Микроскопия фекального мазка дисбактериоз

На сегодня существуют следующие методы лабораторной диагностики дисбактериоза кишечника:

1. Бактериологический анализ (определение состава фекальной микрофлоры, отражающей микробный состав лишь дистальных отделов кишечника — наиболее доступный метод, однако недостаточно точный).

2. Биохимический экспресс — метод определения протеолитической активности супернатантов фекалий.

3. Высоковольтный электрофорез на бумаге для обнаружения β-аспартилглицина, β-аспартиллизина, β-аланина, 5-аминовалериановой и γ-аминомасляной кислот и др.

4. Ионная хроматография, определяющая в фекалиях биогенные амины, желчные и карбоновые кислоты, ароматические соединения.

5. Газожидкостная хроматография для определения в фекалиях летучих жирных кислот.

6. Микроскопия фекального мазка.

NB! Лабораторная диагностика дисбактериоза носит комплексный характер — т.е. параллельно проводится исследование направленные на выделение многих видов микроорганизмов, входящих в состав нормальной микрофлоры

NB! Исследование обязательно является количественным, т.е. направлено не только на установление факта присутствия, но и количества искомых микроорганизмов в исследуемом материале

Как правило, классический бактериологический анализ (прямой метод) требует наличия большого количества дорогостоящих питательных сред и относительно длительного промежутка времени (не менее 5 дней). Как отмечалось выше, только в кишечнике человека обитают около 1000 видов микроорганизмов нормальной микрофлоры, при этом соотношение анаэробов к аэробам 1000:1, из них культивируемых только 10%. Таким образом, учет всех, столь отдаленных в таксономическом отношении микроорганизмов, при классическом бактериологическом анализе практически невозможно.

Согласно ОСТ 91500.11.0004-2003 диагноз дисбактериоза кишечника основывается на результатах клинического обследования пациента и данных микробиологического исследования кала.

Поскольку дисбактериоз кишечника в ряде случаев протекает бессимптомно, решающее значение при постановке диагноза имеют микробиологические показатели.

Микробиологическими критериями дисбиоза являются:

– нарастание количества условно-патогенных микроорганизмов одного или нескольких видов в кишечнике при нормальном количестве бифидобактерий;

– нарастание одного или нескольких видов условно-патогенных микроорганизмов при умеренном снижении концентрации бифидобактерий (на 1-2 порядка);

– снижение содержания облигатных представителей микробиоценоза (бифидобактерий и/или лактобацилл) без регистрируемого увеличения количества сапрофитной или условно-патогенной микрофлоры кишечника;

– умеренное или значительное ( 7 ) снижение содержания бифидобактерий, сочетающееся с выраженными изменениями в аэробной микрофлоре — редукцией лактобацилл, появлением измененных форм кишечной палочки, обнаружением одного или нескольких представителей условно-патогенных микроорганизмов в высоких титрах (до 10 7 — 10 8 КОЕ/г).

Снижение числа анаэробных представителей облигатной микрофлоры, обладающих высокой антагонистической активностью, создает условия для развития условно-патогенных микроорганизмов: энтеробактерий, стафилококков и грибов рода Candida.

При дисбактериозе нарушается нормальное соотношение между анаэробной и аэробной микрофлорой. Это, прежде всего, выражается в:

- снижении концентрации бифидобактерий на 1-2 порядка,

- снижении концентрации лактобактерий на 1-2 порядка,

- нарастании концентрации кишечных палочек с измененными свойствами,

- снижении концентрации нормальных кишечных палочек ( 1 млрд.)

- нарастании концентрации других условнопатогенных микроорганизмов.

Косвенные экспресс методы диагностики дисбактериоза кишечника:

1) Высоковольтный электрофорез на бумаге для обнаружения β-аспартилглицина, β-аспартиллизина, β-аланина, 5-аминовалериановой и γ-аминомасляной кислот и др.

Высоковольтный электрофорез на бумаге применен для разделения не только моно -, но и олигосахаридов. Этот метод может быть использован не только для производных углеводов, содержащих заряженную группу (как, например, гексуроиовые кислоты, аминомоиосахариды, сульфаты и фосфаты моносахаридов), но и для нейтральных соединений, способных образовывать заряженные комплексы с такими электролитами, как борат, арсенит или молибдат натрия

2) Ионная хроматография, определяет в фекалиях биогенные амины, желчные и карбоновые кислоты, ароматические соединения.

Ионная хроматография — это вариант ионообменной хроматографии, включающий

ионообменное разделение ионов и кондуктометрическое определение концентрации хроматографически разделенных ионов. Поскольку высокочувствительное кондуктометрическое определение ионов возможно только при невысокой фоновой электропроводности потока жидкости, поступающей в детектор, были предложены два основных метода ионной хроматографии.

Организация стока поверхностных вод: Наибольшее количество влаги на земном шаре испаряется с поверхности морей и океанов (88‰).

Механическое удерживание земляных масс: Механическое удерживание земляных масс на склоне обеспечивают контрфорсными сооружениями различных конструкций.

Папиллярные узоры пальцев рук - маркер спортивных способностей: дерматоглифические признаки формируются на 3-5 месяце беременности, не изменяются в течение жизни.

Поиск

Современные методы диагностики дисбактериоза кишечника

В статье представлен современный взгляд на проблему дисбактериоза кишечника у детей, методы диагностики и их трактовка. Представлены собственные исследования характера микрофлоры кишечника по содержанию Ig-расщепляющей (протеолитической) активности фекалий у 133 детей с хронической гастродуоденальной патологией. Показано, что метод может быть полезным для характеристики кишечной микробиоты.

The article presents a modern approach to the problem of intestinal dysbiosis in children, methods of diagnosis and treatment. Presented own research into the nature of intestinal microflora on the content of Ig-cleaving (proteolytic) activity of fаeces in 133 children with chronic gastroduodenal pathology. It is shown that the method may be useful for the characterization of intestinal microbiota.

В настоящее время не вызывает сомнений тот факт, что изменение количественного и качественного состава микрофлоры кишечника практически всегда сопровождает любое неблагополучие в пищеварительной системе. Не отвечая критериям самостоятельной нозологической единицы, дисбактериоз кишечника является как следствием, так и одним из звеньев патогенеза патологии желудочно-кишечного тракта. С одной стороны, дисбактериоз кишечника всегда вторичен, поскольку возникает при любом изменении внутренней среды кишки вследствие действия патогенных факторов или прямого влияния на кишечную микрофлору. С другой стороны, дисбактериоз кишечника сам может приводить к повреждению кишечного эпителия, тем самым нарушая процессы пищеварения и усугубляя клиническое течение заболеваний желудочно-кишечного тракта.

В настоящей статье мы коснемся преимущественно диагностики нарушений микроэкологии толстого кишечника.

Толстая кишка представляет собой биотоп с высокой степенью обсемененности. В ней обнаружено более 400 видов микроорганизмов. Показано преобладание анаэробной микрофлоры, представленной на 90% бактероидами и бифидобактериями (главная флора). Аэробы составляют 10% — кишечные палочки, лактобациллы, энтерококки и др. (сопутствующая флора). Остаточная флора, составляющая менее 1% от общего количества микроорганизмов, представлена клебсиеллами, протеем, дрожжами, клостридиями, энтеробактером и цитробактером и др. Необходимо отметить одну особенность микрофлоры толстого кишечника — по мере продвижения от проксимальных отделов к дистальным увеличивается ее обсемененность. В проксимальном отделе общее число микроорганизмов составляет 10 8 -10 9 , а в прямой кишке — 10 11 -10 12 в 1 г кала. Более 90% массы кала приходится на бактерии. Нормальная микрофлора кишечника колонизирует как просвет кишечного тракта, так и поверхность слизистой оболочки кишки, формируя при этом пристеночную или мукозную микрофлору (М-микрофлора) и полостную микрофлору (П-микрофлора). Основную защитную функцию выполняет мукозная микрофлора [1, 2, 3, 4].

На сегодня существуют следующие методы лабораторной диагностики дисбактериоза кишечника [2, 4]:

2. Биохимический экспресс — метод определения протеолитической активности супернатантов фекалий.

5. Газожидкостная хроматография для определения в фекалиях летучих жирных кислот.

6. Микроскопия фекального мазка.

В результате многолетнего изучения кишечной микрофлоры Р.В. Эпштейн-Литвак и Ф.Л. Вильшанская (1970) разработали методы лабораторной диагностики дисбактериоза, основанные на бактериологическом исследовании кала. Эти методы до сих пор существуют практически в неизмененном виде и широко применяются. Но у данного метода есть недостатки. Бактериологическое исследование кала отражает микробный состав полостной флоры лишь дистальных отделов кишечника. Обычно метод предоставляет информацию о 15-20 видах микробов. Число культивируемых кишечных анаэробных бактерий не превышает 7-50% от предполагаемого их истинного количества. В тени остается около 500 видов анаэробов и состав тонкокишечной микрофлоры. Невозможно идентифицировать бактериологическим методом простейших, грибы и вирусы. К тому же данный метод не дает качественной характеристики микробиоценоза. Хочется отметить, чтобы выделить всеми доступными современной медицине методами все возможные виды микрофлоры и составить их развернутую бактериологическую характеристику, потребовалось бы не менее одного года [5, 6]. В литературе также имеются сообщения, подтверждающие низкую диагностическую ценность исследования кала на дисбактериоз [7].

Ниже приведена классификация дисбактериоза кишечника, предложенная И.Б. Куваевой и К.С. Ладодо в 1991 году [8]. Данная классификация базируется на данных бактериологического исследования кала и клинической симптоматике, которая, как правило, неспецифична.

Классификация дисбактериоза кишечника по И.Б. Куваевой и К.С. Ладодо (1991)

Первая степень	Латентная фаза дисбиоза: проявляется только в снижении на 1-2 порядка количества защитной микрофлоры — бифидобактерий, лактобацилл, а также полноценных кишечных палочек — до 80% от общего количества. Остальные показатели соответствуют физиологической норме (эубиозу). Как правило, начальная фаза не вызывает дисфункций кишечника и возникает как реакция организма практически здорового человека на воздействие неблагоприятных факторов, таких как, например, нарушение режима питания и др. В этой фазе возможно вегетирование в кишечнике незначительного количества отдельных представителей условно-патогенной флоры. Клинических проявлений дисбактериоза в этой фазе нет.
Bторaя степень	Пусковая фаза более серьезных нарушений характеризуется выраженным дефицитом бифидобактерий на фоне нормального или сниженного количества лактобацилл или сниженной их кислотообразующей активности, дисбалансом в количестве и качестве кишечных палочек, среди которых нарастает доля лактозонегативных или цитрат-ассимилирующих вариантов. При этом на фоне дефицита защитных компонентов кишечного микробиоценоза происходит размножение либо плазмокоагулирующих стафилококков, либо протеев, либо грибов рода Candida. Вегетирование в кишечнике протеев или плазмокоагулирующих стафилококков в этой фазе развития дисбактериоза чаще транзиторное, чем постоянное. Функциональные расстройства пищеварения выражены неотчетливо — спорадически жидкий стул зеленоватого цвета с неприятным запахом, со сдвигом рН в щелочную сторону, иногда, напротив, задержка стула, иногда отмечается тошнота.
Третья степень	Фаза агрессии аэробной флоры характеризуется отчетливым нарастанием содержания агрессивных микроорганизмов — при этом размножаются до десятков миллионов в ассоциации золотистые стафилококки и протеи, гемолитические энтерококки, наблюдается замещение полноценных эшерихий бактериями родов Klebsiella, Enterobacter и др. Эта фаза дисбактериоза проявляется дисфункциями кишечника с расстройствами моторики, секреции ферментов и всасывания. У больных отмечается учащенный разжиженный стул, часто зеленого цвета, снижение аппетита, ухудшение самочувствия, дети становятся вялыми, капризными.
Четвертая степень	Фаза ассоциативного дисбиоза характеризуется глубоким разбалансированием кишечного микробиоценоза с изменением количественных соотношений основных групп микроорганизмов, изменением их биологических свойств, накоплением токсических метаболитов. Характерно вегетирование энтеропатогенных серотипов E.coli, сальмонелл, шигелл и других возбудителей острых кишечных инфекций. Возможно размножение клостридий. Эта фаза дисбиоза характеризуется функциональными расстройствами пищеварительной системы и нарушениями общего нутритивного статуса, дефицитом массы тела, бледностью кожных покровов, снижением аппетита, частым стулом с примесью слизи, зелени, иногда крови, с резким гнилостным или кислым запахом.

Несмотря на введение в микробиологическую практику новых усовершенствованных методов исследования, до сих пор четкой границы между микробиоценозом кала здоровых и больных лиц так и не выявлено. Каловый микробиоценоз является сложным и динамичным. Состав и количество бактерий широко варьируют.

В последних исследованиях, посвященных анализу микробиоценоза кала, используется метод флуоресцентной гибридизации ДНК in situ (FISH). Количественный анализ бактериального состава и интенсивности свечения в центральных участках образца фекалий, на поверхности и в слизи позволили различить особенности биологической структуры кала здоровых и больных. Особенностью данных исследований является то, что исследуются не гомогенизированные образцы, а цилиндрические образцы кала, полученные от больных, так как при гомогенизации бактерии равномерно распределяются в образце, чего не бывает в естественных условиях [9].

Существуют и другие методы диагностики дисбактериоза кишечника, основанные на определении метаболитов кишечной микрофлоры [2]. Эти соединения разделены на 4 группы. В первую группу входят индикан, n-крезол, фенол. Индикан расщепляется индол-положительными микробами, n-крезол, фенол — анаэробными и аэробными микроорганизмами. Вторая группа включает H₂, СН₄, СО₂, С₂-С₆ жирные кислоты. Это метаболиты строгих анаэробов. Третью группу составляют деконъюгированные желчные кислоты — метаболиты бактероидов, бифидобактерий, клостридий, стрептококков и энтеробактерий. Аммиак входит в четвертую группу, является метаболитом грамположительных и грамотрицательных анаэробов, энтеробактерий и стрептококков.

Для определения метаболитов кишечной микрофлоры используются такие методы, как газо-жидкостная, высокоэффективная жидкостная хроматография, к сожалению, не всегда доступные в повседневной клинической практике.

В настоящее время идентифицирован ряд факторов кишечной микрофлоры, обеспечивающих персистенцию и колонизацию симбионтной и условно-патогенной микрофлоры. К таким факторам относятся ферменты, которые формируют устойчивость некоторых представителей кишечной микрофлоры к действию секреторных антител [10]. Накоплены данные о том, что ферменты, способные расщеплять секреторные иммуноглобулины слизистых оболочек, способствуют колонизации эпителия патогенными бактериями. В связи с этими фактами в последнее время были предложены и апробированы скрининговые биохимические методы оценки состояния микробиоценоза кишечника по уровню протеолитической, Ig-расщепляющей активности супернатантов фекалий [6, 11, 12]. Эти методы диагностики дисбиоза основаны на том, что различные таксономические виды бактерий, колонизирующие разные отделы кишечника, обладают неодинаковой протеолитической способностью. Как правило, индигенная микрофлора кишечника человека и его фекалий, в частности бифидо- и лактофлора, обладает выраженной сахаралитической, нежели протеолитической активностью. Возрастание суммарной протеолитической активности супернатантов фекалий тесно связано с увеличением количественного содержания многих видов условно-патогенных бактерий в кишечнике или с возрастанием доли бактерий, продуцирующих протеолитические энзимы, колонизирующих стенку кишечника. IgА-протеазы — секретируемые факторы бактериальной природы. Они представляют собой специфические энзимы, расщепляющие IgА на классические Fab- и Fc-фрагменты, лишая его тем самым антительных свойств [10].

Протеолитическая активность, в том числе иммуноглобулин-расщепляющая активность, выявлена у многих видов патогенных и условно-патогенных бактерий, грибов и простейших, способных колонизировать кишечник. Выделены IgA-протеиназы у представителей семейства энтеробактерий: Proteus spp, Serratia marcescens, Klebsiella ozaenae, Klebsiella pneumonie, E. Coli, Shigella spp., Salmonella spp. Грамположительная кокковая микрофлора кишечника — S. aureus, S. epidermidis, Enterococcus faecalis — также способна к продукции Ig-расщепляющих протеиназ [12, 13]. IgA-протеиназы индуцируют грибы рода Candida. Изучены протеолитические ферменты, являющиеся факторами вирулентности, у таких простейших, как Lamblia intestinalis [14]. Некоторые представители фекальной микрофлоры здоровых людей: Streptococcus faecalis, Staphyloccocus spp. Propionibacterium acnes, Cl. perfringens, Cl. bifermentas, Cl. sporogenes, Cl. ramnosum, Bacteroides spp. Bifidobacterium spp. — также обладают протеолитической активностью [12, 13]. Вероятно, эта способность вносит свой вклад в вирулентность нормальной микрофлоры, которая, как известно, появляется при дисбактериозе кишечника наряду со снижением антагонистических свойств.

Возрастание суммарной протеолитической активности тесно связано с увеличением количественного содержания многих видов условно-патогенных бактерий в кишечнике и/или с возрастанием доли бактерий, продуцирующих протеолитические энзимы, колонизирующих стенку кишечника [11, 12].

Способность продуцировать IgА протеиназы характерна в основном для патогенных микроорганизмов и является тем условием, которое обеспечивает существование микробов на слизистых поверхностях [10].

Патогенность микробных протеиназ обусловлена не только их деградирующей активностью в отношении антител, но и способностью непосредственно повреждать эпителиальные клетки слизистых оболочек и активировать гемокоагуляционные механизмы в очаге воспаления [15, 16, 17]. Некоторые из бактериальных протеиназ способны снижать жизнеспособность энтероцитов кишечника и повреждать защитный барьер слизистых [18, 19]. Протеолитическая активность исследовалась при патологических состояниях. Так, изучен протеолитический потенциал фекалий при колитах, болезни Крона, в детском возрасте — при кишечной инфекции и дисбактериозах [11, 12, 20, 21, 22, 23]. Было показано, что положительные протеолитические (казеинолитические) пробы, причем высокой степени активности, чаще выявлялись в группе детей с превалирующим выделением различных видов условно-патогенных бактерий и выраженными изменениями микроэкологии кишечника [11]. Протеолитическая активность фекалий нарастала с увеличением содержания в фекалиях гемолитических E. Coli, бактерий рода Proteus, Staphyloccocus и их ассоциаций с псевдоманадами, клебсиеллами, серрациями, гафниями и грибами рода Candida. Во всех случаях, когда в микрофлоре находили бактерии рода Proteus в количестве 5 lg КОЕ/г и выше, протеолитическая активность супернатантов была высокой.

Особый интерес представляет исследование, в котором изучалась Ig-расщепляющая активность микрофлоры кишечника по профилю протеиназ в норме и при патологических состояниях [12]. Выявлено, что условно-патогенная микрофлора обладает более выраженным агрессивным потенциалом, обусловленным Ig-протеолитической активностью по сравнению с бифидофлорой. Уровень иммуноглобулин — расщепляющей активности фекалий у детей с нарушениями микроэкологии кишечника — был выше, чем у детей с эубиозом.

Таким образом, методы, позволяющие оценить уровень протеолитической активности фекалий, косвенно характеризуют возникающий дисбаланс в составе не только фекальной, но и пристеночной тонко- и толстокишечной микрофлоры, показывают ее качественные изменения.

Нами проведено исследование Ig-расщепляющей (протеолитической) активности фекалий у 133 детей с хронической гастродуоденальной патологией. Для изучения активности протеиназ, дети были разделены на 3 группы. Первую группу (55 больных) составили дети с неэрозивными гастродуоденитами, вторую группу (31 больной) — больные эрозивными гастродуоденитами, третью — дети с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки (33 человека). Результаты представлены в таблице 2.

Активность протеолитических ферментов у детей с гастродуоденальной патологией

Протеоли-тическая активность ферментов

Группы детей с гастродуоденальной патологией

Микробиологическое исследование, которое позволяет оценить состав микрофлоры кишечника – концентрацию и соотношение "полезных", условно-патогенных и патогенных микроорганизмов в кале, определить специфическую активность основных пробиотиков в отношении выявленных микроорганизмов и их чувствительность к бактериофагам и антибиотикам. К нормальной микрофлоре кишечника ("полезные" бактерии) относятся лактобактерии, бифидобактерии, энтерококки, кишечные палочки (типичные), анаэробная флора (бактероиды). Условно-патогенная флора – это энтеробактерии, неферментирующие бактерии, стафилококки, анаэробные бактерии (клостридии), грибы. Патогенными микроорганизмами являются сальмонеллы, шигеллы, патогенные эшерихии. При выявлении патогенных и/или условно-патогенных микроорганизмов будет определена их чувствительность к антимикробным препаратам (антибиотикам и бактериофагам) и пробиотикам. При обнаружении микроорганизмов, составляющих нормальную микрофлору, чувствительность к антибиотикам и бактериофагам не определяется, т.к. не имеет диагностического значения.

Дисбиоз кишечника, определение пробиотиков-антагонистов.

Синонимы английские

Intestinal dysbiosis, antagonistic activity of probiotics and bacteriophage sensitivity test, Intestinal dysbacteriosis.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Исследование рекомендуется проводить до начала приема антибиотиков и других антибактериальных химиотерапевтических препаратов.
Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить (по согласованию с врачом) прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.), и препаратов, влияющих на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.

Общая информация об исследовании

Дисбактериоз (дисбиоз) кишечника – это нарушение состава и количественного соотношения бактериальных и грибковых микроорганизмов желудочно-кишечного тракта. В норме слизистая оболочка ЖКТ является средой обитания так называемых комменсальных микроорганизмов, обеспечивающих целый ряд защитных функций в обмен на микронутриенты, используемые человеком. Большинство кишечных комменсалов относятся к родам Lactobacillus, Bifidobacterium и Bacteroides (облигатные бактерии), хотя состав и количество микроорганизмов сильно варьируются в зависимости от отдела ЖКТ. Так, желудок характеризуется наименьшей плотностью бактерий, среди которых преобладают Lactobacillus, Streptococcus и Helicobacter pylori. В тонкой кишке обнаруживается до 10 3 -10 6 КОЕ/мл бактерий, преимущественно Streptococcus и Lactobacillus. Наибольшая плотность комменсальных микроорганизмов наблюдается в толстой кишке (10 8 -10 9 КОЕ/мл), где преобладают Bacteroides, Clostridium, Fusobacterium и Bifidobacterium. Комменсальные микроорганизмы находятся в динамическом взаимодействии с кишечным эпителием и, таким образом, являются механическим препятствием для инвазии патогенов. Кроме того, они секретируют ряд противомикробных соединений (например, дефензины). Бактерии-комменсалы способны регулировать иммунный ответ слизистых оболочек кишечника и в некоторых случаях подавлять воспалительные, в том числе аллергические, реакции. Нарушение баланса микробиоты возникает в результате длительного или бесконтрольного лечения антибактериальными препаратами, при нарушении моторики ЖКТ (послеоперационный период, прием слабительных препаратов), мальабсорбции (хронический алкоголизм, хронический панкреатит) и при некоторых других состояниях. Дисбактериоз может приводить к развитию заболеваний ЖКТ и других органов. Так, в настоящее время получены данные о его роли в патогенезе болезни Крона, неспецифического язвенного колита и целиакии, а также синдрома хронической усталости и атопического дерматита.

Основным способом диагностики дисбактериоза является микробиологический метод, при котором производят качественную и количественную оценку облигатных, условно-патогенных и патогенных микроорганизмов в кале. На основании результатов исследования делают вывод о дефиците облигатных микроорганизмов или об избыточном росте условно-патогенных или патогенных бактерий. Микробиологическое исследование – это один из наиболее специфических и чувствительных методов исследования, применяемых при диагностике дисбактериоза. Следует, однако, помнить, что бактериологический состав кала (он используется в качестве биоматериала) несколько отличается от бактериологического состава слизистой оболочки кишки. Кроме того, результат теста может зависеть от многих других факторов, таких как недавнее употребление антибактериальных препаратов, продуктов, богатых пробиотиками, или слабительных средств.

С учетом растущей устойчивости условно-патогенных и патогенных микроорганизмов к антибактериальным препаратам все большую роль в терапии дисбактериоза играют альтернативные методы лечения с помощью пробиотиков. Пробиотики – это группа препаратов, содержащих бактерии-комменсалы, или дрожжевые грибы. Считается, что они защищают организм от избыточной условно-патогенной и патогенной микробиоты. Совокупность защитных свойств пробиотиков в отношении какого-либо микроорганизма называется антагонистической активностью и может быть определена с помощью микробиологического исследования. В ходе анализа оценивается антагонистическая активность основных используемых в гастроэнтерологической практике пробиотиков. Определение антагонистической активности пробиотиков проводят перед назначением указанных препаратов для лечения дисбактериоза. Оно может быть дополнено анализом на чувствительность выявленных микроорганизмов к антибиотикам и бактериофагам.

Результат анализа оценивают с учетом дополнительным лабораторных и инструментальных данных.

Для чего используется исследование?

Для диагностики и лечения дисбактериоза кишечника, контроля его лечения;
чтобы установить причины кишечных расстройств;
для подбора рациональной терапии антибиотиками.

Когда назначается исследование?

При обследовании пациента после длительного курса лечения антибактериальными препаратами;
при обследовании пациента с указанием на бесконтрольный прием антибактериальных препаратов и слабительных средств в анамнезе;
при выявлении устойчивости условно-патогенных и патогенных микроорганизмов к антибактериальным препаратам;
при обследовании пациента с хроническим панкреатитом, хроническим алкоголизмом и другими состояниями, сопровождающимися мальабсорбцией;
при хронической диарее;
после долгого лечения антибиотиками, глюкокортикостероидами, иммунодепрессантами, химиотерапевтическими препаратами;
при аллергических заболеваниях, которые плохо поддаются лечению (например, атопическом дерматите);
после воздействия химических веществ или ионизирующей радиации – если есть симптомы дисфункции кишечника;
при длительном периоде выздоровления после острых кишечных инфекций.

И все бы хорошо, и все понятно — если хороших микробов мало, плохих — много, значит, это он и есть дисбактериоз. Значит, он-таки не дает бедному дитю жить спокойно да расти всем на радость. Значит, нужно хороших бактерий попить, а плохих — уничтожить, ну, специальными антибиотиками, например, или бактериофагами. И все — дело в шляпе. Но не тут-то было…

То и дело просачивается к родителям информация, что, оказывается, нет никакого дисбактериоза! Дескать, и за рубежом его не признают, и диагноза такого нет, а врач, который ставит дисбактериоз, — и не врач вовсе! Голова от этого уже совсем идет кругом… Что же делать бедным родителям в этом информационном шторме? Какие ориентиры искать? Да и, в конце концов, отчего ж тогда так некрасиво какает ребенок, если не от дисбактериоза?

Так вот, на сегодняшний день существует уже очень много разных публикаций о том, что кишечная флора действительно очень нужна и очень важна, что от ее состояния много чего зависит. Очень интересны в этом отношении результаты исследований, в которых крыс выращивали в совершенно стерильных условиях, получая таким образом гнотобионтов — животных, которые никогда не контактировали ни с какими микробами. Так вот, оказалось, что гнотобионты — это глубоко дефектные организмы с целым букетом проблем, которые образовались от того, что рост и развитие особи происходили без воздействия различных микробов.

В других исследованиях, уже на людях, было доказано, что кишечные микробы влияют и на формирование иммунитета, и на обмен веществ, и на состояние желудочно-кишечного тракта, и на риск развития сердечно-сосудистых заболеваний и нервных болезней. Даже развитию ожирения, атеросклероза, бронхиальной астмы, рака кишечника и болезни Паркинсона могут способствовать определенные изменения микробиома. И когда ученые описывают какие-либо изменения в составе кишечной микрофлоры, то часто в своих статьях используют термин дисбиоз. Но не как некий диагноз, а как совершенно абстрактное понятие, под которым понимают, что есть определенная условная норма микрофлоры у человека — его особая, личная, индивидуальная норма, оптимальная именно для его организма (а не общая для всех), которая сформировалась в процессе всей его жизнедеятельности под воздействием его генов и условий среды обитания, — но в какой-то момент количественное и качественное соотношение микроорганизмов в кишечнике изменилось и возник этот самый дисбиоз.

А возникает он не сам по себе, а под воздействием определенных факторов: приема антибиотиков, кишечной инфекции, серьезных заболеваний, резкого изменения характера питания и т.д. И вот при воздействии этих факторов у человека может произойти нарушение баланса как между отдельными представителями кишечной микрофлоры, так и между всеми микробами и организмом человека. В свою очередь, это нарушение баланса может повлечь за собой изменения в организме, способствующие развитию тех болезней, о которых было сказано выше. Вот что значит дисбиоз с точки зрения современного западного ученого.

На данный момент это направление очень бурно развивается — уже многое стало известно о микроэкологии кишечника и других участков человеческого тела (слизистой рта, половых органов, дыхательной системы, кожи и т.д.). И первое, что стало понятно ученым: на сегодняшний день о микробиоме человека известно еще очень мало. Но кое-что все-таки известно.

Если говорить о микрофлоре кишечника, то мы знаем, что населяют пищеварительный тракт более 1000 (!) различных видов микроорганизмов, а общее количество всех микробов составляет многие триллионы. Считается, что в организме среднестатистического взрослого человека может находиться несколько килограммов бактерий. И расположены они не хаотично, а в особом порядке. Так, выделяют просветную флору, которая находится непосредственно в просвете кишечника вперемешку с перевариваемой едой, и пристеночную, которая покрывает всю слизистую оболочку кишечника, образуя биопленку. В этой биопленке есть несколько слоев, в каждом из которых находятся свойственные этому слою микробы. Между этими микробами существует очень тонкое взаимодействие: приспосабливаясь друг к другу, они помогают друг другу выживать, но в то же время не дают соседям слишком сильно размножаться (отдельные виды бактерий выделяют особые вещества — бактериоцины, которые угнетают избыточное размножение других видов микроорганизмов).

Что интересно, о большинстве из сотен видов микробов, населяющих кишечник, ученые узнали совсем недавно, так как многие из них не высеваются и не растут на применяемых питательных средах. Поэтому данные об их существовании получили только благодаря высокотехнологичным генетическим методам — секвенированию рибосомальной РНК бактерий и полимеразной цепной реакции (ПЦР). То есть, проще говоря, расшифровывая генетический код этих бактерий.

Причем для исследования состава именно кишечной флоры западные ученые берут кишечное содержимое или даже образцы слизистой оболочки кишки (чтобы изучить именно пристеночную флору). Фекалии же используют очень редко, так как для этой цели они мало подходят: их микробный состав может существенно отличаться от состава микрофлоры различных отделов кишечника. А если даже используют кал для анализа, то делают не посев (помните: большинство микробов кишечника не растет на питательных средах), а все ту же ПЦР.

Для определения же количества микробов в тонкой кишке используют так называемые дыхательные водородные тесты. При этом исследовании пациенту дают выпить специальный раствор и после этого, по количеству водорода в выдыхаемом воздухе, с помощью специальных аппаратов определяют, много или мало бактерий в тонкой кишке. Как видите, изучение состава микрофлоры кишечника человека — дело очень непростое и дорогостоящее, поэтому в практической деятельности даже за рубежом применяется не так уж часто, оставаясь уделом научно-исследовательских учреждений.

Поэтому на сегодняшний день, с учетом количества и разнообразия микроорганизмов, населяющих кишечник, а также сложности изучения закономерностей формирования микробиома на протяжении жизни человека, мы еще слишком далеки от того, чтобы четко объявить, что является нормой микрофлоры, а что — патологией. Возможно, что для каждого отдельно взятого человека в отдельный период его жизни существует свой оптимум, который необходим организму для поддержания здоровья и полноценного функционирования.

Надеюсь, читателю уже стало понятно, на что мы намекаем. Микробиом кишечника — это многогранная и многоуровневая экологическая система, насчитывающая сотни видов различных микроорганизмов, состоящих в очень сложных взаимоотношениях. И делать выводы о ее состоянии, высевая фекалии на питательные среды и определяя из тысячи всего лишь полтора десятка видов бактерий, — бесперспективно и бессмысленно. Да и как оценивать полученный результат, если научно обоснованных данных о норме на самом деле не существует (ну подумайте сами, как может быть практически одинаковой норма для всех возрастных периодов — начиная с грудного возраста и заканчивая зрелостью и старостью?!).

В контексте обсуждаемой темы не можем не упомянуть об одном очень интересном исследовании, проведенном российскими коллегами. В этой научной работе сравнивали результаты посева на дисбактериоз, полученные при изучении одного и того же образца кала в разных лабораториях. Было показано, что различные лаборатории демонстрируют совершенно несовпадающие результаты, что говорит об очень низкой воспроизводимости и крайней ненадежности данного метода исследования.

Однако из всего сказанного выше не следует делать вывод, что любые исследования кала, в том числе бактериологические, лишены смысла. Так, например, при кишечной инфекции (сальмонеллезе, дизентерии) можно выделить определенного патогенного возбудителя из кала, доказав тем самым его причастность к развитию диареи. В стуле при помощи микроскопии также выявляют яйца кишечных гельминтов и цисты простейших (лямблий, амеб). В копрограмме можно обнаружить признаки нарушения функции поджелудочной железы и т.д.

дисбиоз (в нашем варианте — дисбактериоз) таки существует в современной мировой медицинской литературе, но не как диагноз, а как достаточно широкое понятие;
микробиом человека крайне сложен, и для его исследования используют не посев кала на дисбактериоз, а очень сложные высокотехнологичные методы исследования;
посев кала на дисбактериоз — это не более чем пустая трата времени и денег, а также запутывание врача и уход от истинной причины заболевания, плюс — повод для пустых переживаний родителей совершенно здоровых детей;
высеваемые из кала стафилококки, клебсиеллы, кишечные палочки и т.д. — это чаще всего не повод для беспокойства, а компоненты нормальной микрофлоры кишечника.

Читайте также: