Биологические пробы в инфекционных болезнях

Аллергические пробы in vitroоснованы на выявлении сенсиби­лизации вне организма больного. Их применяют тогда, когда по тем или иным причинам нельзя произвести кожные пробы, либо в тех случаях, когда кожные реакции дают неясные результаты.

Для проведения аллергических проб используют аллергены — диагностические препараты, предназначенные для выявления специфической сенсибилизации организма. Инфекционные ал­лергены, используемые в диагностике инфекционных заболева­ний, представляют собой очищенные фильтраты бульонных куль­тур, реже взвеси убитых микроорганизмов или АГ, выделенные из них.

Кожные пробы.Инфекционные аллергены вводят, как правило, внутрикожно или накожно, путем втирания в скарифицированные участки кожи. При внутрикожном способе в среднюю треть передней поверхно­сти предплечья специальной тонкой иглой вводят 0,1 мл аллерге­на. Через 28 — 48 ч оценивают результаты реакции ГЗТ, определяя на месте введения размеры папулы.

Неинфекционные аллергены (пыльца растений, бытовая пыль, пищевые продукты, лекарственные и химические препараты) вводят в кожу уколом (прик-тест), накожно путем скарификации и втирания или внутрикожной инъекцией разведенного раствора аллергена. В качестве отрицательного контроля используют ИХН, в качестве положительного — раствор гистамина. Результаты учи­тывают в течение 20 мин (ГНТ) по величине папулы (иногда до 20 мм в диаметре), наличию отека и зуда. Внутрикожные пробы ставят в случае отрицательного или сомнительного результата прик-теста. По сравнению с последним, дозу аллергена уменьшают в 100-5000 раз.

Кожные пробы на наличие ГЗТ широко применяют для выяв­ления инфицированности людей микобактериями туберкулеза (проба Манту), возбудителями бруцеллеза (проба Бюрне), лепры (реакция Митсуды), туляремии, сапа, актиномикоза, дерматомикозов, токсоплазмоза, некоторых гельминтозов и др.

Пробы in vitro. Эти методы исследования безопасны для больного, достаточ­но чувствительны, позволяют количественно оценить уровень аллергизации организма.

В настоящее время разработаны тесты для определения сенси­билизации, основанные на реакциях Т- и B-лимфоцитов, ткане­вых базофилов, выявлении общих специфических IgE в сыворот­ке крови и др. К ним относятся реакции торможения миграции лейкоцитов и бласттрансформации лимфоцитов, специфическое розеткообразование, базофильный тест Шелли, реакция дегрануляции тканевых базофилов, а также аллергосорбентные методы (определение специфических IgE в сыворотке крови).

Реакция торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ).РТМЛ ос­нована на подавлении миграции моноцитов и других лейкоцитов под действием медиаторов, вырабатываемых сенсибилизирован­ными лимфоцитами, в присутствии специфического аллергена.

Реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТ).В основе этой реакции лежит способность нормальных лимфоцитов перифери­ческой крови вступать в митоз и превращаться в бластные формы при культивировании их in vitro под действием специфических фак­торов — аллергенов и неспецифических стимуляторов митогенеза — митогенов (фитогемагглютинин, конканавалин А, липополисахариды и другие вещества).

Реакция специфического розеткообразования.Розетки — харак­терные образования, возникающие in vitro в результате прилипа­ния эритроцитов к поверхности иммунокомпетентных клеток. Розеткообразование может происходить спонтанно, поскольку Т-лимфоциты человека содержат рецепторы к эритроцитам барана. Спон­танное розеткообразование здоровых людей составляет 52 — 53% и служит показателем функционального состояния Т-лимфоцитов. Этот феномен воспроизводится также и в том случае, если используют эритроциты, на которых фиксированы соответствую­щие аллергены.

Реакция дегрануляции тканевых базофилов.Методика основа­на на том, что под действием аллергена происходит дегрануляция тканевых базофилов крысы, предварительно сенсибилизирован­ных цитофильными AT из сыворотки крови больного.

Базофильный тест Шелли.Известно, что базофильные гранулоциты человека или кролика также дегранулируются в присут­ствии сыворотки больного и аллергена, к которому чувствителен данный пациент.

Определение антител класса IgE in vitro. Лабораторная диагно­стика заболеваний, в основе которых лежит ГНТ, основана на определении аллергенспецифических IgEанти-IgE. При использо­вании радиоактивной метки метод носит на­звание радиоаллергосорбентного теста (PACT), но чаще в каче­стве метки используют фермент или флюоресцирующее вещество (ФАСТ). Время анализа — 6 — 7 часов. Принцип метода: фиксиро­ванный на твердой основе известный аллерген инкубируют с сы­вороткой крови больного; находящиеся в сыворотке специфичес­кие IgEанти-IgE связываются с аллергеном и, таким образом, остаются фиксированными на основе и могут вступать в специ­фическое взаимодействие с добавляемыми мечеными анти-IgE.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Биологический метод заключается в выделении чистой культуры возбудителя путем заражения лабораторных животных исследуемым материалом от больного и последующим бактериологическим исследованием трупа животного.

Биологический метод проводится с использованием чувствительных лабораторных животных. Для экспериментального заражения чаще использу­ют белых мышей, крыс, морских свинок и кроликов. Для некоторых специальных исследований служат обезьяны, кошки, собаки, лошади, крупный и мелкий рогатый скот, дикие животные (хомяки, суслики, дикие крысы, полев­ки), птицы (куры, голуби и т. д.), а также куриные эм­брионы. При выборе вида лабораторного животного необходимо учитывать степень его восприимчивости к изучаемому возбудителю инфекции. Для получения сравнимых ре­зультатов исследования проводят на животных одного вида, пола и массы.

Лабораторные животные используются не только с целью выделения и накопления чистой культуры, но и для изучения клинической картины заболевания и для учета реакции нейтрализации токсина антитоксической сывороткой.

Существуют следующие способы заражения: подкож­ный, внутрикожный, накожный, внутримышечный, внутрибрюшинный, внутривенный, пероральный (через рот), интраназальный (через нос в дыхательный тракт), вве­дение в глаз, введение в центральную нервную систему. При внутрикожном или накожном способе зара­жения шерсть на месте введения или нанесения материа­ла удаляют выстриганием, выщипыванием или депилированием.

Вскрытие следует производить непосред­ственно после гибели животного, чтобы избежать про­никновения микроорганизмов из кишечника в кровь и другие органы. Все наблюдения, сделанные во время вскрытия, про­токолируют. Отмечают вид животного, номер, время и место заражения, материал, применяемый для зараже­ния, время гибели, обнаруженные изменения и т. д. Во время вскрытия необходимо следить за тем, чтобы жид­кость и кусочки тканей и органов не попали на стол. После каждой манипуляции инструменты промывают водой или спиртом и прожигают. Отмечают цвет, величину и консис­тенцию каждого органа. Из измененных органов (или из всех, в зависимости от цели эксперимента) делают высев на питательные среды, мазки и мазки-отпечатки. Для посева прижженную поверхность органа надрезают сте­рильным скальпелем, из глубины органа вырезают ма­ленький кусочек, часть его помещают в питательную среду, а из другой делают мазки-отпечатки, приклады­вая срезанную часть к стеклу. Обязательно делают по­сев крови из сердца. Для этого прижигают раскаленным скальпелем верхушку сердца и стерильной пастеровской пипеткой прокалывают прожженный участок, кровь при этом поднимается в капилляр. Кровь из капилля­ра выдувают в жидкие питательные среды и делают из нее мазки. После окончания вскрытия производят тщательную уборку рабочего места. Труп животного сжигают или автоклавируют. Инструменты стерилизуют кипячением или автоклавируют. Доску или кювету протирают спиртом и прожигают или заливают на сутки дезинфицирую­щим раствором. Мазки фиксируют в пламени или жид­ким фиксатором, окрашивают и изучают.

Биопроба — метод контроля биологических препаратов (вакцин, сывороток), основанный на их введении лабораторным животным с целью оценки токсичности, пирогенности и иммунологической активности.

III. План практической работы

1. Провести обнаружение бактериальных структур, являющихся факторами патогенности

а) капсулы бактерий в готовых мазках

Для обнаружения капсул используют метод Бурри-Гинса: на первом этапе тушь, обтекая капсульные бактерии, создает черный или коричневый фон (соответствующий цвету туши) на котором хорошо видны неокрашенные бактерии, которые на втором этапе окрашиваются фуксином в красный цвет, а капсула остается бесцветной. Таким образом, капсулы бактерий хорошо видны на темном фоне в виде прозрачных, белых ореолов вокруг красных бактерий.

б) жгутиков бактерий — зарисовать различные варианты расположения жгутиков (монотрих, лофотрих, амфитрих, перитрих).

По количеству и расположению жгутиков различают монотрихи — один жгутик, перитрихи — жгутики по всей поверхности бактериальной клетки, лофотрихи — пучок жгутиков на одном конце клетки, амфитрихи — единичные жгутики или пучки жгутиков на разных полюсах клетки.

в) корд-фактора у патогенных микобактерий

При культивировании микобактерий на предметных стеклах, погруженных в жидкую среду на основе цитратной крови, микроколонии вирулентных штаммов вырастают в виде переплетающихся кос — тяжей, вследствие наличия корд-фактора. Для их обнаружения стекла окрашивают по методу Циля-Нильсена и проводят иммерсионную микроскопию (метод микрокультивирования по Прайсу).

2. Учесть результаты определения факторов патогенности стафилококка: гемолизина, лецитиназы и плазмокоагулазы.

Гемолизин (экзофермент, по механизму действия мембранотоксин) определяют путем посева испытуемой культуры на чашки Петри с кровяным агаром. Посевы инкубирую при 37°С в течение 18-24 часов. Вокруг колоний гемолитических микроорганизмов образуются зоны полного (β) или неполного, зеленящего (α) гемолиза.

Для обнаружения лецитиназы производят посев исследуемой культуры на питательный агар с лецитином (желточный агар). Вокруг колоний бактерий, выделяющих фермент, образуется зона помутнения с перламутровым блеском.

Плазмокоагулаза выявляется при посеве испытуемой культуры в 0,4 мл стерильной цитратной плазмы крови. Посевы инкубируют при 37°С в течение 2-5 ч. В случае образования фермента происходит свертывание плазмы (образование геля), а в контроле она остается жидкой (золь).

3. Учесть результаты определения токсигенности дифтерийной палочки, зарисовать.

Полоску фильтровальной бумаги, пропитанной антитоксической противодифтерийной сывороткой, накладывают на поверхность прозрачного сывороточного агара в чашке Петри. Культуры дифтерийной палочки сеют бляшками на расстоянии 0,6-0,8 см от полоски фильтровальной бумаги и 1-1,5 см друг от друга. Исследуемые и контрольную (токсигенную) культуры дифтерийной палочки чередуют с одной стороны полоски фильтровальной бумаги, а напротив, с другой стороны полоски сеют одноименные культуры (дубли). Чашку инкубируют при 37 ◦ С в течение 24-48 часов. Затем проводят учет. Положительной реакция считается при наличии тонкой линии преципитата между полоской фильтровальной бумаги и ростом бактерий в виде бляшки, отрицательной — при её отсутствии. Реакция считается специфичной, если контрольная (токсигенная) культура дала положительный результат.

4. Зарисовать схему этапов проведения биологического метода диагностики инфекционных заболеваний.

5. Заполнить таблицы по теме занятия

6. Решить ситуационные задачи

УИРС.Учесть результаты чувствительности микрофлоры зева к антибактериальным препаратам, заполнить таблицу.

IV. Примеры ситуационных задач

Ситуационная задача № 1

Больной А, 18 лет, поступил в инфекционное отделение с карбункулом затылочной области. При проведении бактериологического исследования выделена чистая культура этиологического агента инфекционного заболевания. При изучении факторов патогенности выделенной чистой культуры выявлена зона опалесценции на желточном агаре и зона полного просветления на кровяном МПА. Дайте характеристику данного микроорганизма.

1. лецитиназа положительный
2. лецитиназа отрицательный
3. плазмокоагулаза положительный
4. уреаза положительный
5. гемолитический (β-гемолиз)

В инфекционное отделение детской областной больницы поступил ребенок 6 лет с подозрением на дифтерию. В ходе бактериологического исследования выделена чистая культура дифтерийной палочки (Corynebacterium diphtheriae). При проведении реакции преципитации в агаровом геле с антитоксической противодифтерийной сывороткой определяется зона преципитации. Сформулируйте заключение:

1. исследуемая культура дифтерийной палочки лецитиназа положительна
2. исследуемая культура дифтерийной палочки токсигенна
3. исследуемая культура дифтерийной палочки коагулаза положительна
4. исследуемая культура дифтерийной палочки не токсигенна

Теоретические вопросы для рубежного контроля знаний

1. Антибиотики и антимикробная терапия

2. Основные группы химиопрепаратов и антибиотиков

3. Механизмы действия антибактериальных препаратов на микроорганизмы

4. Побочное действие антибиотиков

5. Механизмы антибиотикорезистентности микроорганизмов

6. Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

8. Формы симбиоза

9. Классификации инфекционных заболеваний и форм инфекций

10. Периоды и исходы инфекционного заболевания

11. Патогенность и вирулентность, единицы вирулентности

12. Основные факторы патогенности микроорганизмов

13. Микробные токсины

14. Биологический метод диагностики инфекционных заболеваний

Папиллярные узоры пальцев рук - маркер спортивных способностей: дерматоглифические признаки формируются на 3-5 месяце беременности, не изменяются в течение жизни.

Поперечные профили набережных и береговой полосы: На городских территориях берегоукрепление проектируют с учетом технических и экономических требований, но особое значение придают эстетическим.

Опора деревянной одностоечной и способы укрепление угловых опор: Опоры ВЛ - конструкции, предназначен­ные для поддерживания проводов на необходимой высоте над землей, водой.

Общие условия выбора системы дренажа: Система дренажа выбирается в зависимости от характера защищаемого.

Инфекционные болезни — это заболевания, вызванные проникновением в организм бактерий, грибков или вирусов. Самая важная часть диагностики инфекций — это определение возбудителя и его концентрации. Для этих целей используются разнообразные лабораторные методы, которые позволяют выяснить, чем именно и как давно атакован организм, а в некоторых случаях — спрогнозировать эффективность лечения тем или иным препаратом.

Особенности диагностики инфекционных заболеваний

В клинической практике данный тип заболеваний встречается очень часто. Именно они, по данным Всемирной организации здравоохранения, становятся причиной 26% всех смертей. В список самых распространенных инфекционных заболеваний входят инфекционная пневмония и другие воспалительные заболевания дыхательных путей, гепатит, ВИЧ, туберкулез, малярия, воспаления органов половой системы и мочевыводящих путей, гистоплазмоз, ротавирусные инфекционные заболевания, ветряная оспа, герпес, вирус папилломы человека и еще несколько десятков болезней. Хотя бы раз в жизни каждый из нас сталкивается с инфекционными заболеваниями и необходимостью быстрой постановки диагноза.

Все инфекционные болезни делятся на пять типов — прионные, вирусные, бактериальные, протозойные и грибковые поражения. Далее будут рассмотрены последние четыре типа как наиболее распространенные. Разные возбудители иногда могут вызывать одно и то же заболевание. В частности, пневмония может быть результатом как вирусной, так и бактериальной инфекции. Лечение зависит не от проявлений, а от возбудителя болезни. Противовирусные препараты бесполезны в борьбе с бактериями и грибками, антибиотики не действуют на вирусы. Поэтому основная задача лабораторной диагностики инфекционных заболеваний — выявление типа возбудителя.

Способы лабораторной диагностики инфекционных болезней можно разделить на два типа: неспецифические и специфические методы.

К неспецифическим относятся общий анализ крови и исследование соотношения ее белковых фракций, печеночные пробы, общий анализ мочи и кала. Эти методы не дают информации о виде возбудителя, но позволяют узнать, в какой мере болезнь затронула органы и системы организма, что именно в их работе нарушено и насколько далеко зашел процесс.

Специфические — вирусологический и бактериологический методы, микроскопическое исследование возбудителей, анализы на антигены и антитела — направлены непосредственно на обнаружение возбудителя.

Современная медицина располагает множеством методов выделения возбудителей бактериальной инфекции:

Бактериоскопический . Исследуется окрашенный специальным образом мазок.

Бактериологический . Биоматериал высеивается в питательную среду, и через некоторое время специалист исследует колонию бактерий, выросшую в ней.

Биологический . Направлен на определение патогенности микроорганизмов.

Серологический . Выявляет антитела и антигены в сыворотке крови — особые вещества, которые вырабатываются организмом при контакте с возбудителем определенной болезни.

Чаще всего для исследований используют кровь или сыворотку крови, реже — слюну, мочу, кал, клетки эпителия (мазок и соскоб) и другой биоматериал.

В лабораторной диагностике вирусных заболеваний используются:

Вирусологическое исследование . Световая и электронная микроскопия дает возможность выявить наличие вирусных включений и сами вирусы и идентифицировать их.

Серологическое исследование для обнаружения антител и антигенов. Этот метод дает возможность быстро выявить агрессора, как и в случае с бактериальными инфекциями. Для диагностики используются разнообразные способы исследования материала — реакции гемадсорбции, гемагглютинации или метод непрямой иммунофлюоресценции. Имунноблоттинг, в частности, позволяет выявлять антитела сразу к нескольким инфекциям и считается современным и точным диагностическим методом.

Молекулярно-генетические методы . Последнее слово в лабораторной диагностике. Позволяют обнаружить вирус даже тогда, когда его концентрация ничтожно мала — то есть на самых ранних стадиях. Самым известным из этих методов является ПЦР, при которой фрагмент вируса многократно копируется до тех пор, пока специалист не получит достаточно материала для определения типа вируса и его изначальной концентрации.

Для выявления вирусов обычно требуется сделать анализ крови.

Так называют инфекции, вызванные простейшими паразитами, например, амебами. Малярия, амёбиаз, токсоплазмоз, лямблиоз, трихомониаз, сонная болезнь — вот неполный список самых распространенных протозойных инфекций. Лабораторная диагностика таких заболеваний включает в себя следующие методы:

Микроскопический . Простейшие паразиты выявляются путем исследования под микроскопом окрашенных образцов биоматериала. Самый простой и надежный метод для многих возбудителей.

Культуральный . Посев биоматериала в питательную следу для дальнейшего исследования размножившихся простейших. У этого метода есть существенный недостаток: результатов нужно ждать долго, сам процесс может занять не менее 5-6-ти дней.

Серологический . Используют редко ввиду малой информативности.

Аллергический . Также не является распространенным. Кожные аллергопробы делают для того, чтобы подтвердить лейшманиоз и токсоплазмоз. Это вспомогательный диагностический метод.

В качестве биоматериала для исследований в основном используется кровь, иногда — – кал или моча.

Микроскопическое исследование . Препарат окрашивается и рассматривается под мощным микроскопом. Посредством иммунофлюоресцентной микроскопии исследуется проба, помеченная флюоресцеинами — специальным красителем. Наиболее быстрый способ выявления грибка по сравнению с другими методами.

Культуральный . Происходит посев пробы на питательную среду и дальнейшее исследование полученной в результате колонии грибков.

Серологический . Используется для выявления грибковых поражений, однако для микозов он считается не особенно точным.

Гибридизация нуклеиновых кислот . Самый современный способ выявления грибковых инфекций, его применяют для идентификации основных возбудителей системных микозов. Из культуры извлекается РНК и вносится особым способом помеченная молекула ДНК. Если в пробе наличествует один из основных патогенных грибков, ДНК объединится с его РНК, создав легко различимую структуру. Несомненным преимуществом метода является возможность определить инфекцию на самых ранних стадиях.

Биоматериалом для исследований являются клетки кожи, волос и ногтей, клетки слизистых оболочек (мазок или соскоб), мокрота, моча, секрет простаты, сперма, грудное молоко.

Современные методики диагностики инфекций позволяет выявить их на начальном этапе, Чем раньше болезнь будет обнаружена, тем проще ее вылечить. Поэтому сдавать анализы на инфекции желательно регулярно, даже если вы ни на что не жалуетесь и не замечаете никаких перемен в самочувствии.

Пе­ред сда­чей био­ма­те­ри­а­ла для ис­сле­до­ва­ний иног­да тре­бу­ет­ся опре­де­лен­ная под­го­тов­ка. Так, кровь обыч­но сда­ют с ут­ра, на­то­щак, а пе­ред за­бо­ром маз­ка не ре­ко­мен­ду­ет­ся при­ни­мать душ. Эти тре­бо­ва­ния очень важ­ны: они обес­пе­чи­ва­ют точ­ность ре­зуль­та­та, по­это­му узнай­те у вра­ча за­ра­нее о под­го­то­ви­тель­ных ме­рах и точ­но сле­дуй­те всем его ре­ко­мен­да­ци­ям.

ДИАГНОСТИКА ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ

Методы диагностики. Чтобы распознать инфекционную болезнь и выявить больных животных, проводят клинический осмотр, аллергические, серологические, микроскопические, бактериологические исследования, биологическую пробу и патологоанатомпческие вскрытия.

Клиническому осмотру подвергают все поголовье животных в хозяйстве, где появилось заболевание. Животных с явно выраженными ь неясными клиническими признаками выделяют для уточнения диагноза.

Аллергические исследования заключаются в введении в организм животного (на конъюнктиву глаза, подкожно или внутрикожно) специфических препаратов, вызывающих у больного животного характерную реакцию. Имеются препараты для выявления лошадей, больных сапом (маллеин), животных, больных туберкулезом (туберкулин), бруцеллезом (бруцеллизат) и другие. Эти препараты называются аллергенами. При введении двух-трех капель маллеина в глаз больной сапом лошади у нее через несколько часов начинается слезотечение из этого глаза, с выделением гноя. У здоровой лошади такой реакции не наблюдается.

Серологическим исследованием называется исследование сыворотки крови животных, позволяющее выявить зараженных животных. В ветеринарной практике широко применяют исследование сыворотки крови по реакции агглютинации (РА) и реакции связывания комплемента (РСК).

Микроскопическому исследованию подвергают мазки крови или отпечатки из органов животных. При этом удается увидеть возбудителей болезни под микроскопом. Бактериологическим исследованием выделяют из органов павшего животного культуру возбудителя болезни посевами зараженного материала на специальные питательные среды. Биологическая проба позволяет воспроизвести заболевание у здоровых животных заражением их материалом, взятым от больного животного, или культурой возбудителя.

Патологоанатомическое вскрытие трупа животного нередко помогает подтвердить прижизненный диагноз. Иногда кусочки органов посылают в лабораторию для гистологического исследования, т. е. исследования под микроскопом ткани, ее характера и строения.

Взятие и пересылка материала для исследования на инфекционные болезни. Взятие патологического материала. Патологический материал берут в стерильную посуду стерильным инструментом, строго соблюдая меры личной предосторожности. Место на трупе или органе, от которых необходимо взять материал на исследование, прижигают горячей металлической пластиной (шпателем).

Жидкий материал - кровь, желчь, мочу, эксудат, слизь, гной и пр. - насасывают в тоЕпше стеклянные пастеровские пипетки, которые запаивают с обоих концов. Его можно также взять стерильным шприцем с иглой в стерильный флакон или стерильную пробирку с плотной резиновой или корковой пробкой, залив ее сверху расплавленным парафином пли воском. Тот же материал, но для микроскопического исследования наносят тонким слоем на чистое предметное, предварительно обезжиренное и профламбированное на огне стекло, которое затем подсушивают на воздухе; стекла связывают попарно мазками внутрь, вложив между ними перекладины из спичек. Вместо предметного можно использовать кусочек оконного стекла, чисто вымыв его в теплом 2-3%-ном растворе питьевой соды и обезжирив в спирте с эфиром или в бензине. Такое стекло высушивают на воздухе и обжигают пламенем спиртовки, после чего на него наносят тонким слоем подлежащий исследованию материал,

Гной из глубоких полостей берут стерильным ватным тампоном на кусочке тонкой проволоки или на небольшой деревянной палочке, вделанной в ватную пробку стерильной пробирки. ,

Гной из невскрывшихся глубоких абсцессов берут проколом стенки абсцесса тонкой, длинной иглой, в стерильный 5-20-граммовый шприц. Затем гной сливают через эту же иглу в стерильную пробирку (или флакон), плотно закрыв ее стерильной ватной или корковой пробкой и залив сверху расплавленным парафином или воском. Место прокола предварительно выстригают и дезинфицируют, после взятия гноя .смазывают настойкой йода.

Кал берут из прямой кишки в небольшом количестве в стерильные пробирки или в такие же стеклянные баночки, плотно закрывающиеся пробками.

Мочу у большинства животных берут через катетер в стерильные флакончики емкостью 100-200 мл. Ее можно взять и без катетера, массажируя рукой мочевой пузырь через прямую кишку и вызывая этим мочеиспускание.

Для исследования на бешенство берут аммоновы рога, а на болезнь Ауески - продолговатый мозг. Их кладут в стерильные баночки и консервируют: для бактериологического исследования - 33%-ным водным раствором глицерина, для гистологического исследования - 10%-ным водным раствором формалина.

Если невозможно вскрыть черепную коробку с соблюдением всех мер предосторожности, в лабораторию посылают голову, целиком отделив ее от трупа. Отпрепарированную голову необходимо завернуть в марлю, пропитанную дезинфицирующим раствором, а затем в пергамент или клеенку, запаковать в плотный ящик и срочно отправить с нарочным в ветеринарную лабораторию. Руки необходимо защитить резиновыми перчатками или брезентовыми (кожаными) рукавицами и после этой работы вымыть и тщательно продезинфицировать, помня, что в слюне бешеных животных содержится вирус.

Внутренние органы - сердце, легкие, печень, селезенку, почки, лимфатические узлы, желудок, а также пораженные мышцы и др. ткани - для бактериологического и гистологического исследования берут маленькими кусочками в местах с наиболее типическим поражением на границе со здоровой тканью в стерильные баночки с плотно притертыми пробками. Части пораженного желудка, кишечника или кусочки некротизированных тканей вначале обмывают водой, затем просушивают ватными тампонами и также помещают в стерильные баночки.

Материал, взятый для бактериологического исследования в зимнее время, не консервируют, в теплое же время года заливают 33%-ным водным раствором глицерина; для гистологического исследования - 10%-ным водным раствором формалина.

Материал не следует консервировать при быстрой доставке его в лабораторию. Банки с материалом герметически закупоривают пробками, закрепляя их тонкой проволокой или шпагатом, а затем заливают сургучом или замазывают смесью воска с парафином.

Трубчатые кости отделяют от трупа, стремясь не повредить их концы, освобождают от мышц и сухожилий, заворачивают в марлю, смоченную раствором сулемы или фенола, и упаковывают в плотный ящик.

Ухо (для исследования па сибирскую язву) берут с той стороны, на которой лежал труп. Предварительно ухо перевязывают у основания в двух местах шпагатом и отрезают между перевязками. Участок кожи на трупе, где отрезано ухо, прижигают каленым железом. Отделенное ухо сначала заворачивают в марлю, смоченную раствором сулемы или фенола, а затем в пергаментную бумагу, после чего упаковывают в плотный ящик. Для проведения бактериологического исследования на сибирскую язву вместо уха можно послать кровь, взятую из него толстой иглой. Можно сделать небольшой, но глубокий надрез кожи, взять кровь и нанести ее толстыми мазками на несколько предметных стекол. Мазки высушивают на открытом воздухе и, не фиксируя их пламенем спиртовки, складывают на перекладинки спичек, затем заворачивают в пергамент и упаковывают в плотный ящик или коробку, в которой и отправляют с нарочным в лабораторию. Место надреза (или укола иглой) прижигают раскаленным железом.

Трупы поросят, ягнят, птиц, телят и жеребят, а также плоды абортировавших животных отправляют в лабораторию в целом виде в тех случаях, когда на месте невозможно стерильно взять материал.

Трупы и плоды животных предварительно обтирают и завертывают в мешковину, смоченную раствором фенола или креолина, а затем упаковывают в металлический или плотный деревянный ящик со стружками и опилками.

Пчелиный сот с погибшим расплодом заворачивают в пергамент или вощеную бумагу и плотно укладывают в деревянный * ящик на планки (чтобы сот не соприкасался с дном и крышкой ящика). Погибших пчел и маток пересылают в стеклянных, плотно закрывающихся баночках, наполненных медом.

Патологический материал пересылают в лабораторию с нарочным. Плотный материал (например, трубчатую кость) можно послать почтой, обеспечив надежную упаковку, исключающую возможность рассеивания инфекции. Верх посылки обозначают надписью. При подозрении на особо опасные инфекции (сибирская язва, сап, эмфизематозный карбункул, туляремия, бруцеллез, чума свиней и птиц, инфекционная анемия, инфекционный энцефаломиелит и бешенство) материал, взятый в стеклянную посуду, помещают в металлическую коробку, которую запаивают, пломбируют или опечатывают и упаковывают в деревянный ящик.

При отправке нарочным следует герметически упакованную посуду с патологическим материалом опечатать, завернуть в вату и уложить в деревянный ящик.

В лабораторию отправляют вместе с посылкой сопроводительный документ (направление), в котором указывают: 1) адрес лаборатории; 2) какой материал направляют для исследования и в чем он законсервирован; 3) от какого животного и кому оно принадлежит; 4) клинические признаки у больного животного; 5) основные патологоанатомические изменения, обнаруженные при вскрытии трупов на месте; 6) имеются ли еще в хозяйстве больные животные со сходными признаками (сколько); 7) предполагаемые причины падежа; 8) на какие заболевания необходимо произвести исследование. Сопроводительное письмо подписывает ветеринарный работник, направляющий материал. В письме указывают дату взятия и отправления материала.

Взятие крови для серологического исследования. Кровь животных берут стерильными иглами у лошадей, крупного рогатого скота, верблюдов и у других крупных животных, а также у овец, коз из яремной вены, у свиней - из копчика хвоста или из ушной вены. На месте взятия пробы шерсть выстригают и кожу протирают дезинфицирующим раствором или денатурированным спиртом. При взятии крови следят, чтобы капли ее не попали на землю; для этого на муфту иглы надевают небольшую резиновую трубку, конец которой опускают в пробирку. С этой же целью используют специальный прибор, в который с одного конца вставляют иглу, а с противоположной стороны - пробирку. Струю крови нужно направлять по стенке пробирки, чтобы избежать распада эритроцитов (гемолиза). Гемолизированная кровь для исследования непригодна.

Кровь, взятую зимой, сразу же ставят в теплое место для свертывания кровяного сгустка и отстаивания сыворотки. Кровь доставляют в лабораторию не позднее чем на 2-3-й день после ее взятия. Сохранять ее следует в темном и прохладном месте. В жаркую погоду при невозможности своевременной отправки крови для исследования ее необходимо консервировать 0,5%-ным раствором карболовой кристаллической кислоты на физиологическом (0,85?о-ном) растворе поваренной соли. С этой целью отстоявшуюся сыворотку крови пипеткой отсасывают и переносят в чистые пробирки, оставив в первоначальной пробирке кровяной сгусток. К 9 мл сыворотки крови добавляют 1 мл 5%-ного раствора карболовой кристаллической кислоты, пробирку тщательно встряхивают, плотно закрыв ватной пробкой. При малом количестве исследуемой сыворотки к 1 мл ее добавляют 0,1 мл указанного раствора карболовой кислоты. Консервированная сыворотка может сохраняться длительное время.

Пробирки с кровью упаковывают в вертикальном положении и отправляют в лабораторию с нарочным, предохраняя от замораживания и встряхивания. Гемолизированная, проросшая и покрытая сверху пленкой плесени кровь, а также помутневшая сыворотка давно взятой крови для серологического исследования непригодны.

На каждой пробирке с кровью ставят номер или кличку животного. Бумажную этикетку надписывают простым карандашом и прикрепляют ее резиновым колечком, плотно надетым на пробирку. Пробы с кровью направляют в сопровождении списка, составленного в 2 экземплярах. Одни из них с обозначением полученных результатов лаборатория возвращает лицу, направившему кровь на исследование.