анодного пространства электролизера, отл ич а ющийс я тем, что, с целью использования для концентрирования растворов азотной кислоты ниже 707 о, ввод окислов азота ппоизводяг порциями в течение всего процесса электролиза, в количествах, соответствующих степени насыщения ими анолита (не допуская его вски, - пания).2. Способ по п. 1, отл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью получениямаксимальных выходов по току, в качестве.
[youtube.player]Лекция №9. Микроскопический анализ.
- Цели проведения микроскопического анализа.
- Методика проведения микроскопического анализа.
- Техника приготовления временных препаратов.
Микроскопический анализ основан на определении признаков анатомического строения и обычно применяется для исследования резаного и порошкообразного лекарственного сырья. Цель микроскопического анализа — установить подлинность сырья. Для этого рассматриваемый объект помещают на предметное стекло микроскопа в капле жидкости и накрывают покровным стеклом. Каждый препарат рассматривают сначала при малом увеличении для общей ориентировки, а для детального анализа — при большом увеличении.
Жидкости, применяемые для изготовления микропрепарата, называются включающими. Они имеют разное назначение и делятся на две группы: индифферентные и просветляющие.
Индифферентные жидкости — это вода, глицерин, масло, просветляющие — раствор хлоралгидрата, растворы КОН и NaOH.
Индифферентные жидкости, не реагируя с исследуемым сырьем, служат средой для его рассмотрения. Вода применяется для ориентировочного исследования, она не изменяет форму и окраску клеток. В воде хорошо просматриваются крахмальные зерна и включения оксалата кальция, но в ней растворяется слизь и распадаются алейроновые зерна, жирное масло собирается в более крупные капли.
По сравнению с водой в глицерине препараты не высыхают и могут сохраняться несколько дней. Он относится к слабопросветляющим жидкостям, так как при его продолжительном воздействии ткани становятся более прозрачными.
Масло применяют для наблюдения растворимых в воде веществ.
Просветляющие жидкости. Их назначение — сделать препарат более прозрачным. Лучшей просветляющей жидкостью является раствор хлоралгидрата. При его воздействии воздух из препарата вытесняется, крахмальные зерна разбухают и расплываются; жирные и эфирные масла растворяются; белковые вещества, хлорофилл, смолы и другие включения разрушаются; темноокрашенные оболочки светлеют; без изменения остаются включения оксалата кальция. Так как хлоралгидрат действует медленно, препарат рекомендуется осторожно подогреть, но не кипятить.
Действие растворов КОН и NaOH в различных концентрациях (от 5 до 15%) сходно с действием хлоралгидрата: крахмальные зерна разбухают и быстрее превращаются в клейстер, жиры при нагревании омыляются.
Техника приготовления временных микропрепаратов
Техника приготовления микропрепаратов зависит от состояния, в котором находится сырье (цельное, резаное, порошкообразное), и от принадлежности его к определенной морфологической группе (кора, подземный орган, лист).
Чтобы выяснить анатомическое строение цельного сырья, его необходимо предварительно подготовить. Это достигается холодным размачиванием, кипячением, размягчением в водяных парах во влажной камере. Чаще применяют метод холодного размачивания, рекомендуемый для всех органов растения.
Он состоит в том, что используемое сырье помещают в банку или чашку с жидкостью (2 ч воды и 11 ч глицерина), куда добавляют кристаллик карболовой кислоты. В течение 1—2 суток размачивают мелкие семена, плоды, листья, траву, цветки. Кору, корни, корневища, твердые семена рекомендуется размачивать около 3 суток, иногда до 4—5 суток. После этого сырье перекладывают в 96%-ный спирт с небольшим количеством глицерина (чтобы спирт меньше улетучивался). Затем делают срезы — поперечные и продольные (радиальные или тангентальные) бритвой, лезвием или на микротоме. Мелкие объекты резать трудно, их помещают в парафин, пробку или сердцевину бузины. В последнее время для среза листьев используют сырой картофель.
Приготовление срезов в парафине. Из куска парафина скальпелем вырезают прямоугольник (блок), который удобно держать в руке, размером 1x2 см. В верхнюю часть парафина вставляют нагретый в пламени горелки кончик препаровальной иглы; в расплавленную ямочку быстро опускают размягченное семя или плод. Через несколько минут парафин застывает. Выравнивают поверхность парафина и отрезают верхушку объекта. Затем делают срезы вместе с парафином, после чего парафин отбрасывают.
Приготовление крупных размягченных объектов. Кору, корневища, толстые корни, крупные плоды, семена при изготовлении среза держат в руке. Подравнивают скальпелем поверхность и делают срез бритвой или лезвием.
Техника микроскопического исследования лекарственного сырья
Препараты цельного сырья (листья, травы, цветки). Препараты для микроскопического анализа готовят из сырья, предварительно просветленного в растворе КОН. Для этого кусочки листовой пластинки (с краем листа, жилкой), венчика и чашечки, иногда стеблей (в безлистном сырье) кипятят в 5%-ном водном растворе КОН 1—2 мин в зависимости от толщины листа, затем содержимое пробирки выливают в чашку, жидкость сливают, сырье промывают и оставляют в воде. Кусочки сырья берут лопаточкой или препарировальной иглой, если листья тонкие и собираются при вынимании в складочки, подводят предметное стекло в воду под кусочек листа, вынимают его иглой на стекло и расправляют. Если лист надо рассматривать с двух сторон, кусочек листовой пластинки разрывают на две части скальпелем на предметном стекле, одну часть осторожно перевертывают и помещают рядом со второй. Плотные листья при рассмотрении раздавливают лопаточкой или скальпелем, иногда готовят срезы в пробке, бузине. Готовые препараты и срезы просматривают в растворе хлоралгидрата. Иногда при анализе листьев и трав используют микрохимические реакции с раствором Судана III: на эфирное масло, млечники, вместилища со смолой и кутикулу.
Если требуется приготовить срез листа, выбирают кусочек, содержащий главную жилку; мелкие листья рассматривают целиком. Препарат готовят так, чтобы срез прошел поперек главной жилки и в него попала часть мезофилла с более мелкими жилками. Обращают внимание на число, форму и расположение ксилемы и флоэмы в проводящих пучках жилки, присутствие кристаллоносной обкладки, строение мезофилла (расположение палисадной ткани с одной или с двух сторон, наличие губчатой ткани; например в изолатеральном листе палисадная ткань имеется с обеих сторон) и на включения.
Препараты резаного сырья. Листья, травы, цветки исследуют так же, как цельное сырье.
Плоды и семена. При анализе плодов и семян обычно делают поперечные, иногда продольные срезы; кожуру рассматривают с поверхности. Поперечные срезы готовят из предварительно обработанного сырья, (увлажненного в камере или размягченного в водяных парах). Мелкие объекты режут в пробке, сердцевине бузины или в парафине.
Резаная кора. Препараты готовят путем кипячения кусочков в 5%-ном растворе NaOH в течение 3—5 мин, промывают в воде, раздавливают объект и смотрят препарат в растворе хлоралгидрата. Микрохимические реакции проводят с соскобом коры или с ее 10%-ным отваром после охлаждения: на одревесневшие элементы, крахмал (иногда) и на действующие вещества (дубильные, антраценопроизводные и некоторые другие).
Подземные органы (корни, корневища, клубни, луковицы). Подготовленное сырье (размоченное и размягченное) исследуют на поперечных и продольных срезах. Толстые срезы рассматривают в лупу (ув. 1Q), обращая внимание на общее строение. На тонких срезах выявляют диагностические признаки.
Резаное сырье исследуют после кипячения кусочков в 5%-ном растворе NaOH, промывают в воде и раздавливают на предметном стекле. Объекты рассматривают в растворе хлоралгидрата.
Препараты растительных порошков. Для приготовления препаратов всех морфологических групп на предметное стекло помещают 1—2 капли включающей жидкости, смачивают в ней конец препаровальной иглы или скальпеля и берут исследуемый порошок; переносят его на предметное стекло в жидкость; осторожно, чтобы не попал воздух, накрывают покровным стеклом. Если при этом жидкости под стеклом оказалось мало, добавляют ее из пипетки рядом с покровным стеклом (она быстро затягивается под стекло). Если жидкости окажется много, её удаляют, не снимая стекла полоской фильтровальной бумаги. Необходимо соблюдать правило: на предметное стекло вначале следует вносить включающую жидкость, а затем порошок, чтобы не загрязнить реактивы.
Препараты готовят в растворе хлоралгидрата или в, растворе КОН, медленно нагревают до полного просветления и выявляют все диагностические признаки. При необходимости проводят микрохимические реакции.
Дата добавления: 2018-04-15 ; просмотров: 1204 ;
[youtube.player]Читайте также:
