Лабораторная диагностика аденовирусная инфекция у

Диагностика: Для раннего лабораторного подтверждения диагноза используют обнаружение вирусного антигена в эпителиальных клетках слизистой оболочки носоглотки с помощью иммунофлуоресцентного метода. Применяют и серологический метод (РСК с аденовирусным антигеном). Диагностическим считается нарастание титра антител в парных сыворотках в 4 раза и больше.

Лечение и профилактика: Лечение неосложненных форм аденовирусной инфекции проводится также, как и при гриппе и других ОРЗ. В том случае, если у больного развился конъюнктивит, кератит или кератоконъюнктивит, используют: дезоксирибонуклеазу 0,05% раствор по 1-2 капли в конъюнктивальную складку; полудан в виде глазных капель и/или инъекций под конъюнктиву. Закапывают в конъюнктивальный мешок больного глаза 6-8 раз в день. По мере стихания воспалительных явлений - 3-4 раз в день; бонафтан в виде таблеток для приема внутрь и 0,05% глазной мази в тубах по 10г; теброфен (0,25-0,5% глазная мазь в тубах); флореналь (0,25-0,5% глазная мазь в тубах). Глазные мази закладывают за веки 3 раза в день, к концу лечения 1-2 раза в день. Длительность лечения 10-14 дней.

Для профилактики заболеваний дыхательных путей разработаны эффективные живые вакцины, включающие в себя ослабленные вирусы наиболее часто вызывающие заболевания человека. Их широкое применение останавливают имеющиеся в распоряжении ученых данные о возможной способности аденовирусов вызывать злокачественное перерождение клеток организма человека.

Изучить возбудителей аденовирусных инфекций.
Ознакомиться с методами культивирования аденовирусов.
Делать выводы по микроскопии препаратов (ЦПД вирусов).
Изучить лабораторную диагностику аденовирусов.
Ознайомиться с техникой заражения тканевых культур.
Ознайомиться с ЦПД аденовирусов и их идентификацией.

Определять цитопатическое действие аденовирусов при микроскопии микропрепаратов.
- Проводить дифференциальную диагностику аденовирусов.
- Делать учет серологических реакций, используемые при диагностике аденовирусов.

Характеристика аденовирусов. Особенности репродукции.

Методы культивирования аденовирусов. Идентификация и типирование.

Пути передачи и патогенез аденовирусных инфекций.

Проявление аденовирусных заболеваний и выбор материала для исследования.

Серологическая диагностика аденовирусных инфекций.

Практические задания, которые выполняются на занятии:

Изучение ЦПД аденовирусов на культуре ткани на демонстрационных препаратах.
1. Студенты просматривают культуру ткани в пробирках под малым увеличением и определяют состояние клетки.
2. Разбор и запись в протокол схемы лабораторной диагностики аденовирусных инфекций.
3. Микроскопия и зарисовка демонстрационных препаратов в протокол занятия.
4. Оформление протокола.

Пяткін К.Д., Кривошеїн Ю.С. Мікробіологія з вірусологією та імунологією. Київ: Вища школа, 1992. 431 с.
Воробьев А.В., Быков А.С., Пашкола Е.П., Рибакова А.М. Микробиология. М.: Медицина, 1998. 336 с.
Медицинская микробиология /Под редакцией В.И. Покровского. М.: ГЄОТАР-МЕД, 2001. 768 с.
Медицинская микробиология, вирусология и иммунология /Под редакцией академика А.А. Воробьева, М.: Медицинское информационное агентство, 2004. 691 с.
Конспект лекции.

Збірник завдань для підготовки до тестового екзамену Крок-1. Загальна лікарська підготовка. Київ.: Медицина, 2004.- С. 300-333.
Методические указания для преподавателей к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии. Харьков,1986. 125 с.
Сборник тестовых заданий для самоподготовки по медицинской микробиологии и вирусологии. Харьков, 2005. 28 с.

Краткие методические указания к работе на практическом занятии.

В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию.

Самостоятельная работа состоит из микроскопии демонстрационных препаратов. Студенты зарисовывают микропрепараты в альбом и дают необходимые пояснения. Записывают схемы лабораторной диагностики.

В конце занятия проводится тестовый контроль и анализ итоговых результатов самостоятельной работы каждого студента.

Распознать аденовирус бывает не так просто. Симптомы этой инфекции похожи на симптомы ОРВИ или гриппа. Именно поэтому важно вовремя обратиться к врачу и сдать анализы, а также наблюдать за состоянием ребенка и фиксировать любые изменения в самочувствии и поведении.

Этиология

Аденовирусная инфекция — это острое инфекционное заболевание, при котором поражается:

слизистая оболочка дыхательных путей,
пищеварительного тракта,
глаз,
лимфатическая ткань.

Причиной заболевания являются ДНК-содержащие вирусы семейства Adenovirida. Заразится можно только от больного человека или носителя.

Все аденовирусы имеют три антигена:

А‐антиген, обладающий способностью связывать комплемент;
токсический В‐антиген;
типоспецифический с цитотоксическими способностями С‐антиген.

За ними различают около ста сероваров (совокупности микроорганизмов одного вида с общими антигенными свойствами, которые различаются по эпидемиологическим особенностям).

Для человека опасны не более 40 видов. Аденовирус у ребенка (в особенности у маленьких детей), в основном, вызывают серотипы 1,2 и 5.

Пути передачи:

воздушно-капельным,
алиментарным,
контактно-бытовым через предметы (в редких случаях).

Патогенез

Вместе с капельками слюны возбудители попадают на открытые слизистые оболочки здорового ребенка (нос, конъюнктива, губы) со следующим распространением по дыхательным путям. Попадая в эпителиальные клетки слизистого покрова, вирусы начинают размножиться и перемещаться на соседние клетки, после чего эпителиальные клетки гибнут.

Организм начинает реагировать на чужеродные тела, расширяя сосуды и делая их проницательнее для иммиграции защитных клеток из крови. Но вместе с этими защитными клетками (фагоцитами и макрофагами) из кровеносного русла выходить жидкость, из-за которой подслизистый слой отекает.

Аналогичные изменения происходят в тонком кишечнике, если возбудитель сможет выжить после контакта с соляной кислотой желудка. Эндокриноциты кишечника также разрушаются под влиянием вируса, а поверхностная оболочка и субмукозный слой заполняются гистиоцитарной и лейкоцитарной инфильтрацией.

Кроме гематогенного (через кровь), возбудитель может распространятся лимфогенным (через лимфу) путем. Таким образом инфекционные агенты попадают в лимфоидную ткань фолликулов, миндалин и узлов, ведя к лимфаденопатии (увеличении лимфотичеких узлов).

Эти процессы угнетают иммунную систему, что способствует присоединению бактериальной микрофлоры.

Признаки

Аденовирусная инфекция у детей, симптомы которой схожи с другими заболеваниями верхних дыхательных путей, имеет инкубационный период от нескольких часов до двух недель, в среднем 6-9 дней. Болезнь начинается остро с классических симптомов респираторных вирусных инфекций в сочетании с выраженным фарингоконъюктивальным синдромом (воспалением конъюнктивы и фарингитом с высокой температурой).

В клинической картине наблюдаются следующие признаки:

повышенная температура 37-39 градусов, озноб;
интоксикация, которая проявляется отказом от еды, вялостью, нарушением сна, эмоциональной лабильностью;
боль в горле, особенно при глотании;
обильное выделение из носа (по началу прозрачное слизистое, а потом густое зеленовато-желтое);
ухудшившееся носовое дыхание, одышка;
сухой кашель, который на 3-4 день стает влажным с густой мокротой;
конъюнктивит (слезотечение, отек, резь в глазах). Обычно поражается один глаз, спустя несколько дней второй. При присоединении бактерий в глазах обнаруживают гнойное отделяемое, которое может склеивать ресницы;
диспепсия (диарея, рвота, тошнота, метеоризм);
судороги на фоне лихорадки, особенно у грудных детей.

Классическим проявлением аденовирусной инфекции является сочетание:

Диагностика

Различить аденовирусную инфекцию от других ОРЗ только по клиническим симптомам трудно, особенно в начале заболевания.

Для постановки диагноза нужно собрать подробный анамнез (жалобы ребенка, инфекции, которыми ребенок недавно болел, контакт с больным, вспышки инфекций в коллективе).

При осмотре ребенок бледный, лимфатические узлы при пальпации приобретают плотную консистенцию, их конгломераты спаяны с окружающим тканями. В горле покраснение, гнойная слизь на задней стенке глотки.

Характерным признаком болезни является увеличение печенки и селезенки (гепатолиенальный синдром). Его можно определить с помощью УЗИ органов брюшной полости.

Лабораторная диагностика включает общий и специфический анализы крови. В крови будет повышение лимфоцитов и СОЭ. В биохимическом анализе диспротеинемия (дисбаланс белка и наличие С-реактивного протеина).

Для выявления инфекционного возбудителя используют метод ИФА (иммунофлюоресцентный анализ) или ПЦР (полимеразная цепная реакция) с групповым антигеном из мазков:

слизистой оболочки носа,
задней стенки носоглотки,
конъюнктивы.

Что говорит Комаровский

По мнению врача, аденовирусная инфекция ничем не тяжелее любой другой болезни из группы ОРЗ. Как бы родители не оберегали свои детей, контакт с возбудителем неизбежен. Но дальнейший прогноз зависит только от тактики родителей.

Одноразовые маски или целая купа медикаментов не спасет от простуды. Поскольку вирус не может жить на открытом воздухе, главная задача создать неблагоприятные условия для развития инфекции (для этого необходимо проветривать комнату и заниматься влажной уборкой).

Больные дети в это время должны пить много теплых и любимых напитков. Ни в коем случае не стоит заставлять кушать ребенка. Таким образом, выздоровление наступит гораздо быстрее и с минимальным риском осложнений.

Полезное видео

Врач-инфекционист Г. Виноградова об аденовирусе:

Аденовирусная инфекция КРС (АВИ КРС, аденовирусная пневмония телят, аденовирусный пневмоэнтерит) у телят протекает остро и характеризуется поражением органов дыхания, пищеварения и конъюнктивитами. КРС часто является носителем латентных аденовирусов (АВ) КРС, вызывающих бессимптомные инфекции, патогенез и роль которых в общей патологии животных остается неясной. АВИ КРС регистрируется во многих странах мира.

Поставить диагноз на АВ по эпизоотологическим данным, клиническим и патологоанатомическим признакам нельзя, так как сходную патологию могут вызывать вирусы других таксономических групп: парагриппа-3, диареи, неориккетсии и др. Поэтому при постановке диагноза решающее значение имеют лабораторные исследования.

Лабораторная диагностика АВИ КРС заключается в следующем: обнаружение АГ в патологическом материале (мазках, отпечатках, срезах), полученном от больных животных, в ИФ и РСК; выделение возбудителя в культуре клеток ТБ, ПЭК или ЛЭК и его групповая идентификация в серологических реакциях: (РСК, РДП и РИФ); выявление АТ в сыворотке крови больных и переболевших животных (ретроспективная диагностика) в серологических реакциях: (РСК, РИГА, РДП и ЕLISА).

Лабораторную диагностику АВИ проводят с использованием соответствующего набора диагностикумов, выпускаемого биологической промышленностью, и параллельно с исследованием материала на ПГ-3,
РС-инфекцию, ИРТ и ВД-БС. Показана возможность тестирования АВИ с помощью ДНК-зонда. Это, по существу, экспресс-метод лабораторной диагностики АВИ, который можно с успехом применять при массовом обследовании телят в хозяйствах промышленного типа. Наиболее четкую картину гибридизации наблюдали на 5-7-е сут в пробах смывов из носа. Это соответствует динамике накопления вируса в организме зараженных животных.

Серологическая идентификация.Идентификацию выделенных

шт. вируса проводят в ИФ, РСК и РДП. Ввиду того, что КС и преципитирующий АГ вирусов 1-й подгруппы (1, 2 и 3) отличны от АГ
2-й подгруппы (4, 5, 6 и др.), РИФ, РСК и РДП ставят с 2-мя антисыворотками, соответствующим 2 подгруппам. Препараты считаются положительными при наличии флюоресценции в 10% клеток, заражённых патологическим материалом, при ее отсутствии в контрольной (незараженной) культуре клеток. Срок выявления АВ в культуре клеток зависит от заражающей дозы и колеблется в пределах 20-96 ч. Показана возможность применения сыворотки к гексону 1-го типа АВ человека для обнаружения АВ КРС. Близкое АГ родство АВ 1-й подгруппы КРС и человека может служить основанием для создания на основе гексона единого диагностикума для ИФ-выявления данных АВ.

Исследование в данном методе антигексоновых сывороток к АВ позволяет повысить его эффективность в 3 раза в сравнении с использованием антисыворотки к цельному вирусу.

НИФ.Для экспресс-диагностики АВИ КРС в клинических образцах разработан вариант непрямой ИФ клеточных культур на покровных стеклах, зараженных АВ, с помощью монАТ с групповой специфичностью гексонов всех АВ млекопитающих.

РСК.С ее помощью можно успешно обнаруживать и идентифицировать выделенные полевые шт. АВ. РСК ставят по общепринятой методике в макро- или микровариантах. В качестве испытуемого АГ используют органы и ткани больных животных, а также культуральный вирус, полученный после заражения культуры клеток. Разработаны методики приготовления АГ и схемы иммунизации для получения (1:1280) сывороток.

РДП.Ставят в чашках Петри в слое застывшего агара. Как и РСК, её используют для идентификации вновь выделенных шт. АВ с гипериммунными сыворотками кроликов (сыворотки морских свинок для этой цели не применяют). Шт. серотипов 1-й подгруппы (Воvine 10, Воvine -19, WBR 1) в РДП прекрасно реагируют между собой, тогда как шт. 2-ой подгруппы (ТНТ/62, В4/65 и 671/130) проявляют низкую активность в РДП даже с гомологичными сыворотками. Однако, если использовать концентрированные АГ этих шт., с помощью РДП удается четко выявить перекрестную АГ- связь между ними. В качестве испытуемого АГ используют культуральную вируссодержащую жидкость, которую необходимо концентрировать.

РТНГА.Рекомендуют для идентификации выделенного в культуре клеток вируса. При положительных реакциях РСК и РДП устанавливают принадлежность АВ к 1-й или 2-й подгруппе АВ КРС и проводят его типирование с типоспецифическими сыворотками к АВ КРС. Типирование бычьих АВ осуществляют в научно-исследовательских учреждениях, имеющих типоспецифические сыворотки и вирусы для РН.

Серодиагностика и ретроспективная диагностика.Необходимо иметь в виду, что при положительном результате выделения и идентификации АВИ для окончательной постановки диагноза необходимо исследовать парные сыворотки больного животного с выделенным вирусом. Если при помощи РИГА и РСК выявлено 4-кратное и более повышение титра АТ к выделенному вирусу во 2-й сыворотке больного по сравнению с 1-й, ставят диагноз. В реакциях используют парные пробы сывороток, взятые в первые 2-3 сут болезни и через 14-30 дн. У заболевших животных вначале выявляются АТ в РИГА, затем - в РН и РТГА и уже через 1-1,5 нед - в РДП и РСК. КС и ПА сохраняются у животных-реконвалесцентов до 4 мес. У экспериментально заражённых телят ВНА обнаруживают на 5-й дн после заражения в титре 2,2 log₂ и на 10-й дн - в титре 4-4,3 log₂.

ЕLISА.Установлена в 100 раз большая его чувствительность для выявления АТ к гек-соновому АГ АВ по сравнению с РСК Были получены гипериммунные, высокоактивные и специфические сыворотки против гексонов АВ 1-й подгруппы (ВАV1 и ВАV3) и 2-й подгруппы (ВАV7), которые были рекомендованы при разработке иммуноферментного набора для серодиагностики АВИ КРС. Для диагностики АВИ биопромышленность выпускает 2 диагностических набора для выявления и идентификации вируса и АТ методами ИФ, РСК, РДП и РНГА.

Дифференциальная диагностика.Клинико-эпизоотологическая диагностика АВИ затруднена из-за сходства её с ПГ-3, ВД-БС, ИРТ,
РС-инфекцией, хламидиозом и другими болезнями, поражающими респираторно-кишечный тракт животных. Кроме того АВИ часто протекает в ассоциации с вышеуказанными болезнями. Поэтому только лабораторные исследования, проводимые с использованием диагностических наборов к указанным болезням, помогут правильно поставить диагноз.

Вирусоскопия.ЭМ и ИЭМ в практических условиях не применяются. Из экспресс-методов диагностики наибольшего внимания заслуживает применение гибридизационного зонда. С помощью его (точечной гибридизации) удается дифференцировать два родственных морбилливируса - ВЧ КРС и ВЧ МЖЖ. Дифференциальная диагностика с помощью ДНК-зондов помогла идентифицировать вспышку чумы КРС среди популяции баранов в Индии.

Индикация и идентификация вируса

Обнаружение специфических телец-включений.В зараженных культурах клеток в цитоплазме одиночных клеток и симпластов появляются сначала мелкие эозинофильные включения округлой формы со светлым ободком вокруг. С увеличением размеров симпластов растут объем и число цитоплазматических включений. Последние принимают многоугольную, продолговатую формы или форму кольца, охватывающего ядра симпластов; в цитоплазме располагается до 10 включений. Вслед за появлением цитоплазматических включений в инфицированных клетках, в том числе и в симпластах, образуются внутриядерные оксифильные включения в количестве 2-4. Хроматиновая сеть ядра нарушается лишь вокруг включений. В некоторых случаях они занимают почти все ядро.

Биопроба.Идентифицировать ВЧ можно биопробой на иммунном и неиммунном скоте. Двух животных вакцинируют сухой вирусвакциной из шт. ЛТ (согласно утвержденному наставлению по применению препарата). Через 12 дн вакцинированных и двух невакцинированных животных заражают испытуемым материалом (суспензия селезенки, лимфоузлов и крови). При наличии у невакцинированных животных специфической температурной реакции, клинических признаков и отсутствии таковых у иммунных животных биопроба считается положительной. У заболевших или павших животных обнаруживают специфический АГ в РСК и РДП.

РН. Применяют качественную и количественную РН. Для установления специфичности вызываемых вирусом поражений клеток проводят качественную РН, а для определения количества АТ в сыворотке иммунных животных - количественную.

РСК.Применяют для прижизненной и посмертной диагностики чумы с целью выявления АГ в гомогенатах лимфоузлов, селезенки, а также в инфицированной культуре клеток. При использовании РСК с целью идентификации вируса в культуре клеток в качестве специфического и контрольного АГ используют культуральную жидкость с зараженной и неза-раженной культурами клеток.

Предложена упрощенная модификация РСК для определения растворимых АГ ВЧ КРС. АГ готовят из лимфоузлов или селезенки КРС, коз и кроликов. Отмечено, что АГ, подвергнутые замораживанию - оттаиванию или ультразвуковой обработке, или осаждению сульфатом аммония или сульфатом натрия, более активны.

Гипериммунные сыворотки для идентификации вируса готовят по методу Скотта. Кровь берут от кроликов, иммунизированных лапинизированиым, авинизированным или ЛТ-вирусами. Такие сыворотки нужны для обнаружения испытуемого АГ в РСК. Положительные сыворотки и соответствующие им контроли (нормальные сыворотки) получают на КРС в возрасте 12-18 мес. От них берут сыворотку до иммунизации (контрольная) и через 21 день после подкожной прививки 100 иммунизирующих доз (позитивная сыворотка). Такая сыворотка обычно в РН реагирует положительно в разведении 1:40 - 1:80. Полученную сыворотку сохраняют при -20°С и используют в РСК и РН с испытуемым АГ в течение 4-
6 мес. Диагностическую сыворотку для РСК получают также от кроликов, инфицированных, а затем гипериммунизированных ВЧ КРС.

РДП.Реакцию ставят по методу Оухтерлони. Выявление преципитирующего АГ ВЧ в органах больного КРС является ценным диагностическим тестом, поскольку этот АГ регулярно появляется в лимфоузлах больных животных, начиная с 1-го дня повышения температуры. На 3-й день болезни он выявляется лишь у 50% больных. РДП, как и РСК, дает быстрый ответ (через 12-18 ч). Оптимальный срок для взятия проб - период от 4-6 дн после начала лихорадки до появления поражений во рту и диареи. Если нет животного в этой стадии болезни, рекомендуют брать образцы от погибшего животного. Для исследования пригоден материал даже от разлагающихся в течение 52 ч трупов, в качестве антител используют гипериммунные сыворотки кроликов и КРС.

Заведомо положительные и отрицательные АГ, приготовленные соответственно от больных и здоровых животных, используют в РДП одновременно. Положительную преципитирующую сыворотку получают от кроликов, иммунизированных инфицированными кроличьими тканями. РСК, РДП, РН и РИГА являются специфичными и эффективными лабораторными методами выявления АГ и идентификации ВЧ КРС. Однако данные ученых показали, что аттенуированные штаммы ВЧ КРС в естественных условиях не стимулируют продуцирование преципитирующего антигена в тканях животных. Это может быть характерным признаком отличия вакцинного штамма от эпизоотического. В Иране в 1982 г. в зонах, где скот был вакцинирован, у привитых животных не обнаруживали образование преципитирующего антигена. Поэтому в зонах систематической вакцинации скота против данной инфекции диагноз поставить сложно.

ВИЭОФ.Предложен вместо РДП для быстрой диагностики чумы КРС. В качестве испытуемого АГ служит суспензия селезенки и лимфоузлов толстого кишечника КРС и овец, полученных во время вспышки болезни. ВИЭОФ проводят в 0,8%-ной агарозе на вероналовом буферном растворе с рН 8,6. Гипериммунную сыворотку помещают в лунки вблизи анода, исследуемый материал - вблизи катода. Пластины помещают в горизонтальную ванночку с охлажденным вероналовым буфером. Линии преципитации образуются через 45 мин при силе тока 6 мА. ВИЭОФ при обнаружении АГ в тканях павших животных он оказался в 4-16 раз чувствительнее РДП и позволяет получить результат в течение 40 мин.

РТГА.Разработана для экспресс-диагностики чумы КРС. Если исследуемый материал содержит вирус, анти-ГА связываются, а их отсутствие или нехватку можно потом выявить, исследуя сыворотку в РТГА с использованием гемагглютинина ВК. При отсутствии вируса в исследуемом материале количество АТ остается неизменным. В этой реакции используют родство АГ ВЧ КРС и ВК. Особую ценность она имеет для диагностики случаев заболевания, вызванных штаммами с ослабленной вирулентностью.

ИФ.В качестве исследуемого материала используют мазки-отпечатки и гистологические срезы (селезенка, лимфоузлы, печень, слизистые оболочки ротовой полости и кишечника) из органов и тканей больных животных или инфицированные этими материалами культуры клеток. Возможно применение непрямого ИФ для обнаружения специфического АГ. Четкие результаты получают в случаях, если ФИТЦ-конъюгат изготовлен на основе гамма-глобулина, выделенного ионообменной хроматографией из специфической сыворотки. Прямая ИФ позволяет обнаруживать АГ в более ранние сроки: в мазках-отпечатках из органов больных животных через 2 ч, в зараженной культуре клеток - на 1 пассаж ранее появления ЦПД - т.е. раньше на 8-10 дн. С помощью прямой ИФ возможно оценивать результаты РН в культуре клеток через 24-48 ч после постановки опыта, тогда как для оценки реакции по ЦПД вируса требуется 6-8 сут. Поэтому прямой метод ИФ признан высокоспецифичным, чувствительным и пригодным для экспресс-диагностики чумы КРС.

РНГАи РЗГА.Обе реакции позволяют дифференцировать сыворотки и АГ при использовании обработанных дубильной кислотой эритроцитов крови коз. Реакции основаны на адсорбции перекрестных АТ из сыворотки, которая используется в РТГА.

ИФА.ИФА позволяет быстро выявлять АГ ВЧ КРС в патматериале. Наиболее часто АГ выявляли в мазках из поражений слизистой ротовой полости и лимфоузлов. АГ ВЧ наиболее часто выявляли у КРС моложе
3 лет, а у буйволов - в более старшем возрасте. В РДП и ИФА результаты совпадали, но последний позволял получить результат через 2-3 ч. Успешно вирус определяли в назальных и глазных секретах через 4 дн несмотря на то, что он там содержался в количестве не более 1,75lg
ТЦД_50/МЛ. ИФА оказался более чувствительным по сравнению с выделением ВЧ КРС. Получены компоненты набора для диагностики чумы КРС методом твердофазного ИФА, которые обеспечивают обнаружение вирусспецифического АГ (нуклеопротеина) ВЧ КРС в лизатах зараженных клеточных культур и пробах органов больных животных, а также обеспечивали обнаружение АТ в сыворотках больных и переболевших животных. Чувствительность ТФ ИФА при выявлении специфических антител в сыворотках крови больных и иммунных животных (метод ингибирования) сравнима с чувствительностью РТНГА с использованием эритроцитарного диагностикума на основе монАТ к ВЧ КРС.

Серодиагностика и ретроспективная диагностика. Для обнаружения АТ используют РН, ВИЭОФ, РРГ и ЕLIЗА. Для серологического исследования берут кровь как можно раньше после установления клинических проявлений и повторно через 10-14 дн. Исследуют парные сыворотки крови не менее чем от 10 животных. ВНА и КСА у животных-реконвалесцентов обнаруживаются через 3-5 дн, поэтому чаще всего применяют РСК и РН. Ретроспективную диагностику чумы КРС проводят в очагах инфекции или при атипичном её течении на вакцинированном поголовье животных, имевших слабый поствакцинальный иммунитет. 4-кратное увеличение титра КСА и ВНА свидетельствует о наличии прошедшей инфекции.

РСК.Применяют чаще всего. На 3-4-й день после снижения температуры у животных обнаруживают КСА в титре от 1:10 до 1:40. На 21-30-й дн достигают максимума и удерживаются в течение 3 мес на уровне 1:80-1:160. Через 8 мес титр их составляет 1:20-1:40.

РН. Можно ставить на кроликах, имея лапинизированный штамм. Учитывая дороговизну этого метода, его используют крайне редко. Реакция в культурах клеток с использованием адаптированных к ним штаммов - метод более простой и дешевый. Для выявления и титрования ВНА метод микротитрования не уступает пробирочному, но выгодно отличается от него меньшей чувствительностью к колебаниям дозы. Чтобы избежать цитотоксического и ингибирующего проявления, рекомендуется делать первоначальное разведение сыворотки 1:5. Количественную РН можно проводить в двух вариантах: 1) с постоянной дозой вируса (200-500 ТЦД₅₀) и двукратно возрастающими разведениями сыворотки;
2) с постоянной дозой сыворотки (разведение 1:5-1:10) и 10-кратными разведениями вируса 10 -1 -10 -6 .

РТГА.В качестве АГ в этой реакции используют вирус кори.

ЕLISА.Непрямой твердофазный микрометод позволяет обнаруживать АТ к ВЧ КРС. Данные его коррелируют с результатами РН. Считают, что указанный метод можно успешно применять для оценки эпизоотической ситуации и при проведении кампаний по вакцинации животных.

Проведена сравнительная оценка эффективности использования ИФ, ИФА и ВИЭОФ для выявления АТ против чумы КРС у телят, вакцинированных культуральной вирус-вакциной против чумы КРС. Исследования проведены с использованием первичных культур бычьей почки, выращенных на покровных стеклах и инфицированных шт. К90 ВЧ КРС, или с использованием мазков-отпечатков ткани лимфоузлов КРС, зараженного шт. Гиссар. При применении ИФА мазки-отпечатки предварительно обрабатывали антипероксидазной сывороткой для удаления эндогенной пероксидазной активности клеток лимфоузлов. Установлено, что в первые 7 нед после вакцинации у телят удавалось выявить АТ в 100% случаев всеми испытуемыми методами. В последующий период (с 8 до 12 нед после вакцинации) наиболее эффективным был метод ИФ (АТ выявлены у 84,6-100% телят). Менее чувствительными в этот период были методы ИФА и ВИЭОФ (соответственно АТ обнаружены у 23-77,7 и 7,7-77,7% телят). Для определения АТ к ВЧ КРС в Индии успешно применяют метод micrоЕLISА. Показаны преимущества конкурентного ЕЫЗА со специфическими монАТ над непрямым ЕLISА.

Реакция радиального гемолиза (РРГ).Рекомендована для обнаружения АТ к ВЧ КРС. В качестве АГ используют суспензию лимфоузлов от зараженных телят. Реакцию ставят на пластинках, куда вносят 2-4 мл 1%-ной агарозы с 0,3 мл конъюгированных с АГ бараньих эритроцитов, обработанных хлоридом хрома и 0,3 мл неразведенного комплемента.

Дифференциальная диагностика.Проводится по данным исследования вируссодержащего материала (гибридизационным тестом, биопробой, серологическими реакциями с видоспецифической сывороткой). В связи с тем, что в некоторых странах, в том числе и в европейских, чума КРС давно ликвидирована, при случайном заносе она может быть ошибочно диагностирована как вирусная диарея или злокачественная катаральная горячка, что необходимо иметь в виду при дифференциальной диагностике чумы.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Патогенез аденовирусной инфекции обусловлен развитием под воздействием вируса местных воспалительных реакций в слизистой оболочке верхних дыхательных путей и конъюнктивы, гиперплазией лимфоидной ткани и общим токсическим воздействием на организм.

Заболевание может протекать бессимптомно или с клиническими проявлениями умеренно выраженной респираторной инфекции (в виде сочетания ринита с фарингитом или сочетания ринита, фарингита и тонзиллита), кератита в конъюнктивита (катарально-фолликулярный или пленчатый конъюнктивит), гастроэнтерита или пневмонии.

В период эпидемических вспышек диагностируется по клиническим и эпидемиологическим данным, при абортивном течении и в спорадических случаях аденовирусная инфекция подтверждается микробиологическими методами диагностики.

Лечение заболевания в неосложненных случаях - симптоматическое.

Источником инфекции являются больные с клинически выраженными или стертыми формами болезни, в меньшей степени - вирусоносители. Возбудитель выделяется из организма с секретом верхних дыхательных путей до 25-го дня болезни, более 1,5 месяцев - с фекалиями.

Механизм передачи инфекции - аэрозольный (с капельками слюны и слизи), путь передачи – воздушно-капельный, не исключается возможность и фекально-орального механизма заражения (алиментарный путь передачи).

Естественная восприимчивость людей высокая. Перенесенное заболевание оставляет типоспецифический иммунитет, возможны повторные заболевания.

Распространено заболевание повсеместно, составляет 5-10% от всех вирусных болезней. Заболеваемость регистрируют в течение всего года с подъемом в холодное время. Наблюдаются как спорадические случаи, так и эпидемические вспышки. Наиболее восприимчивы к инфекции дети от 6 месяцев до 5 лет, а также военнослужащие. Особенно высока заболеваемость во вновь сформированных коллективах детей и взрослых (в первые 2-3 месяца). У 95% взрослого населения в сыворотке крови обнаруживаются антитела к наиболее распространенным сероварам вируса.

Классификация Клиническая классификация учитывает преимущественную локализацию процесса. Выделяют следующие формы аденовирусной инфекции:
- Острое респираторное заболевание.
  Начинается с катаральных явлений в виде ринита, сочетания ринита с фарингитом, ринита с фарингитом и тонзиллитом, или ларинготрахеита. Клинические проявления бронхита встречаются редко. Общетоксический синдром (головная боль, ломота в теле, озноб, слабость) выражен умеренно. Лихорадка продолжительная, чаще субфебрильная.
- Фарингоконъюнктивальная лихорадка.
  Имеет четкую клиническую картину с 4-7 дневной температурой, общетоксическим синдромом, симптомами ринита и фарингита, конъюнктивитом, нередко пленчатым.
- Аденовирусная пневмония.
  Клинически характеризуется длительной волнообразной лихорадкой, прогрессированием симптомов интоксикации, усилением кашля, одышкой при физической нагрузке, акроцианозом.
- Конъюнктивит и кератоконъюнктивит.
  Характеризуется тяжелым поражением конъюнктив: конъюнктивит фолликулярный или пленчатый, может присоединяться кератит. Заболевание начинается остро и протекает тяжело. Температура тела повышается до 39-40 °С и сохраняется до 5-10 дней. Заболевание сопровождается увеличением периферических лимфатических узлов, особенно передне- и заднешейных, иногда – подмышечных и паховых.
По степени тяжести:
- Легкая форма.
  При легкой форме возникают острое катаральное воспаление верхних дыхательных путей (острый риноларинготрахеобронхит), глотки (острый фарингит), регионарный лимфаденит и острый конъюнктивит.
- Среднетяжелая форма.
  Проявляется выраженными катаральными явлениями, гиперплазией лимфоидных образований ротоглотки, лимфаденопатией. Конъюктивит катарально-фолликулярный или пленчатый.
- Тяжелая форма.
  Эта форма заболевания обусловлена генерализацией вируса или присоединением вторичной инфекции. При генерализации инфекции вирусы размножаются в эпителиальных элементах кишечника, печени, почек, поджелудочной железы, ганглиозных клетках головного мозга, вызывая расстройство кровообращения и воспаление.

Код МКБ-10
- A08.2 - Аденовирусный энтерит.
- A85.1 - Аденовирусный энцефалит (G05.1).
- A87.1 - Аденовирусный менингит (G02.0).
- B30.0 - Кератоконъюнктивит, вызванный аденовирусом (H19.2).
- B30.1 - Конъюнктивит, вызванный аденовирусом (H13.1).
- B34.0- Аденовирусная инфекция неуточнённая.
- J12.0- Аденовирусная пневмония.

Этиология

Возбудители заболевания человека – ДНК-содержащие вирусы, относящиеся к семeйству Adenoviridae. У людей выделено более 40 сероваров аденовирусов, которые различаются по эпидемиологическим характеристикам: серовары 1, 2 и 5 вызывают поражения дыхательных путей и кишечника у маленьких детей с длительной персистенцией в миндалинах и аденоидах, серовары 4, 7, 14 и 21 - ОРВИ у взрослых, серовар 3 вызывает острую фарингоконъюнктивальную лихорадку у детей старшего возраста и взрослых, несколько сероваров вызывают эпидемический кератоконъюнктивит. Вспышки заболеваний чаще бывают обусловлены типами 3, 4, 7,14 и 21.

Аденовирусы устойчивы во внешней среде, сохраняются до 2 недель при комнатной температуре, неустойчивы к нагреванию, воздействию ультрафиолетовых лучей и хлорсодержащих препаратов. Хорошо переносят замораживание. В воде при температуре 4 °С сохраняют жизнедеятельность 2 года.

Подавление активности макрофагов и повышение проницаемости тканей приводят к развитию вирусемии с диссеминацией возбудителя по различным органам и системам и проникновением вируса в клетки эндотелия сосудов, приводящее к их повреждению. При этом часто наблюдается синдром интоксикации. Фиксация вируса макрофагами в печени и селезенке вызывает изменения в этих органах с увеличением их размеров (гепатолиенальный синдром).

При аденовирусной инфекции чаще, чем при других ОРВИ, может развиваться продолжительная вирусемия, что ведет к вовлечению в патологический процесс печени, селезенки, новых лимфоидных образований, а также к появлению длительной волнообразной лихорадки.

Клиника Инкубационный период имеет продолжительность от 4 до 14 дней (чаще 5-7 дней).

Аденовирусные заболевания начинаются остро с повышения температуры тела, симптомов интоксикации: озноб, головная боль, слабость, снижение аппетита, мышечные боли. Но даже при высокой лихорадке общее состояние больных остается удовлетворительным и токсикоз организма не достигает степени, свойственной гриппу

Лихорадка в типичных случаях продолжительная, длится до 6-14 дней, может носить двухволновой характер. При аденовирусных заболеваниях, протекающих с поражением только верхних дыхательных путей, температура сохраняется 2-3 дня и нередко не превышает субфебрильных цифр.

Продолжительность заболевания в среднем от нескольких дней до 1 недели, но при длительной задержке вируса в организме возможно рецидивирующее течение, при этом инфекция затягивается на 2-3 недели.

Основными клиническими формами аденовирусной инфекции являются:

Острое респираторное заболевание (ринофарингит, ринофаринготонзиллит, ларинготрахеобронхит).
Фарингоконъюнктивальная лихорадка.
Конъюнктивиты и кератоконъюнктивиты.
Аденовирусная пневмония.

Острое респираторное заболевание

Встречается чаще у детей. Характеризуется высокой 4-7-дневной температурой, общетоксическим синдромом, ринофарингитом и конъюнктивитом, нередко пленчатым (чаще односторонним). Длительность конъюнктивита - 6-12 дней.

Для этих форм характерно более тяжелое поражение конъюнктив: конъюнктивит фолликулярный или пленчатый, может присоединяться кератит. Пленчатые конъюнктивиты встречаются преимущественно у детей дошкольного возраста. Заболевание начинается остро и протекает тяжело. Температура тела повышается до 39-40 °С и сохраняется до 5-10 дней. В большинстве случаев увеличиваются периферические лимфатические узлы, особенно передне- и заднешейные, иногда – подмышечные и паховые.
Присоединение кератита может быть обусловлено инфицированием роговицы при травмах или медицинских манипуляциях. В этих случаях возможно развитие эрозий роговицы, вплоть до потери зрения.

Может развиться через 3-5 дней от начала заболевания, у детей до 2-3 лет чаще возникает внезапно. Способствует этому наличие иммунодефицита. Клинически характеризуется длительной волнообразной лихорадкой, прогрессированием симптомов интоксикации, усилением кашля, одышкой при физической нагрузке, акроцианозом. У детей раннего возраста в тяжелых случаях вирусной пневмонии возможна пятнисто-папулезная сыпь, энцефалит, очаги некроза в легких, коже и головном мозге.

Течение заболевания в разных возрастных группах У детей раннего возраста аденовирусная инфекция протекает тяжелее и длительнее, с наличием повторных волн заболевания, сравнительно частым присоединением пневмонии. Лица пожилого возраста болеют аденовирусной инфекцией редко.

Осложнения Могут возникать на любом сроке аденовирусного заболевания и зависят от присоединения бактериальной флоры. Наиболее часто встречается пневмония , реже – синуситы (гайморит, фронтит). С присоединением пневмонии состояние больного ухудшается, температура тела достигает 39-40 °С, появляется одышка, цианоз, усиливаются кашель, интоксикация. Клинически и рентгенологически пневмония является очаговой, но может быть сливной. Лихорадка сохраняется до 2-3 недель, а изменения в легких (клинические и рентгенологические) до 30-40 дней от начала болезни.

Диагностика
- Цели диагностики
  - Выявление клинической формы аденовирусной инфекции.
  - Определение степени тяжести течения заболевания.
  - Своевременно диагностировать осложненное течение заболевания.
- Сбор анамнеза При сборе анамнеза учитывается острое начало заболевания с характерного сочетания экссудативного воспаления слизистых оболочек ротоглотки, глаз, с системным увеличением лимфатических узлов (преимущественно шеи).
  Устанавливается наличие факторов, повышающих риск развития осложнений (возраст больного, наличие хронических заболеваний легочной, сердечно-сосудистой, мочевыводящей, эндокринной систем, у женщин детородного возраста – возможность беременности).
  При сборе эпидемиологического анамнеза выявляется групповой характер заболеваемости.
- Физикальное исследование
  
  При осмотре ротоглотки выявляется гиперемия и отечность передних и задних небных дужек, мягкого язычка, задней стенки глотки с гипертрофированными фолликулами, иногда с белесоватыми налетами. Миндалины увеличены в размерах, гиперемированы, могут быть с беловатыми рыхлыми, легко снимаемыми налетами в виде островков, в лакунах может образовываться желеобразный экссудат серовато-белого цвета.
  
  Конъюнктивы век гиперемированы, отечны, со скудным отделяемым. Фолликулов немного, они мелкие, иногда наблюдаются точечные кровоизлияния. На роговице могут появляться точечные эпителиальные инфильтраты, исчезающие бесследно и не влияющие на остроту зрения. Сосуды склер инъецированы, глазная щель сужена.
  
  При пальпации лимфатических узлов выявляется увеличение и болезненность подчелюстных, шейных, подмышечных, медиастинальных и мезентериальных лимфоузлов.
  
  В некоторых случаях возможна гепатоспленомегалия.
  
  Аскультативно в легких при присоединении бронхита выслушиваются жесткое дыхание и рассеянные сухие хрипы в разных отделах. При развитии пневмонии перкуторно выявляется укорочение перкуторного звука над зоной воспаления, аускультативно - ослабление дыхания и влажные мелкопузырчатые хрипы. Пневмония носит очаговый или сливной характер.
- Лабораторная диагностика
  - Анализ крови клинический . При неосложненных формах болезни – нормоцитоз, реже – лейкопения. СОЭ не увеличена. При пневмонии наблюдается лейкоцитоз и увеличение СОЭ.
  - Анализ мочи . Без изменений.
  - Биохимический анализ крови. При неосложненном течении болезни изменений не наблюдается. При развитии пневмонии повышается содержание сиаловой кислоты свыше 2,5 мкмоль/л, положительные пробы на С-реактивный белок , повышение содержания фибриногена свыше 4 г/л.
  - Микробиологическая диагностика.
    - Метод экспресс-диагностики. Для раннего лабораторного подтверждения используется обнаружение специфического вирусного антигена в эпителиальных клетках слизистой оболочки носоглотки с помощью иммунофлюоресцентного метода (зеленое свечение).
    - Серологические исследования. Проводятся с целью ретроспективной диагностики. Используется метод реакции связывания комплемента (РСК). Исследуются парные сыворотки, взятые в острый период заболевания и в период реконвалесценции. Диагностически значимым считается нарастание титров антител в парных сыворотках в 4 раза и больше.
    - ПЦР- диагностика аденовируса . Методом полимеразной цепной реакции выявляется ДНК-вируса в крови или в мазке из зева.
  - Исследование мокроты. Определяется возбудитель и выявляется чувствительность выделенных микроорганизмов к антибиотикам.
- Инструментальные методы исследования. Рентгенограмма органов грудной клетки. Выполняется при подозрении на аденовирусную пневмонию: признаки мелкоочаговой или сливной пневмонии. Характерна выраженная реакция лимфоузлов корней, усиление легочного рисунка, особенно в прикорневых зонах. На этом фоне появляются одиночные или немногочисленные малоинтенсивные облаковидные затемнения. Гиперплазия лимфоузлов двухсторонняя, а инфильтраты чаще – односторонние.
- Тактика диагностики В период эпидемических вспышек по клиническим данным диагноз аденовирусной инфекции затруднений не вызывает. В случаях абортивного течения и при спорадических случаях болезни проводится лабораторная диагностика методами серологической и экспресс-диагностики.

Дифференциальный диагноз Проводится с гриппом, парагриппом, инфекционным мононуклеозом, микоплазменной инфекцией, брюшным тифом и паратифами А и В, иерсиниозом, энтеровирусной инфекцией.

Лечение легких форм аденовирусной инфекции может быть ограничено применением средств симптоматической терапии.

Лечение среднетяжелых форм при отсутствии бактериальных осложнений включает в себя патогенетическую и симптоматическую терапию.

Лечение тяжелых форм аденовирусной инфекции.

При развитии пневмонии наряду с патогенетическим лечением назначается рациональная антибактериальная терапия на основании анамнестических данных, клинико-рентгенологической картины и вероятной природы воспаления, поскольку бактериологическое исследование дает отсроченные и порой неопределенные результаты.

Тактика лечения Госпитализация проводится по клиническим и эпидемиологическим показаниям. Комплекс лечебных мероприятий включает в себя базисную (режим и рациональное лечебное питание), патогенетическую и симптоматическую терапию. При необходимости проводится физиотерапевтическое лечение. При присоединении вторичной бактериальной флоры оправдано применение антибактериальных препаратов.

Правила выписки

Переболевшие аденовирусной инфекцией выписываются после полного клинического выздоровления, при нормальных контрольных результатах общих клинических анализов крови и мочи, ЭКГ, но не ранее, чем через 3 дня после установления нормальной температуры тела. Средние сроки временной нетрудоспособности перенесших заболевание в легкой форме составляют не менее 6, средней тяжести - не менее 8, тяжелые формы - не менее 10-12 дней. При выписке из стационара больничный лист может оформляться на срок до 10 суток.

Больные аденовирусной инфекцией, осложненной острой пневмонией, должны выписываться на работу при полном клиническом выздоровлении, рассасывании воспалительной инфильтрации в легких, нормализации лабораторных показателей крови, мочи.

Критерии эффективности лечения. Критерием эффективности терапии является исчезновение симптомов заболевания.

Читайте также: