Реферат лабораторная диагностика гриппа

Грипп - острое респираторное заболевание, характеризующееся поражением слизистых оболочек верхних дыхательных путей, лихорадкой, симптомами общей интоксикации, нарушением деятельности сердечно-сосудистой и нервной систем. Грипп отличается склонностью к эпидемическому и пандемическому распространению благодаря высокой контагиозности и изменчивости возбудителя.

В 1933 г. У. Смит, К. Эндрюс и П. Лейдлоу от больных гриппом выделили вирус, названный впоследствии вирусом гриппа типа А. В 1940 г. были открыты вирусы гриппа типа В, а в 1947 г. - типа С. В России первые вирусы гриппа были выделены в 1936 г. А. А. Смородинцевым и отнесены к типу А.

Таксономия, классификация. РНК-содержащие вирусы относятся к семейству Orthomyxoviridae (от греч. orthos - правильный, myxa - слизь). Семейство включает два рода: род Influenzavirus объединяет вирусы гриппа типов А и В, род Influenza С представлен вирусом гриппа типа С.

Морфология и химический состав. Вирионы имеют сферическую форму диаметром 80-120 нм, реже палочковидную и нитевидную; состоят из сердцевины и наружной липопротеидной оболочки. Сердцевина содержит однонитчатую линейную фрагментированную минус-нитевую РНК, белковый капсид, окруженный дополнительной мембраной - слоем матриксного белка. Нуклеокапсид имеет спиральный тип симметрии. На поверхности суперкапсидной оболочки имеются шипы гликопротеидной природы, одни из которых являются гемагглютинином, другие - нейраминидазой.

Культивирование. Для культивирования используют куриные эмбрионы, культуры клеток, иногда лабораторных животных.

Антигенная структура. Вирусы гриппа имеют внутренние и поверхностные антигены. Внутренние сердцевидные антигены являются типоспецифическими, на основании чего вирусы гриппа подразделяются на типы А, В и С, поверхностные представлены гемагглютинином (Н) и нейраминидазой (N). Н - основной специфический антиген, вызывающий образование вирус-нейтрализующих антител и обеспечивающий адсорбцию вируса на клетках, в том числе эритроцитах человека или животных, в результате чего происходит их склеивание (гемагглютинация). N вызывает образование антител, частично нейтрализующих вирусы; являясь ферментом, N участвует в освобождении вирусов из клетки.

Характерной особенностью вирусов гриппа, в основном типа А, является изменчивость антигенов Н и N. Известны три разновидности Н и две разновидности N. В зависимости от их сочетания выделяют три подтипа вируса гриппа А человека: H1N1, H2N2, H3N2, соответственно A1, A2, A3. Внутри подтипов имеется множество антигенных вариантов, отличающихся по структуре Н- и N-антигенов.

Изменчивость поверхностных антигенов связана с фрагментарным строением РНК вируса и может происходить в виде дрейфа и шифта. Дрейф - постоянно осуществляющиеся незначительные изменения Н- и N-антигенов в результате точечных мутаций, приводящие к возникновению новых антигенных вариантов вируса. Шифт (скачок) - редко встречающиеся значительные изменения Н- и N-антигенов в результате рекомбинаций, приводящие к появлению новых подтипов вируса.

По сравнению с вирусами гриппа типа А антигенная структура вирусов гриппа типа В изменяется только по типу дрейфа, а тип С не имеет N-антигена и мало изменчив.

Резистентность. В воздухе вирусы гриппа могут сохранять инфекционные свойства при комнатной температуре в течение нескольких часов; чем выше температура и относительная влажность воздуха, тем быстрее инактивируются вирусы. Возбудители гриппа чувствительны к действию УФ-лучей, многим дезинфицирующим средствам (формалину, этиловому спирту, фенолу, хлорамину), жирорастворителям; в жидкой среде инактивируются при температуре 50-60 0 С в течение нескольких минут. Длительное время сохраняются в замороженном состоянии и в глицерине.

Восприимчивость животных. В естественных условиях вирусы гриппа типа А поражают как человека, так и животных; вирусы типов В и С . только человека. Среди лабораторных животных к вирусам гриппа чувствительны африканские хорьки, сирийские хомяки, белые мыши. Заболевание характеризуется поражением легких и нередко заканчивается гибелью животных.

Возникновение пандемий и крупных эпидемий обычно связано с появлением нового подтипа вируса гриппа А. Ежегодные эпидемические вспышки вызываются новыми антигенными вариантами одного подтипа. В последние годы эпидемии гриппа связаны с вирусом гриппа A (H3N2), хотя среди населения продолжают циркулировать вирусы гриппа A (H1N1) и В.

Источником гриппозной инфекции является больной человек с клинически выраженной или бессимптомной формой. Путь передачи - воздушно-капельный (при разговоре, кашле, чиханье).

Патогенез и клиническая картина. Вирусы гриппа внедряются и репродуцируются в эпителиальных клетках слизистой оболочки верхних дыхательных путей, откуда проникают в кровь и разносятся по всему организму. Продукты распада поврежденных клеток и некоторые вирусные белки оказывают токсическое действие на различные органы и системы организма.

Инкубационный период короткий - от нескольких часов до 1-2 сут. Для гриппа характерны острое начало, высокая температура тела, общая интоксикация, выражающаяся в недомогании, головной боли, боли в глазных яблоках, поражение дыхательных путей различной степени тяжести. Лихорадочное состояние при гриппе без осложнений продолжается не более 5-6 дней. Тяжесть и исход болезни нередко связаны с осложнениями, вызванными самим вирусом гриппа (гриппозная пневмония, острый отек легких) или условно-патогенными бактериями. Развитию осложнений способствует угнетающее действие вирусов гриппа на процессы кроветворения и иммунную систему организма.

Иммунитет. После перенесенного заболевания формируется стойкий типо-, подтипе- и вариантоспецифический иммунитет, который обеспечивается клеточными и гуморальными факторами защиты. Большое значение имеют антитела класса IgA. Пассивный естественный иммунитет сохраняется у детей до 8-11 мес жизни.

Лабораторная диагностика. Материалом для обнаружения вируса или вирусного антигена служат мазки-отпечатки со слизистой оболочки носовой полости, отделяемое носоглотки, при летальных исходах - кусочки легочной ткани или мозга. Экспресс-диагностика основана на выявлении вирусного антигена с помощью РИФ; разработана тест-система для ИФА. Для выделения вирусов используют куриные эмбрионы. Индикацию вирусов гриппа осуществляют при постановке реакции гемагглютинации. Идентифицируют выделенные вирусы поэтапно: типовую принадлежность определяют с помощью РСК, подтип - РТГА. Серодиагностику проводят с помощью РСК, РТГА, РН в культуре клеток, реакции преципитации в геле, ИФА.

Специфическая профилактика и лечение. Для специфической профилактики используют живые и инактивированные вакцины из вирусов гриппа A (H1N1), A (H3N2) и В, культивируемых в куриных эмбрионах. Существует три типа инактивированных вакцин: вирионные (корпускулярные); расщепленные, в которых структурные компоненты вириона разъединены с помощью детергентов; субъединичные, содержащие только гемагглютинин и нейраминидазу. Вакцину из трех вирусов гриппа вводят интраназально в одной прививочной дозе по специальной схеме. Вакцинация показана определенным контингентам, имеющим высокий риск заражения.

Проходит испытания культуральная инактивированная вакцина. Ведутся разработки по созданию гриппозных вакцин нового поколения: синтетических, генно-инженерных. К сожалению, в отдельные годы отмечается довольно низкая эффективность вакцинации вследствие высокой изменчивости вирусов гриппа.

Для лечения, а также экстренной профилактики гриппа применяют химиотерапевтические противовирусные препараты (ремантадин, виразол, арбидол и др.), препараты интерферона и иммуномодуляторы (дибазол, левамизол и др.). При тяжелом течении гриппа, особенно у детей, показано применение донорского противогриппозного иммуноглобулина, а также препаратов, являющихся ингибиторами клеточных протеаз: гордокса, контрикала, аминокапроновой кислоты.

• Трактовать стадии взаимодействия вируса с клеткой.
• Ознакомиться с методами культивирования вирусов.
• Ознакомиться со строением куриного эмбриона.
• Указать специфические изменения в эмбрионе.
• Ознайомиться с техникой введения вирусосодержащего материала в аллантоисную полость.
• Ознайомиться с понятием о клеточной культуры и ЦПД вируса гриппа в ней.

• Заражать куриные эмбрионы в аллантоисную полость.
  • Вскрывать куриные эмбрионы.
  • Изучить изменения на хорион-аллантоисной оболочке, вызванные вирусом гриппа.
  • Забирать аллантоисную жидкость из куриного эмбриона.
  • Ставить реакцию гемагглютинации и проводить ее учет.

1. Классификация вирусов, вызывающих острые респираторные заболевания.
2. Характеристика вирусов гриппа.
3. Строение вириона.
4. Строение генома (взаимодействие вируса с клеткой).
5. Антигенная структура вирусов гриппа.
6. Изменчивость вирусов гриппа.
7. Основные методы культивирования вируса гриппа (заражение куриного эмбриона, культуры клеток).
8. Патогенез гриппа.
9. Микробиологическая диагностика гриппа.
10. Особенности противогриппозного иммунитета. Антитела. Интерферон. Механизм их действия.
11. Вакцины и профилактические препараты.

Практические задания, которые выполняются на занятии:

1. Вскрытие куриного эмбриона.
   1. Забор аллантоисной жидкости.
   2. Постановка и учет РГА.
   3. Разбор и запись схемы лабораторной диагностики гриппа.
   4. Микроскопия и зарисовка демонстрационных препаратов в протокол занятия.
   5. Оформление протокола.

1. Пяткін К.Д., Кривошеїн Ю.С. Мікробіологія з вірусологією та імунологією.– Київ: Вища школа, 1992.– 431 с.
2. Воробьев А.В., Быков А.С., Пашкола Е.П., Рибакова А.М. Микробиология.– М.: Медицина, 1998.– 336 с.
3. Медицинская микробиология /Под редакцией В.И. Покровского.– М.: ГЄОТАР-МЕД, 2001.– 768 с.
4. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология /Под редакцией академика А.А. Воробьева, М.: Медицинское информационное агентство, 2004.– 691 с.
5. Конспект лекции.

1. Збірник завдань для підготовки до тестового екзамену Крок-1. Загальна лікарська підготовка.– Київ.: Медицина, 2004.- С. 300-333.
2. Методические указания для преподавателей к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии.– Харьков,1986.– 125 с.
3. Сборник тестовых заданий для самоподготовки по медицинской микробиологии и вирусологии.– Харьков, 2005.– 28 с.

Краткие методические указания к работе на практическом занятии.

В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию.

Самостоятельная работа состоит из заражения куриного эмбриона в хорионалантоисную оболочку. Студенты проводят вскрытия куриного эмбриона, забирают алантоисную жидкость, выполняют РГА и проводят ее учет. Студенты проводят микроскопию демонстрационных препаратов, зарисовывают их в альбом и дают необходимые пояснения. Записывают схемы лабораторной диагностики гриппа.

В конце занятия проводится тестовый контроль и анализ итоговых результатов самостоятельной работы каждого студента.

Известно более 200 разновидностей вирусов, избирательно поражающих респираторный тракт человека (возбудителей ОРВИ).

У большинства возбудителей ОРВИ первичное размножение вирусов происходит в слизистой оболочке дыхательной системы, поэтому клиническая картина сходная, заболевание протекает в виде ринита, ринофарингита, как правило, в легкой форме. У детей раннего возраста вирусы могут поражать нижние отделы респираторного тракта, и болезнь протекает в более тяжелой форме в виде бронхитов, бронхиолитов, пневмоний. Наиболее тяжело протекающей острой вирусной респираторной инфекцией является грипп, который часто принимает эпидемическое распространение, характеризуется явлениями общей интоксикации, лихорадкой, поражением дыхательного тракта, нервной и сердечно-сосудистой систем. Максимальное число тяжелых форм течения инфекции наблюдается в период пандемий, обусловленных новым вариантом вируса гриппа.

Лаборатория оуществляет диагностику с помощью экспресс-методов, вирусологических и серологических методов исследования. Быстрая (экспресс) диагностика гриппа и ОРВИ:

1)метод флюоресцирующих антител (МФА) - основан на выявлении вирусных антигенов в клетках эпителия носовых ходов, конъюнктивы (при явлениях конъюнктивита). Исследуемый материал: мазки из носа, конъюнктивы, взятые в первые 3 дня и не позднее 5 дня болезни. Определяемые возбудители: - вирусы сезонного гриппа типа А (H1N1) - вирусы сезонного гриппа типа А (H3N2) - вирусы гриппа типа В - вирусы парагриппа 1, 2, 3 типов - аденовирусы - респираторно-синцитиальный вирус;

2) метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)- основан на обнаружении в клинических пробах генетического материала вирусов (РНК или ДНК)- является наиболее современным, высокочувствительным методом.

Исследуемый материал: мазки из носа и зева, взятые в первые 3 дня и не позднее 5 дня болезни, секционный материал. Определяемые возбудители:

- вирусы пандемического высокопатогенного гриппа типа А (H1N1)

- вирусы гриппа типа А

- вирусы гриппа типа В - вирусы парагриппа 1, 2, 3,4 типов

- аденовирусы - респираторно-синцитиальный вирус;

Вирусологическая диагностика - выделение вируса на чувствительной клеточной культуре с последующей идентификацией в реакции нейтрализации или ПЦР.

Этот метод отличается трудоемкостью и длительностью и используется, главным образом, для эпидемиологических и научных целей (изучается изменчивость вирусов, что помогает прогнозировать эпидемические подъемы гриппа, отбираются актуальные штаммы, пригодные для изготовления вакцин) Исследуемый материал: мазки из носа и зева (в первые 3 дня и не позднее 5 дня болезни).

- вирусы гриппа типа А (разные серотипы)

- вирусы гриппа типа В Серологическая диагностика является ретроспективной. Она выявляет прирост титров антител к возбудителям заболевания в парных сыворотках крови, что позволяет установить точную этиологию даже при отрицательных результатах других методов лабораторной диагностики, а также при бессимптомном или атипичном течении гриппа, широко применяется и для эпидемиологических целей. Исследуемый материал: сыворотки крови, взятые в начале заболевания и через 10- 14 дней.

Возбудители к которым определяется прирост титров антител:

- вирусы сезонного гриппа типа А (H1N1)

- вирусы сезонного гриппа типа А (H3N2) - вирусы гриппа типа В

- вирусы парагриппа 1, 2, 3 типов

В период подьема заболевамости гриппом и ОРВИ (в октябре- декабре 2009г.) вирусологической лабораторией обследовано методом флюоресцирующих антител (МФА) 432 человека. У 27% заболевших был выявлен аденовирус, у 8,3% - вирус парагриппа 3 типа, у 8% - респираторно-синцитиальный вирус, у 2% - вирусы парагриппа 1, 2 типов, у 0,2% - вирус сезонного гриппа типа А (H1N1).

При обследовании методом ПЦР 565 больных с подозрением на высокопатогенный грипп типа А (H1N1) РНК вируса обнаружена у 213 человек (в 38% проб). По даннным серологического обследования 67 больных ( в октябре и ноябре) заболевания гриппозной этиологии составили 4,3 % (грипп А(H1N1) сезонный - 2 человека), парагрипп 3 типа — 4,5% ( 3 человека), парагрипп 2 типа — 1,5% ( 1человек).

В плане лабораторной и инструментальной диагностики гриппа и других ОРЗ обязательным являются общий анализ крови, общий анализ мочи, при возможности – этиологическая диагностика, в том числе силами ЦГСН. По показаниям – биохимическое исследование крови, ЭКГ, рентгенография органов грудной клетки и околоносовых пазух, люмбальная пункция и исследование спиномозговой жидкости, консультации врачей-специалистов.

В общем клиническом анализе крови при неосложненном течении ОРВЗ, респираторного хламидиоза и микоплазмоза: показатели гемоглобина, содержание эритроцитов в норме, характерны нормоцитоз или лейкопения, нейтропения, эозинопения, относительный лимфо- и моноцитоз. СОЭ не увеличена. При орнитозе характерно значительное увеличение СОЭ и нормоцитоз. При бактериальных осложнениях (пневмония, синусит и т.д.), обострении хронических очаговой инфекции в крови нарастает лейкоцитоз, появляется палочкоядерный нейтрофилез, увеличивается СОЭ. При геморрагическом синдроме – время кровотечения и свертываемости крови.

В общем клиническом анализе мочи при неосложненном течении ОРЗ легкой и средней степени тяжести патологических изменений нет, и только при выраженной лихорадке и интоксикации могут выявляться признаки инфекционно-токсической почки (ИТП) - увеличение плотности мочи, невыраженные лейкоцитурия, протеинурия, цилиндрурия, которые носят транзиторный характер, исчезают при нормализации температуры тела и купировании проявлений общей инфекционной интоксикации. При возникновении осложнений (присоединение бактериальной инфекции или обострение хронических заболеваний мочевыделительной системы) эти изменения сохраняются и в периоде реконвалесценции.

Биохимическое исследование крови проводят по показаниям: при геморрагическом синдроме - протромбин, фибриноген, факторы свертывания крови, при признаках поражения печени – билирубин общий и его фракции, АЛТ, АСТ, ЛДГ и ЛДГ_4,5, при ИТШ, ИТП, ОПН - мочевина, креатинин, остаточный азот, при поражении миокарда – тропанин, креатинфосфокиназа общая (КФК), МВ-фракция (КФК-МВ), АСТ, ЛДГ_1,2, при дыхательной недостаточности – газы крови, сатурация крови кислородом.

Электрокардиография показана больным при подозрении на поражение сердца, а также больным с хроническими заболеваниями сердца.

Рентгенографическое исследование органов грудной клетки показано при явлениях бронхита (для исключения очаговой пневмонии) и наличии физикальных признаков поражения легочной ткани (верификация пневмонии), для диагностики синуситов – рентгенография околоносовых пазух.

Исследование спинномозговой жидкости (СМЖ) показано при явлениях менингизма. В последнем случае патологических изменений ликвора не обнаруживается. Необходимо помнить, что вирусы гриппа не обладают тропизмом к нервной ткани, менингеальная и даже энцефалитическая симптоматика носит дисциркуляторный и гипоксический генез, а все патологические изменения ликвора при гриппе или после него носят вторичный характер, например, при аутоиммунных поражениях нервной ткани (менингит, менингоэнцефалит, полирадикулонейропатия, синдром Гийена-Барре).

Для этиологической диагностики гриппа используют экспресс-методы обнаружения вируса или его антигенов - флюоресцентная микроскопия, иммуноферментный анализ (ИФА), иммунохроматографический метод, метод оптико-иммунного анализа, полимеразной цепной реакции (ПЦР). Выделение вирусов осуществляют на куриных эмбрионах и чувствительных культурах клеток (например, MDCK) и только в специализированных вирусологических лабораториях НИИ.

Материалами для микробиологической диагностики гриппа и других ОРЗ являются мазки из пораженных органов, носоглоточные смывы, соскобы с конъюнктивы, кровь, спинномозговая жидкость, испражнения и образцы, полученные при аутопсии.

Серологические исследования проводят для ретроспективной диагностики ОРЗ. Применяют реакции торможения гемагглютинации (РТГА), реакции связывания комплимента (РСК), иммуноферментного анализа (ИФА) с антигенами гриппа и других ОРЗ. Исследуют парные сыворотки крови, взятые у больных в острый период болезни (до 5-го дня от начала заболевания) и в период реконвалесценции с интервалом 5–14 дней. Диагностическим считается нарастание титра антител в 4 раза и более (в РТГА, РСК) или увеличение концентрации специфических антител IgM (в остром периоде) и/или IgG (в динамике заболевания) на 0,4-0,5 единиц оптической плотности (в ИФА).

В основе специфической лабораторной диагностики респираторных хламидиоза и микоплазмоза лежат иммунофлюоресцентные (ПИФ), серологические (НРИФ, ИФА) и молекулярно-генетические методы (ПЦР, NASBA). Материалом для исследования является сыворотка крови больного, соскобный материал со слизистой оболочки рото- и носоглотки, носоглоточные смывы, мокрота, бронхоальвеолярный лаваж.

В случаях подозрения на осложнения со стороны ЛОР-органов показана консультация оториноларинголога, сердечно-сосудистой системы – терапевта или кардиолога, поражениях легочной ткани и плевры – терапевта или пульмонолога, нервной системы – невропатолога, а при наличии неотложных состояний для определений показаний к переводу в ОРИТ – реаниматолога.

КЛИНИЧЕСКАЯ КЛАССИФИКАЦИЯ ГРИППА

I 1. Типичный грипп:

2. Атипичный грипп:

II По степени тяжести (токсикоза):

- токсикоз I степени (T 37-38,5° С, умеренная общая интоксикация)

- токсикоз II степени (Т 38,6 – 39,9°С, выраженная общая интоксикация: головная боль, рвота, слабость, анорексия)

- токсикоз III степени (Т 40°С и выше, менингизм, выраженный геморрагический синдром, появление ИТШ, ОНМ, отека легких)

- отек головного мозга

- серозные менингиты, арахноидиты, менингоэнцефалиты

- острая сердечно-сосудистая недостаточность

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ОРЗ

Серологические исследования помогают ретроспективной диагностике гриппа. Исследуют парные сыворотки крови, взятые у больных в острый период болезни (до 5-го дня от начала заболевания) и в период реконвалесценции с интервалом 12–14 дней. Наиболее показательными в серологической диагностике являются реакция связывания комплемента (РСК) с гриппозными антигенами и реакция торможения гемагглютинации (РТГА). Диагностическим считается нарастание титра антител в 4 раза и более.

Парагрипп. Для лабораторного подтверждения диагноза наи­более быстрым является обнаружение вирусных антигенов в эпителиальных клетках слизистой оболочки носа с помощью иммунофлуоресцентного метода. При иммунофлуоресцентном исследовании мазков, отпечатков со слизистой оболочки носа при парагриппе обнаруживается синее свечение.

Более четкие результаты дает серологический метод. При помощи РТГА и РСК исследуют парные сыворотки, взятые с интервалом 10 – 14 дней. Нарастание титра антител к какому-либо типу парагриппозных вирусов в 4 и более раз подтверждает диагноз. Однако серологический метод пригоден лишь для ретроспективной диагностики.

Аденовирусные заболевания. Для раннего лабораторного под­тверждения диагноза используют обнаружение специфического вирусного антигена в эпителиальных клетках слизистой оболочки носоглотки с помощью иммунофлуоресцентного метода (зеленое свечение). Для ретроспективной диагностики применяют серологический метод (РСК с аденовирусным антигеном). Диагностическим считается нарастание титра антител в парных сыворотках в 4 раза и больше.

Респираторно-синцитиальная инфекция. Для лабораторной диагностики наиболее распространенным и доступным является серологический метод. Исследуют парные сыворотки, взятые с интервалом 10 – 14 дней, при помощи РН, РСК и РНГА. Диагно­стическим является нарастание титра антител в 4 раза и более. Используют также метод иммунофлуоресценции.

Коронавирусная инфекция. Лабораторная диагностика коро-навирусной инфекции сходна с диагностикой других острых респираторных заболеваний. Наиболее распространенным явля­ется метод обнаружения возбудителя в слизи зева и носа при по­мощи флуоресцирующих антител и серологический. Серологи­ческая диагностика используется для ретроспективной расшиф­ровки этиологии. Проводится на основе роста титров антител в РСК, РНГА.

Риновирусные заболевания. Лабораторным подтверждением диагноза служит выделение вируса на культурах тканей или на­растанием титра антител в 4 раза и более с использованием РСК с антигенами из смеси разных серотипов риновирусов. Для серологических исследований первую сыворотку берут до 5-го дня болезни, вторую – спустя 2-4 недели.

ПЛАН ОБСЛЕДОВАНИЯ БОЛЬНЫХ ОРЗ

1. Общий анализ крови при поступлении и в динамике

2. Общий анализ мочи при поступлении и в динамике

3. Кровь на РТГА (РСК, РНГА) с парными сыворотками при поступлении и на 7-8 день болезни

4. Обнаружение антигенов в цилиндрическом эпителии методом иммунофлюоресценции (только во время эпидемии гриппа в вирусологической лаборатории – мазки)

5. Обнаружении гриппозных антигенов вирусов типа А и В в ИФА (только во время эпидемии гриппа в вирусологической лаборатории – мазки из зева)

6. Бактериологическое исследование слизи из носоглотки, крови, мочи, ликвора - по показаниям

7. Коагулограмма – по показаниям

8. ФПП, креатинин, мочевина сыворотки крови – по показаниям

9. Рентенография органов грудной клетки – по показаниям

10. Рентгенография придаточных пазух – по показаниям

11. УЗИ органов брюшной полости, почек – по показаниям

13. Консультации специалистов (оториноларинголога, невролога, нефролога, терапевта)

Тема: Ортомиксовирусы. Вирус гриппа. Характеристика. Патогенез и клиника гриппа. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика.

Общая характеристика ортомиксовирусов

Семейство Orthomyxoviridae включает четыре рода: Influenzavirus А, Influenzavirus В, Influenzavirus С. Род Influenzavirus А включает один вид - вирус гриппа А. Внутри этого вида различают субтипы вируса по гемагглютинину и нейраминидазе. Внутри субтипов могут быть сероварианты. Род Influenzavirus В включает один вид - вирус гриппа В, у которого не установлены антигенные субтипы. Род Influenzavirus С также включает один вид - вирус гриппа С, который также не имеет антигенных субтипов.

Морфология вирионов. Геном ортомиксовирусов представлен односпиральной линейной фрагментированной молекулой минус-РНК. Количество фрагментов в геноме различных представителей ортомиксовирусов разное. Так, вирусы гриппа А и В имеют 8 фрагментов, вирусы гриппа С – 7 фрагментов. Каждый фрагмент в отдельности и все фрагменты в совокупности покрыты белковой оболочкой, образуя нуклеокапсид. Снаружи вирион ортомиксовирусов покрыт суперкапсидной оболочкой, имеющей шипы, образованные гемагглютинином и нейраминидазой. Между нуклеокапсидом и суперкапсидом располагается матриксный белок М. Нуклеокапсид с М-белком в совокупности составляют сердцевину вириона.

Устойчивость. Ортомиксовирусы слабо устойчивы во внешней среде. Под действием ультрафиолетового света они погибают в течение 5 минут. В 70%-ном этиловом спирте вирусы гибнут через 5 минут, в 3%-ном феноле, 1%-ной настойке йода, 1%-ной сулеме, 1%-ном купоросе – через 3 минуты.

Морфология. Вирионы вируса гриппа являются “одетыми”, сферической или нитевидной формы. Геном вирионов вируса гриппа образован однонитевой спиральной молекулой минус-РНК. Геном состоит из 8 фрагментов. Нуклеокапсид имеет спиральный тип симметрии. Суперкапсид образован липидным бислоем, который пронизывают гликопротеиновые шипы гемагглютинина (Н) и нейраминидазы (N). В вирионе обнаружено 7 структурных белков, из которых 3 белка являются наруж­ными и 4 белка - внутренние. К наружным структурным протеинам относятся гемагглютинин (Н), нейраминидаза (N) и белок М. У вируса гриппа А выявлено 16 антигенных типов или вариантов гемагглютинина (от Н1 до Н16) и 9 вариантов нейраминидазы (от N1 до N9).

Репродукция вируса гриппа состоит из следующих этапов:

1. Адсорбция и проникновение вируса внутрь клетки. Вирус адсорбируется на клетках за счет взаимодействия гемагглютинина с рецепторами клеточных мембран и проникает внутрь клетки.

2. Депротеинизация вирусного генома и его проникновение в ядро клетки. В цитоплазме клетки нуклеокапсид освобождается от суперкапсида и выходит в цитоплазму. Отсюда вместе с М-белком он транспортируется в ядро.

3. Образование полных и неполных плюс-нитей РНК. В ядре клетки происходит трансформация геномной минус-нити РНК с помощью вирусной РНК-зависимой РНК-полимеразы в неполные и полные плюс-нити. Неполные плюс-нити являются иРНК для синтеза вирусных белков, а полные плюс-нити служат матрицей для синтеза геномных минус-нитей РНК.

4. Трансляция вирусных белков. После выхода молекул мРНК из ядра в цитоплазму клетки происходит трансляция вирусных белков на рибосомах.

5. Формирование потомства вирионов. На границе ядерной мембраны формируются нуклеокапсиды, которые мигрируют в цитоплазму для дальнейшего созревания. В модифицированных М-белком участках клеточной мембраны нуклеокапсиды окончательно созревают.

6. Выход вирионов из клетки происходит почкованием.

Патогенез и клиника гриппа

Источник инфекции - только больной человек. Заражение происходит воздушно-капельным путем. Вирусы гриппа проникают в респираторный тракт с каплями аэрозоля и частицами пыли. Главным местом размножения вируса служат реснитчатые и бокаловидные клетки слизистой оболочки верхних дыхательных путей. Повреждение зараженных эпителиоцитов приводит к выходу вируса в кровь. Продукты распада эпителиоцитов и медиаторы воспаления стимулируют продукцию слизи, а уцелевшие клетки мерцательного эпителия и кашлевые толчки проталкивают ее вверх вместе с основной массой вируса.

Инкубационный период при гриппе короткий - 1-2 суток. Размножение вируса в эпителиоцитах клинически проявляется в виде сухого мучительного кашля с болями по ходу трахеи. Продукты распада пораженных клеток попадают в кровь, вызывают сильную интоксикацию и повышение температуры тела до 38-39°С. Вирус гриппа оказывает угнетающее действие на кроветворение и иммунную систему. Все это может приводить к вторичным вирусным и бактериальным инфекциям, которые осложняют течение болезни.

Лабораторная диагностика, профилактика и лечение гриппа

Лабораторная диагностика. Материалом для исследования служит отделяемое носоглотки, которое получают путем смыва или с помощью ватно-марлевых тампонов. Для диагностики гриппа в качестве ускоренной диагностики используют иммунофлуоресцентный метод, позволяющий быстро обнаружить вирусный антиген в мазках-отпечатках со слизистой оболочки носа или в смывах из носоглотки больных.

Лечение гриппа проводится с использованием амантадина, ремантадина, противогриппозного иммуноглобулина, интерферона.

Специфическая профилактика заключается в применении вакцин:

- живая из аттенуированного вируса;

- убитая вакцина цельновирионная;

- субвирионная вакцина (из расщепленных вирионов);

- субъединичная вакцина (вакцина, содержащая только гемагглютинин и нейраминидазу).

Полимер-субъединичная вакцина “Гриппол” представляет собой конъюгат поверхностных белков вирусов гриппа А и В, который связан с сополимером полиоксидионием (иммуностимулятор).

Литература для подготовки к занятию:

1. Борисов микробиология, вирусология, иммунология. М., 2002.

2. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. Под ред. . М., 2004.

3. Поздеев микробиология. М., ГЭОТАР-МЕДИА, 2005.