Менингококковая инфекция тест-системы пцр

Информация об исследовании

Нейссерия менингитидис
Neisseria - грамотрицательные диплококки, под микроскопом напоминают кофейные зёрна. Род включает много патогенов для человека, например: Neisseria меningitidis (менингококк), который является одним из возбудителей бактериального менингита и причиной менингококкового сепсиса.
Основной путь передачи: воздушно-капельный.
Источник инфекции: носители и больные с признаками генерализованных поражений.
Наибольший процент заболевших составляют дети до 5-ти лет.
Инкубационный период: 2-6 дней.

Клинически выделяют следующие формы:
1.Локализованные формы (менингококконосительство и острый назофарингит)
2.Генерализованные формы (менингит, менингоэнцефалит и менингококцемия)
3.Редкие формы (эндокардит, пневмония, полиартрит).

При локализованной форме отмечается субфибрилитет, головная боль, катаральные проявления в виде кашля, насморка со слизисто-гнойными выделениями, гиперемией зева. Заболевание может нарастать и переходить в генерализованную форму, либо длиться 5-7 дней и заканчиваться выздоровлением. Генерализованная форма характеризуется высокой температурой тела (до 40 градусов), головной болью, рвотой. При тяжелых формах - нарушение сознания, симптомы раздражения мозговых оболочек, присоединение геморрагических проявлений (в виде сыпи, кровоизлияний в слизистые оболочки и внутренние органы). Крайне тяжелое течение менингококковой инфекции обусловлено возникновением осложнений в результате нарушений жизненноважных функций организма. В ряде случаев возможен летальный исход заболевания.
Одним из методов диагностики менингококковой инфекции является ПЦР.

Показания к исследованию:
-подозрение на менингокковую инфекцию
-обследования в эпидемиологических очагах и группах риска по развитию заболевания
-выявление бактерионосительства

Биологический материал: кровь (ЭДТА), мазок с задней стенки глотки.
Подготовка к исследованию: забор материала для исследования из ротоглотки производится натощак, либо через 2 часа после еды. Анализ проводится до начала антибиотикотерапии или не ранее чем через 2 недели после её окончания.

Гемофилус инфлюенца (Haemophilus influenza) – гемофильная палочка, возбудитель острой антропонозной ифекции. Болеют преимущественно дети до 5 лет, с поражением легких и ЦНС. Эпидемиология.
Источник инфекции: носители гемофильной палочки и больные. Уровень носительства среди взрослых здоровых лиц достигает 90%.
Пути передачи: воздушно - капельный.
Восприимчивость определяется возрастными и генетическими факторами. Так, риск заражения для детей в возрасте от 6-ти месяцев до 3-х лет в 6 000 раз выше, чем в других возрастных группах.
Клиническая картина.
Гемофильная инфекция может протекать в разных формах:
-В форме ОРЗ (ринофарингит) - не имеет специфических особенностей.
-Пневмония - встречается у детей до 2-х лет, начинается с катаральных явлений, выраженной интоксикации и высокой лихорадки. Физикальные данные такие же, как и при других бактериальных пневмониях. Процесс чаще локализуется в прикорневых отделах лёгких, возможно абсцедирование. Картина крови не носит выраженного воспалительного характера.
-Менингит характеризуется длительной лихорадкой, частым увеличением печени и селезёнки, катаральными явлениями (ринофарингит). Менингиальные симптомы появляются на 2-4 день болезни. Возможно затяжное волнообразное течение менингита с развитием гидроцефалии. Церебральная жидкость гнойная, цитоз умеренный, в пределах 2-3тыс./мкл. Воспалительные изменения в крови выражены слабо.
-Эпиглотит – воспаление надгортанника с развитием асфиксии.
-Возможны также целлюлит – воспаление жировой ткани, гнойный артрит, остеомиелит, отит, сепсис. Диагностика возможна только с использованием бактериологического метода и ПЦР. ПЦР (полимеразно - цепная реакция) – это метод, который позволяет найти в исследуемом материале небольшой участок генетической информации (ДНК) любого организма среди огромного количества других участков и многократно размножить его. Метод ПЦР основан на принципе репликации ДНК.

Биологический материал: кровь(ЭДТА), мазок из зева (задняя стенка глотки).

Подготовка к исследованию: забор материала из зева проводится натощак, либо через 2 часа после еды. Анализ проводится до начала антибиотикотерапии или не ранее чем через 14 дней после её окончания.

Стрептококкус пневмонии.
Streptococcus pneumonia – является возбудителем заболеваний, объединенных в группу пневмококковых инфекций. Возбудитель представляет собой грамположительные кокки, при обитании в организме образуют капсулу. Паразит дыхательных путей человека. Вызывает острые пневмонии, бронхит, отит, гайморит у взрослых и детей.

Пути передачи:
1.Бронхогенный и этому способствуют аспирация, вдыхание микробов из окружающей среды.
-медицинские манипуляции: бронхоскопия, интубация трахеи
-переселение патогенной флоры из верхних отделов дыхательной системы в нижние отделы.
-ингаляция лекарственных веществ из обсеменённых ингаляторов
2.Гематогенный путь – распространение инфекции с током крови. Встречается реже.
-при внутриутробном заражении.
-септических процессах.
3.Лимфогенный путь. Встречается очень редко.

Факторы, предрасполагающие к развитию пневмонии.

Для раннего возраста:
-внутриутробная гипоксия и асфиксия
-родовая травма
-пневмопатии новорождённых
-гипотрофии
-гиповитаминозы

Для школьного возраста:
-хронические очаги инфекции в носоглотке
-рецидивирующие бронхиты
-иммунодефицитные состояния

Взрослые:
-курение и хронический бронхит
-хронические болезни легких
-эндокринные заболевания
-сердечная недостаточность
-иммунодефицитные состояния
-хирургические операции
-длительное пребывание в горизонтальном положении

Клиническая картина. Пневмония характеризуется резким подъёмом температуры, кашлем с обильным выделением гнойной мокроты, в некоторых случаях плевральной болью. При физикальном обследовании отмечается укорочение перкуторного звука, усиление голосового дрожания, жесткое дыхание, сначала сухие затем влажные крепетирующие хрипы, затемнение на ренгенограмме.
Одним из лабораторных методов диагностики пневмококковой инфекции является - ПЦР.
Подготовка к исследованию: забор мазка из зева берется натощак или через 2 часа после приема пищи. Анализ проводится до начала антибиотикотерапии или не ранее чем через 2 недели после её окончания.

Возбудителем менингококковой инфекции является Neisseria meningitidis (менингококк). Менингококк колонизирует заднюю стенку носоглотки человека и в зависимости от вирулентности штамма и резистентности зараженного лица вызывает инфекционный процесс с широким спектром клинических проявлений: бессимптомное носительство, назофарингит и генерализованную форму – менингококцемию и/ или менингит. Менингококковая инфекция поражает лиц всех возрастов, но чаще (70%) болеют дети. Показатель летальности составляет в среднем 10%, что определяет высокую социальную значимость заболевания. Капсульные штаммы менингококка в зависимости от химического строения капсульного полисахарида делятся на ряд серологических групп: А, В, С, X, Y, Z, W-135, 29-E, H, I, K, L. Более чем 90% случаев генерализованных форм менингококковой инфекции обусловлены штаммами серогрупп А, В и С, значительно реже – штаммами серогрупп X, Y и W-135, остальные серогруппы не представляют эпидемиологического интереса. Определение серогруппы – важнейшая процедура для выбора адекватного вакцинного препарата. Все менингококки экспрессируют на своей поверхности один из аллельных вариантов белков наружной мембраны 2 или 3 класса (PorB). Большинство менингококков экспрессируют белки 1 класса (PorA). Антигенная структура белка PorB определяет серотип штамма, белка PorA – серосубтип. На основании химической структуры капсульного липополисахарида определяют иммунотип. Антигенная характеристика может включать и некоторые другие АГ: Ора и Орс (белки наружной мембраны 5 класса), пили, поверхностный белок FetA.

Показания к обследованию

• Диагностические исследования проводят в условиях стационара при подозрении на гнойный менингит и/или генерализованную форму менингококковой инфекции;
• исследования по эпидемическим показаниям проводят в очаге генерализованной формы менингококковой инфекции среди контактировавших с больным и имеющих клинические проявления назофарингита.

Материал для исследования

• Кровь – микроскопическое исследование, культуральное исследование;
• СМЖ – микроскопическое исследование, культуральное исследование, выявление ДНК, выявление АГ;
• мазки из ротоглотки и носа – культуральное исследование;
• сыворотка крови – выявление АГ, определение специфических АТ

• Возбудители гнойных менингитов другой этиологии: Streptococcus pneumonia, Haemophilus influenza, Staphylococcus aureus и др.;
• при исследовании носоглотки – пигментирующие нейссерии Neisseria subflava, Neisseria flavescens, Neisseria mucosa, Neisseria sicca, Neisseria lactamica.

Лабораторная диагностика генерализованной формы менингококковой инфекции включает микроскопию биологического материала, посев биологического материала с дальнейшей культуральной и биохимической идентификацией возбудителя, определением антибиотикочувствительности; обнаружение специфических генетических фрагментов менингококка и его АГ, обнаружение специфических АТ.

Посев СМЖ и крови на питательные среды при дальнейшей инкубации в течение 24 ч при 37 оС в атмосфере с 5–10% СО2 и повышенной влажностью позволяет выявить характерные тинкториальные свойства патогена. Исследование рекомендуется проводить в активной фазе заболевания (первые два дня после поступления в стационар) до начала интенсивной антибактериальной терапии.

При определении сахаролитической активности проводят учет результатов посева чистой культуры на плотные питательные среды с углеводами. Метод дает возможность дифференцировать различные виды нейссерий и некоторые другие виды микроорганизмов (таблица 16). Иногда наблюдается вариабельность сахаролитической активности у различных штаммов одного и того же вида.

Уточнение биохимических свойств менингококков проводят с использованием наборов реагентов для расширенного изучения ферментативной и метаболической их активности, что в течение 2-х часов позволяет определить видовую принадлежность возбудителя.

Определение серогруппы менингококков проводят в реакции агглютинации на стекле с набором агглютинирующих серогрупповых антисывороток (серогруппы А,В,С,X,Y,Z,W-135,29E). Реакцию проводят только с чистой культурой менингококков, прошедшей все этапы идентификации. Менингококки серогрупп А, В и С наиболее часто являются причиной возникновения генерализованных форм менингококковой инфекции, реакцию агглютинации проводят в первую очередь с антисыворотками к менингококкам этих серогрупп. Отсутствие реакции с одной из основных серогрупповых АТ, указывает на необходимость продолжения проведения аналогичных исследований с другими специфическими антисыворотками (X, Y, Z, W-135, 29E). Только в том случае, если подтвержденный всеми тестами штамм менингококка не показал положительного результата в реакции агглютинации с полным набором агглютинирующих антисывороток, его следует отнести к категории неаггютинирующегося штамма (НА).

Для обнаружения АГ в СМЖ и/или сыворотке крови используют реакцию латекс- агглютинации. Исследование нативного ликвора (экспресс-метод) проводится при наличии в нем признаков гнойного воспаления и/или при микроскопическом обнаружении возбудителей. Использование реакции позволяет в кратчайшие сроки (15–20 мин) выявить специфические АГ менингококков самых распространенных серогрупп (А, В, С, У, W-135). Рекомендуется проводить исследование в активной фазе заболевания (первые два дня после поступления в стационар).

Для выявления ДНК патогена используется СМЖ и/или свежая чистая культура Neisseria meningitidis, выросших на чашки Петри. Обнаружение специфических генетических фрагментов микроорганизма выполняют с использованием ПЦР. Метод обладает высокой диагностической чувствительностью и специфичностью, позволяет выявлять в клиническом образце микроорганизмы, содержащиеся в единичных количествах или в нежизнеспособном состоянии, характеризуется высокой воспроизводимостью и сжатыми сроками выполнения исследования (в течение нескольких часов).

Показаниями к проведению исследований для выявления ДНК при диагностике бактериальных менингитов являются:

• отрицательные результаты диагностики иными методами, особенно в случае исследования образцов СМЖ после проведения массивной антибиотикотерапии или на поздних сроках болезни;
• необходимость получения срочного ответа об этиологии возбудителя;
• исследование образцов материала, доставленных в замороженном состоянии или фиксированных этанолом.

Детекция специфических АТ в сыворотке крови при диагностике менингококковой инфекции проводят с использованием РНГА. Рекомендуется проводить исследование дважды: в активной фазе заболевания (первые два дня после поступления в стационар) и на 12–14 день заболевания. Диагноз считается подтвержденным при нарастании титров АТ в четыре и более раза в пределах указанного периода.

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

Copyright ФБУН Центральный НИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, 1998 - 2020

! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

Менингококковая инфекция носит спорадический характер, однако, несмотря на это, она является одной из самых опасных и непредсказуемых по молниеносности течения. 1/3 всех случаев составляют гипертоксические, молниеносные формы, которые часто заканчиваются смертью больного. Течение менингококковой инфекции зависит от ранней диагностики и адекватной стартовой терапии на всех этапах лечения. Диагностика менингококковой инфекции основана на эпидемиологических данных, данных, полученных в результате опроса больного, общеклинических и лабораторных методах исследования.

При помощи бактериоскопии можно обнаружить возбудитель и провести анализ клеточного состава ликвора. Бактериологическое исследование проводится для получения чистой культуры менингококков (Neisseria meningitidis). Серологический метод позволяет выявить бактериальные антигены и антитела в сыворотке крови.

Материалом для исследования являются слизь из носоглотки, спиномозговая жидкость (ликвор), кровь и гной, соскоб кожи из области геморрагических высыпаний.

Рис. 1. На фото тяжелая форма менингококкового сепсиса у детей.

Диагностика менингококковой инфекции с использованием общеклинических методов исследования

• Менингококковый назофарингит протекает с небольшим лейкоцитозом и нормальной или слегка увеличенной СОЭ. При диагностике менингококкового назофарингита используются эпидемиологические и данные бактериологического обследования. На основании только клинических данных данное заболевание диагностировать чрезвычайно трудно.
• Генерализованные формы заболевания протекают с выраженным нейтрофильным лейкоцитозом и значительным сдвигом в формуле, из периферической крови исчезают эозинофилы, увеличивается СОЭ.
• Токсическая форма менингококцемии протекает с тромбоцитопенией и небольшой анемией. О сгущении крови в сосудистом русле говорит повышенный уровень гематокрита. Развившаяся лейкопения говорит о нарастании тяжелой интоксикации и является плохим прогностическим признаком. В крови падает уровень тромбоцитов, изменяется коагулограмма. Появляются признаки метаболического ацидоза и нарушения электролитного состава крови.
• Появление в моче следов белка, цилиндров и единичных эритроцитов говорит о токсическом поражении почек. Значительное увеличение белка, зернистых цилиндров и эритроцитов говорит о развитии острой почечной недостаточности.

При массовой гибели менингококков выделяются эндотоксины, воздействие которых на внутренние органы и системы организма определяют клиническую картину заболевания, тяжесть которого диктует применение определенного объема исследований.

Рис. 2. На фото менингококцемия у детей.

Исследование спинномозговой жидкости с целью диагностики менингококкового менингита

Исследование спинномозговой жидкости при диагностике менингита имеет решающее значение. Забор спинномозговой жидкости осуществляется при люмбальной пункции.

• При явлениях менингизма клеточный состав спинномозговой жидкости остается нормальным, отмечается ее незначительное повышенное давление.
• В первые часы заболевания (фаза серозного воспаления) ликвор остается прозрачным, отмечается небольшое повышение клеточных элементов (до 50 — 200 клеток) с преобладанием лимфоцитов. Антибиотикотерапия в этот период всегда дает положительный эффект.
• К концу первых суток серозное воспаление переходит в гнойное. Спиномозговая жидкость становится мутной. Цитоз достигает высоких цифр (несколько тысяч в 1 мм 3) . До 90% его клеточного состава составляют нейтрофиллы. Содержание белка невысокое. Показатель уровня сахара умеренно снижен. Уровень глобулинов в ликворе значительно повышен (реакция Нонне-Апельта резко положительная).

Спиномозговая жидкость подлежит общеклиническому, бактериологическому и биохимическому исследованию, для чего готовится 3 пробирки. Ликвор в 4-й пробирке остается в отделении. За ним устанавливается наблюдение на предмет образования пленки, характерной для туберкулезного менингита.

Рис. 3. На фото слева вид ликвора при гнойном менингите. На фото справа менингококки из спинномозговой жидкости (бактериоскопия) больного менингитом.

Диагностика менингококковой инфекции с использованием биохимических методов исследований

При генерализованных формах менингококковой инфекции исследуется кислотно-основное состояние и электролиты плазмы крови. При менингококковом сепсисе контролируются показатели свертывающей системы крови и проводятся почечные тесты.

Диагностика менингококковой инфекции с использованием бактериоскопического метода исследования

Анализ на туберкулез методом прямой бактериоскопии является наиболее простым и быстрым способом обнаружения микобактерий в исследуемом материале. Выявить наличие возбудителя можно в течение одного часа. Данная методика используется для экспресс диагностики.

Для бактериоскопического исследования применяется мазок, взятый из носоглотки, толстая капля крови и ликвор. Мазки окрашиваются по Граму или обрабатываются метиленовым синим.

Менингококки представляют собой диплококки (сдвоенные кокки бобовидной формы) размером от 0,6 до 0,8 мкм. При окрашивании по Граму приобретают розовую окраску (грамотрицательные). Располагаются внутри и внеклеточно.

• Мазок из носоглотки берется натощак специальным стерильным тампоном, укрепленным на алюминиевой проволоке.
• При приготовлении мазков из спинномозговой жидкости обращают внимание на внешний вид биологического материала. При гнойном характере ликвора мазки готовятся из осадка, который получают при центрифугировании материала.
• Кровь для бактериоскопического исследования берется при ее заборе из вены. Далее готовится препарат толстой капли, который окрашивается метиленовым синим.

Рис. 4. На фото Neisseria meningitidis (вид под микроскопом). Окраска по Граму.

Рис. 5. Приготовление мазков толстой капли. В препарате (фото справа) видны менингококки, окрашенные в темно-синий цвет (окраска метиленовым синим).

Рис. 6. Менингококки в цитоплазме нейтрофильного лейкоцита у больного тяжелой генерализованной формой менингококковой инфекции.

Диагностика менингококковой инфекции с использованием бактериологического метода исследования

Анализ на менингококк методом посева биологического материала (культуральный метод) более чувствителен, чем бактериоскопия. Для исследования используются мазки носоглоточной слизи, кровь, плевральная жидкость и ликвор. Ответ врач получает через 4 суток.

Менингококки хорошо растут на средах, которые содержат нативный белок (сыворотка и кровь, асцитическая жидкость, яичный белок). Оптимальная температура роста 38-36 ° С. На простых средах микробы не растут. Neisseria meningitidis являются аэробами (живут и развиваются только в присутствии кислорода). Для получения чистой культуры в питательные среды добавляют антибиотики, которые подавляют рост сопутствующей микрофлоры. После получения роста колоний менингококков проводится тест на чувствительность к антибиотикам.

Рис. 7. Neisseria meningitidis при росте на сывороточном агаре. Колонии менингококков слегка выпуклые, полупрозрачные, с гладкой поверхностью и ровными краями, в проходящем свете имеют голубоватый оттенок.

Диагностика менингококковой инфекции с использованием серологических методов исследования

Серологические исследования используются для выявления антител в организме человека, вырабатываемых против антигенов менингококков. Данная методика используется для ретроспективной диагностики и применяется с интервалом от 7 до 12 дней. С целью обнаружения антигенов возбудителя используются реакции агглютинации.

В последнее время для выявления специфических антител в крови больного или спинномозговой жидкости стали применяться экспресс-методики:

• методика иммунофлюоресценции,
• реакция энзиммеченых антител,
• реакция преципитации в геле,
• иммуноэлектрофорез с групповыми преципитирующими антисыво­ротками,
• методика встречного иммуноэлектрофореза (ВИЭФ),
• иммуноферментный анализ (ИФА),
• радиоиммунологические методы.

к содержанию ↑

Применение ПЦР для диагностики менингококковой инфекции

Диагностика коклюша с применением ПЦР (полимеразной цепной реакции) является самой перспективной методикой в современных условиях. Высокая чувствительность теста позволяет выявлять ДНК бактерий, даже если в исследуемом материале их несколько десятков и даже единиц. Данный метод является высокоспецифичным. Его особая ценность заключается в том, что выявление менингококков в биологическом материале становится возможным, когда другие методы исследования дают отрицательный результат.

Рис. 8. Методика ПЦР является высокоспецифичной и позволяет выявлять ДНК бактерий, даже если их в исследуемом материале несколько десятков и даже единиц.

Использование дополнительных методов исследования

Из дополнительных методов исследования применяются электрокардиограмма (ЭКГ), фонокардиография (ФКГ), электроэнцефалограмма (ЭЭГ), компьютерная томография головного мозга (КТ), нейросонография (НСГ), цветовое доплеровское картирование и др.

При необходимости к обследованию больных привлекаются врачи разных специальностей — окулисты, отоларингологи, невропатологи.

Рис. 9. Электроэнцефалограмма позволяет выявлять структурные изменения в головном мозге.

Рис. 10. Компьютерная томография головного мозга позволяет выявлять наличие гематом, гидроцефалию и другие объемные поражения, локализующихся в головном мозге.

Рис. 11. Электрокардиограмма позволяет исследовать и регистрировать электрические поля, образующиеся при работе сердца.

Рис. 12. Нейросонография (ультразвуковое исследование) используется для исследования у детей в возрасте до 1-го года структур полости черепа.

Дифференциальная диагностика менингококковой инфекции

• Менингококковый менингит следует дифференцировать с менингитами, вызванными стафилококками, стрептококками, клебсиеллами, синегнойной и гемофильной палочками, грибами, тяжелой формой дизентерии, сальменеллеза и брюшного тифа.
• Менингококцемию, протекающую с сыпью, следует отличать от краснухи, кори, скарлатины, иерсиниоза, геморрагических васкулитов, тромбопенических состояний и сепсиса.
• Менингококковую инфекцию, протекающую с поражением центральной нервной системы, следует дифференцировать от острых респираторных вирусных инфекций, в том числе гриппа, протекающих с явлениями поражения головного мозга и его оболочек.

Рис. 13. На фото менингококцемия у взрослого.

Ранняя диагностика менингококковой инфекции и своевременно начатое лечение обеспечивает благоприятный исход заболевания.

Менингококковая инфекция и гнойные бактериальные менингиты относятся к категории социально значимых инфекций с высокими показателями летальности (10-25%), инвалидизации (до 50%) и вовлечением в эпидемический процесс детей младших возрастных групп (более 50%).

Эпидемиологическая ситуация по менингококковой инфекции в Российской Федерации за последние годы имеет медленную тенденцию к снижению, при этом сохраняется спорадическая заболеваемость.

Развитие бактериального менингита начинается с момента, когда вирулентные микроорганизмы преодолевают защитные барьеры центральной нервной системы, при этом в первую очередь в процесс вовлекается субарахноидальное пространство.

По данным отечественных авторов, основным этиологическим фактором бактериального менингита в Росси является Neisseria meningitides серотипы А и С (примерно 65%), Streptococcus pneumoniae (20%), Haemophilus influenzae тип b (10%), 5% прочие это: Enterobacteriaceae , Listeria monocytogenes и другие.

Структурной особенностью возбудителей являются поверхностные образования – пили, которые снабжены рецепторами, обепечивающие тропную адгезию бактериальной клетки к слизистой оболочке. Кроме того они снабжены наружной оболочкой из полисахаридов, которая определяет такие факторы вирулентности, как невозможность фагоцитоза и препятствует лизису бактерий. Именно по составу полисахарида менингококки классифицируют на 12 серологических групп, из которых только три серогруппы (А,В,С) отвечают за более чем 90% случаев клинически выраженной генерализованной менингококковой инфекции.

Основным биологическим материалом для исследования при бактериальных менингитах служит спинномозговая жидкость и кровь. Для бактериологического подтверждения менингококкового назофарингита и выявления назофарингиального менингококкового носительства исследуют носоглоточную слизь.

В диагностическую цепочку кроме культурального метода исследования включены экспресс методы.

Наиболее простым методом, не требующим сложного оборудования и дорогостоящих реактивов, является метод латекс-агглютинации с применением тест-систем, позволяющий в течение 15 минут дать заключение об отсутствии или наличии в исследуемом материале (СМЖ, ликвор) больного специфических антигенов.

Встречный иммуноэлектрофорез позволяет с помощью специфических антисывороток выявлять полисахаридный антиген возбудителя в СМЖ и сыворотке крови больного уже в первый день исследования материала.

Вспомогательным методом диагностики менингококковой инфекции является реакция непрямой гемагглютинации с "парными" сыворотками крови, постановка которой выявляет динамику нарастания титров специфических антител к менингококку и позволяет определить принадлежность возбудителя к наиболее распространенным серогруппам менингококков (А и С).

Более высокой чувствительностью и специфичностью является ПЦР, которая дает возможность установить этиологический фактор в первые сутки болезни. Кроме этого ПЦР играет важную роль в расшифровке менингитов вирусной этиологии.

По результатам проведенных серологических исследований в 2017-2018 годах отмечаются иммунологические сдвиги в сыворотках крови при обследовании к менингококкам серогруппы А, тогда как положительных сдвигов к менингококкам серогруппы С отмечено не было. Данные серологические исследования указывают на возможное отсутствие циркуляции менингококка серогруппы С и циркуляцию менингококка серогруппы А среди учащихся Республики Марий Эл разных возрастных групп.

Актуальность изучения менингитов определяется с одной стороны высокими показателями заболеваемости, распространенностью носительства, широким спектром этиопатогенов, ростом резистентности возбудителей к наиболее распространенным антибиотикам, а с другой - трудностью диагностики, связанной со сложностью культивирования возбудителей традиционными методами. Поэтому рационально организованная, комплексная, лабораторная диагностика бактериальных менингитов любой этиологии, включающая в диагностическую цепочку все методы исследования: от культивирования до ПЦР метода позволяет достоверно контролировать состояние проблемы этой инфекционной патологии.

исследований микробиологической лаборатории

Об актуальных изменениях в КС узнаете, став участником программы, разработанной совместно с ЗАО "Сбербанк-АСТ". Слушателям, успешно освоившим программу выдаются удостоверения установленного образца.

Программа разработана совместно с ЗАО "Сбербанк-АСТ". Слушателям, успешно освоившим программу, выдаются удостоверения установленного образца.

Обзор документа

Правила взятия образцов биоматериала для лабораторного обследования больных с симптомами менингита, а также контактных лиц (утв. Федеральным медико-биологическим агентством 10 июля 2013 г.)

Менингиты могут иметь как бактериальную этиологию (бактериальные менингиты), так и вирусную (серозные менингиты).

1. При менингитах бактериальных, вызванных Neisseria meningitidis (менингококк), Haemophilus influenzae (гемолитическая палочка) или Streptococcus pneumoniae (пневмококк) с диагностической целью необходимо исследовать:

1.1 образцы спинномозговой жидкости (СМЖ, ликвор) - обязательное исследование.

Определение показаний к проведению люмбальной пункции и ее выполнение осуществляется врачом-клиницистом в первые дни болезни.

1.2 мазки из ротоглотки - как дополнительное исследование в первые 3-4 дня от начала заболевания.

Получение отрицательного результата при исследовании мазка из ротоглотки не является диагностическизначимым и необходимо провести исследование образца СМЖ, ликвора в связи с широким распространением бессимптомного носительства этих возбудителей среди населения разных возрастных групп.

2. При менингитах, вызванных энтеровирусами, с диагностической целью необходимо исследовать не менее двух различных клинических образцов из ниже перечисленных:

2.1 образцы спинномозговой жидкости (СМЖ, ликвор) - обязательно,

2.2 материал из везикул (при их наличии),

2.3 образцы фекалий - две пробы фекалий отбирают в течение 7 дней после начала болезни, но не позднее 14 дней с интервалом 24-48 часов.

2.4. мазки из ротоглотки,

2.5 кровь (сыворотка и/или плазма). Пробы крови для иммунологического исследования берут в виде парных сывороток: первую отбирают как можно раньше после начала заболевания, вторую на 3-4 неделе в стадии реконвалесценции.

Параллельно кровь исследуется на наличие РНК вируса (кровь с ЭДТА), но следует помнить, что возбудитель в крови у больного циркулирует очень непродолжительное время.

3. Клинический материал, подлежащий исследованию от контактных с больным серозным или вирусным менингитом

Для обследования контактных с больным бактериальным менингитом достаточно исследовать только мазок из ротоглотки.

Для обследования контактных с больным менингитом вирусной этиологии можно исследовать мазок из ротоглотки и/или образцы фекалий.

Исследование клинического материала для определения наличия ДНК/РНК возбудителя проводится методом ПЦР в режиме реального времени.

4. Инструкция по правилам взятия клинического материала

Эффективность проведения лабораторного исследования зависит от правильного сбора соответствующих материалов и транспортировки их в лабораторию. Необходимо исключить контаминацию одной пробы от другой.

Для успешного лабораторного исследования необходимо проводить как можно более ранний отбор проб. Для отбора проб используются стерильные контейнеры, пробирки.

Пробы с отобранным материалом помещают в пластиковые мешки так, чтобы избежать протечек и повреждений. Все материалы должны сопровождаться соответствующими документами - направлением на исследование.

Транспортирование проб осуществляется в термоконтейнерах при температуре +2-8°С.

4.1. Спинномозговая жидкость (СМЖ, ликвор)

Взятие материала. Определение показаний к проведению люмбальной пункции и ее выполнение осуществляется в первые дни болезни врачом-клиницистом. СМЖ в количестве не менее 1 мл получают используя одноразовые иглы и одноразовые пластиковые пробирки объемом 1,5 или 2,0 мл.

Условия хранения до момента доставки в лабораторию:

- при температуре +2-8°С - в течение 1 суток;

4.2. Материал из везикул

Взятие материала. Перед взятием материала кожные элементы очищают ватным тампоном, смоченным спиртом, затем прокалывают их у основания стерильной иглой с одноразовым шприцем и отбирают содержимое. Для облегчения процедуры везикула может сдавливаться стерильным инструментом. Собранное содержимое помещают в одноразовые пластиковые пробирки объемом 1,5 или 2,0 мл. Рекомендуется проводить взятие материала из пяти элементов и исследовать их как единый образец.

Условия хранения до момента доставки:

- при температуре +2-8°С - в течение 1 суток;

4.3. Кровь (цельная, плазма)

Взятие материала. Для получения плазмы забор крови проводят натощак или через 3 часа после приема пищи из локтевой вены одноразовой иглой в специальную вакуумную систему (сиреневые крышки - 6% ЭДТА) или одноразовым шприцем в пластиковые пробирки с цитратом натрия (3,8%-ный раствор цитрата натрия в соотношении 1:9). Пробирку закрывают крышкой и аккуратно переворачивают несколько раз вверх дном, чтобы кровь в пробирке тщательно перемешалась с антикоагулянтом (в противном случае кровь свернется, и выделение ДНК/РНК станет невозможным). Гепарин в качестве антикоагулянта использовать нельзя!

Условия хранения до момента доставки:

Образцы цельной крови:

- при температуре 20-25°С - в течение 2 часов;

- при температуре +2-8°С - в течение 12 часов с момента взятия материала для качественного определения нуклеиновых кислот;

Недопустимо замораживание образцов цельной крови.

- при температуре +2-8°С - в течение 5 суток;

4.4. Образцы фекалий

Взятие материала. Забор образцов фекалий производится из одноразовых подгузников (дети младшего возраста) или из одноразовой емкости (чашка Петри, одноразовый пластиковый пакет и т.д.), помещенной в судно для дефекации. При использовании одноразового подгузника, у детей с водянистой консистенцией фекалий для получения достаточного количества образца в подгузник перед использованием помещают ватный тампон. N.B. Не допускается забор образца фекалий непосредственно из судна для дефекации или другой емкости многократного использования (вне зависимости от методов их дезинфекции). Забор образца фекалий производят одноразовым ватным зондом (предоставляется лабораторией). Забираемый материал должен полностью пропитать рабочую часть зонда. При возможности зондом собираются сгустки материала. После забора материала зонд помещается в пробирку с транспортной средой и оставляется в ней. N.B. При заборе материала не допускается контаминация им наружной поверхности пробирки и одноразовых перчаток. При возникновении контаминации производится замена перчаток и повторное взятие материала.

Образцы нативных фекалий

- при температуре +2-8°С - в течение 3 суток;

4.5. Мазки из ротоглотки

Взятие материала. Мазки берут сухими стерильными ватными тампонами на пластиковой основе вращательными движениями с поверхности миндалин, небных дужек и задней стенки ротоглотки. После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в одноразовую пластиковую пробирку объемом 1,5 или 2,0 мл. со специальной транспортной средой (или физ. раствором) и аккуратно обламывают пластиковый стержень на расстоянии не более 0,5 см от рабочей части, оставляя рабочую часть зонда с материалом в транспортной среде. Пробирку плотно закрывают крышкой.

- при температуре +2-8°С - в течение 3 суток;

- Информационное письмо по правилам забора, хранения и предварительной обработке образцов клинического материала при обследовании на энтеровирусную инфекцию, ассоциированную с энтеровирусом 71 типа (EV71);

- Инструкции к наборам реагентов для определения ДНК/РНК инфекционных агентов методом ПЦР в реальном времени.

Врач-вирусолог - Авдеенко Т.Ф.

Врач-вирусолог- Городилова Н.Б.

Заместитель главного врача, руководитель ИЛЦ, дмн

О.А. Тарасенко

Обзор документа

Определено, как у больных с симптомами менингита, а также у контактных лиц забираются образцы биоматериала для лабораторного исследования.

Менингиты могут иметь как бактериальную, так и вирусную этиологию.

При бактериальных менингитах в целях диагностики исследуются, во-первых, образцы спинномозговой жидкости (СМЖ, ликвор). Это обязательно. Врач-клиницист определяет показания к люмбальной пункции и выполняет ее в первые дни болезни. Во-вторых, дополнительно в первые 3-4 дня с начала заболевания исследуются мазки из ротоглотки. Если при исследовании мазка получен отрицательный результат, то это не является диагностически значимым. Нужно исследовать образец СМЖ, ликвора.

При менингитах, вызванных энтеровирусами, в целях диагностики необходимо исследовать не менее 2-х различных клинических образцов из ниже перечисленных. Первое - образцы спинномозговой жидкости (СМЖ, ликвор). Это обязательно. Второе - материал из везикул (при их наличии). Третье - образцы фекалий. Четвертое - мазки из ротоглотки. Пятое - кровь (сыворотка и (или) плазма).

Для обследования контактных с больным бактериальным менингитом достаточно исследовать только мазок из ротоглотки. При менингите вирусной этиологии можно исследовать мазок из ротоглотки и (или) образцы фекалий. Для определения наличия ДНК/РНК возбудителя клинический материал исследуется методом ПЦР в режиме реального времени.

Приведены правила взятия клинического материала.