Мазок крови на дирофиляриоз

На территории СНГ дирофиляриоз собак получил распространение в 1990-2000 гг. В ветеринарных клиниках г. Луганска впервые диагностировали эту болезнь в 1997 г. Было выявлено 18 случаев заболевания собак в возрасте от 3 до 11 лет. Чаще всего болели животные короткошерстных пород.

Дирофиляриоз у собак вызывают нематоды подряда Filariata семьи Filaridae. Промежуточными живителя являются комары видов Anopheles, Culex, Aedes и др. Взрослые особи дирофилярий (макрофилярии) локализуются в правом предсердии или в правом желудочке сердца (D. immitis), подкожной клетчатке различных частей тела (D. repens), брюшной или грудной полости (D. drancunculoides), околоренальной жировой ткани (D. reconditum). Личинки дирофилярий, так называемые микрофилярии - циркулируют в кровеносном русле.

Для диагностики дирофиляриоза собак используют следующие методы:

В мазках крови обнаруживаются классические и атипичные формы микрофилярий. В первых двух случаях микрофилярии идентифицируют по характерным ритмичными движениями среди эритроцитов.

Для определения видовой принадлежности дирофилярий проводили цитохимические определения в мазках активности кислой фосфатазы микрофилярий. Этот метод позволяет идентифицировать D. immitis (окраска анальной и экскреторной поры) D. drancunculoides (анальной поры и основного тела) D. repens (окраска только анальной поры) D. reconditum (диффузное окраски основного тела).

Клинико-паразитологическая характеристика дирофиляриоза собак

По течению дирофиляриоза у собак можно выделить четыре основные формы болезни, или синдромы:

• интоксикационная
• кожная
• псевдоопухолевые разрастания
• правожелудочковой недостаточности

Заболевание имеет неспецифические или стертые клинические признаки. Собака быстро устает, наблюдается снижение или извращение аппетита, затрудненное дыхание, общая кахексия, кашель, апатия, иногда прослушиваются сердечные шумы, развиваются симптомы нарушения со стороны нервной системы. Собака может стать агрессивной или раздражительной. Анализируя относительную частоту дирофиляриоза в популяции собак, обнаружено, что при подобной симптоматике почти в 20% случаев диагностируется дирофиляриоз, обусловленный D. repens.

Основным симптомом болезни является поражение кожи головы, спины и конечностей (межфаланговое пространство). Сначала появляются участки облысения, затем припухлость, покраснение, множественные пустулы с серозно-гнойным экссудатом и макрофиляриями, позже – язвы кожи, новообразования.

Характерным клиническим признаком рецидивирующего дерматита у собак при дирофиляриозе является резистентность к антибактериальным и противовоспалительным препаратам. При цитологическом исследовании мазков выявляют скопления нейтрофилов и эозинофильных лейкоцитов, иногда лимфоцитарнуюи плазмоклеточную реакцию. В содержании пустул микрофилярии встречаются редко. Поэтому диагноз мы устанавливали преимущественно на основе выявления микрофилярий в периферической крови.

Кожная форма дирофиляриоза собак в эндемичных зонах встречается с частотой 15-20%.

У ряда собак обнаруживаются опухолевидные образования в области молочной железы, на нижней трети передней конечности, в межфаланговом пространстве и на коже в области спины. При разрезе псевдоопухолей можно выявить макрофилярии.

Новообразования диаметром до 2 см, которые имеют неправильную форму, инфильтративный рост в коже и подкожной клетчатке; с язвенной поверхностью. Как правило, не наблюдается увеличение регионарных лимфоузлов. Для диагностики данной формы дирофиляриоза проводят пункционную биопсию.

Цитологическая картина псевдонеоплазии молочной железы характеризуется пролиферацией эпителиоцитов, полиморфизмом ядер. При лимфогранулематозе встречаются гигантские клетки Березовского-Штернберга. Выявляются микрофилярии и макрофилярии. Веткардиология

Синдром правожелудочковой сердечной недостаточности при дирофиляриозе собак считается типичным для инвазии D. immitis. При обследовании таких животных обнаруживают асцит, общую слабость, гепатомегалию, спленомегалию, удушье, тахикардию, анемичность слизистых оболочек, при проведении электрокардиографии - признаки повышении электрической активности правого предсердия и желудочка, при проведении эхокардиографии – дилатация правых отделов сердца.

В асцитной жидкости обнаруживаются микрофилярии.

При исследовании общеклинических показателей у больных дирофиляриозом собак чаще всего обнаруживали гипохромную анемию (среднее количество эритроцитов 4,2 ± 0,8 Т/л, гемоглобина - 101,3 ± 18,1 г/л), лейкоцитоз (16,4 ± 3,2 Г/ л ), эозинофилию, моноцитоз, тромбоцитоз, наличие мононуклеаров и иммунобластов.

У собак вявляют субклиническое поражение печени с интоксикационным синдромом и дерматитом. Об этом свидетельствовало увеличение концентрации аланиновой (АлАТ) и аспарагиновой (АсАТ) трансаминаз, непрямого билирубина, общих липопротеидов.

У собак обнаруживаются признаки функциональной недостаточности почек (повышение содержания мочевины, азота, креатинина в сыворотке крови), при этом клинических проявлений и нарушений диуреза не было. Очевидно, в таких ситуациях имело место травмирование клубочков микрофиляриями с последующим отложением циркулирующих иммунных комплексов.

У больных дирофиляриозом собак нарушений функционального состояния поджелудочной железы и электролитного обмена, как правило, не наблюдается.

Таким образом, дирофиляриоз собак чаще всего обусловлен инвазией D. repens. Основными клиническими проявлениями дирофиляриоза собак является изолированный синдром интоксикации, дерматит, псевдоопухолевые поражения кожи, синдром правожелудочковой сердечной недостаточности. Основным методом диагностики заболевания является обнаружение микрофилярий в толстой капли периферической крови, биоптатах кожи, пунктатах поражений кожи и асцитической жидкости.

27 апреля 2017, 15:44 Эксперт статьи: Блинова Дарья Дмитриевна 0 1,332

Развитие технологий и медицины позволило человечеству избавиться от большого количества страшных болезней, но дирофиляриоз у человека встречается и по сей день. Это заболевание опасно для здоровья, поэтому важно знать о нем, как можно больше. Что собой представляет это заболевание, как оно появляется?

Что это такое?

Дирофиляриоз представляет собой распространенное заболевание, во время которого организм поражают глисты.

Заболевание развивается у домашних животных и человека. Часто глисты селятся в организмах собак и кошек, а к человеку попадают очень редко. Для заражения дирофиляриозом необходим переносчик. Им является комар. Он переносит личинки на своем теле. Современным врачам сложно выявить инвазии дирофилярий в организм, поэтому сведений о количестве случаев заражения мало.

Тем не менее, сегодня известно, что дирофиляриоз — паразитарное заболевание животных и людей, возбудителем которого являются паразиты в личиночной стадии развития. В человеческом организме глисты локализуются в сердечной мышце, в глазах, а также могут жить в других органах и системах. В последнем случае заболевание считается перешедшим в хроническую стадию, что опасно для жизни.

Актуальность заболевания дирофиляриозом обусловлена постоянным присутствием домашних животных. Также проблема усугубляется низкой информированностью врачей и сложностью идентификации типа гельминтов, находящихся в организме. Это можно сделать лишь после извлечения глистов из организма. До этого момента врачи зачастую ставят совершенно другие диагнозы — опухоли, кисты, фибромы и даже флегмоны.

Исследования гельминтов и поиск средств для их удаления начались в середине 19 столетия. В 1855 году был описан первый случай удаления червя из глаза ребенка. Затем были описаны подобные случаи в Европе. В России первый случай заражения был диагностирован в 1915 году. Исследования заболевания показали, что черви представляют собой опасность для здоровья человека. Запоздалая и неверная диагностика могут привести к плачевным последствиям и даже смертельному исходу.

Возбудитель заболевания

Личинки микрофилярии попадают в организм с помощью насекомых. Однако человеческий организм для них является тупиковой средой обитания, так как развиться до состояния половозрелой особи они неспособны, а, значит, болезнь не может передаваться от человека к человеку. В теле животных гельминт может достигать 30 мкм. в длину и 1,5 мкм. в окружности.

В организм человека паразиты попадают личинками дирофилярий с помощью комаров, но существует вероятность заражения и при участии других кровососущих насекомых. Такой способ называется трансмиссивный. Путь миграции начинается с жизни паразитов в сердце, полых венах, легочной артерии и бронхах животных половозрелых особей. Они выделяют в кровь животных микрофилярии (личинки), каждая из которых составляет 320 мкм в длину и 7 мкм в ширину. После укуса насекомого они попадают в кровеносную систему человека, а уже оттуда мигрируют в разные органы.

В теле комара личинки живут до 17 дней, при этом они линяют и мигрируют по его телу. В этот период микрофилярии дозревают до инвазивной стадии. После попадания к другому животному или человеку личинки в течение 90 дней живут в месте укуса. В этот период у них происходит линька. После этого личинки начинают миграцию по организму в крови своего нового хозяина для дальнейшего развития и размножения. Весь цикл развития паразит проходит за 8 месяцев.

Чем опасен дирофиляриоз для человека?

Заболевание опасно для жизни и здоровья человека. Оно может спровоцировать осложнения в виде заболеваний крови и гнойных процессов.

При том, что паразит в крови и органах человека не размножается, он представляет опасность. Зачастую врачам удается обнаружить всего одну особь в месте, где произошел укус насекомого, то есть в подкожно-жировой клетчатке. Основная опасность состоит в первичном аффекте. Это явление характеризуется появлением уплотнения под кожей. Оно начинает увеличиваться в размерах и болеть. Новообразование представляет собой узел с измененным гнойным содержимым. Внутри этого образования и содержатся личинки паразитов и сами паразиты. Внутреннее наполнение этой капсулы-образования является уже опасным для здоровья, так как может вызывать гнойные процессы в организме. Еще одна опасность подстерегает человека в случае, если червь погибнет в этой капсуле. В этом случае продукты гниения будут разноситься по всему организму.

Виды и симптомы болезни

Основным отличительным нюансом болезни является ее длительный инкубационный период. По наблюдениям врачей он длится от месяца до нескольких лет. Длительность этого периода напрямую зависит от состояния здоровья нового носителя червей. Этот факт осложняет выявление болезни и терапию. Единственным способом обнаружить неприятных соседей является симптоматика.

На сегодняшний день врачи различают 3 вида гельминтоза:

• кожный дирофиляриоз;
• дирофиляриоз сердца;
• дирофиляриоз глаз.

Каждая из этих форм имеет свою собственную симптоматику, а также общие черты, по которым можно распознать дирофиляриоз вовремя и обратиться за квалифицированной помощью. Важно знать о каждом из симптомов, так как сохранение здоровья и жизни пациента зависит от ранней и правильной диагностики. Даже одна незначительная деталь может стать спасительной для больного.

Чаще всего у человека развивается кожная форма дирофиляриоза. При ней в месте укуса появляется уплотнение. При надавливании на него больной ощущает боль, покалывания и зуд. В этом уплотнении развиваются черви, со временем человек начинает ощущать, как они там двигаются. В месте укуса и развития капсулы появляется воспаление кожных покровов и абсцесс.

При дирофиляриозе, червь часто локализуется в органах зрения.

При дирофиляриозе в глазу червь локализуется под кожей век, в редких случаях он может мигрировать под конъюнктиву глаза. При этом больной испытывает дискомфорт в глазах (ощущение инородного тела). Веки отекают, а глазное яблоко воспаляется. В большинстве случаев ощущается зуд. В процессе развития червей пациент может ощущать боль во время моргания. Данная форма опасна тем, что ее симптомы схожи с симптоматикой отека Квинке.

Падая в сердце человека, червь вызывает трудности в работе сердечной мышцы. Человек чувствует боли за грудиной, слабость. Врачи при этой форме заболевания фиксируют нарушение сердечной деятельности и ритма. Пациенты жалуются на одышку и усталость. Данная форма болезни является наиболее опасной, так как черви способны парализовать работу основного органа.

Профилактика, анализы и лечение болезни

Наилучшим способом сохранить здоровье и защититься от возможного вторжения является профилактика. Специалисты советуют внимательно относиться к себе и соблюдать все правила гигиены. В первую очередь нужно избавиться от всех кровососущих насекомых в помещении, а на улице минимизировать вероятность контакта с ними. Для этого можно использовать одежду с длинным рукавом и брюки, головные уборы. Важным моментом в профилактике гельминтоза данного вида является своевременное обнаружение зараженных домашних животных и их лечение. Чтобы минимизировать заражение во время прогулки или отдыха, можно обработать открытые участки тела репеллентами, а лучшей защитой для животных является специальный ошейник. Также к профилактическим действиям относится защита домашних питомцев и их своевременное лечение.

Подтвердить или опровергнуть заражение дирофиляриями можно лишь с помощью специальных анализов и исследований. Одним из таких анализов является анализ крови на дирофиляриоз или анализ по методу ИФА. С его помощью можно выявить специфические антитела в крови. При гельминтозе врачи выявляют антитела к мигрирующим личинкам. Однако данный анализ требует подтверждения результатов. Их получают с помощью ультразвукового исследования и с помощью компьютерной томографии.

Операция — это единственный способ удалить червя из организма. Употребление противоглистных препаратов не даст результатов.

Таким образом, зная симптомы и ответственно подойдя к профилактике, можно защитить себя, своих родных и близких, а также домашних животных от опасного заболевания. При обнаружении подозрительных уплотнений на коже или других ощущений лучше обратиться к специалисту и пройти обследование. В результате таких оперативных мер можно сохранить здоровье.

Несколько лет назад один приятель рассказал, как он, находясь в здравом уме и твердой памяти, чуть было не угодил в сумасшедший дом. И виноват в этом был как раз герой нашего сегодняшнего рассказа.

Дело было так. Через несколько месяцев после отдыха на юге мой приятель вдруг почувствовал, что у него под кожей кто-то ползает. То тут ползает, то там… То на плече, то на спине, то ниже пояса…

Пошел человек к доктору, описывает свои ощущения. А доктор всё как-то односторонне уточняет: что-де пил в последнее время, какие лекарства употреблял, что курил, не наблюдался ли приятель у психиатра, какие сны видит… Приятель заподозрил неладное, и от доктора скрыться поспешил.

Так произошло его знакомство с Дирофилярией – круглым глистом семейства Нематод.

А спустя очень недолгое время с носителем дирофиляриоза встретилась и я – уже среди своих пациентов…

Дирофилярии опасны и для животных, и для человека, поэтому владельцам животных знать о них вдвойне полезно. Целые медицинские конгрессы собираются по проблеме дирофиляриоза, многие фармацевтические компании работают над вопросами диагностики и профилактики дирофиляриоза у животных и человека.

Вот и нам стоит познакомиться с этим гельминтом, что называется, поближе.

Длина этих червей достигает 30 см (самка D. Immitis), самцы почти в 3 раза короче самок, толщина червей — до 0,5 мм.

Размер личинок дирофилярий – микрофилярий составляет 0,2-0,36 мм в длину и 0,005-0,008 мм в толщину. Такие личинки видны только в микроскоп. Как правило их находят при микроскопии мазка крови у собак и кошек как при целенаправленных поисках, так и при плановых анализах крови и при обследованиях по поводу других заболеваний.

У человека взрослые гельминты обнаруживаются под кожей и слизистыми оболочками, изредка паразитов находят в области лёгких и плевры, микрофилярии в крови человека обычно не обнаруживаются. Нередко дирофилярий находят у человека в области век и в передней камере глаза.

У животных взрослые особи располагаются также под кожей и слизистыми (D. Repens), вызывая воспалительные процессы и псевдоопухолевые разрастания соединительной ткани, и в полостях желудочков сердца – чаще в правом (D. Immitis), вызывая сердечную недостаточность. Кроме того, микрофилярии, которые циркулируют в крови больных дирофиляриозом кошек и собак, забивают мелкие кровеносные сосуды лёгких, печени и других органов и тканей, вызывая их воспаление и дистрофию.

Собаки и кошки являются окончательными, или дефинитивными, хозяевами дирофилярий. Это значит, что без их участия размножение этого гельминта просто невозможно.

Половозрелая самка отрождает микрофилярий в кровь. Микрофилярии циркулируют в крови дефинитивного хозяина до 2,5 лет или до тех пор, пока не попадут в кишечник кровососущего насекомого.

Одна половозрелая самка дирофилярии ежедневно выделяет в кровь порядка тридцати тысяч микрофилярий. Личинки довольно точно определяют время суток. За несколько минут до рассвета и примерно два часа до заката они мигрируют в кровеносные сосуды кожи. Примерно через два часа микрофилярии возвращаются во внутренние органы. Миграция микрофилярий связана с максимальным количеством комаров в воздухе.

Я впервые встретилась с носителем дирофиляриоза в одной из московских пятиэтажек. Собаку взяли из приюта, куда волонтёры привезли эту жительницу одного из южных регионов России. Собачку весьма быстро пристроили. Да только в нагрузку новые хозяева получили ещё и несколько паразитов, живущих в собачьем сердце. Микрофилярий мы обнаружили случайно, при плановом взятии анализа крови. Клинически собака была здоровой. Собака эта и сейчас, спустя много лет живет у своих любящих хозяев, только ежемесячно она получает дозу противопаразитарных препаратов для того, чтобы быть безопасной для окружающих.

Заражение дирофиляриозом возможно только в том случае, когда в определенном месте имеется животное, в крови которого есть микрофилярии, и есть комары или другие кровососущие насекомые, которые имеют возможность укусить новую жертву.

Попав с кровью жертвы в кишечник комара, микрофилярии-1 проникают затем в полость тела насекомого, переживают линьку (микрофилярии-2) и развиваются там до инвазионной стадии (микрофилярии-3).

Затем они концентрируются в головном отделе и нижней губе насекомого и при укусе попадают в тело новой жертвы. Поэтому заразиться напрямую от питомца, без комара или другого кровососа, человек не сможет.

Развитие дирофилярии внутри комара от микрофилярии из крови жертвы (микрофилярий-1) до инвазионной личинки (микрофилярии-3) длится около 17 суток.

Далее, уже в теле новой жертвы (животного или человека), 90 дней личинки продолжают свое развитие в месте укуса, т.е. в подкожно-жировой клетчатке, где еще дважды линяют до образования микрофилярии-5.

В дальнейшем она развивается до половозрелой стадии на месте или попадает в кровь и переносится в другие органы и ткани, где и созревает до половозрелой стадии, еще в течение 3-х месяцев. Таким образом, весь цикл развития дирофилярии длится от 6 до 8-ми месяцев.

Человек является побочной жертвой дирофилярий. Заражение происходит при укусах комаров и других кровососущих насекомых, которые до этого питались на зараженных микрофиляриями животных. Большинство попавших в организм человека микрофилярий гибнет, но некоторые могут расти до взрослого состояния. Однако микрофилярий в крови человека ученые пока обнаружили только в одном единственном случае. Это говорит о том, что размножения дирофилярий в организме человека практически не происходит. По крайней мере, пока…

Как правило, основные находки микрофилярий и даже взрослых дирофилярий у животных – явление случайное. Только очень интенсивная инвазия (заражение) этими гельминтами, либо длительное их воздействие на организм вызывают клинические признаки – интоксикацию, исхудание, сердечную недостаточность, псевдоопухоли в лёгких и соединительной ткани.

Обычно такие явления наблюдаются в очагах распространения дирофиляриоза — в южных регионах с множеством водоёмов и, соответственно комаров. Но у местных диких и домашних животных существует устойчивость к этому паразиту, поэтому клинически болезнь может долго не проявляться.

Диагноз на дирофиляриоз может ставиться несколькими методами, каждый из которых подтверждает наличие паразита в организме пациента. Это:

• Микроскопия мазков крови для обнаружения микрофилярий
• ПЦР-тест для выявления видовой принадлежности паразита по ДНК
• Иммунологические тесты (ИФА, ИХА) для диагностики наличия паразитарного антигена
• Рентген- и УЗИ-диагностика для выявления гранулематозных узлов в соединительной ткани вокруг паразита
• ЭХО-кардиография для выявления паразитов в желудочках сердца.
• Визуальное обнаружение паразитов под кожей и слизистыми оболочками больного животного (и человека).

Возможно, после прочтения этой статьи вы спросите, а как проверить, не заражен ли мой питомец дирофиляриозом? Что в этом случае стоит сделать в первую очередь?

Если ваш питомец давно или никогда не проходил диспансеризацию, то мой совет – проведите своему любимцу именно общую диспансеризацию со сдачей анализов крови. Если микрофилярии в крови есть – их обязательно обнаружат. Если будет какое-то подозрение на дирофиляриоз – вас направят на дополнительные иммунологические анализы.

При этом если вы давно не давали питомцу средства от гельминтов, – проведите плановую дегельминтизацию и через одну-две недели записывайте питомца на диспансеризацию.

Если у вашего питомца есть признаки сердечной недостаточности – посетите кардиолога. При обнаружении в полости сердца инородных тел (гельминтов) он направит вас на дополнительные иммунологические анализы.

Если же ваш питомец недавно проходил диспансеризацию, и никаких болезней выявлено не было, а вы всё же волнуетесь, посетите лабораторию и сдайте иммунологические тесты на дирофиляриоз.

Лечение дирофиляриоза можно разделить на два отличающихся друг от друга этапа:

• Борьба с микрофиляриями
• Уничтожение половозрелых гельминтов

То есть от микрофиляриоза лечат животных – собак и кошек. На этом этапе применяются препараты системного действия, обладающие свойством обездвиживать личинки паразита и вызывать их гибель.

В этом лечении нуждаются животные – носители взрослых дирофилярий (например, в сердце), и те животные, которые заразились совсем недавно.

Для лечения микрофиляриоза (т.е.уничтожения личинок дирофилярий) используются антгельминтики системного действия – мильбемицина оксим, селамектин, моксидексин, левамизол, ивермектин, альбендазол и другие.

Многочисленные исследования показали, что просто уничтожить гельминтов с помощью лекарственных препаратов в органах и тканях пациента – это далеко не всё. Средства от взрослых паразитов обладают весьма высокой токсичностью, а погибшие гельминты не менее опасны для организма хозяина, чем живые. Их гибель и разложение может вызвать множественные побочные явления от интоксикации до абсцедирования, а гибель паразитов в сердце вызывает эмболию (закупорку) сердечных и легочных сосудов и гибель хозяина.

Поэтому на сегодняшний день предпочтительный способ борьбы со взрослыми половозрелыми дирофиляриями – хирургическое удаление гельминтов. Благодаря развитию эндоскопической хирургии этот метод становится всё более доступным даже для пациентов с гельминтами в сердце.

Не стоит впадать в панику и бояться каждого комара. Интенсивность заражения дирофиляриями этих кровососущих насекомых сильно различается не только по регионам, но даже по отдельным районам в разные годы. Это зависит от численности животных-носителей дирофиляриоза, от их устойчивости к этим гельминтам, от количества комаров и от многих других факторов.

Кроме того, имейте в виду, что живой организм в состоянии защищать себя от любых паразитов. Правда, только если он здоров и крепок. Поэтому главная защита – это поддержание общего здоровья наших питомцев. Тогда вероятность заражения значительно снижается.

А направленно защищать себя и своих питомцев от дирофиляриоза следует одновременно несколькими путями:

Главное, не поддавайтесь истерии страха и не ударяйтесь в другую крайность – наплевательское отношение к обработкам от гельминтозов может быть смертельно опасно для вашего питомца.

Золотая середина как всегда – самое верное решение.

дирофиляриоз плотоядный собака болезнь

По данным многих авторов при постановке диагноза на дирофиляриоз необходимо учитывать следующие показатели:

• Анамнестические данные - прибытие из эндемической области или нахождение в ней.

• Клинические признаки болезни,

• Выделение микрофилярий из крови животного.

• Дополнительные лабораторные исследования

Личинок дирофилярий в крови можно обнаружить следующими лабораторными методами:

· Прямая микроскопия капли свежей крови под малым увеличением микроскопа наиболее легкий, удобный и быстрый метод диагностики дирофиляриоза. Подвижные личинки паразита заметны по их активному движению между эритроцитами. Этот метод дает надежные результаты только при высокой интенсивности инвазии. Недостатками этого метода являются: трудность диагностирования дирофиляриоза при низкой интенсивности инвазии, необходимость иметь под рукой микроскоп в рабочем положении и предметные стекла, исследование необходимо проводить сразу же после взятия крови, что создает неудобства в работе. Кроме того, при малой подвижности микрофилярий их бывает трудно обнаружить среди большого количества эритроцитов. При высокой температуре окружающего воздуха, свежий мазок крови быстро высыхает, что создает дополнительные трудности в исследовании.

· Исследование цельной сыворотки крови - для исследования сыворотки крови в пробирку берут несколько миллилитров венозной крови от собаки. Кровь сворачивается, и микрофилярии мигрируют в сыворотку. Сыворотка со сгустком должна постоять в пробирке несколько часов. После этого пастеровской пипеткой берут несколько капель сыворотки со дна пробирки или из места на границе сыворотки и сгустка крови. Эти капли помещают на предметное стекло, накрывают покровным и исследуют под малым увеличением микроскопа на наличие подвижных микрофилярий. Если кровь до исследования находилась в холодильнике, то предметное стекло с каплями сыворотки выдерживают несколько минут при комнатной температуре для того, чтобы личинки дирофилярий восстановили свою подвижность. Недостатками этого метода диагностики являются: возможность постановки диагноза только через определенное время (около двух часов необходимо для отстаивания сыворотки крови). Преимущества метода: исследованиями на дирофиляриоз можно заниматься в свободное время, не отвлекаясь от основной работы; так как личинки дирофилярий сохраняют свою подвижность в сыворотке крови при комнатной температуре до трех суток, а в холодильнике при температуре +2. +4°С до одной недели. Даже после их гибели, при наличии определенного опыта, микрофилярии легко можно обнаружить в сыворотке крови. При сворачивании крови образуется сыворотка, объем которой почти в два раза меньше цельной крови, это способствует концентрации микрофилярий и облегчает их обнаружение при невысокой интенсивности инвазии. Кроме того, в сыворотке легче обнаружить микрофилярии, чем в цельной крови, так как в данном случае отсутствуют форменные элементы крови, мешающие исследованию.

· Метод Куликова - 20 мл венозной крови смешивают с 2 мл 3,8% водного раствора лимоннокислого натрия (цитрата натрия) и отстаивают 20-30 минут. По истечении этого времени в пробирке образуется 3 слоя: внизу - эритроциты, в середине - лейкоциты и микрофилярии, вверху - плазма крови. Берут пипеткой средний слой, каплями наносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и исследуют при малом и среднем увеличении.

· Архиповой Д.Р. разработан количественный метод прижизненной диагностики дирофиляриозов собак основанный на применении меланжера для подсчета количества лейкоцитов и счетной камеры Фукс-Розенталя. Меланжер до метки I заполняют кровью и до метки II раствором, состоящим из ледяной уксусной кислоты, раствора фуксина и дистиллированной воды в соотношении 3:4:93. Для равномерного смешивания меланжер с кровью и раствором кладут на вибратор на 2-3 минуты. К чистой и сухой камере Фукс-Розенталя притирают покровное стекло до появления колец Ньютона. Затем раствор в меланжере встряхивают, и каплю (но не первую) раствора наносят на среднюю часть пластинки камеры и при увеличении микроскопа в 100 раз подсчитывают количество микрофилярий во всех квадратах. Полученное количество личинок умножают на 6,23, так как для 20 мм 3 раствора потребовалось бы 6,23 объема камеры. Для определения количества микрофилярий в 1 мл крови число выявленных микрофилярий в 20 мм 3 умножается на 50.

· Исследование крови для обнаружения микрофилярий может быть облегчено добавлением вещества, вызывающего гемолиз. При этом методе периферическую кровь собак исследуют сразу после взятия (на месте). Каплю крови помещают на предметное стекло, добавляют две капли дистиллированной воды или 1%-ного водного раствора уксусной кислоты, накрывают покровным и исследуют под малым увеличением микроскопа.

· При использовании метода с применением уксусной кислоты к 1 мл венозной крови сразу же приливают 5 мл 2%-ного раствора уксусной кислоты. Смесь центрифугируют при 1000 об/мин. В течение 3-5 минут. Надосадочную жидкость выливают, а осадок микроскопируют для обнаружения микрофилярий. При этом методе личинки погибают, и их бывает трудно обнаружить в исследуемом материале.

· Метод Руже-Мюленса - к крови добавляют пятикратный объем раствора: 5%-ный формалина 95 мл, уксусной кислоты 5 мл и концентрированного спиртового раствора генцианвиолета 2 мл. Смесь центрифугируется, надосадочная жидкость сливается, а осадок опять центрифугируют с водой и смотрят под микроскопом. Этот метод можно упростить: каплю крови помещают в пробирку с раствором и микроскопируют на следующий день.

· Метод Шуффнера - 10 капель крови помещают в 10 мл физиологического раствора, к которому предварительно добавили несколько капель раствора сапонина. После гемолиза, производят центрифугирование. Живые, подвижные личинки обнаруживаются в осадке.

· Модифицированный метод Кнотта дает хорошие результаты при практической постановке диагноза на наличие микрофилярий у собак, Метод заключается в следующем: к 1 мл венозной крови добавляют 10 мл 2%-ного раствора формалина. Этот раствор хорошо перемешивают и центрифугируют при 1500 об/мин. в течение 5 минут. Надосадочную жидкость удаляют, а осадок смешивают с равным объемом метиленового синего в разведении 1:1000 и оставляют для окрашивания на 5 минут. Окрашенный осадок микроскопируют для обнаружения фиксированных микрофилярий.

К дополнительным методам исследования относятся следующие:

1. Морфологические и биохимические исследования крови - не позволяют поставить точный диагноз на дирофиляриоз, но помогают определить патологические изменения в органах и тканях, которые могут быть связаны с дирофиляриозом. Наиболее часто при дирофиляриозе отмечают нормоцитарную, нормохромную или гипохромную анемию (гематокрит