Тесты методы культивирования вирусов
Тест-вирусы и методы их культивирования
Тест-вирусы получают из национальных или международных коллекций вирусов:
1.1. Вирус полиомиелита I типа (вакцинный штамм Sabin (LSc-2ab), РНК-содержащий вирус, не имеющий оболочки, из семейства пикорнавирусов.
1.2. Аденовирус, тип V, штамм Аденоид 75 (АТСС VR-5),
ДНК-содержащий вирус, не имеющий оболочки, из семейства аденовирусов.
1.3. Бычий парвовирус, штамм Хаден (АТСС VR-767).
1.4. Вирус гепатита А, штамм HAS-15, РНК-содержащий вирус, не имеющий оболочки, из семейства пикорнавирусов.
1.5. Вирус гепатита В уток (ВГВУ), штамм "УФА-04",
ДНК-содержащий, из семейства гепаднавирусов.
1.6. Вирус гепатита С человека, штамм Д1.
1.7. Вирус бычьей диареи (ВД-БС), РНК-содержащий вирус диареи - болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота, из семейства пестивирусов, штамм ВК-1В1-N 28.
2. Культивирование вирусов
2.1. Исходный вирус - это вирус, полученный из Референс-центров (из национальных или международных коллекций вирусов), размноженный в объемах, достаточных для длительной работы с данным пассажем, при минимальных количествах пассажей. Хранится в малых объемах при -70°С или в жидком азоте (Руководство по вирусологическим исследованиям полиомиелита, ВОЗ, Женева, М., 1998).
2.2. Тест-вирусная суспензия - вирусная суспензия, полученная из исходного вируса и используемая для определения вирулицидных свойств дезинфектанта.
2.3. Исходный вирус размножают в чувствительных клетках (лабораторных животных, утках и др.), продуцирующих вирус в высоких титрах. Клеточный детрит удаляют цетрифугированием при низких оборотах (1 000 об/5 мин). Этот материал называют "тест-вирусной суспензией". Ее используют не разведенной.
Предполагается, что минимальный титр вирусной суспензии по крайней мере . В любом случае он должен быть достаточно высоким, чтобы можно было получить снижение титра на 4,0 .
Полиовирус размножают в перевиваемой культуре клеток RD и HEp-2 или в других чувствительных клеточных культурах (4647, Vero и т.д.). Для получения ВС культуру клеток, инфицированную вирусом полиомиелита на стадии 100% поражения монослоя, вызванного цитопатическим действием вируса, трехкратно замораживают и оттаивают. После удаления разрушенных клеток центрифугированием, полученную суспензию используют в экспериментах.
Аденовирус размножают в перевиваемой клеточной культуре HEp-2, 4647 и в других чувствительных клеточных культурах. Методика получения ВС аналогична вышеописанной, за исключением того, что перед процедурой разрушения клеток методом замораживания-оттаивания, проводят замену культуральной среды на не содержащую сыворотки и добавляют ее в меньшем объеме.
Вирус гепатита А размножают в перевиваемой культуре клеток 4647. Для получения ВС флаконы инкубируют при 37°С в течение 21-28 дней с еженедельной сменой среды. По окончании инкубации из флаконов удаляют среду поддержания, монослой промывают раствором Хенкса, добавляют подогретый до 37°С раствор Версена, монослой обмывают диспергентом, раствор Версена сливают и добавляют 0,1М фосфатно-солевой буфер, рН 7,6.
Зараженные клетки ресуспендируют в фосфатно-солевом буфере, суспензию клеток пятикратно замораживают (-70°С) и оттаивают при комнатной температуре. Полученный клеточный лизат, содержащий 6,5-7,0 ВГА гомогенизируют и осветляют центрифугированием (3 000 об/5 мин), затем используют в качестве тест-вируса.
Супернатант аттестовывают на содержание антигена вирусного гепатита А методом ИФА. Оптическая плотность испытуемых образцов, обработанных ДС, должна соответствовать контрольных образцов, не содержащих ВГА.
Методика определения инфекционного титра основана на выявлении антигена ВГА при титровании методом конечного разведения. Готовят 10-кратные разведения анализируемого материала на среде Игла МЕМ х 2. Каждым разведением вируса, начиная с , заражают не менее 4 одинаковых емкостей с плотным монослоем культуры клеток 4647. После инкубации в течение 21-28 дней супернатант аттестуют на содержание вирусного антигена методом ИФА. Инфекционные титры вычисляют по методу Рида и Менча или по методу Спермана-Кербера (прилож. 3).
Вирус гепатита В уток. Метод моделирования инфекции ВГВУ in vivo. Источником вируса при моделировании инфекции является сыворотка крови домашней утки, инфицированной ВГВУ in vivo при экспериментальном заражении вирусом с известными инфекционными свойствами. Для тест-вируса ВГВУ, используемого в каждом опыте по оценке ДС, должен быть определен инфекционный титр.
Важным моментом при подготовке опыта по испытанию ДС с помощью моделирования ВГВУ-инфекции домашних уток является определение численности опытных групп. По причине довольно широкой распространенности естественной ВГВУ-инфекции и отсутствия скрининга на ВГВУ в хозяйствах - поставщиках эмбрионов и утят на территории Российской Федерации перед закладкой опыта необходимо предварительное тестирование на ДНК ВГВУ для отвода от участия в опыте уток с естественной инфекцией. Ввиду максимальной восприимчивости к инфицированию ВГВУ утят в возрасте 1-3 дней целесообразно работать с утятами именно этого возраста, однако предварительный скрининг может привести к задержке эксперимента и, как следствие, к снижению числа восприимчивых к инфицированию особей. Поэтому рекомендуется увеличение опытных групп до 10-15 голов каждая с учетом потенциального числа утят с естественной ВГВУ-инфекцией, взятие крови у всех утят непосредственно перед введением опытного материала, определение ДНК ВГВУ в течение ближайшего времени и выведение из опыта утят с выявленной естественной ВГВУ-инфекцией.
После определения числа опытных групп проводят непосредственно обработку вируса ДС. Обработка ДС должна проводиться непосредственно перед введением материала уткам, при необходимости обработанный ДС вирусный препарат может храниться не более суток при 4°С без снижения потенциальных инфекционных свойств.
Обработка вируса ДС проводится по стандартной методике с использованием суспензионного метода или метода батистовых тест-объектов.
Затем проводят нейтрализацию ДС по стандартной методике. Трехдневных утят размещают по 10 голов в изолированных клетках по числу групп эксперимента. Затем у всех утят берут кровь и используют для последующего ПЦР-анализа. После взятия крови уткам внутрибрюшинно вводят материал, полученный в результате обработки ВГВУ ДС. Показано, что внутрибрюшинное инфицирование ВГВУ так же эффективно, как и внутривенное, но при этом менее травматично для животных. Каждой утке вводят 200 мкл материала, в каждой опытной группе используют соответствующий материал, обработанный выбранной концентрацией ДС. В позитивной и негативной группах таким же образом вводят соответствующий контрольный материал.
После получения данных по выявлению естественной ВГВУ-инфекции среди задействованных в эксперименте уток, позитивных по ВГВУ особей удаляют. У всех участвующих в эксперименте уток проводят взятие крови через 3 недели после инфицирования. Взятие крови и отделение сыворотки крови проводят таким же образом, как и при предварительном тестировании на естественную ВГВУ-инфекцию. В отобранных образцах проводят определение ВГВУ-инфекции в ПЦР. Оценка результатов эксперимента проводится по системе "да/нет", т.е. появление даже одного случая ВГВУ-инфекции в опытной группе рассматривается как инфицирование ВГВУ и, как следствие, указывает на недостаточные вирулицидные свойства анализируемой концентрации ДС.
Вирус диареи крупного рогатого скота размножают в клетках КСТ - перевиваемой культуре клеток коронарных сосудов сердца плода коровы. Вирус имеется в музее ГУ "Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени Я.Р. Коваленко".
Вирус гепатита С человека размножают в культуре клеток по методике, разработанной в ГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН.
| > (справочное). Метод батистовых тест-объектов |
| Содержание Методические указания МУ 3.5.2431-08 "Изучение и оценка вирулицидной активности дезинфицирующих средств" (утв. Главным. |
Откройте актуальную версию документа прямо сейчас или получите полный доступ к системе ГАРАНТ на 3 дня бесплатно!
Вирусы не способны культивироваться на питательных средах, т.к. являются внутриклеточными паразитами.
1. Метод культивирования в организме чувствительных экспериментальных лабораторных животных.
Ограничения:
1) не все вирусы человека размножаются в организме лабораторных животных;
2) в организме экспериментальных животных есть иммунная система, которая может оказывать влияние на размножение вирусов.
2. Культивирование вирусов в развивающихся куриных эмбрионах.
Куриные эмбрионы имеют двухслойную экто- и энтодермальную хорион-аллантоисную оболочку; желточный мешок построен из мезодермальных клеток. Т.о., куриный эмбрион содержит ткани любого происхождения.
Куриный эмбрион не обладает иммунологической активностью.
Дешевле по сравнению с лабораторными животными. После заражения куриных эмбрионов они погибают вследствие размножения вирусов. На оболочках эмбриона могут образовыватся бляшки – мелкие зернистые образования. Вирус накапливается в жидкости куриного эмбриона.
Но: в куриных эмбрионах размножаются не все вирусы человека.
3. Метод культивирования вирусов в культуре ткани:
– для культивирования вирусов вне организма; используют эмбриональные, опухолевые клетки, которые активно размножаются в питательных средах для культуры тканей.
Типы культур тканей:
1) перевиваемые тканевые культуры – культуры обычно опухолевых клеток. Они стандартные. Их нужно постоянно поддерживать, они одинаковы во всех лабораториях мира;
2) первично-трипсинизированные тканевые культуры - культуры эмбриональных тканей, которые готовятся каждый раз по мере надобности: эмбриональную ткань измельчают, затем подвергают обработке трипсином (чтобы разрушить межклеточные связи), центрифугируют отдельные клетки. Эти культуры ткани обладают хорошими ростовыми качествами, но они не стандартны.
Для поддерживания культур ткани служат специальные синтетические питательные среды.
Культивирование вирусов под агаровым покрытием (однослойные культуры тканей) дает возможность получить потомство отдельных вирионов.
1. Организм животного:
- Изменения в организме животного (болезнь).
2. Куриный эмбрион:
- Бляшки на оболочках;
3. Культура ткани:
При размножении вирусов проявляются изменения, которые не свойственны здоровым клеткам:
- ЦПЭ (цитопатический эффект);
- У культивируемых вирусов есть феномен гемадсорбции (в результате избыточного синтеза гемагглютинин экспрессируется на наружную поверхность клеток культуры ткани и они приобретают способность адсорбировать эритроциты);
- появление в клетках включений – морфологических структур, которые обнаруживаются только в зараженных вирусом клетках культуры ткани.
Виды включений:
1) по локализации:
2) По характеру окраски по Романовскому-Гимза:
Типы включений характерны для определенного вируса.
- Учет размножения вирусов в культуре ткани (метод цветной пробы – ориентировочный тест, который говорит о нарушении клеточного метаболизма):
- если культура ткани не заражена, в клетках протекают процессы метаболизма, продукты метаболизма обнаруживаются в питательной среде, рН изменяется в кислую сторону, изменяется цвет индикатора;
- если культура ткани заражена вирусом, нарушения клеточного метаболизма, продукты метаболизма не обнаруживаются в питательной среде, рН не меняется, индикатор не меняет цвет.
Культуры тканей по чувствительности к вирусам делятся на 3 группы:
1) пермессивные (поддерживает вирусную инфекцию);
2) непермессивные (не способны поддерживать вирусную инфекцию);
3) полупермессивные (вирус поддерживается, но не размножается; такие клетки передают вирусную инфекцию при контакте с другими клетками).
На вирус развивается полноценный иммунный ответ.
Вирус существует в организме в двух формах. В отношении внеклеточного вируса действуют те же механизмы противомикробной резистентности, что и в отношении бактерий.
Неспецифические механизмы:
- клеточная ареактивность – отсутствие специфических рецепторов для вирусов на клетках организма;
- выделительные механизмы: чихание, кашель;
- барьерная функция кожи и слизистых оболочек;
Его особенности: при бактериальных инфекциях – лейкоцитоз, при вирусных – лейкопения. Т.к. нейтрофильные лейкоциты фагоцитируют вирус, он в них размножается и они гибнут. Защитное значение имеет фагоцитоз клеток, пораженных вирусом – на поверхности таких клеток экспрессируются вирусные белки, что делает их объектом макрофагального фагоцитоза, отсюда – моноцитоз, характерный для вирусных инфекций.
- гуморальный иммунитет: система комплемента, пропердина и вирусные ингибиторы – это химические группировки и радикалы, тождественные вирусным рецепторам, и они их блокируют.
Специфические механизмы иммунитета
Роль антител особая. Уровень сывороточных антител и устойчивость к вирусам не идут параллельно. При вирусной инфекции важно не количество антител, а их локализация в организме – на месте входных ворот или на территории пораженных тканей.
Большую роль при вирусной инфекции играет клеточный иммунитет. Это связано с тем, что инфицированные вирусом клетки становятся мишенью для цитолитического действия Т-киллеров.
При заражении двумя разными вирусами одной ткани один подавляет другой. Это явление лежит в основе невосприимчивости к вирусным инфекциям. Это
Интерферон – индуцибельный белок клеток позвоночных, появляется под влиянием интерфероногенов. Один из них – вирусная инфекция. Основная функция интерферона: подавление размножения вирусов.
Виды (в зависимости от продуцирующей клетки):
Интерферон – важнейший фактор, обладающий многогранной биологической активностью: стимулирует фагоцитоз, киллерную функцию Т-лимфоцитов, подавляет синтез комплемента, снижает гемопоэз, снижает развитие реакций гиперчувствительности замедленного и немедленного типов.
Интерферон обладает активностью в отношении внутриклеточных вирусов. Он нарушает трансляцию иРНК на рибосомах, что ведет к прекращению синтеза вирусных белков.
Интерферон появляется в клетке уже через 2 часа после заражения вирусом. Защищает практически от всех видов вирусных агентов.
Особенности интерферона:
- подавляет репродукцию любых видов вирусов (т.е. не обладает специфичностью);
- Обладает видовой специфичностью (защищает только свой вид).
Универсальность интерферона делает его незаменимым в терапии вирусных инфекций.
Интерферон обеспечивает защиту на уровне нуклеиновой кислоты, т.е. поддерживает нуклеиновый гомеостаз, а антитела и Т-лимфоциты – белковый гомеостаз.
Индукторы синтеза эндогенного интерферона:
- естественные (бактерии, вирусы, ЛПС);
- синтетические (крупномолекулярные соединения: полифосфаты, поликарбонаты и т.п.)
Применение интерферона:
- средство антивирусной терапии.
С помощью химиотерапевтических препаратов воздействуют на различные этапы взаимодействия вируса с клеткой: тормозят адсорбцию вирусов на клетках.
Основные препараты:
– производные ремантадина строго специфичны (ремантадин – при вирусах гриппа А);
– производные марборана (онковирусы, вирус оспы и т.д.);
– структурные аналоги пуриновых и пиримидиновых оснований (фтортимедин, фтордезоксиурацил, азидотимедин и т.п.);
Встраиваются в вирусную нуклеиновую кислоту → вирусы теряют инфекционность.
Вирусные вакцины: живые и убитые.
В настоящее время живые вакцины используется…, т.к. возможна реверсия аттенуированных штаммов.
Средство экстренной профилактики: иммунные сыворотки, интерферон.
Экстренная профилактика кори – коревой γ-глобулин. Чаще используются химические и генно-инженерные вакцины.
По типу нуклеиновой кислоты вирусы делятся на:
По размерам вириона на:
- крупные (более 100 нм);
- средние (50-100 нм);
- мелкие (меньше 50 нм).
По типу симметрии нуклеокапсида на:
По наличию или отсутствию суперкапсидной оболочки.
По антигенной структуре.
По типу репликации нуклеиновой кислоты.
Главную роль в патологии человека играют РНКовые вирусы к ним относятся:
- сем. Пикорновирусы и т.д.
ДНКовые вирусы, патогенные для человека. Это:
- вирус папилломы, полиомы и бородавок;
- Аденовирусы (постоянные обитатели глоточного кольца), могут вызывать ОРВИ, ОРЗ;
- сем. Поксвирусов, включающее вирус натуральной оспы.
Происхождение вирусов – вопрос, который на протяжении многих лет составлял предмет дискуссий.
Было выдвинуто три гипотезы:
1. Вирусы – потомки бактерий и других одноклеточных организмов, претерпевших дегенеративную (регрессивную) эволюцию.
2. Вирусы – потомки древних доклеточных форм жизни, перешедших к паразитическому способу существования.
3. Вирусы – дериваты (производные) клеточных генетических структур, ставших относительно автономными, но сохранившими зависимость от клеток.
Вирусы представляют собой совершенно особые формы жизни. Принципиальным отличием вирусов от других возбудителей (бактерий, хламидий) является:
Очень малые размеры
Неспособность культивироваться на искусственных питательных средах
Отсутствие молекул с макроэргическими связями (собственных источников энергии)
Облигатный внутриклеточный паразитизм
*Паразитизм на генетическом уровне
В живой природе только представителям одного семейства вирусов – ретровирусам – присущ свой уникальный вариант экспрессии генома. Выберите этот вариант экспрессии генома:
ДНК – и РНК–белок
*Вирионная РНК – ДНК – и РНК–белок
Вирионная РНК – и РНК–белок
ДНК – ДНК – и РНК–белок
В детском учреждении зарегистрирована вспышка инфекции, предполагаемо вирусной этиологии. Необходимо срочно наметить план противоэпидемических мероприятий. Какие методы лабораторной диагностики необходимо подключить в первую очередь для быстрой и своевременной расшифровки данной вспышки?
Микроскопию нативного материала
Если для расшифровки вспышки будет применен вирусологический метод, что должны использовать сотрудники лаборатории для изоляции вируса из материала?
Эмбриональную телячью сыворотку
Экстракт тканей куриного эмбриона
*Первично-трипсинизированную культуру клеток
В настоящее время в качестве экспресс-методов диагностики вирусных инфекций все шире используются методы, позволяющие обнаружить в исследуемом материале следовые количества нуклеиновых кислот. К таким методам относится:
Лаборатория диагностического центра получила современную тест-систему для выявления ТОRСН-инфекции, которая дает возможность диагностировать : 1) токсоплазмоз, 2)рубиинфекцию, 3) цитомегаловирусную инфекцию, 4) герпес-инфекцию . Какие из названных заболеваний вызываются вирусами?
A. * Рубиинфекция, цитомегаловирусная инфекция, герпес-инфекция
B. Рубиинфекция, герпес-инфекция. токсоплазмоз
C. Цитомегаловирусная инфекция, герпес-инфекция, токсоплазмоз
E. Все перечисленные в условии.
В детское инфекционное отделение городской больницы госпитализирована группа детей с предварительно поставленным клиническим диагнозом “ротавирусный гастроэнтерит”. Какой основной лабораторный диагностический принцип используется в этом случае?
A. *Обнаружение вирусного антигена в исследуемом материале.
B. Обнаружение специфических включений в клетках.
C. Заражение куриных эмбрионов.
D. Выделение вируса в клеточных культурах с последующей идентификацией.
E. Заражение лабораторных животных.
При серологическом методе диагностики вирусных заболеваний исследуемую сыворотку двукратно разводят в лунках планшета. Вносят вирусный диагностикум и взвесь эритроцитов. Как называется такая реакция?
Реакция пассивной гемагглютинации
Реакция обратной пассивной гемагглютинации
*Реакция торможения гемагглютинации
Реакция связывания комплемента
Для обнаружения вирусного антигена в исследуемом материале применяют реакцию с использованием антительного эритроцитарного диагностикума. Как называется эта реакция?
При вирусологическом методе диагностики инфекционных заболеваний возбудитель выделяют путем культивирования его in vitro в культуре клеток с питательной средой. Укажите эту питательную среду.
Среда для контроля стерильности (СКС)
С целью индикации вирусов в культуре клеток применяют метод, основанный на изменении ph культуральной питательной среды в процессе культивирования вирусов in vitro. Укажите метод индикации вирусов.
Фильтрат испражнений больного с подозрением на кишечную вирусную инфекцию обработали антибиотиками, затем подготовленным материалом заразили первичные и перевиваемые культуры клеток. Через двое суток в зараженных культурах обнаружили цитопатическое действие. Как провести идентификацию энтеровирусов?
*С помощью реакции нейтрализации цитопатического действия типоспецифическими энтеровирусными сыворотками
С помощью реакции иммунофлюоресценции (РИФ)
С помощью реакции торможения гемагглютинации (РТГА)
С помощью реакции гемагглютинации (РГА)
С помощью реакции преципитации (РП)
При микроскопии монослоя клеток, зараженного предположительно вируссодержащим материалом и обработанного специфической сывороткой, меченной флюорохромом, обнаружили изумрудно-зеленое свечение в околоядерной зоне клеток. Какой это вид микроскопии?
С целью обнаружения вирусов при микроскопии зараженного вирусом монослоя культуры клеток обнаружили клетки вокруг которых находились характерные скопления эритроцитов. Какой метод индикации вирусов применен в данном случае?
Исследуемый материал обработали специфической сывороткой, выдержали 1 час, отцентрифугировали, из осадка приготовили препарат и промикроскопировали с целью обнаружения вирусов. Какой это вид микроскопии?
Вирусный антиген и специфическое антитело, помещенные на определнном расстоянии друг от друга в агаровом геле, диффундируют и образуют при встрече друг с другом белые полосы. В случае несоответствия антигена и антитела полосы не появляются. Назовите эту реакцию.
Реакция агглютинации на стекле
Реакция агглютинации Грубера
Реакция иммуносорбентного анализа на твердой фазе
При индикации вируса натуральной оспы в зараженном курином эмбрионе обнаружены мелкие (1мм), белые, плотные, возвышающиеся, резкоочерченные, точечные поражения, напоминающие манную крупу. Назовите место обнаружения вируса в курином эмбрионе.
Вирусы представляют собой микроскопические патогенные агенты, способные функционировать и репродуцироваться в восприимчивых клетках животных, растений, бактерий. Какие основные свойства данных агентов?
А. Способность к делению вне клетки
В. Они не содержат нуклеиновых кислот
С. Клеточная организация
D.*Облигатный внутриклеточный паразитизм
Вирусы представляют собой микроскопические патогенные агенты, способные функционировать и репродуцироваться в восприимчивых клетках животных, растений, бактерий. По каким признакам вирусы отличаются от других живых организмов?
А.Содержат ДНК и РНК, белки и липиды
В. Не требовательны к питательным средам
С. Высокой степенью вирулентности, токсичности
D.Хорошо красятся анилиновыми красителями, грамвариабельны
Е.*Не содержат белоксинтезирующих систем, содержат только один тип нуклеиновых кислот, паразитируют на генетическом уровне.
Вирусы представляют собой микроскопические патогенные агенты, способные функционировать и репродуцироваться в восприимчивых клетках животных, растений, бактерий. С какой целью проводится культивирование вирусов (выберете наиболее полный и правильный ответ)?.
Получение анатоксина, вакцин, сывороток
*Диагностики, выделения, производства вакцины, изучение взаимодействия вируса с чувствительными клетками
Получение агглютинирующих сывороток, диагностикумов
Получение преципитирующих сывороток, производства вакцин, диагностики вирусных инфекций
Получение аутовакцины, аллергенов, изучение взаимодействия вируса с чувствительными клетками
Вирусологический метод включает: индикацию и идентификацию вируса в исследуемом материале. Как можно подтвердить наличие вируса в исследуемом материале?
А . Диффузным ростом вирусов в питательной среде
В.Пристеночным ростом вирусов в питательное среде
С.Отсутствие роста вируса в питательной среде
D.Изменением цвета питательной среды (ЦП)
Е.*Гибелью клеток (ЦПД), нарушением метеболизма клеток и отсутствием изменений в питательной среде (цветная проба).
Вирусы представляют собой микроскопические патогенные агенты, способные функционировать и репродуцироваться в восприимчивых клетках животных, растений, бактерий. Что значит цитопатическое действие вируса ?
А. Персистенция вируса в чувствительных клетках и образование включений
*Совокупность морфологических, функциональных и биохимических изменений в клетке возникающих под влиянием внедрившегося вируса
Нарушение проницаемости клеточных мембран
Усиление инфекционных свойств вируса
Образование специфических антител
Вирусы представляют собой микроскопические патогенные агенты, способные функционировать и репродуцироваться в восприимчивых клетках животных, растений, бактерий. Какова цель вирусологического метода исследования?
Постановка серологических реакций
*Выделение вируса с целью их идентификации
Проведение биологической пробы на животных
Постановка аллергических реакций
Получение высокоиммуногенных штаммов вируса
Вирусы-это особая форма жизни. По целому ряду свойств вирусы отличаются от всего живого, но принципиальным отличием их от микроорганизмов является особая форма паразитизма -паразитизм на генетическом уровне. Что представляет собой такой тип паразитизма, присущий только вирусам?
А.Репродукцию вирусов в ядре клетки с использованием клеточной ДНК-полимеразы
В.Физическую связь вирусного и клеточного геномов
*D.Реализацию генетической программы вируса в ущерб генетической программы клетки
Е.Использование энергетических ресурсов клетки
Сложные вирусы имеют в отличие от простых дополнительную оболочку – суперкапсид. Чем является данная оболочка у сложных вирусов?
*А.Фрагментом цитоплазматической или ядерной мембраны клетки, липидным слоем
В. Фрагментом клеточной стенки, полисахаридным слоем
С.Второй белковой оболочкой, синтезированной в клетке
D.Липопротеиновой оболочкой, кодируемой геномом вируса
Е. Фрагментом цитоплазматической или ядерной мембраны клетки, белковым слоем
При проникновении вируса в клетку происходит депротеинизация, транспортировка вирусного генома в ядро (или он остается в цитоплазме), транскрипция и репликация вирусного генома, синтез вирусных белков, сборка дочерних вирионов. Такая последовательность событий и их исход характерны для взаимодействия вирусного и клеточного геномов, которое называют
Вирусы являются паразитами на генетическом уровне. При проникновении вируса в клетку происходит депротеинизация, транспортировка вирусного генома в ядро (или он остается в цитоплазме), синтеза вирусных белков, сборки дочерних вирионов не происходит. Такой вариант вирусной инфекции клетки называют
Вирусы являются паразитами на генетическом уровне. При проникновении вируса в клетку происходит депротеинизация, транспортировка вирусного генома в ядро, встраивание этого генома в геном клетки, в дальнейшем, при определенных условиях, - транскрипция и репликация вирусного генома, синтез вирусных белков, сборка дочерних вирионов. Такая последовательность событий и их исход характерны для взаимодействия вирусного и клеточного геномов, которое называют
Данный этап взаимодействия вируса с клеткой обеспечивается наличием на поверхности цитоплазматической мембраны соответствующих рецепторов и у вируса – т.н.. «прикрепительных « белков. Как называется такой этап взаимодействия вируса с клеткой?
В.Проникновение путем слияния
С. Проникновение путем рецепторного эндоцитоза
D. Проникновение путем инокуляции
Е. Неспецифическая адсорбция
Данный этап взаимодействия вируса с клеткой обеспечивается разностью зарядов на поверхности цитоплазматической мембраны клетки и на внешней оболочке вируса. Как называется такой этап взаимодействия вируса с клеткой?
В.Проникновение путем слияния
С. Проникновение путем рецепторного эндоцитоза
D. Проникновение путем инокуляции
*Е. Неспецифическая адсорбция
При проникновении вируса в клетку происходит депротеинизация, транспортировка вирусного генома в ядро. С участием клеточных полимераз осуществляется репликация вирусного генома, клеточные транскриптазы обеспечивают образование вирусспецифических иРНК. В цитоплазме происходит синтез вирусных белков. Такая стратегия экспрессии вирусного генома характерна для…
А.+ нитевых РНК-геномных вирусов.
*В.ДНК – геномных вирусов
D.- нитевых РНК-геномных вирусов.
E.РНК –геномных вирусов с фрагментарным геномом
Среди вирусов выделяется группа ретровирусов, для которых характерный совершенно особенный, только им свойственный вариант экспрессии генома. Какой вариант экспрессии генома свойственный для данной группы вирусов?
А.ДНК – информационная РНК – белок.
В.Вирионная РНК – белок.
*С.Вирионная РНК – вирусспецифическая ДНК – вирусспецифическая иРНК -белок.
D. Вирионная РНК – информационная РНК – белок.
Е.ДНК – ДНК – белок.
У пациента, с подозрением на вирусную инфекцию, был отобран и направлен в лабораторию материал для вирусологической диагностики. Каким образом можно будет изолировать вирус из материала, полученного от данного больного?
А. Если посеять полученный материал на питательную среду с высоким содержанием сыворотки.
В. Если посеять полученный материал в питательную среду с высоким содержанием СО2
С.Культивировать материала от больного в анаэробных условиях.
*D.Заразить полученным материалом культуру клеток.
E.Исследовать полученный от больного материал под электронным микроскопом
В процессе приготовления первично-трипсинизированной культуры клеток произвели механическое измельчение эмбриональной ткани, отмыли раствором Хенкса и для получения клеточной взвеси использовали определенное средство. Как называетя это средство?
*А. Раствор трипсина
С. Раствор Версена
Аналогом бактериологического метода (выделение чистой культуры) в вирусологии является вирусологический (изоляция вируса). Однако в связи с особенностями вирусов диагностика вирусных инфекций отличается от микробиологической. Какие свойства вирусов обусловливают специфику вирусологической диагностики?
В.Существование вирусов с РНК-геномом
С.Существование вирусов с фрагментарным геномом
*D.Невозможность культивироваться на искусственных питательных средах
Е.Способность проходить сквозь бактериальные фильтры
При микроскопии монослоя клеток, пораженного вирусом и обработанного специфической сывороткой, меченой флюорохромом, нашли изумрудно-зеленое свечение в околоядерний зоне клеток. Как называют такую разновидность микроскопии?
С целью индикации вирусов в культуре клеток, применяют метод, основанный на изменении рН культуральной питательной среды в процессе культивирования вирусов in vitro. Как называется данный метод индикации вирусов?
3.При серологическом методе диагностики вирусных заболеваний исследуемую сыворотку, двухкратно разводят в лунках планшета. Вносят вирусный диагностикум и взвесь эритроцитов.
Как называется данная серологическая реакция?
В.Реакция пассивной гемагглютинации
С.Реакция обратной пассивный гемагглютинации
*D.Реакция торможения гемагглютинации
E.Реакция связывания комплемента
Исследуемый материал (предполагаемо содержащий вирус) обработали специфической сывороткой с красителем, выдержали 1 час, центрифугировали, из осадка приготовили препарат и иследовали под микроскопом с целью выявления вирусов. Какая это разновидность микроскопии?
Заражение куриных эмбрионов является основным методом выделения вируса гриппа. При введении в куриный эмбрион исследуемого материала (смыва из носоглотки) с целью уничтожения микробов к нему сначала добавляют:
*А. Стрептомицин и пенициллин
B. Перийодат калия
Для лабораторного подтверждения диагноза острой респираторной вирусной инфекции у пациента врач решил использовать серологический метод диагностики. Как необходимо отобрать материал для данного метода диагностики у пациента?
А.В начале заболевания, как можно раньше
В.В конце заболевания, в период угасания клинических симптомов
С.На пике заболевания, в момент проявления всех клинических симптомов
*D.В начале заболевания (как можно раньше) и через 2-3 недели
E.Во время максимального повышения температуры
С целью идентификации вируса в зараженной культуре клеток применяют реакцию нейтрализации цветной пробы с использованием специфической сыворотки. Какой будет цвет питательной среды при положительной реакции нейтрализации цветной пробы?
Испражнения больного с подозрением на кишечную вирусную инфекцию обработали антибиотиками и заразили первичные культуры и культуры перевиваемых клеток. Через 2-3 дня в зараженных культурах клеток выявлено цитопатическое действие, присущее энтеровирусам. С помощью какой реакции необходимо дальше провести идентификацию обнаруженных цитопатогенных агентов?
*А. Нейтрализации цитопатического действия
B. Реакции иммунофлюоресценции
З. Реакции торможения гемагглютинации
D. Реакции агглютинации
E. Реакции преципитации
Для подтверждения диагноза герпетической инфекции у пациента, заболевшего несколько дней назад, врач назначил обследование с целью выявления противогерпетических антител с помощью ИФА. Выявление антител какого класса может достоверно подтвердить диагноз герпетической инфекции у данного больного?
А. Иммуноглобулинов А
*В. Иммуноглобулинов М
С. Иммуноглобулинов D
D. Иммуноглобулинов E
E. Иммуноглобулинов G
В детском учреждении зарегистрирована вспышка инфекции, вероятно вирусной этиологии. Необходимо срочно наметить план противоэпидемических мероприятий. Какие реакции или методы лабораторной диагностики необходимо подключить в первую очередь для быстрой и своевременной расшифровки данной вспышки?
E.Световую микроскопию нативного/исходного материала
В настоящее время как экспресс-методы диагностики вирусных инфекций все более широко используются методы, позволяющие найти в исследуемом материале следовые количества нуклеиновых кислот. Какой из перечисленных методов относится к данной группе методов?
У пациента с подозрением на аденовирусную инфекцию в начале заболевания и на третьей неделе от начала заболевания были отобраны сыворотки. После забора второй сыворотки материал был передан в вирусологическую лабораторию для постановки РСК с аденовирусным антигеном. Как можно оценить диагностику заболевания у данного больного?
Экспресс-метод, позволяющий в первые часы подтвердить этиологию заболевания
Метод, позволяющий прогнозировать результат заболевания
Метод, позволяющий выделить возбудитель
*Ретроспективный метод, позволяющий подтвердить вирусную этиологию заболевания
Е. Метод, выявляющий циркуляцию вирусных антиген ов в организме больного
Читайте также:
