Набор реагентов для выявления рнк энтеровирусов

Информация о документе
Дата добавления:
Размер:
Доступные форматы для скачивания:

по применению набора реагентов

для выявления РНК энтеровируса 71 типа ( Enterovirus 71 типа) в объектах окружающей среды и биологическом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией

ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора,

Российская Федерация, 111123,

город Москва, улица Новогиреевская, дом 3а

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 3

ПРИНЦИП МЕТОДА 3

ФОРМАТЫ И ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ 4

АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 5

ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 7

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ 7

ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ 9

ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА 10

ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАЦИИ РНК 10

ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ 12

ЭКСТРАКЦИЯ РНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ 13

ПРОВЕДЕНИЕ РЕАКЦИИ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ И АМПЛИФИКАЦИИ 13

А. Подготовка пробирок для проведения ОТ-ПЦР 13

Б. Проведение ОТ-ПЦР 16

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ 17

ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ 19

ЭКСТРАКЦИЯ РНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ 20

А. Подготовка пробирок для проведения ОТ-ПЦР 20

АНАЛИЗ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ 23

СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ 25

СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ 26

В настоящей инструкции применяются следующие сокращения и обозначения:

- внутренний контрольный образец

- геномные эквиваленты микроорганизма

- положительный контроль этапа ПЦР

- отрицательный контроль этапа ПЦР

- комплементарная ДНК, полученная в ходе реакции обратной транскрипции

- отрицательный контроль этапа экстракции

- полимеразная цепная реакция

ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора

ВНИМАНИЕ! Результаты ПЦР-исследования учитываются в комплексной диагностике заболевания 1 ) .

ПРИНЦИП МЕТОДА

ФОРМАТЫ И ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ

Набор реагентов выпускается в 1 формате.

Набор реагентов выпускается в 2 формах комплектации:

Форма 2 включает наборы реагентов оптом, расфасованные по отдельным реагентам, с маркировкой реагентов на их оптовой фасовке.

Форма комплектации 2 предназначена для производственных целей для последующей маркировки на языке заказчика и комплектации по наборам.

ВНИМАНИЕ! Форма комплектации 2 используется только в соответствии с регламентом, утвержденным ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора.

АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Комплект для экстракции РНК

Комплект для обратной транскрипции, амплификации и детекции

Аналитическая чувствительность 2 ) ,

Спинномозговая жидкость (СМЖ), концентраты образцов воды

вариант FEP/FRT-50 F

5х10 3

вариант FEP/FRT-50 F

1х10 4

Специфичность набора реагентов проверялась на следующих штаммах микроорганизмов: энтеровирусов человека (представителей разных генетических кластеров – Human echovirus 2, 6, 9, 11, 14, 15, 16, 17, 18, 30; Human coxsackievirus A4, A5, A6, A9, A16, B4, B5 , Human poliovirus 1, 2, 3 (Sabin1, Sabin2, Sabin3)); вирусов гриппа А (H23N2, H9N2, H8N4, H3N3, H5N6, H21N6, H22N5, H4N8, H2N1, H6N2, H20N7, H6N1), В, риновирусов, RS вирусов, аденовирусов человека – 3, 5, 7, 37, 40, 41 типов (клинические изоляты, специфичность подтверждена прямым секвенированием нуклеотидных последовательностей); штаммах микроорганизмов и образцах ДНК – ДНК человека, штаммах Acinetobacter baumanii ATCC ® 19606™, Bacteroides fragilis ATCC ® 25285™, Bordetella bronchiseptica ATCC ® 10580™, Bordetella bronchiseptica ATCC ® 4617™, Bordetella pertussis ATCC ® 9340™, Candida albicans ATCC ® 14053™, Candida guilliermondii ATCC ® 6260™, Candida krusei ATCC ® 14243™, Clostridium difficile ATCC ® 9689™, Clostridium septicum ATCC ® 12464™, Corynebacterium jeikeium ATCC ® 43734™, Corynebacterium xerosis ATCC ® 373™, Eggerthella lenta ( Eubacterium lentum ) ATCC ® 43055™, Enterobacter aerogenes ATCC ® 13048™, Enterobacter cloacae ATCC ® 13047™, Enterococcus faecalis ATCC ® 29212™, Enterococcus faecalis ( vancomycin resistant ) ATCC ® 51299™, Enterococcus faecium ATCC ® 35667™, Erysipelothrix rhusiopathiae ATCC ® 19414™, Escherichia coli ATCC ® 25922™, Escherichia coli ATCC ® 35218™, Fluoribacter ( Legionella ) dumoffii ATCC ® 33279™, Haemophilus infuenzae ATCC ® 33930™, Haemophilus influenzae ATCC ® 9006™, Haemophilus influenzae ATCC ® 10211™, Haemophilus parainfluenzae ATCC ® 7901™, Klebsiella oxytoca ATCC ® 49131™, Klebsiella pneumoniae ATCC ® 27736™, Legionella pneumophila ATCC ® 33152™, Listeria grayi ( murrayi ) ATCC ® 25401™, Listeria innocua ATCC ® 33090™, Listeria monocytogenes ATCC ® 7644™, Moraxella ( Branhamella ) catarrhalis ATCC ® 25238™, Moraxella ( Branhamella ) catarrhalis ATCC ® 8176™, Neisseria meningitidis ATCC ® 13102™, Neisseria meningitidis ATCC ® 13090™, Neisseria lactamica ATCC ® 23970™, Neisseria gonorrhoeae ATCC ® 19424™, Neisseria gonorrhoeae ATCC ® 49926™, Peptoniphilus ( Peptostreptococcus ) anaerobius ATCC ® 27337™, Proteus mirabilis ATCC ® 12453™, Proteus vulgaris ATCC ® 6380™, Propionibacterium acnes ATCC ® 11827™, Pseudomonas aeruginosa ATCC ® 15442™, Rhodococcus equi ATCC ® 6939™, Salmonella enterica subsp . enterica serovar Typhimurium ATCC ® 14028™, Serratia marcescens ATCC ® 14756™, Staphylococcus aureus ATCC ® 6538P™, Staphylococcus aureus (MRSA) ATCC ® 43300™, Staphylococcus aureus ATCC ® 29213™, Staphylococcus aureus ATCC ® 25923™, Staphylococcus aureus ATCC ® 33862™, Staphylococcus aureus (MRSA) ATCC ® 33591™, Staphylococcus aureus subsp . aureus ATCC ® 12600™, Staphylococcus epidermidis ATCC ® 12228™, Staphylococcus haemolyticus ATCC ® 29970™, Staphylococcus saprophyticus ATCC ® 49907™, Stenotrophomonas maltophilia ATCC ® 13637™, Streptococcus agalactiae ATCC ® 12386™, Streptococcus agalactiae ATCC ® 13813™, Streptococcus equisimilis ATCC ® 12388™, Streptococcus equi subsp . equi ATCC ® 9528™, Streptococcus bovis (Group D) ATCC ® 9809™, Streptococcus mutans ATCC ® 35668™, Streptococcus pneumoniae ATCC ® 49619™, Streptococcus pneumoniae ATCC ® 6303™, Streptococcus pneumoni ae ATCC ® 27336™, Streptococcus pneumoniae ATCC ® 6305™, Streptococcus pyogenes ATCC ® 19615™, Streptococcus salivarius ATCC ® 13419™, Streptococcus uberis ATCC ® 700407™, Trichophyton mentagrophytes ATCC ® 9533™, Vibrio parahaemolyticus ATCC ® 17802™, Vibrio vulnificus ATCC ® 27562™, Moraxella catarrhalis ATCC ® 25240™. При проведении тестирования данных панелей, а также образцов ДНК человека, неспецифических реакций выявлено не было.

ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Сравнительные характеристики набора реагентов:

Результативность применения метода сравнения 3 )

Выявление вирусов рода Enterovirus (Echovirus, Сoxsackievirus, Poliovirus), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) определяется генетический материал (РНК) вируса в образце биоматериала.

Энтеровирусы, энтеровирусная инфекция [полимеразная цепная реакция].

Синонимы английские

EV, RNA [polymerase chain reaction, PCR].

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить (по согласованию с врачом) прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.), и препаратов, влияющих на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.

Общая информация об исследовании

Enterovirus – это группа РНК-содержащих вирусов, характеризующихся нуклеокапсидом в форме икосаэдра и отсутствием оболочки. Они относятся к семейству Picornaviridae, в которое также входят возбудитель вирусного гепатита А и риновирус.

Род Enterovirus объединяет несколько десятков различных вирусов, являющихся возбудителями целого спектра заболеваний человека: полиомиелита (Poliovirus), миокардита и перикардита (Сoxsackievirus В), вирусной пузырчатки полости рта и конечностей, герпетической ангины, асептического менингита и энцефалита (Сoxsackievirus A, Echovirus), а также более редких болезней. Для всех вирусов рода Enterovirus характерен схожий патогенез: попадание возбудителя в желудочно-кишечный тракт (фекально-оральный путь передачи), репликация в эпителиальных клетках слизистой оболочки ЖКТ и гематогенное распространение с поражением различных органов и тканей. Учитывая эти особенности заражения, основными биологическими средами для выявления Enterovirus являются отделяемое носоглотки, кал и ликвор. Как правило, острая инфекция Enterovirus протекает бессимптомно или в доброкачественной форме, а клиническая картина заболевания развивается лишь спустя некоторое время после первичного заражения. Эту особенность следует учитывать при выборе вида биоматериала, направляемого на анализ.

Для выявления возбудителя при подозрении на Enterovirus-ассоциированную инфекцию применяют серологические тесты, выделение вируса в культуре клеток и молекулярную диагностику.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в ликворе) фрагменты генетического материала (РНК) возбудителя инфекции. Она характеризуется высокой чувствительностью и специфичностью, а также позволяет получить результат в более короткие сроки по сравнению с большинством других анализов, что делает ее незаменимым инструментом для своевременной диагностики Enterovirus-ассоциированных инфекций.

ПЦР является "золотым стандартом" исследования ликвора для диагностики Enterovirus-ассоциированного менингоэнцефалита. Чувствительность такого анализа составляет 95-97 %, специфичность – 97-100 %. Благодаря этим преимуществам ПЦР заменила другой прямой метод идентификации возбудителя – выделение вируса в культуре клеток эмбриона. При этом исследование ликвора, полученного в первые 2 дня развития симптоматики менингоэнцефалита, характеризуется меньшей чувствительностью. Следует отметить, что вероятность обнаружить вирус при анализе нестерильных биологических сред (отделяемого носоглотки, кала) меньше, что необходимо учитывать при отрицательном результате анализа у пациента с клиническими признаками Enterovirus-ассоциированной инфекции. Большая частота ложноотрицательных реакций связана с полной элиминацией вируса из клеток ЖКТ к моменту развития симптомов заболевания (период репликации вируса в эпителии глотки составляет от 2 дней до 2 недель, в эпителии кишки – до 3 месяцев). Также ниже и специфичность метода при исследовании нестерильных сред, что связано с возможным "здоровым носительством" Enterovirus, сопутствующим клинически выраженному заболеванию, но не являющимся ее причиной.

ПЦР основана на непосредственном выявлении РНК вируса и может быть применена для выявления Enterovirus на раннем этапе болезни, что отличает ее от серологических (непрямых) методов, требующих около 2-4 недель для оценки динамики уровня выявляемых специфических антител. Однако по этой же причине ПЦР не позволяет различить острую и хроническую энтеровирусную инфекцию.

Благодаря тому, что в ПЦР выявляется общий для всех Enterovirus фрагмент РНК, она позволяет определить наличие любого представителя этого рода. Современные серологические методы разработаны только для 11 из более чем 70 вирусов рода Enterovirus. Однако по этой же причине с помощью ПЦР нельзя различить вирусы рода Enterovirus между собой, что имеет определенное значение в дифференциальной диагностике Enterovirus 71 – и Сoxsackievirus type A 16 – ассоциированного поражения нервной системы.

Диагностиказаболеваний, вызванных вирусами рода Enterovirus, представляет определенные трудности и требует проведения дополнительных лабораторных, а также инструментальных исследований.

Для чего используется исследование?

Для диагностики Enterovirus-ассоциированных инфекций:

менингита;
герпетической ангины;
вирусной пузырчатки полости рта и конечностей;
миоперикардита;
полиомиелита.

Когда назначается исследование?

менингита (головная боль, раздражительность, лихорадка, фотофобия, тошнота и не приносящая облегчения рвота, ригидность затылочных мышц);
герпетической ангины (острое начало заболевания, лихорадка с температурой 39-40 ºС, головная боль, тошнота, рвота, болезненная шейная лимфаденопатия, везикулезная сыпь на слизистой оболочке миндалин, мягкого и твердого неба, боль при глотании);
вирусной пузырчатки полости рта и конечностей у детей (лихорадка, кашель, везикулезная сыпь на коже кистей, стоп и на слизистой оболочке рта);
миоперикардита (одышка, загрудинная боль, усиливающаяся на вдохе и ослабевающая при наклоне вперед, а также периферические отеки и нарушения ритма сердца);
полиомиелита (лихорадка, головная боль, тошнота, боль в животе, парез или паралич конечностей или группы мышц, нарушения глотания, пронации и др.).

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Enterovirus-ассоциированная инфекция;
носительство Enterovirus.

отсутствие Enterovirus в исследуемом биоматериале.

Что может влиять на результат?

Применение рибавирина и плеконарила может приводить к получению ложноотрицательного результата.
Применение противовирусного иммуноглобулина не влияет на результат исследования.
Анализ ликвора в первые 2 дня менингоэнцефалита, а также исследование отделяемого носоглотки и кала характеризуются большей частотой ложноотрицательных результатов.

Кто назначает исследование?

Инфекционист, невролог, педиатр, стоматолог, врач общей практики.

Литература

Sawyer MH. Enterovirus infections: diagnosis and treatment. Semin Pediatr Infect Dis. 2002 Jan;13(1):40-7. Review.
Rhoades RE, Tabor-Godwin JM, Tsueng G, Feuer R. Enterovirus infections of the central nervous system. Virology. 2011 Mar 15;411(2):288-305. Epub 2011 Jan 20.
Ooi MH, Wong SC, Lewthwaite P, Cardosa MJ, Solomon T. Clinical features, diagnosis, and management of enterovirus 71. Lancet Neurol. 2010 Nov;9(11):1097-105.
Smalling TW, Sefers SE, Li H, Tang YW. Molecular approaches to detecting herpes simplex virus and enteroviruses in the central nervous system. J Clin Microbiol. 2002 Jul;40(7):2317-22.
Hsiung GD, Wang JR. Enterovirus infections with special reference to enterovirus 71. J Microbiol Immunol Infect. 2000 Mar;33(1):1-8.

Стоимость услуги:

570 руб.* Заказать

Срок исполнения: 1 - 3 к.д. Заказать Указанный срок не включает день взятия биоматериала

Кал для исследования собирается в одноразовую стеклянную или пластиковую посуду (контейнер можно получить в регистратуре CMD), в объеме, равном 1/2 чайной ложки из средней части фекальной массы.

Нельзя собирать кал в памперсы, после клизмы, после введения ректальных свечей или приема медикаментов, влияющих на перестальтику кишечника, с примесями мочи или выделений из половых органов.

Доставка в лабораторию в день взятия материала.

Метод исследования: ПЦР

Данное исследование предназначено для выявления энтеровирусов человека (Human enterovirus) кластеров A, B, C и D; в том числе вирусов Коксаки A и B, но без дифференцировки по кластерам. Информация о наличии или отсутствии именно вирусов Коксаки не может быть отражена в результате.

Энтеровирусная инфекция широко распространена во всех регионах мира.

Вирус Коксаки относится к энтеровирусным инфекциям. Энтеровирусы хорошо переносят низкие температуры, сохраняются в воде. Источником инфекции является только человек — больной или бессимптомный носитель. Передача инфекции происходит через пищевые продукты, воду, контактно-бытовым, воздушно-капельным путем. Инкубационный период варьирует от 2 до 35 дней, в среднем – до 7 дней. Наиболее интенсивное выделение возбудителя происходит в первые дни болезни. Вирус выделяется с фекалиями в течение 3 - 4 недель (не более 5 недель), а у иммунодефицитных лиц может выделяться в течение нескольких лет.

У человека энтеровирусная инфекция может протекать бессимптомно или сопровождаться различными клиническими проявлениями: от легкого недомогания или диарейного синдрома до развития тяжелых заболеваний (серозный менингит, паралич, миокардит, сепсис новорожденных). Наиболее подвержены заболеванию дети младшего возраста.

ПОКАЗАНИЯ К ИССЛЕДОВАНИЮ:

Обследование детей в случае возникновение групповой заболеваемости в детском организованном коллективе при наличии диарейного, респираторного синдрома

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ:

Референсные значения (вариант нормы):

Параметр	Референсные значения
РНК Enterovirus	Не обнаружено

Интерпретация результата проводится с учетом факта высокой частоты бессимптомного носительства энтеровируса в популяции.

Обнаружение РНК энтеровируса может служить подтверждением инфекции во время вспышки при наличии у пациента клинической картины.

" ["serv_cost"]=> string(3) "570" ["cito_price"]=> NULL ["parent"]=> string(2) "25" [10]=> string(1) "1" ["limit"]=> NULL ["bmats"]=> array(1) < [0]=>array(3) < ["cito"]=>string(1) "N" ["own_bmat"]=> string(2) "12" ["name"]=> string(6) "Кал" > > >

Биоматериал и доступные способы взятия:

Тип	В офисе
Кал

Подготовка к исследованию:

Доставка в лабораторию в день взятия материала.

Метод исследования: ПЦР

Энтеровирусная инфекция широко распространена во всех регионах мира.

ПОКАЗАНИЯ К ИССЛЕДОВАНИЮ:

Обследование детей в случае возникновение групповой заболеваемости в детском организованном коллективе при наличии диарейного, респираторного синдрома

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ:

Референсные значения (вариант нормы):

Параметр	Референсные значения
РНК Enterovirus	Не обнаружено

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

Закон закупки 44-ФЗ

Закон, регулирующий правовые отношения в области государственных закупок.

Национальный режим при осуществлении закупок по 44-ФЗ и 223-ФЗ: запреты, ограничения, условия допуска
Независимый регистратор по 44-ФЗ: обзор, функции, цели, плюсы и минусы использования
Чем обычный договор отличается от контракта по 44-ФЗ
Неустойка по 44-ФЗ: разбираемся с особенностями начисления
Вопрос: Я продаю компьютеры. Могу ли я участвовать в закупках по 44фз, если у меня нет документов о том, что эта техника - российского происхождения?
Что такое госзакупки: полное определение понятия, виды закупок по 44-ФЗ
Как проходят закупки у СМП по 223-ФЗ и 44-ФЗ
Переторжка по 44-ФЗ и 223-ФЗ: особенности, процедура проведения
Что не так с 44-ФЗ, или Почему злится Артемий Лебедев
Сравниваем 44-ФЗ и 223-ФЗ: таблица для чайников
Идентификационный код закупки (ИКЗ) по 44-ФЗ: определение, формирование, расшифровка и поиск закупок по ИКЗ
В каких случаях указывать и подтверждать страну происхождения товара по 44-ФЗ?
Банковское сопровождение контракта по 44-ФЗ: виды, случаи и порядок осуществления
Предметы роскоши по 44-ФЗ: как их опознать
Расширили список запрещенных иностранных товаров по 44 ФЗ
Исключения из правил: что нельзя закупить по 44-ФЗ или 223-ФЗ
Существенные условия контракта по 44-ФЗ: что к ним относится и можно ли их изменять?
Что изменилось в закупках в конце мая: обзор Постановлений Правительства
Как оплатить неустойку по 44-ФЗ
Оплата по контракту по 44-ФЗ: как получить вовремя
Способы закупок по 44-ФЗ и 223-ФЗ

Заказчик

ИНН: 4025002173 / КПП: 402501001

Контракт исполнен, а оплаты нет - знакомая ситуация?
Ошибки заказчика и обжалование действий заказчика
Как заказчики злоупотребляли своими правами
Любовь заказчика к ПДФ (pdf)
"Зачем потеть и страдать, затачивая техзадание под своего подрядчика?" - подумал как-то заказчик и обратился к компьютерщикам.
Заказчик не платит
Заказчик разместил аукцион на ремонтные работы. Сроки выполнения работ - нереальные. Стоит ли участвовать?
Об исчезновении строительства детского сада.
Кто такие государственные заказчики
Как отличить убытки от неустойки
Топ-5 ловушек заказчика в техзадании
Права поставщика, о которых молчат заказчики
Общение с заказчиками
Положение о закупках по 223-ФЗ: содержание, структура, примеры
Может ли поставщик увидеть заявки конкурентов?
ФАС в шоке: новое нарушение госзаказчиков
Топ-5 ловушек заказчика в документации
Может ли заказчик поменять техзадание после публикации закупки?

Информационная лента

При прокрутке вниз Вы можете получить очень полезную информацию, подобранную специально для Вас нашей программой. А также самые интересные и актуальные статьи о тендерах и закупках, которые мы подобрали для Вас на просторах интернета.

Портал отображает информацию о закупках, публикуемых в сети интернет
и находящихся в открытом доступе, и предназначен для юрлиц и индивидуальных предпринимателей,
являющихся участниками размещения государственного и коммерческого заказа. Сайт использует Cookie, которые нужны для авторизации пользователя.
На сайте стоят счетчики Яндекс.Метрика, Google Analytics и LiveInternet,
которые нужны для статистики посещения ресурса.

по применению набора реагентов

для выявления РНК энтеровирусов (Enterovirus)

в объектах окружающей среды и клиническом материале

методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с

электрофоретической детекцией продуктов амплификации в

ВАРИАНТЫ И ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ

ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ

ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА. 6

ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ ДНК/РНК. 6 СОСТАВ

ЭКСТРАКЦИЯ РНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ

ПРОВЕДЕНИЕ РЕАКЦИИ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ

А. Подготовка пробирок для проведения ПЦР

Б. Проведение амплификации

СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ

СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ

Форма 1: REF V16-50 / VER 19.04.12 / стр. 2 из 13

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

В настоящей инструкции применяются следующие сокращения и обозначения:

ВКО - внутренний контрольный образец кДНК - комплементарная ДНК ПЦР - полимеразная цепная реакция ОКО - отрицательный контрольный образец ОТ - обратная транскрипция ОТ-ПЦР - полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией

ВНИМАНИЕ! Результаты ПЦР-исследования учитываются в комплексной диагностике заболевания.

ПРИНЦИП МЕТОДА

Выявление РНК энтеровирусов (Enterovirus) методом полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) с электрофоретической детекцией включает в себя следующие этапы: экстракция (выделение) РНК из образцов клинического материала, получение кДНК в ходе реакции обратной транскрипции, ПЦР-амплификация участка кДНК данного микроорганизма и электрофоретическая детекция. Экстракция РНК из клинического материала проводится в присутствии внутреннего контрольного образца (ВКО который позволяет Enterovirus-rec), контролировать выполнение процедуры исследования для каждого образца. Затем с полученными пробами РНК проводится реакция обратной транскрипции, в ходе которой получают кДНК. Пробы кДНК используются для амплификации участка кДНК Enterovirus при помощи специфичных к этому участку ДНК праймеров и фермента Taq-полимеразы. Специфический продукт амплификации имеет определенный размер и детектируется методом электрофореза в агарозном геле.

Форма 1: REF V16-50 / VER 19.04.12 / стр. 3 из 13

ВАРИАНТЫ И ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ

Форма комплектации 1 предназначена для проведения амплификации кДНК Enterovirus. Для проведения полного ПЦР-исследования необходимо использовать комплекты реагентов для экстракции (выделения) РНК, комплекты реагентов для проведения реакции обратной транскрипции и комплекты реагентов для электрофоретической детекции продуктов амплификации, рекомендованные ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора.

АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Аналитическая специфичность Специфичность набора реагентов проверялась на следующих штаммах микроорганизмов: штаммы энтеровирусов (Coxsakie B1, B2, B3, B4, B5, B6; Polio (Sabin) I, II, III); вирусов гриппа А (H13N2, H9N2, H8N4, H2N3, H4N6, H11N6, H12N5, H3N8, H1N1, H6N2, H10N7, H5N1), В, риновирусов, RS вирусов, аденовирусов человека – 3, 5, 7, 37, 40 типов; штаммах N meningitidis, St pneumoniae, H influenzae, Clebsiella K 65 SW4, Listeria monocitogenes УСХЧ 19, Listeria monocitogenes УСХЧ 52, Proteus vulgaris 115/98, Pseudomonas aeruginosa ДН c1, Staphilococcus aureus 653, Staphilococcus aureus 29112, Morganella Morganii 619 c 01, Enterobacter faecalis 356.

При проведении тестирования данных панелей, а также образцов ДНК человека неспецифических реакций выявлено не было.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

При работе всегда следует выполнять следующие требования:

ВНИМАНИЕ! При удалении отходов после амплификации (пробирок, содержащих продукты ПЦР) недопустимо открывание пробирок и разбрызгивание содержимого, поскольку это может привести к контаминации продуктами ПЦР лабораторной зоны, оборудования и реагентов.

Применять набор строго по назначению, согласно данной инструкции.

Допускать к работе с набором только специально обученный персонал.

Не использовать набор по истечении срока годности.

Избегать контакта с кожей, глазами и слизистой оболочкой. При контакте немедленно промыть пораженное место водой и обратиться за медицинской помощью.

Спецификация по безопасности материалов (MSDS – material safety data sheet) доступна по запросу.

ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ

2. Дополнительные материалы и оборудование для экстракции РНК – согласно инструкции к комплекту реагентов для выделения РНК.

4. Дополнительные материалы и оборудование для проведения реакции обратной Форма 1: REF V16-50 / VER 19.04.12 / стр. 5 из 13 транскрипции – согласно инструкции к комплекту реагентов для ОТ.

6. Дополнительные материалы и оборудование для электрофоретической детекции

– согласно инструкции к комплекту реагентов для электрофоретической детекции.

7. Бокс абактериальной воздушной среды (ПЦР-бокс).

10.Автоматические дозаторы переменного объема (от 5 до 20 мкл, от 20 до 200 мкл и от 50 до 1000 мкл).

11.Одноразовые наконечники с фильтром до 100 мкл в штативах.

12.Штативы для микропробирок объемом 0,2 мл или 0,5 мл (в соответствии с используемыми комплектами реагентов).

13.Холодильник от 2 до 8 °С с морозильной камерой от минус 24 до минус 16 °С.

14.Отдельный халат, шапочки, обувь и одноразовые перчатки по МУ 1.3.1888-04.

15.Емкость для сброса наконечников.

ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА

ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ ДНК/РНК

Спинномозговая жидкость, отделяемое везикул, мазки из ротоглотки не требуют специальной подготовки для экстракции РНК.

ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ

ОТ-ПЦР-исследование состоит из следующих этапов:

Экстракция (выделение) РНК из исследуемых образцов.

Проведение реакции обратной транскрипции.

Электрофоретическая детекция продуктов амплификации и интерпретация результатов.

ЭКСТРАКЦИЯ РНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ

ПРОВЕДЕНИЕ РЕАКЦИИ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ

ПРОВЕДЕНИЕ АМПЛИФИКАЦИИ

Общий объем реакционной смеси – 25 мкл, включая объем пробы ДНК – 10 мкл.

А. Подготовка пробирок для проведения ПЦР

1. Пробирку с воском для ПЦР прогреть в термостате при температуре 95 °С до полного расплавления.

2. Раскапать на дно микропробирок для амплификации по 5 мкл ПЦР-смеси-1 Enterovirus. Сверху добавить по капле (примерно 10-15 мкл) расплавленного воска так, чтобы он полностью накрыл жидкость, закрыть крышки пробирок, подписать на каждой сокращенное название инфекции. Пробирки с разлитой ПЦР-смесью-1 Enterovirus и воском можно хранить при температуре от 2 до 8 °С.

3. Отобрать необходимое количество пробирок с ПЦР-смесью-1 Enterovirus для амплификации кДНК исследуемых и контрольных проб.

4. В пробирки с ПЦР-смесью-1 Enterovirus на поверхность застывшего воска внести по 10 мкл ПЦР-смеси-2 blue, при этом она не должна проваливаться под воск и смешиваться с ПЦР-смесью-1 Enterovirus.

5. Сверху добавить каплю минерального масла для ПЦР (при использовании амплификатора без термостатируемой крышки).

6. В подготовленные пробирки внести по 10 мкл кДНК-проб, полученных в реакции обратной транскрипции РНК.

7. Поставить контрольные реакции:

а) отрицательный контроль (К-) –внести в пробирку 10 мкл ДНК-буфера.

б) положительный контроль (К+) – внести в пробирку 10 мкл ПКО кДНК Enterovirus.

Рекомендуется перед постановкой в амплификатор осадить капли со стенок пробирок кратким центрифугированием на вортексе (1-3 с).

Б. Проведение амплификации

1. Запустить на амплификаторе соответствующую программу термоциклирования (см. табл. 1).

ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКАЯ ДЕТЕКЦИЯ

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ

Интерпретация результатов ПЦР-анализа проводится по наличию или отсутствию на электрофореграмме специфических полос амплифицированной кДНК.

Форма 1: REF V16-50 / VER 19.04.12 / стр. 10 из 13

СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ

Срок годности. 9 мес. Набор реагентов с истекшим сроком годности применению не подлежит.

Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до 8 °С не более 5 сут.

Хранение. Набор реагентов хранить при температуре от 2 до 8 °С.

Условия отпуска. Для лечебно-профилактических и санитарно-профилактических учреждений.

направлять в адрес ФГУН Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А.

Тарасевича Роспотребнадзора (119002 г. Москва, пер. Сивцев Вражек, д. 41), тел./факс (499) 241-39-22, а также на предприятие-изготовитель ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора (111123 г. Москва, ул. Новогиреевская, д. 3а), тел. (495) 974-96факс (495) 305-54-23 e-mail: obtk@pcr.ru) и в отдел по работе с рекламациями и организации обучения тел.

(495) 925-05-54, факс (495) 916-18-18, e-mail:

Читайте также: