Пцр на вирусы у детей что это

Лабораторные исследования помогают выявить причины различных недомоганий у детей и предотвратить многие заболевания. Анализы следует сдавать, не только когда у ребенка наблюдаются симптомы патологий, но и в профилактических целях. Какие именно исследования нужно проходить и в каком возрасте? Давайте поговорим об этом более подробно.

Особенности сдачи анализов ребенком

Первое исследование крови у детей проводят еще в родильном доме. Это позволяет врачу составить мнение о состоянии здоровья малыша в первые дни жизни, выявить наследственные заболевания, такие как фенилкетонурия (нарушение обмена веществ) или гипотиреоз (снижение функции щитовидной железы).

Если никаких признаков патологий и расстройств у младенца не наблюдается, то через три месяца проводят общий анализ крови, необходимый при подготовке к вакцинации.

Кроме того, при необходимости детям в возрасте до года могут назначить биохимический анализ крови. Это позволяет оценить работу внутренних органов, обнаружить инфекцию, диагностировать ряд заболеваний на ранней стадии.

Также общий анализ крови и общий анализ мочи необходимы детям для поступления в детский сад и школу. Исследования проводятся и в рамках ежегодной диспансеризации.

Помимо анализа крови и мочи, у детей в ряде случаев берут образцы кала, мазки из носа и горла. Так, при частых воспалениях слизистой оболочки носоглотки у детей разного возраста, чтобы определить, какая в организме инфекция, берут мазок.

Наиболее частыми назначениями на анализы у детей является проверка на генетические заболевания, аллергию и выявление вирусных инфекций.

По статистическим данным в Москве около 15% населения страдает от аллергии. В России и странах СНГ количество детей, подверженных аллергии, колеблется от 5,2 до 15,5%. Речь идет о пищевой аллергии, бронхиальной астме, высыпаниях на коже, нейродерматите, поллинозе и т.д.

На аллергию указывает ряд симптомов: затянувшийся насморк, чихание, слезящиеся глаза, набухшие веки. В остальном признаков заболевания не наблюдается, ребенок бодр и активен (если аллергическая реакция не принимает тяжелый характер). Зачастую родители принимают такое состояние за признаки простуды и начинают соответствующую терапию, не приносящую результата. В таком случае врач может назначить анализ на предрасположенность к аллергии. На нее указывает повышенная выработка в организме ребенка специфических белков иммуноглобулинов E (IgE). Анализ на аллергены, как пищевые, так и растительные, позволяет конкретизировать, чем вызвана реакция.

Могут быть предписаны следующие исследования:

За 7 дней до анализа нельзя принимать антигистаминные препараты. Проведение аллергопроб не рекомендуется делать натощак. Анализ не делают в период обострения аллергии, также он противопоказан детям до 3–5 лет.

Резкое повышение температуры, расстройство желудка, кашель, боли в горле, ломота в теле, слабость, головокружение — эти и другие симптомы являются показанием для сдачи анализов на инфекции.

Выявить вирусы можно разными способами.

Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) . Метод позволяет выявить ДНК различных инфекций, то есть определить возбудителя болезни. В ходе исследования в специальный реактор помещают небольшое количество биологического материала, в котором могут быть фрагменты ДНК микроба. Например, при определении инфекции дыхательных путей у детей берут мазки из носа и горла. К исследуемому материалу добавляют специальные ферменты. Они связываются с ДНК микроба и синтезируют ее копию.

ПЦР позволяет с высокой достоверностью обнаружить наличие ряда инфекций. Очень часто детям назначают мазок на стрептококк. Этой методикой пользуются, например, для диагностики коклюша и дифтерии.

Наследственные заболевания могут быть обнаружены и у детей, родившихся у здоровых родителей. Причем многие болезни дают о себе знать не сразу. Вовремя сделанный анализ даст возможность обнаружить болезнь и своевременно принять меры. Рассмотрим наиболее часто встречающиеся генетические заболевания.

Только девочки подвержены болезни Шерешевского-Тернера . При данном заболевании у пациенток 45 хромосом вместо 46. Первые признаки патологии часто обнаруживают лишь в 10–12 лет. Указывают на заболевание низкий рост, низко растущие на затылке волосы, отсутствие полового развития, умственная отсталость. Во взрослом возрасте болезнь грозит бесплодием.

Другое генетическое заболевание диагностируется у мальчиков — болезнь Клайнфельтера . Причем если не сдавать анализы, то болезнь выявится только к 16–18 годам. Юноши с таким диагнозом высокого роста, у них непропорционально длинные руки. Также наблюдается некоторое отставание в умственном и психическом развитии. В 9 случаях из 10 у таких пациентов наблюдается бесплодие. Исследования показывают, что в данном случае дело в лишней — 47-ой — хромосоме.

Всем детям в возрасте до 2–3 месяцев следует проводить биохимическое исследование мочи, позволяющее определить наличие или отсутствие фенилкетонурии (пировиноградной олигофрении). Заболевание является наследственным, и в том случае если оба родителя являются носителями рецессивного гена (сами они могут быть здоровы), риск рождения больного ребенка составляет 25%.

Детям до 1–1,5 лет желательно проводить диагностику на выявление еще одного наследственного заболевания — муковисцидоза , которое поражает дыхательную систему и желудочно-кишечный тракт. У пациентов отмечаются симптомы хронического воспаления легких и бронхов в сочетании с диспепсическими проявлениями (поносами, чередующимися с запорами, рвотой и тошнотой и т.д.). Частота этого заболевания составляет 1 случай на 2500 детей.

Только после года у детей проявляются клинические признаки достаточно распространенного заболевания — гемофилии . Ей подвержены в основном мальчики, тогда как женщины являются носительницами рецессивного гена.

В 4–5-летнем возрасте только у мальчиков могут быть обнаружены признаки миодистрофии Дюшенна . В этом случае так же, как и при гемофилии, мать является носителем гена мутации. В ходе болезни сначала мышцы голеней, а с годами и всех других частей тела заменяются соединительной тканью, которая не способна сокращаться.

Современная медицина позволяет вовремя диагностировать генетические заболевания с помощью специальных лабораторных исследований. Еще во время беременности можно пройти тесты на иммуногенетику, генетическую предрасположенность к болезням сердца и сосудов, желудочно-кишечного тракта, центральной нервной системы, онкологических заболеваний и ряда других.

Лабораторные исследования — верные помощники врачей и родителей в диагностике различных детских заболеваний и в мониторинге лечения. С помощью анализов выявляют вирусные инфекции, аллергию, врожденные пороки развития. Важно лишь правильно выбрать медицинский центр для проведения процедуры: предлагающий необходимые услуги, обеспечивающий получение точных результатов и работающий с детьми.

Здо­ровье ре­бен­ка — за­лог спо­койст­вия в семье. Во­вре­мя про­ве­ден­ная ди­аг­нос­ти­ка по­мо­жет вы­явить воз­мож­ные про­бле­мы со здо­ровь­ем и при­нять ме­ры для раз­ра­бот­ки вер­но­го кур­са ле­че­ния. Что­бы ма­лыш не бо­ял­ся, объ­яс­ни­те ему, что про­це­ду­ра не бу­дет бо­лез­нен­ной, за­то при­не­сет мно­го поль­зы. Сей­час мож­но най­ти мно­жест­во по­зна­ва­тель­ных мульт­филь­мов и ро­ли­ков, рас­ска­зы­ва­ю­щих о со­ста­ве кро­ви, о бо­лез­нях и ви­ру­сах, их ле­че­нии — пос­ле их про­смот­ра де­ти по-дру­го­му смот­рят на про­це­ду­ру про­ве­де­ния ана­ли­за.

Детям свойственно в силу более слабого, чем у взрослых иммунитета хуже переносить любые заболевания. Они протекают, как правило, с выраженной симптоматикой с первых дней. Впрочем, есть группа заболеваний, которые протекают чаще бессимптомно, но грозят серьезными последствиями и осложнениями для организма. Скрытые инфекции у ребенка так же сложно диагностировать, как и у взрослого человека. К ним относят все типы герпеса, включая цитомегаловирус, а также папилломы человека и урогенитальные инфекции, которые передаются у взрослых половым путем, а в детский организм попадают еще в утробе матери или в процессе родов.

Скрытые инфекции у ребенка

Существовать скрытые инфекции могут в организме, никак не давая о себе знать долгое время, но в определенных условиях, при снижении защитных сил их возбудители активизируются и размножаются. Вместе с кровью и лимфатической жидкостью болезнетворные микроорганизмы разносятся по всему организму.

Проявляться признаки патологий начинают только при ослаблении иммунитета, в остальных случаях скрытые инфекции протекают без симптомов.

Поскольку заболевание никак себя не проявляет, его достаточно сложно диагностировать. Выявить вирус или болезнетворные бактерии можно только при помощи клинических анализов. Без них невозможно начать лечение, а несвоевременная диагностика часто становиться причиной опасных осложнений и последствий для здоровья.

Один из типов герпеса – цитомегаловирус. Как и другие скрытые инфекции, цитомегаловирусная протекает в латентной форме и поражает ребенка, когда его иммунитет слабеет. Но также проникнуть в организм ребенка возбудитель может еще до рождения, в утробе матери или при родах.

Только у детей с ослабленной иммунной защитой могут проявляться общие симптомы, которые легко спутать с любым другим недугом. Часто цитомегаловирус живет в организме длительное время, не проявляясь, но при благоприятных условиях возбудитель размножается и поражает все органы без исключения.

При активации цитомегаловирус проявляется комплексом общих симптомов:

• повышение температуры тела;
• слабость;
• сонливость;
• вялость;
• увеличение лимфоузлов;
• мышечная слабость;
• увеличение печени и селезенки;
• пожелтение склер;
• снижение аппетита.

Сначала все эти симптомы можно спутать с кишечной инфекцией или простудным заболеванием. У здорового, на первый взгляд, ребенка крайне опасно пускать болезнь на самотек, это может привести к развитию в дальнейшем опасных осложнений. У новорожденных спустя несколько месяцев при скрытой врожденной инфекции начинают проявляться первые расстройства:

• появление судорог;
• аномальное развитие костей черепа;
• расстройства двигательной системы;
• дефицит массы тела.

Со временем становятся заметны нарушения речи, расстройства нервной системы, отставание в умственном развитии, недоразвитость внутренних органов, а у пятой части всех заболевших, стремительно опускается зрение, и наступает слепота.

Заражение ребенка происходит от носителя в любом возрасте. Если инфицирование случилось внутриутробно или в первые часы после появления на свет, речь идет о неонатальном типе герпеса. Симптоматика заболевания может не проявляться длительное время, пока инфекция находится в продромальной стадии, выявить вирус очень сложно.

Латентная форма не менее опасна и требует незамедлительного лечения.

У новорожденных детей заболевание проявляется характерными симптомами практически сразу, у остальных проявления могут меняться и возникать постепенно. Ребенок становится менее подвижным, даже слабая реакция иммунитета на вирус проявляется повышением температуры тела, возникает слабость и общее недомогание. А также для герпеса характерно появление головной боли и воспаление горла. Так себя проявляет и герпесная ангина, которую путают с признаками простуды.

Если диагноз ставят ошибочно и ребенка начинают лечить от респираторного заболевания, упускают драгоценное время и борются не с той болезнью. Иногда вместе с герпесом действительно проявляются различного рода расстройства, и тогда симптоматика становится смазанной, а поставить точный диагноз можно только после лабораторных исследований.

Без лечения вирус герпеса вызывает различные сбои в работе организма. Из самых частых последствий следует выделить такие:

• поражения головного мозга (менингоэнцефалит, энцефалит);
• нарушение зрения, а также конъюнктивит, поражение катаракты, эрозия роговицы и радужной оболочки глаза, сосудов;
• развитие стоматита или гингивита;
• нарушение работы и поражение печени;
• поражение миндалин;
• развитие герпангины;
• детский церебральный паралич.

Вирус герпеса вылечить нельзя, но подавить его активность и предупредить развитие осложнений можно, главное – вовремя диагностировать и начать лечение инфекции у детей.

Заражение папилломавирусом происходит при контактах с инфицированным человеком бытовым путем, а также во время родов и внутриутробно. Попасть в организм человека вирус может при расчесывании и повреждении кондилом (самозаражение).

Длительное время инфекция может не проявляться, но как только иммунитет ребенка слабеет, вирус выходит наружу. Его активность проявляется образованием наростов на кожных покровах, чаще возникающих в подмышечных впадинах, на руках или лице. Этим плоским или нитевидным выростам предшествует покраснение кожи, зуд и жжение. Иногда этих признаков нет, и образование возникает совершенно неожиданно.

Вирус папилломы человека опасен для здоровья и без лечения может привести к серьезным осложнениям. Если наросты возникают на гортани, это может вызвать нарушения дыхательной и голосовой функции. Но хуже всего то, что вирусы папилломы могут спровоцировать злокачественные образования или плоскоклеточный рак.

Анализ на скрытые инфекции у детей

Выявить скрытые инфекции и подтвердить диагноз, если проявляются признаки заболевания, можно только по результатам клинических анализов. Обнаружить генетический материал вирусов можно в крови, но на сегодняшний день используют несколько методик и для лабораторных исследований берут мазки, соскобы и другие материалы.

Самым информативным и популярным среди лабораторных исследований является анализ ПЦР. Для него подходит кровь, соскоб или любой биологический материал. Тест очень чувствителен к возбудителям, и если будет обнаружен хотя бы фрагмент ДНК патогена, результат будет положительным.

Эту методику серологической диагностики крови применяют чаще других. В процессе исследования в плазме определяют наличие иммуноглобулинов, которые возникают сразу после проникновения инфекции в организм. Этот анализ не только устанавливает тип инфекции, по количеству и характеру антител можно судить о давности заболевания и активности вируса.

Для проведения бак.посева материал забирают, чтобы определить содержащиеся в нем микроорганизмы. Далее, образец помещают на питательную среду, где бактерии размножаются, формируют характерные колонии, по форме и росту которых делаются выводы об их принадлежности к тому или иному виду.

Кроме того, применяют микроскопическую технику. Так изучают мазки, полученные непосредственно от больных, а также берут для изучения фрагменты колоний, выросших на питательной среде.

Впрочем, такие методы не используются для диагностики вирусных инфекций. Эти возбудители способны размножаться только в культуре тканей, а на питательных средах они не растут.

Россия готовится к тотальному тестированию, новые тест-системы позволяют быстро провести масштабную проверку на вирус. К массовому выпуску приступил один из разработчиков нового продукта, два других начинают производство. Олег Гусев, ведущий научный сотрудник Научно-клинического центра прецизионной и регенеративной медицины Казанского федерального университета и института физико-химических исследований RIKEN (Япония) помог РБК Тренды разобраться в том, как устроено тестирование на коронавирус в России и в мире.

Что предлагает ВОЗ

Глава Всемирной организации здравоохранения Тедрос Гебреисус еще в середине марта призвал страны проводить как можно больше тестов на вирус, который вызывает заболевание SARS-CoV-2, даже людям без симптомов. Согласно руководству ВОЗ, анализы на коронавирус COVID-19 должны проводиться методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с обратной транскрипцией. Как говорится в рекомендациях, на сегодня это самый точный и надежный метод диагностики вирусной инфекции. Он позволяет определить даже очень небольшое количество РНК вируса в биологическом материале человека. Это помогает выявить болезнь в инкубационном периоде.

Изобретенный в 1983 году метод и сейчас считается фундаментальным в молекулярной диагностике. Американский ученый, который придумал способ значительного увеличения малых концентраций фрагментов ДНК в биологической пробе, получил за него Нобелевскую премию. Выявление ДНК/РНК методом ПЦР позволяет диагностировать такие заболевания, как ВИЧ, вирусные гепатиты, инфекции, передающиеся половым путем, туберкулез, боррелиоз, энцефалит и многие другие. Метод используют в археологии, криминалистике, генетике.

Как работает ПЦР-тест

Для анализа из физиологических жидкостей извлекают одноцепочечную РНК, моделируют на ее основе двуцепочечную ДНК и многократно дублируют с помощью специального фермента (полимеразы). Увеличение числа копий ДНК называется амплификацией. В результате концентрация определенных фрагментов ДНК/РНК в биологическом образце, изначально минимальная, значительно увеличивается. При исследовании копируется только необходимый для теста участок ДНК. И, конечно, дублирование происходит только в том случае, если искомый участок вирусной ДНК или РНК присутствует в исследуемом биоматериале. В случае с коронавирусом мазок для анализа берут из ротоглотки или носоглотки, поскольку в крови или в кале вирус появляется на более продвинутой стадии болезни.

Тест-система EMG — продукт совместной разработки российских и японских разработчиков, проводившейся с 2016 года, рассказывает Олег Гусев. На данный момент эти тесты включены в систему обязательного медицинского страхования в Японии.

В ближайшее время планируется производить до 2,5 млн. тестов и 1 тыс. портативных лабораторий в неделю. Сами тесты, как и многие реагенты производятся в России. Планируется, что цена на тесты EMG будет в среднем в пять раз меньше, чем на стандартные ПЦР-тесты в Европе.

Российско-японские тесты основаны на методе изотермальной молекулярной диагностики SmartAmp, превосходящем метод ПЦР по скорости работы в восемь раз, а переносная лаборатория позволяет тестировать до 20 пациентов в час, говорит Гусев.

Ключевое отличие теста EMG в том, что многие тесты, которые производятся сейчас, это тесты ИФА (имунноферментный анализ), а не ПЦР. Данные системы определяют антитела, которые организм начинает вырабатывать не ранее, чем через неделю после заражения. Российско-японская разработка позволяет получать результат уже за 30 минут, с точностью, равной почти 100%. Кроме того, тест EMG позволяет определить наличие вируса уже на самых ранних стадиях, в то время как другие системы диагностики короновируса обладают меньшей чувствительностью и не могут выявлять вирус на ранней стадии инфицирования.

Принцип технологии российско-японского теста, по сути, не отличается от классической ПЦР — это наращивание количества целевых фрагментов ДНК и их детекция. Однако в изотермической амплификации, в отличие от классической ПЦР, где необходимы циклы нагрева и охлаждения, все происходит при одной температуре. Это позволяет многократно увеличивать скорость реакции. Метод SmartAmp был изобретен более 15 лет назад (как и LAMP — другая популярная технология изотермальной амплификации, предшествующая SmartAmp). Впервые для инфекционных заболеваний эту технологию применили в 2009 году для быстрого выявления пандемического гриппа (H1N1) в Японии.

Повторные тесты необходимы при любом методе. Отрицательный тест на COVID-19 не гарантирует, что человек не заразится этим вирусом на следующий день. Поэтому, например, в японских лабораториях персонал тестируют каждые несколько дней. Повторный тест нужен и для того, чтобы подтвердить, что человек излечился.

Эта тест-система будет использоваться для диагностики COVID-19 не только в России и Японии. 40 тыс. тестов закупила Австрия, поступили заказы из других стран Европы, Ближнего Востока, и Латинской Америки. Подана заявка в Управление по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных препаратов США (FDA) для поставок в эту страну.

На данный момент в России прошли регистрацию еще три теста на коронавирус.

По некоторым данным, в Москве проводится около 700 тестов на коронавирус в сутки. В планах у московских властей увеличить этот показатель до 10 тыс. тестов в сутки, а затем довести его до 25—28 тыс. тестов ежедневно.

Новые разработки за рубежом

Компания Bosch выводит на рынок свой тест на коронавирус, который сначала будет доступен в Германии, а вскоре появится в других странах. В его основе лежит диагностический аппарат Vivalytic, который, по словам изготовителей, станет первым автоматизированным тестом на COVID-19. Тест распознает не только коронавирус, но еще шесть респираторных заболеваний, например, вирусы гриппа А и B. Во время лабораторных испытаний аппарата его точность составила 95%.

Как пишет издание ZME Science, анализ может проводиться прямо в стационаре или медицинском центре — не нужно отправлять образцы в лабораторию и ждать, пока придет ответ. Врачи смогут быстрее идентифицировать и изолировать зараженных, а пациентам не придется пребывать в неизвестности несколько дней. Тест прост в обслуживании и не требует специальной подготовки. Медперсоналу нужно только взять мазок из носа или горла пациента, нанести его на картридж, содержащий реагент, и вставить картридж в анализатор. Каждый аппарат может выполнять до десяти анализов за 24 часа.

Еще более оперативный тест на COVID-19 разработали в Великобритании. Он позволяет выявить COVID-19 всего за 30 минут. Чтобы провести его, достаточно портативного оборудования стоимостью около $120 и набора полосок для мазков из носа и горла по $5 каждая. Одновременно проходить тест могут до шести человек.

FDA в экстренном порядке одобрило сверхбыстрый тест на коронавирус, разработанный калифорнийской компанией Cepheid. С его помощью диагноз можно будет поставить всего за 45 минут. Как отмечает Business Insider, для обработки результатов теста не требуется специальное обучение. Нужен лишь доступ к системе Cepheid GeneXpert — в США их 5 тыс., а по всему миру — 23 тыс.

Начало тотального тестирования людей на COVID-19 во всем мире — хорошая новость как для людей, так и для национальных органов здравоохранения. До сих пор в мире нет четкого представления о том, сколько людей заражены коронавирусом и выявление тех, у кого он уже есть: их госпитализация или отправка на домашний карантин позволит быстрее оценить масштаб угрозы и вовремя принять правильные меры.

После двух отрицательных результатов диагноз COVID не ставится

08.04.2020 в 17:52, просмотров: 10058

Обилие тестов на выявление COVID-19 и не всегда точные их результаты совсем запутали москвичей. Как разобраться в большом многообразии появляющихся вариантов диагностических систем? Что такое ПЦР или экспресс-тест? Какой из них является высокочувствительным, а какой - нет? Можно ли брать анализ у себя самого и отправлять в лабораторию? Расставить все по полочкам мы попросили заведующего лабораторией редактирования генома Национального медицинского исследовательского центра им. В.И.Кулакова, доктора биологических наук Дениса РЕБРИКОВА.

– Денис Владимирович, сориентируйте, пожалуйста, наших читателей в многообразии имеющихся диагностических тестов.

– Кто сегодня производит эти тесты?

– На начало апреля в России уже семь производителей тест-систем для ДНК-диагностики имеют регистрационное удостоверение Росздравнадзора (документ, разрешающий применение теста в клинической лабораторной диагностике). Более-менее все они одинаковы по своей чувствительности и специфичности. Хотя самые первые тесты, рекомендованные к применению в феврале, отличались немного пониженной чувствительностью.

– То есть, в том случае, когда один аналог давал положительный результат, указывая на болезнь, другой мог дать отрицательный?

– Когда нам говорят: подготовлено столько-то единиц тест-систем, что имеется в виду?

– Один тест - это сочетание реагентов, рассчитанное на проведение анализа одного образца биоматериала (одного пациента). Он включает несколько этапов. Первый этап -высвобождение нуклеиновой кислоты из вируса (занимает минут 30-40), потом идет этап обратной транскрипции — превращение РНК в ДНК и ПЦР-амплификации (1,5 часа).

Каждый набор реагентов, как правило, поставляется в комплекте для анализа 96-ти образцов. Поэтому цифры поставленных тест-систем иногда плавают: кто-то считает комплектами, кто-то единицами тестов. Более корректно считать в единицах.

– Еще совсем недавно вроде бы ощущалась нехватка таких ПЦР-тестов. А сегодня нам сообщают, что Россия поставляет тест-системы в 30 стран мира. У нас действительно хватает тестов на всю страну?

– Семь производителей хорошо справляются с производством. У нас исторически хорошие мощности по производству такого рода реагентов.

– Почему тогда люди порой подолгу ждут результатов? Моя коллега, у которой подозревали инфицирование SARS-CoV-2, ждала результаты анализа больше недели.

– Такая же система действует и в других областях России?

– Когда берут мазок, пациенту сообщают, что за тест, кто его производитель?

- Если это не коммерческое исследование, то скорей, нет. Но смею вас заверить, сегодня все тесты уже относятся к разряду высокочувствительных.

– И все-таки, если человек сдал биоматериал на первый анализ, а он дал отрицательный результат, когда ему назначат повторное взятие пробы?

– Через три дня, когда в биологическом образце частиц вируса будет больше. В течение этих трех дней человек должен быть изолирован. Если оба раза тест будет выдавать отрицательный результат, то в этом случае диагноз COVID-19 не ставится.

– Повторный анализ также производят в двух лабораториях?

– Да, по правилам требуется независимое подтверждение в референсной лаборатории.

- А насколько вероятен вариант с ложно-положительным результатом? После него не назначают повторный анализ?

– Вероятность ложно-положительного ответа при двух повторных тестах в разных лабораториях – менее 0,01%, то есть фактически отсутствует.

– В среду Роспотребнадзор объявил о том, что ряд лабораторий начинают в Москве массовый скрининг всех желающих с помощью платной высокочувствительной тест-системы. То есть, любой житель города может заказать диагностику и ему на дом привезут все необходимое.

– Насколько я понимаю, речь идет о том же, что коммерческие лаборатории практиковали и раньше, - оказывали подобные услуги со сбором биопробы на дому.

– Предлагают даже опцию, которая позволила бы пациенту брать у себя биопробы и отправлять в лабораторию.

– Самодеятельность в этом случае может дать некорректный результат. Брать мазок из горла должен врач или обученный лаборант. Если пациент сам не туда попадет, у него может быть ложно-отрицательный ответ.

– Почему мазок берется из носа и из горла?

– Такой на данный момент алгоритм взятия биоматериала, хотя, по сути, более правильным является мазок из горла.

– По крови можно определить болезнь?

– Для способа ПЦР можно использовать как мазок, так и кровь.

– Сейчас все чаще рекламируют некий экспресс-тест для выявления вирусных частиц в виде тест-полосок. Это альтернатива ПЦР?

– Скорей всего, когда речь идет о тест-полосках, имеется в виду ИФА — иммуно-ферментный анализ. Анализ вирусных частиц можно произвести при помощи ИФА, но вряд ли его сегодня будут использовать. Дело в том, что по точности и чувствительности он сильно уступает вышеописанному способу ПЦР. Зато появляются уже подобные тест-полоски для ИФА-теста на наличие антител в крови человека, уже переболевшего COVID-19. Вот они очень эффективны и дают результат через несколько минут.

Поэтому будьте внимательны и при заказе экспресс-тестов внимательно изучайте их предназначение. Кстати, некоторые производители тест-систем для ПЦР-диагностики могут и ее называть экспресс-тестом, в принципе, 3-4 часа, в течение которых она выполняется, это небольшой срок.

Заголовок в газете: Из какого теста сделаны тесты?
Опубликован в газете "Московский комсомолец" №28237 от 9 апреля 2020 Тэги: Наука, Коронавирус, Грипп, Клиники, Анализы Организации: Роспотребнадзор Места: Россия, Москва

ПЦР или полимеразная цепная реакция (Рolymerase Сhain Reaction) – это высокоинформативный метод диагностики, предназначенный для выявления генетических отклонений и дифференциации инфекционных заболеваний.

Клинико-лабораторная оценка биоматериала (крови, мочи и т.п.) основана на определении генно-молекулярной структуры возбудителя инфекции, что нивелирует риск ложноположительного результата анализа. За научно-медицинскую ценность метода его разработчик Кэри Мюллис был удостоен Нобелевской премии в 1993 г.

Специфика метода ПЦР крови на инфекции

Анализ крови на ПЦР (PCR) обнаруживает активных инфекционных агентов и неактивных патогенов, погибших под воздействием медицинских препаратов, на любом этапе развития болезни. Такая способность обусловлена выявлением не просто возбудителя инфекции, а его генома:

• ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоты) бактерий, паразитов, грибков;
• РНК (рибонуклеиновой кислоты) вирусов.

Пробирку с образцом крови, взятой у пациента, размещают в амплификаторе – реакторе, обеспечивающем последовательное нагревание и охлаждение образца. К биоматериалу добавляют реакционную смесь. В амплификаторе производится более 30 циклов смены температурного режима, каждый из которых включает 3 этапа (денатурацию, отжиг праймеров, элонгацию).

В ходе многократной реакции амплификации:

• разрываются водородные цепи макромолекул (ДНК и РНК);
• образуются комплементарные комплексы матрицы с короткими фрагментами РНК и ДНК (праймеры);
• термостойка ДНК-полимераза достраивает матричную цепь, и формирует множественные генетические копии возбудителя.

При достаточном количестве копий амплификатор дает качественно-количественную оценку обнаруженному возбудителю. Таким образом, молекулярная диагностика решает три задачи одновременно:

• обнаруживает инфекционного агента;
• дифференцирует его принадлежность (вирус, бактерия и т. д) и разновидность;
• определяет дальнейшую тактику лечения и выбор медикаментов (в соответствии с установленным заболеванием).

ПЦР крови применяют для определения вирусов и бактерий либо тяжелых паразитарных внекишечных инвазий. Генная информация является уникальной, поэтому точность исследования ПЦР практически 100%. Рolymerase Сhain Reaction определяет инфекцию даже при отсутствии активности возбудителя и выраженных симптомов болезни.

Области применения анализа

В настоящее время в медицине и криминалистике, а также для клонирования генов и установления родственных связей применяют более десятка разновидностей амплификации. В ежедневной практике кровь на ПЦР назначают медицинские специалисты:

• педиатр;
• гинеколог;
• уролог;
• дерматовенеролог;
• инфекционист;
• фтизиатр;
• пульмонолог.

Генно-молекулярная диагностика успешно применяется в неонатологии. С помощью полимеразной цепной реакции выявляют возможное заражение младенцев внутриутробно и сразу после появления на свет. Для детей с риском инфицирования анализ проводят в первые 48 часов после рождения и повторно в возрасте 3-6 месяцев.

Кроме инфекционных заболеваний, Рolymerase Сhain Reaction помогает диагностировать наследственные аномалии и мутации. В перинатальный период методом ПЦР у будущего малыша можно обнаружить:

• гемофилию – нарушение свертываемости крови;
• болезнь Хантера – патологии обменных процессов;
• мусковидоз – нарушение внешнесекреторной функции желез;
• нервно-мышечную миодистрофию Дюшенна-Беккера;
• первичный иммунодефицит;
• синдром Альпорта – патологию почек.

PCR используют для определения мутантных генов и их РНК-продуктов в диагностике онкологических заболеваний. Высокая чувствительность молекулярного метода обеспечивает выявление онкопатологий в доклинической стадии, когда очаг опухоли не превышает 0,01 см 3 в размерах.

По обнаруженным онкогенам, биологическим канцерогенам и антионкогенам диагностируют исходную стадию:

• онкогематологических болезней (рака крови и лимфатической системы);
• злокачественных образований молочных желез;
• аденокарциномы толстой кишки;
• меланомы;
• рака ротоглотки;
• наследственных форм рака.

Высокой онкогенностью обладают штаммы 16, 18, 31, 33, 35 ВПЧ (вируса папилломы человека). В 50% случаев вызывают карциному шейки матки у женщин – раковую опухоль эпителиальных клеток. Обнаружение неопластических клеток в доклинической стадии рака значительно повышает шансы на успешное лечение болезни.

Особую ценность ПЦР имеет для Службы крови. Метод позволяет определить заражение гепатитами, ВИЧ, сифилисом в бессимптомный инкубационный период. На этой стадии иммунная система еще не продуцирует антитела к возбудителям, и выявить заболевания с помощью серологических исследований невозможно.

Спектр возможностей ПЦР в диагностике инфекций

Анализ полимеразной цепной реакции крови используется для выявления ЗППП (заболеваний, передающихся половым путем) и урогенитальных инфекций, инфекционных болезней легких, печени, пищеварительной системы, так называемых, детских болезней.

Вирусы
герпесовирус	1 тип	обычный герпес
	2 тип	генитальный герпес
	3 тип	краснуха
	4 тип (цитомегаловирус)	цитомегалия
	5 тип (Эпштейн-Барр)	инфекционный мононуклеоз
папилломы человека (21 штамм)		папилломатоз
HAV, HBV, HCV		гепатит А, В, С
иммунодефицита		ВИЧ, СПИД
Бактерии
бледная трепонема		сифилис
гарднереллы		гарднереллез
гонококки		гонорея
уреаплазма		уреаплазмоз
сальмонелла		сальмонеллез
палочка Коха		туберкулез
листерия		листериоз
стрептококки и стафилококки		сепсис, пневмония, менингит
Паразиты, прокариоты, простейшие
описторхи (печеночные сосальщики)		описторхоз
плазмодий		малярия
токсоплазма		токсоплазмоз
лямблии		лямблиоз
хламидии		хламидиоз
трихомонада		трихомониаз
микоплазма		микоплазмоз
эхинококки		эхинококкоз
шистосомы		шистосомоз
цестоды		альвеококкоз

• хламидиоз;
• гонорея;
• трихомониаз;
• сифилис;
• ВИЧ;
• обычный и генитальный герпес;
• цитомегалия и инфекционный мононуклеоз;
• папилломатоз;
• гепатиты В, С.

А также микоплазмоз и уреаплазмоз – не относящиеся к венерическим болезням, но передающиеся при интимной близости. Отдельный анализ крови ПЦР на кандидоз (молочницу) практикуется редко, поскольку заболевание легко выявляется по мазку из влагалища (у мужчин из уретры).

Прямыми показаниями являются симптоматические проявления, характерные для половых инфекций:

• длительная фебрильная (38-39 ℃) температура тела;
• увеличение лимфатических узлов;
• кожная сыпь;
• зудящие высыпания в области наружных половых органов;
• поллакиурия (учащенное мочеиспускание), сопровождающаяся жжением в уретре;
• боли в нижней части живота, иррадиирующие в поясницу;
• диспареуния (болезненные ощущения во время интимной близости и после секса);
• лейкоррея у женщин (неспецифические влагалищные выделения с неприятным запахом) и выделение слизи из уретры у мужчин.

ПЦР-12 рекомендовано пройти при планировании беременности.

Основные достоинства PCR

Метод полимеразной цепной реакции применяется в совокупности с другими исследованиями или заменяет:

• Микроскопию (обычную и люминесцентную) – изучение крови под микроскопом (люминесцентным микроскопом).
• Бактериологический посев – высаживание биоматериала на питательные для паразитов, бактерий и т. д. среды, и выращивание в лабораторных условиях колоний болезнетворных микроорганизмов.
• Серологические тесты – основаны на выявлении специфических антител (иммуноглобулинов) к антигену (инфекционному агенту): реакция иммунофлуоресценции (РИФ), иммуноферментный анализ (ИФА), реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ), реакция пассивной гемагглютинации (РПГА).

ПЦР используют для уточнения спорных диагнозов, при получении ложноположительных и ложноотрицательных результатов других анализов. Прерогативы ПЦР-диагностики:

• Высокая точность типизации возбудителей. Оценка уникальных для каждого микроорганизма фрагментов ДНК и РНК дает возможность распознать конкретный штамм вируса, разновидность паразитов, грибков и бактерий.
• Гиперчувствительность к инфекционным агентам. Чтобы обнаружить инфекцию, для ПЦР достаточно молекулярного присутствия патогенного микроорганизма.
• Оперативность проведения анализа. В отличие, к примеру, от бакпосева для выполнения которого требуется 7-14 дней, результаты PCR можно получить через 24 часа (в платных диагностических центрах интервал ожидания может быть сокращен до 5-7 часов).
• Универсальность. Диагностические возможности метода в области инфекционных болезней практически не ограничены.
• Комплексность. Одного образца крови достаточно для проведения исследования на несколько патогенных микроорганизмов.
• Специфичность. При проведении ПЦР исключены перекрестные реакции иммуноглобулинов с близкородственными не комплементарными антигенами, следовательно, невозможен ложноположительный результат исследования.

О недостатках Рolymerase Сhain Reaction можно говорить в свете высоких требований к оснащению лаборатории и квалификации медицинского персонала. Анализ проводится в условиях абсолютной стерильности, со строгим соблюдением температурного режима. Присутствие посторонних ДНК в воздухе может исказить результаты исследования.

Подготовка к анализу крови методом полимеразной цепной реакции

Подготовительные мероприятия обеспечивают максимальную объективность результатов исследования. Правила подготовки к ПЦР анализу крови включают:

• отказ от приема медикаментов за 5-7 дней до сдачи крови;
• ограничение жирной пищи и исключение из рациона спиртных напитков за 2 дня;
• сокращение физической активности накануне забора крови;
• соблюдение режима голодания 8-12 часов (сдавать кровь необходимо натощак).

За час до процедуры рекомендуется отказаться от никотина (не курить). Забор крови производится из вены, в утренние часы. В современных лабораториях, имеющих условия для проведения ПЦР-диагностики, биоматериал берут при помощи стерильных вакутейнеров. Кровь пациента хранится в течение двух недель, что делает возможным проведение дополнительных тестов.

О результатах и ценах

Результаты исследования можно получить на следующий день. Количественный показатель, иначе, число полученных копий инфекционного агента, указывается редко. В большинстве случаев пациент получает бланк с качественной интерпретацией результата. Варианты могут быть:

Положительный результат при отсутствии выраженных проявлений болезни свидетельствует о латентном бессимптомном течении инфекции или пребывании возбудителя в стадии инкубации. Исследование относится к средней ценовой категории.

В клиниках Москвы и других крупных городов стоимость определения одного вида инфекции варьируется от 300 до 500 руб. Комплексный анализ ПЦР-12, как правило, обходится дешевле, чем проверка на каждый возбудитель отдельно.

Итоги

Полимеразная цепная реакция (реакция амплификации) – современное клинико-диагностическое исследование крови и других биожидкостей человека. Анализ основан на обнаружении и дифференциации молекулярного фрагмента вируса, бактерии и т. д. для определения инфекции или поврежденного гена для выявления мутаций, анормальных отклонений в развитии, наследственных патологий.

Ключевые преимущества ПЦР перед иными лабораторными тестами:

• диагностика заболеваний в исходном периоде (при отсутствии психосоматических проявлений);
• обнаружение нескольких патогенов, атакующих организм по одному биообразцу;
• чувствительность практически ко всем инфекционным агентам;
• определение начальных (доклинических) форм рака;
• определение генетических патологий во внутриутробном периоде развития ребенка.

Исследование является высокоинформативным, доступным и оперативным по времени выполнения. Результаты можно получить на следующий день после анализа.