Набор антигенов и сывороток для диагностики гриппа лошадей
2. БОЛЕЗНИ ЛОШАДЕЙ
2.2. НАСТАВЛЕНИЕ ПО ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА АНТИГЕНОВ И СЫВОРОТОК ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ГРИППА ЛОШАДЕЙ
УТВЕРЖДЕНО 27 февраля 2004 г., б/н
1. Общие положения
1. Общие положения
1.1. Набор антигенов и сывороток предназначен для диагностики гриппа лошадей путем идентификации выделенных штаммов вируса и исследования сывороток крови лошадей, больных и переболевших этой болезнью.
1.2. Диагностический набор содержит:
- сухие инактивированные антигены 1 (H N ) и 2 (H N ) серотипов вируса гриппа лошадей - по 2 флакона (ампулы) каждого вида;
- сухие гипериммунные сыворотки к 1 (H N ) и 2 (H N ) серотипам вируса гриппа лошадей - по 2 флакона (ампулы) каждого вида;
- сыворотка нормальная - 1 флакон (ампула).
1.3. Специфические антигены представляют собой сухую аморфную массу беловато-серого цвета; специфические сыворотки - розовато-кремового цвета.
1.4. Антигены и сыворотки расфасовывают по 1,0 см во флаконы (ампулы). Флаконы (ампулы) укладывают в картонные или полистироловые коробки, обеспечивающие неподвижность и целостность флаконов (ампул).
Каждая коробка представляет собой набор антигенов и сывороток для диагностики гриппа лошадей. В каждую коробку вкладывают наставление по применению.
1.5. На флаконы (ампулы) наклеивают или несмываемой краской по стеклу наносят этикетки с указанием:
- для антигенов - названия антигена, объема, титра в РГА, даты изготовления и номера серии;
- для сывороток - наименования гипериммунной сыворотки к подтипу вируса, на который она получена, титра в РТГА, объема фасовки, даты изготовления и номера серии.
На коробках с набором указывают наименование предприятия-изготовителя и его товарный знак; полное название препарата; количество флаконов (ампул) каждого компонента, входящего в препарат; название антигенов, сывороток и их серотипов; дату изготовления; срок годности; номер серии; номер контроля; условия хранения и обозначение ТУ.
1.6. Набор хранят в сухом темном помещении при температуре от 2 до 8°С. Допускается хранение при любой минусовой температуре.
1.7. Срок годности набора - 3 года с даты изготовления.
2. Принцип метода
Сущность метода основана на способности сывороток крови лошадей, содержащих специфические антитела, тормозить гемагглютинирующую активность антигена (вируса) гриппа лошадей соответствующего серотипа.
3. Порядок применения набора
3.1. Антигены в ампулах (флаконах) разводят физиологическим раствором (рН 7,2. 7,4) до первоначального объема, т.е. добавляют к содержимому по 1,0 см физиологического раствора. Сухая масса должна полностью раствориться при встряхивании в течение 3. 5 мин и представлять собой гомогенную взвесь желтоватого цвета.
3.2. Сыворотки в ампулах (флаконах) разводят дистиллированной водой в соотношении 1:10. Сухая сыворотка должна растворяться при встряхивании в течение 3. 5 мин и представлять собой прозрачную жидкость розовато-кремового цвета. Разведенную сыворотку прогревают на водяной бане при температуре 56°С в течение 5 мин. Надосадочную часть сыворотки собирают для постановки РТГА. Разведенные антигены и сыворотки хранят при температуре от 2 до 8°С не более 24 ч.
3.3. Приготовление 1%-ной суспензии эритроцитов петуха
Для получения 1%-ной суспензии эритроцитов используют петухов старше 6 мес.
Взятие крови у петухов производят из подкрыльцовой вены. Набирают необходимое количество крови в стеклянную пробирку с 2. 3%-ным раствором лимоннокислого натрия на физиологическом растворе (рН от 7,2 до 7,4) в соотношении 2:1.
Полученную кровь трижды отмывают физиологическим раствором, осаждая эритроциты на центрифуге в течение 10 мин при 1500 об/мин.
Из осадка эритроцитов готовят 1%-ную суспензию, которую хранят при температуре от 2 до 8°С не более 4 сут.
3.4. Идентификация выделенного из патологического материала больных лошадей вируса в реакции торможения гемагглютинации (РТГА).
3.4.1. С целью выделения вируса используют носовые смывы от больных лошадей в первые 2. 3 дня от начала заболевания. Для идентификации вируса в РТГА используют вируссодержащий материал с титром гемагглютинации не ниже 1:8.
3.4.2. Постановка реакции гемагглютинации
Грипп (инфлюэнца) лошадей, Grippus (Influenzae) equorum- высококонтагиозная, остро протекающая болезнь, характеризующаяся поражением респираторных органов, высокой температурой, катаром верхних дыхательных путей, конъюнктивитом, серозным или гнилостным истечением из носа и глубоким болезненным кашлем.
Историческая справка. Болезнь под различными названиями известна с древних времен (4-5 в.н.э.). Заболевание чаще называли инфлюэнцией , что отражает аналогию с соответствующей болезнью человека.
В 18 и 19 вв. грипп лошадей протекал в виде панзоотии в Европе и Америке. Широкое распространение имела болезнь в 1914—1918 и 1941—1945 гг.
Экономический ущерб. Болезнь причиняет значительный ущерб коневодческим хозяйствам. Массовый охват лошадей гриппом нарушает нормальную деятельность, особенно ипподромов и конских заводов. Следует учитывать и то обстоятельство, что часть лошадей переболевает с осложнениями, из-за чего они надолго выходят из строя. Больших финансовых затрат требуют также карантинные мероприятия.
Возбудитель болезни относится к семейству ортомиксовирусов рода А. Впервые его выделили Совинова и Тумова в Чехословакии (1956) во время крупной эпизоотии. В 1963г. в США также во время крупной респираторной вспышки от лошадей был выделен вирус, отличающийся от чехословацкого по антигенной структуре. Таким образом, признано два антигенных сероварианта вируса гриппа лошадей Лошадь-1 и Лошадь-2. В последующие годы в разных странах мира во время респираторных заболеваний от лошадей выделены различные штаммы вируса, которые были идентичны чехословацкому или американскому эталонным штаммам или имели антигенные отличия.
Кроме истинных возбудителей гриппа, от лошадей изолируют штаммы, которые вызывают респираторные заболевания разной степени тяжести, но по характеристике, соответствуют вирусу гриппа человека А. По своей структуре, штаммы вируса гриппа лошадей имеют общую характеристику с вирусами гриппа млекопитающих и птиц. Отличаются они по гемагглютинину. Вирус гриппа лошадей обладает свойствами агглютинировать эритроциты разных видов млекопитающих и птиц, а также антигенными свойствами, вызывая у лошадей и других животных образование антител. В последние годы все чаще появляются сообщения об антигенной вариабельности вируса, больше присущей возбудителю второго сероварианта.
Эпизоотологические данные. Заболевание распространено во многих странах мира. Гриппом болеют лошади независимо от возраста, пола и породы. Жеребята-сосуны переболевают гриппом тяжелее, чем взрослые животные. Болеют гриппом также ослы и мулы. Источником возбудителя инфекции являются больные и переболевшие лошади, выделяющие заразное начало во внешнюю среду вместе с выдыхаемым воздухом при кашле. А также с истечениями из носовой полости. Факторами передачи возбудителя инфекции могут быть корма, загрязненные выделениями больных, навоз, подстилка и различные предметы, с которыми соприкасались больные животные. Инфекционный агент может переносится и человеком.
Болезнь может возникнуть в любое время года, однако предрасполагающими факторами являются резкое изменение погоды, сырость, похолодание и пр. Болезнь всегда проявляется в виде эпизоотий, а иногда и панзоотий, охватывая ряд государств на большой территории. Быстрота распространения исключительно высокая. Ухудшение условий содержания отягощает индивидуальное течение болезни. Следует отметить, что на ипподромах и конных заводах грипп лошадей встречается периодически с интервалом 2-4 года. При этом охват поголовья болезнью бывает разным (от 30 до 100%), что объясняется образованием иммунитета у переболевших ранее лошадей.
Патогенез. Вирус гриппа попадает в организм лошадей через верхние дыхательные пути и проникает в клетки цилиндрического эпителия. Размножение вируса происходит в тканях верхних дыхательных путей, конъюнктиве, а иногда и в легочной ткани. Из пораженных тканей вирус проникает в кровь, поэтому она бывает заразительной, в первые дни болезни, однако размножение вируса в крови, как и в других паренхиматозных органах, не доказано.
Наличие вируса в клетках эпителия дыхательных путей вызывает нарушение обмена веществ в тканях слизистых оболочек, что сопровождается явлениями некроза, отторжением целых пластов эпителия. Вирус гриппа обладает токсическими свойствами. Вирус, действуя на нервные рецепторы, вызывает угнетение центральной нервной системы, что приводит к депрессии животного, лейкопении, уменьшению фагоцитарной активности лейкоцитов, лихорадке.
В свою очередь ослабление защитных свойств организма, наличие обильного экссудата на слизистых дыхательных путей вызывает повышенную активность условнопатогенных микроорганизмов: стрепто- и диплококков, пастерелл и других, которые вызывают осложнения в верхних дыхательных путях и в легких (бронхопневмония). Это наблюдается у слабовирулентных животных.
В ответ на внедрение вируса гриппа в организм животного происходит его иммунобиологическая перестройка, заключающаяся в том, что в организме больного животного против вируса появляются антитела, образуется интерферон, а в ответ на действие микроорганизмов увеличивается количество лейкоцитов, фагоцитоз приобретает завершенный характер. Все это в конечном итоге ведет к выздоровлению животного.
Клинические признаки. Инкубационный период -1-3 дня. Заболевание начинается повышением температуры тела до 39-41,5°. Обычно лихорадка постоянного типа. Она отмечается у 50% больных 1-2 дня, у 30%-2-3дня и у небольшого количества лошадей -5-6 дней. У отдельных лошадей отмечаем рецидивы лихорадки, интервалы между которыми чаще всего 3-5 дней. Остальные клинические признаки состоят в следующем.
При легком течении болезни слизистая носа и глаз слегка гиперемирована. У лошадей наблюдается сухой кашель и незначительная болезненность при пальпации в области гортани. Аппетит у больных не нарушен, угнетения почти нет. Болезнь длится 6-7 дней.
В начальной стадии болезни у больных лошадей наблюдается лимфоцитоз (75%), эозинофилия (14%), нейтрофилия (80%).
При более выраженном течении болезни у лошадей появляется конъюнктивит, отечность век, светобоязнь, из носовых отверстий выделяется серозное, а затем серозно-гнойное истечение. Кашель иногда сухой и отрывистый, а иногда глуховатый и затяжный, наблюдается у многих лошадей; отмечается небольшое увеличение подчелюстных лимфатических узлов. У некоторых больных ослаблена перистальтика кишечника, кал выделяется сухой, покрыт слизью. В отдельных случаях наблюдается кратковременный понос. Бывают отеки подкожной клетчатки на груди, нижней стенке живота и на отдельных конечностях. Но и в этих случаях длительность болезни не превышает 8-12 дней.
Если у лошадей возникает рецидивирующая лихорадка, это свидетельствует о присоединении к основной болезни вторичной инфекции, вызванной обычно стрептококками. При этом у больных лошадей наблюдаем более выраженное поражение дыхательных путей, осложнения типа бронхитов и микробронхитов. У больных ухудшается аппетит, учащаются дыхание и пульс, возникают кашель, одышка, иногда явления эмфиземы.
Из других осложнений, отягощающих течение гриппа, следует отметить иногда наблюдающееся поражение глаз, когда, наряду с гнойным конъюнктивитом, происходит помутнение роговицы, развитие ирита с отложением в передней камере глаз желтого фибринозного экссудата. В отдельных случаях болезнь осложняется острым нефритом, воспалением мочевого пузыря и мочеиспускательного канала. У таких больных лошадей мочеиспускание затруднено, оно происходит более часто и сопровождается болезненностью. В моче обнаруживается белок.
У отдельных больных отмечается серозная инфильтрация и воспаление сухожилий и сухожильных влагалищ, что приводит к затруднению при движении и хромоте. В большинстве случаев эти явления довольно быстро проходят, и лишь у некоторых лошадей тендовагиниты становятся хроническими и, кроме того, наблюдаются тяжелые воспаления суставов. В редких случаях бывают аборты.
Самое частое и серьезное осложнение при гриппе — бронхопневмония, при которой состояние животного становится тяжелым. У больной лошади пульс 70, дыхание до 30-35 в минуту; при аускультации грудной клетки отмечаются хрипы, при перкуссии – очаги притупления. Глухой и затяжной кашель на фоне общего угнетения и отсутствия аппетита дополняет картину болезни. Бронхопневмония у лошади продолжается до нескольких недель; иногда она принимает заразный характер и распространяется в хозяйстве.
Течение гриппа зависит в значительной степени от условий содержания, кормления и эксплуатации лошадей. Различные осложнения у больных возникают в тех случаях, когда отмеченные выше условия являются неудовлетворительными и, особенно, когда продолжают работать на больных лошадях.
Патологоанатомические изменения наиболее ярко выражены в респираторных органах. Смерть при гриппе наступает только в результате тяжелых осложнений. Поэтому изменения при вскрытии не могут считаться специфическими для гриппа. Если лошадь пала в результате бронхопневмонии, в легких обнаруживают пневмонические фокусы различной величины, розовато-серого и серого цвета, уплотненные и приподнятые над поверхностью легкого. В просвете бронхов обильные слизисто-гнойные массы экссудата. Бронхиальные лимфатические узлы отечны, геморрагичны.
Диагноз на грипп лошадей устанавливают на основании эпизоотологических данных, клинических признаков болезни и результатов лабораторных (вирусологических) исследований. Вирус выделяется первые 3 дня заболевания. Во время лихорадки ветспециалисты берут из носа смывы, которыми, после соответствующей обработки, заражают 9-11-дневные ЭК. Выделенный вирус типируют при помощи специфических сывороток. Ретроспективную диагностику проводят с парными сыворотками крови лошадей, взятыми с интервалом 10-14 дней. Увеличение титра антигемагглютининов в 2-4 раза свидетельствует о циркуляции вируса в организме лошади. Для диагностики гриппа лошадей биологическая промышленность выпускает диагностический набор антигенов и специфических сывороток.
Дифференциальный диагноз. Грипп лошадей необходимо дифференцировать от ринопневмонии, вирусного артериита, аденовирусной инфекции и респираторных заболеваний не инфекционного происхождения.
Ринопневмония (вирусный аборт) — характеризуется рождением нежизнеспособных жеребят и поражением верхних дыхательных путей у жеребят в возрасте от трех недель до трех месяцев. У молодых кобыл-аборты.
Вирусный артериит сопровождается конъюнктивитами, слезотечением, отечностью конечностей, мышечной слабостью, поносом, резко выраженным угнетением, абортами (50-80%). Для окончательного диагноза выделенный вирус типируют с позитивными сыворотками в серологических реакциях.
Лечение. Больных лошадей освобождают от работы, улучшают условия содержания, дают мягкий, но питательный корм (траву, сено, отруби, корнеплоды), вволю поят водой. При поражении носовой полости ее орошают растворами фурациллина (1:5000). Для дезинфекции воздуха и ингаляции в конюшнях рекомендуется прикреплять к решеткам ватные тампоны, смоченные скипидаром. В качестве отхаркивающих средств дают больным хлористый аммоний-10 г или порошок следующего состава :аммоний хлористый и сода двууглекислая в равных частях с добавлением четырех частей лакричного корня. Можно также больным лошадям давать порошок, состоящий из смеси терпингидрата -3 г и соды двууглекислой -10 г.
Для лечения больных лошадей с бронхитами или бронхопневмонией применяют антибиотики, в том числе и современные цефалоспоринового ряда в общепринятых дозах. С целью профилактики и лечения, особенно в затянувшихся случаях болезни, рекомендована аутогемотерапия (100-150 мл крови подкожно).
Мероприятия по предупреждению и ликвидации гриппа лошадей.
Ввод в благополучные хозяйства больных и подозрительных по заболеванию гриппом лошадей строго запрещают. Всех вновь поступающих лошадей карантинируют в течение 30 дней. В этот период их ежедневно подвергают клиническому осмотру.
С целью профилактики инфекции проводят иммунизацию лошадей инактивированной поливалентной вакциной против гриппа. При этом вакцинации подлежат:
- лошади, принадлежащие конным заводам, спортивным обществам и циркам;
- спортивные и племенные лошади, направляемые за пределы хозяйств;
- лошади любых хозяйств, при угрозе возникновения гриппа.
Поливалентную инактивированную вакцину вводят внутримышечно, двукратно через 2-4 недели с ревакцинацией через 6 месяцев, а затем ежегодно. Длительность иммунитета до 1 года.
При возникновении у лошадей респираторного заболевания всех больных животных и животных, находящихся с ними в одном помещении, изолируют от остального конепоголовья хозяйства и принимают меры для установления диагноза.
- запрещается ввод в хозяйство и вывод из него лошадей, а также перегруппировку их внутри хозяйства, вывоз фуража и сбруи.
- Лошадей делят на три группы: больных, подозрительных по заболеванию и подозреваемых в заражении. Лошадей первых двух групп освобождают от работы и изолируют от остального конепоголовья. За ними закрепляют отдельный обслуживающий персонал и отдельных ветеринарных специалистов.Больных животных подвергают симптоматическому лечению (применяют сердечные средства, антибиотики, сульфаниламиды). В дневное время в теплую сухую погоду их содержат на открытом воздухе (на изолированном пастбище).
- Помещения, где содержатся больные и подозрительные по заболеванию животные, сбрую, предметы ухода, подстилку обеззараживают в соответствии с действующей Инструкцией по ветеринарной дезинфекции, дезинвазии, дезинсекции и дератизации.С трупов лошадей, павших от гриппа, кожу снимают и обеззараживают в течение 12 ч в слабом растворе известкового молока (1 л свежегашеной извести на 20 л воды). Трупы утилизируют.
- Клинически здоровых лошадей хозяйства (подозреваемых в заражении гриппом) вакцинируют против этой болезни.
Выздоровевших животных в течение 15 дней содержат отдельно и втягивают в работу постепенно, не ранее чем через 7-10 дней после выздоровления. Больным через три дня после нормализации температуры тела организуют ежедневную проводку; при хорошей погоде их содержат на открытом воздухе. Для рысистых лошадей допускается езда шагом в качалках.
Ограничения с неблагополучного хозяйства снимают через 15 дней после последнего случая выздоровления больных лошадей и проведения заключительных мероприятий.
Лекарственная форма
рег. №: ПВР-1-4.7/02081 от 03.03.08Форма выпуска, состав и упаковка
По внешнему виду диагностические компоненты наборов представляют собой сухую
гомогенную массу беловато- или розовато-желтого цвета.
— антиген коронавирусный по 1 мл - 5 амп. (фл.);
— сыворотка специфическая антигемагглютинирующая по 1 мл - 1 амп. (фл.);
— сыворотка отрицательная (контрольная) по 1 мл - 1 амп. (фл.).
Расфасован в ампулы (флаконы), упакованные в коробки.
На ампулах (флаконах) должны быть этикетки с указанием краткого наименования компонента, объема препарата в ампуле (флаконе), номера серии, даты изготовления (мес, год), активности компонента (титра).
На каждой коробке с набором должна быть этикетка, на которой указано: наименование организации-производителя, адрес и телефон, полное наименование набора, перечень компонентов, входящих в набор, количество ампул (флаконов) каждого компонента, объем компонента в каждой ампуле (флаконе), номер серии, номер контроля, дата изготовления набора (месяц, год), срок годности, условия хранения и обозначение настоящего СТО.
Свидетельство о регистрации № ПВР-1-4.7/02081 от 03.03.08
Фармакологические (биологические) свойства и эффекты
Набор для диагностики коронавирусного энтерита крупного рогатого скота методом гемагглютинации применяется для обнаружения коронавирусного антигена и антикоронавирусных антител у крупного рогатого скота.
Антиген определяют в пробах фекалий больных, тонкого и толстого отделов кишечника павших с признаками диареи телят.
Обнаружение антител проводят в сыворотках крови коров и телят, молозиве и молоке лактирующих коров.
Принцип метода заключается в способности антигена коронавируса агглютинировать эритроциты белых мышей. Специфическая сыворотка связывает антиген коронавируса, лишая его способности к агглютинации.
Показания к применению препарата НАБОР ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ КОРОНАВИРУСНОГО ЭНТЕРИТА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА МЕТОДОМ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ
Порядок применения
Для проведения реакций необходимы следующие материалы:
фосфатно-буферный солевой раствор (ФБСР), который готовят по следующей прописи:
раствор А - NaH 2 PO 4 ×12Н 2 О - 53.72 г на 1 л Н 2 О
раствор Б - КН 2 РО 4 - 20.42 г на 1 л Н 2 О
раствор В - NaCl - 8.59 г на 1 л Н 2 О
Для приготовления ФБСР с рН 7.2-7.4 смешивают 430 см 3 раствора А, 119 см 3 раствора Б и 500 см 3 раствора В.
Раствор Альсевера используют для консервирования крови и готовят по следующей прописи:
натрий лимоннокислый - 9.6 г
натрий хлористый - 5.1 г
вода дистиллированная до 1200 см 3 .
Для приготовления растворов используют реактивы по чистоте не ниже "чистые для анализа" (чда).
Раствор Альсевера разливают по флаконам и стерилизуют в водяной бане по 30-40 мин три дня подряд. К одной части крови добавляют 10 частей консерванта. Консервированная кровь пригодна для получения эритроцитов в течение 10-12 сут со дня ее получения.
0.5-0.8%-ную суспензию эритроцитов мышей готовят следующим образом: кровь от мышей берут в раствор Альсевера путем тотального обескровливания животных. Затем необходимое количество крови центрифугируют в течение 10 мин при 2000 об./мин. Осадок эритроцитов отмывают трижды ФБСР. Из отмытых эритроцитов готовят 0.5-0.8%-ную суспензию.
Для исследования используют жидкую часть фекалий от больных телят и надосадочную жидкость после центрифугирования 50%-ной суспензии фекалий или кишечника на ФБСР. Кусочки кишечника тщательно измельчают ножницами и растирают в фарфоровой ступке до образования однородной кашицеобразной массы. К полученной суспензии кишечника, а также густым фекалиям добавляют равный объем ФБСР, экстрагируют в течение 3-4 ч при температуре 4-5°С и осветляют центрифугированием при 4000 об./мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость сливают в стерильную посуду и используют для исследований.
Испытуемые сыворотки крови получают от переболевших телят и их матерей в количестве 4-5 см 3 и используют в нативном виде или консервируют добавлением антибиотиков или мертиолята (1:10000).
Сыворотки крови без консерванта хранят в замороженном состоянии.
Сыворотку молозива и молока получают после обработки их сычужным ферментом, для чего в пробирку с 2-5 см 3 молозива или молока на кончике скальпеля добавляют 1-2 кристалла сычужного фермента, пробирки помещают в термостат на 1-2 ч и после этого образовавшуюся сыворотку отделяют центрифугированием в течение 5-7 мин при 2000 об./мин.
Сыворотки крови, молозива и молока, а также контрольную и специфическую сыворотки из набора перед исследованием обрабатывают эритроцитами мышей, для чего к 0.25 см 3 сыворотки добавляют 0.25 см 3 10%-ной суспензии эритроцитов, выдерживают до полного оседания эритроцитов и используют в реакции. Таким образом, перед использованием в реакции сыворотки оказываются разведенными 1:2.
Все компоненты набора перед использованием разводят в 1 см 3 дистиллированной воды. В последующем все необходимые разведения рабочих растворов готовят на фосфатно-буферном солевом растворе.
Реакции ставят микрометодом в объеме 0.025 см 3 (1 капля), используя полистироловые панели с U-образным дном.
Реакции можно ставить и макрометодом (в 0.2 см 3 ) на панелях из плексигласа.
Обнаружение коронавируса в фекалиях
Коронавирусный антиген в фекалиях обнаруживают в реакции гемагглютинации, которая основана на способности коронавируса вызывать агглютинацию эритроцитов мышей. Эта реакция позволяет обнаружить вирус в материале от больных и павших животных.
Реакцию торможения гемагглютинации в данном случае используют для подтверждения специфичности РГА (т.е. подтверждения принадлежности гемагглютининов именно коронавирусу).
Для постановки этой реакции в первый ряд лунок панели вносят по 0.025 см 3 отрицательной (контрольной) сыворотки, во второй - по 0.025 см 3 специфической антигемагглютинирующей сыворотки, разведенных 1:20 ФБСР. Затем в первые лунки обоих рядов вносят по 0.025 см 3 испытуемого антигена из фекалий или кишечника, приготовленных по схеме, описанной выше, перемешивают и делают двукратные разведения, затем ставят на инкубацию на 1 ч. По истечении этого срока во все лунки обоих рядов панели вносят по 0.025 см 3 0.8%-ной суспензии эритроцитов, перемешивают и оставляют на 1 ч.
Реакция считается положительной, если титр гемагглютининов в исследуемом материале составил 1:32 и выше, и специфическая сыворотка тормозит гемагглютинацию в исследуемом материале не менее чем на 4 разведения (в 16 раз), т.е. если титр гемагглютининов в первом ряду с отрицательной сывороткой составил 1:128, то во втором ряду со специфической антигемагглютинирующей сывороткой он должен быть не выше 1:8.
Выявление антител к коронавирусу в сыворотках крови, молозиве и молоке
Для выявления антител в сыворотках крови, молозиве и молоке используют реакцию торможения гемагглютинации (РТГА). основанную на способности специфических антител тормозить гемагглютинирующую активность вируса.
Постановка РТГА включает два этапа: определение рабочей дозы антигена и постановка основного опыта.
Вначале определяют рабочую дозу антигена (4АЕ), для чего проводят титрование антигена в РГА. Для этого во все лунки панели вносят по 0.025 см 3 ФБСР и делают двукратные разведения специфического антигена. Затем во все лунки вносят по 0.025 см 3 0.8%-ной суспензии эритроцитов.
Учет реакции проводят после оседания эритроцитов в контрольных лунках, которые содержат по 0.025 см 3 ФБСР и 0.8%-ной суспензии эритроцитов. Учет проводят по четырехкрестовой системе. За гемагглютинирующий титр антигена принимают наибольшее его разведение, которое вызывает агглютинацию эритроцитов не менее чем на ++.
Затем показатель титра антигена в РГА деляг на 4. Так, если титр антигена 1:256, то рабочее разведение будет составлять 1:64 (4АЕ).
Перед постановкой основного опыта определяют правильность выбора 4 АЕ.
Для этого в 5 лунок раскапывают по 0.025 см 3 ФБСР, а затем титруют рабочую дозу антигена. Таким образом, в первой лунке будет 2 АЕ, во второй - 1 АЕ, в третьей - 0.5 АЕ. После этого в каждую лунку добавляют по 0.025 см 3 0.8%-ной суспензии эритроцитов, панели встряхивают и оставляют при комнатной температуре на 60 мин.
При правильном выборе рабочей дозы (4АЕ) агглютинация должна быть только в первой и второй лунках. Если в третьей лунке оказывается полная или частичная агглютинация, это означает, что выбранная доза антигена содержит больше 4 АЕ и должна быть уменьшена. Если во второй лунке, где должна быть 1 АЕ антигена, агглютинация не полная, то выбранная рабочая доза содержит меньше АЕ в 0.025 см 3 и должна быть увеличена.
Уменьшение или увеличение рабочей дозы антигена проводят добавлением соответственно ФБСР или антигена и повторно проверяют.
Для постановки основного опыта в ряд лунок панели разливают по 0.025 см 3 ФБСР. В первую лунку вносят 0.025 см 3 испытуемой сыворотки и делают двукратные разведения ее до 1:256. После этого во все лунки панели вносят по 0.025 см 3 рабочего разведения антигена (4АЕ). После часового контакта сыворотки с антигеном во все лунки добавляют по 0.025 см 3 0.8%-ной суспензии эритроцитов.
Реакцию учитывают через 60 мин. За титр сыворотки принимают наибольшее ее разведение, которое тормозит агглютинацию эритроцитов с коронавирусным антигеном не менее чем на ++.
Контролями реакции служат результаты взаимодействия специфической и контрольной сывороток с коронавирусным антигеном, для чего эти сыворотки титруют как испытуемые.
Сыворотку считают положительной, если ее титр 1:32 и выше.
Особые указания и меры личной профилактики
По окончании работы ампулы (флаконы), инструменты, остатки неизрасходованного материала обеззараживают кипячением в течение 15 минут. Рабочую поверхность стола и руки обрабатывают дезинфицирующим раствором (0.5%-ный раствор хлорамина).
Меры личной профилактики
Лица, участвующие в проведении исследований, должны соблюдать правила общей и личной гигиены, надевать халаты, колпаки. Во время работы запрещается принимать пищу, пить воду и курить. При попадании компонентов диагностикума на открытые участки тела или слизистую оболочку глаз, рта, носа их тщательно промывают водопроводной водой с мылом.
Условия хранения НАБОР ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ КОРОНАВИРУСНОГО ЭНТЕРИТА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА МЕТОДОМ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ
Набор следует хранить в сухом, темном, недоступном для детей месте при температуре 4-8°С. Допускается хранение при любой минусовой температуре.
Разведенные антиген и сыворотки сохраняют активность в течение года при условии хранения их при - 20°С. Разведенные препараты должны храниться в пенициллиновых флаконах под резиновыми пробками.
УТВЕРЖДЕНО 27 февраля
2004 г., б/н
1.
Общие положения
1.1. Набор антигенов и
сывороток предназначен для диагностики гриппа лошадей путем
идентификации выделенных штаммов вируса и исследования сывороток
крови лошадей, больных и переболевших этой болезнью.
1.2. Диагностический
набор содержит:
—
сухие инактивированные антигены 1 (HN) и 2 (HN) серотипов вируса гриппа лошадей — по 2
флакона (ампулы) каждого вида;
—
сухие гипериммунные сыворотки к 1 (HN) и 2 (HN) серотипам вируса гриппа лошадей — по 2
флакона (ампулы) каждого вида;
—
сыворотка нормальная — 1 флакон (ампула).
1.3. Специфические
антигены представляют собой сухую аморфную массу беловато-серого
цвета; специфические сыворотки — розовато-кремового цвета.
1.4. Антигены и сыворотки
расфасовывают по 1,0 см во флаконы (ампулы). Флаконы (ампулы)
укладывают в картонные или полистироловые коробки, обеспечивающие
неподвижность и целостность флаконов (ампул).
Каждая коробка
представляет собой набор антигенов и сывороток для диагностики
гриппа лошадей. В каждую коробку вкладывают наставление по
применению.
1.5. На флаконы (ампулы)
наклеивают или несмываемой краской по стеклу наносят этикетки с
указанием:
—
для антигенов — названия антигена, объема, титра в РГА, даты
изготовления и номера серии;
—
для сывороток — наименования гипериммунной сыворотки к подтипу
вируса, на который она получена, титра в РТГА, объема фасовки, даты
изготовления и номера серии.
На коробках с набором
указывают наименование предприятия-изготовителя и его товарный
знак; полное название препарата; количество флаконов (ампул)
каждого компонента, входящего в препарат; название антигенов,
сывороток и их серотипов; дату изготовления; срок годности; номер
серии; номер контроля; условия хранения и обозначение ТУ.
1.6. Набор хранят в сухом
темном помещении при температуре от 2 до 8°С. Допускается хранение
при любой минусовой температуре.
1.7. Срок годности набора
— 3 года с даты изготовления.
2.
Принцип метода
Сущность метода основана
на способности сывороток крови лошадей, содержащих специфические
антитела, тормозить гемагглютинирующую активность антигена (вируса)
гриппа лошадей соответствующего серотипа.
3.
Порядок применения набора
3.1. Антигены в ампулах
(флаконах) разводят физиологическим раствором (рН 7,2…7,4) до
первоначального объема, т.е. добавляют к содержимому по 1,0
см физиологического раствора. Сухая масса
должна полностью раствориться при встряхивании в течение 3…5 мин
и представлять собой гомогенную взвесь желтоватого цвета.
3.2. Сыворотки в ампулах
(флаконах) разводят дистиллированной водой в соотношении 1:10.
Сухая сыворотка должна растворяться при встряхивании в течение
3…5 мин и представлять собой прозрачную жидкость
розовато-кремового цвета. Разведенную сыворотку прогревают на
водяной бане при температуре 56°С в течение 5 мин. Надосадочную
часть сыворотки собирают для постановки РТГА. Разведенные антигены
и сыворотки хранят при температуре от 2 до 8°С не более 24 ч.
3.3. Приготовление 1%-ной
суспензии эритроцитов петуха
Для получения 1%-ной
суспензии эритроцитов используют петухов старше 6 мес.
Взятие крови у петухов
производят из подкрыльцовой вены. Набирают необходимое количество
крови в стеклянную пробирку с 2…3%-ным раствором лимоннокислого
натрия на физиологическом растворе (рН от 7,2 до 7,4) в соотношении
2:1.
Полученную кровь трижды
отмывают физиологическим раствором, осаждая эритроциты на
центрифуге в течение 10 мин при 1500 об/мин.
Из осадка эритроцитов
готовят 1%-ную суспензию, которую хранят при температуре от 2 до
8°С не более 4 сут.
3.4. Идентификация
выделенного из патологического материала больных лошадей вируса в
реакции торможения гемагглютинации (РТГА).
3.4.1. С целью выделения
вируса используют носовые смывы от больных лошадей в первые 2…3
дня от начала заболевания. Для идентификации вируса в РТГА
используют вируссодержащий материал с титром гемагглютинации не
ниже 1:8.
3.4.2. Постановка реакции
гемагглютинации
2. Бруцеллин ВИЭВ.
3. Туберкулин сухой очищенный (ППД) для млекопитающих.
4. Альттуберкулин для млекопитающих.
5. Аллерген сухой очищенный комплексный из атипичных микобактерий (КАМ).
6. Туберкулин сухой очищенный (ППД) для птиц.
7. Альттуберкулин для птиц.
Антигены штаммоспецифические сухие для серологических реакций (РСК, РИД, РРНД и др.):
8) ящурный, тип 0-1618;
9) ящурный, тип С-564;
10) ящурный, тип А-22;
11) ящурный, тип САТ-1;
12) ящурный, тип Азия-1;
13) ящурный, тип 0-194;
14) ящурный, тип 0-194 для РУСК;
15) ящурный, тип 0-1618 для РУСК;
16) ящурный, тип а-22 для РУСК;
17) ящурный, тип САТ-1 для РУСК;
18) ящурный, тип Азия-1 для РУСК.
19. Антиген сибиреязвенный бактериальный стандартный.
20. Антиген сапной для реакции связывания комплементов (РСК).
21. Антиген паратуберкулезный.
22. Антиген бруцеллезный для кольцевой реакции (КР) с молоком.
23. Антиген бруцеллезный единый для РА, РСК, РДСК.
24. Антиген бруцеллезный для роз- бенгалпробы (РБП).
25. Антиген вибриозный для реакции агглютинации.
26. Антиген листериозный УНИИЭВ для РСК.
27. Антиген и антисыворотка для диагностики инфекционной анемии лошадей в реакции диффузной преципитации (РДП).
28. Антиген сальмонеллезный моновалентный для водоплавающей птицы.
29. Антиген сальмонеллезный моновалентный для крупного рогатого скота.
30. Антиген сальмонеллезный моновалентный для овец.
31. Антиген сальмонеллезный моно валентный для свиней.
32. Антиген пуллорный эритроцитар ный.
33. Антиген токсоплазменный.
34. Антиген трипанозомный.
Сыворотки штаммоспецифически( для серологических реакций (РСК РИД, РРНД и др.):
35) ящурная, тип 0-1618;
36) ящурная, тип С-564;
37) ящурная, тип А-22;
38) ящурная, тип САТ-1;
39) ящурная, тип 0-194;
40) ящурная, тип Азия -1.
41. Сыворотка сибиреязвенная пре- ципитирующая.
42. Люминесцентные антибактерий- ные антитела сибиреязвенные.
43. Сыворотки групповые агглютинирующие лептоспирозные.
44. Люминесцирующие антибакте- рийные антитела бруцеллезные.
45. Сыворотка позитивная бруцеллезная для РСК.
46. Антитела антибактерийные туля- ремийные люминесцирующие.
47. Сыворотка сапная для РСК.
48. Сыворотка паратуберкулезная.
49. Сыворотка вибриозная люминес- цирующая.
50. Сыворотки вибриозные моноспе- цифические агглютинирующие.
51. Сыворотка листериозная люми- несцирующая.
52. Набор сывороток для типизации
53. Сыворотка листериозная для
54. Сыворотки сальмонеллезные мо- норецепторные О- и Н-агглютинирую- щие адсорбированные.
55. О-сыворотки флуоресцирующие сальмонеллезные.
56. Антиадгезивные коли-сыворотки.
57. Сыворотки О-коли агглютинирующие.
58. Сыворотка рожистая люминес-
59. Сыворотки диагностические антитоксические перфрингенс типов А,
С, О, Е для диагностики заболеваний животных, вызываемых микроорганизмами перфрингенс.
60. Сыворотки ботулинистические антитоксические типов А, В, С, Е.
61. Комплемент сухой для РСК.
62. Сыворотка гемолитическая для РСК.
63. Сыворотка токсоплазменная.
64. Сыворотка трипанозомная.
Наборы антигенов и сывороток
65. Набор компонентов для диагностики бешенства.
66. Флуоресцирующий антирабичес- кий глобулин.
67. Диагностикумы эритроцитарные типоспецифические для идентификации вируса ящура в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА).
68. Диагностикумы для экспресс- метода определения типов вируса яшура.
69. Диагностический набор для идентификации вирусов, вызывающих заболевания сельскохозяйственных животных с везикулярным синдромом.
70. Набор специфических компонентов для диагностики болезней овец, вызываемых бруцеллой овис.
71. Набор антигенов и сывороток для серологической диагностики хламиди- озного аборта сельскохозяйственных животных.
72. Набор флуоресцирующих иммуноглобулинов и контрольных сывороток для диагностики хламидиозного аборта сельскохозяйственных животных.
73. Набор антигенов и сывороток для диагностики гриппа лошадей.
74. Набор для серологической диагностики лейкоза крупного рогатого скота.
75. Набор диагностикумов вирусной диареи крупного рогатого скота.
76. Набор диагностикумов для диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота.
77. Набор диагностикумов ринотрахеита методом ИФА крупного рогатого скота.
78. Набор для выявления антигена вируса ТГС и ротавируса крупного рогатого скота методом ИФА.
79. Набор диагностикумов ротави- русного энтерита методом ИФА.
80. Набор сухих диагностикумов аденовирусной инфекции крупного рогатого скота.
81. Набор жидких диагностику мои для серологической диагностики аденовирусной инфекции крупного рогатого скота.
82. Набор диагностикумов парагриппа-3 крупного рогатого скота.
83. Набор диагностикумов респира- торно-синтициальной инфекции крупного рогатого скота.
84. Набор для диагностики трансмиссивного гастроэнтерита свиней.
85. Набор для диагностики болезни Тешена свиней.
86. Набор для дифференциальной диагностики везикулярной болезни и везикулярной экзантемы свиней (ВБС и ВЭС).
87. Набор для диагностики ньюкаслской болезни и гриппа птиц.
88. Набор антигенов и сывороток для диагностики гриппа птиц.
89. Набор антигенов и сывороток для диагностики инфекционного бронхита кур.
90. Набор для диагностики болезни Гамборо.
91. Набор для диагностики синдрома снижения яйценоскости ССЯ-76 методом ИФА.
92. Набор для серологической диагностики синдрома снижения яйценоскости 76 (ССЯ-76) в РЗГА.
93. Набор для диагностики катаральной лихорадки овец и коз.
94. Набор антигенов и контрольных сывороток для серологической диагностики алеутской болезни норок.
95. Эритроцитарный диагностикум сапа лошадей.
96. Бактериофаг сибиреязвенный.
97. Бактериофаг для идентификации возбудителя листериоза.
- Власова Наталия Геннадьевна
- email — n.vng52@yandex.ru
- телефон — 8 (831) 433-74-85
- обеспечение заявки — 1 100 руб.
- обеспечение контракта — не требуется
- преимущества и требования — установлены
Получать рассылку с такими закупками на почту?
Преимущества и требования
| 1 | Запрет на допуск товаров, услуг при осуществлении закупок, а также ограничения и условия допуска в соответствии с требованиями, установленными статьей 14 Федерального закона № 44-ФЗ |
| 2 | Закупка у субъектов малого предпринимательства и социально ориентированных некоммерческих организаций |
| 3 | Единые требования к участникам (в соответствии с частью 1 Статьи 31 Федерального закона № 44-ФЗ) |
| 4 | Требования к участникам закупок в соответствии с частью 1.1 статьи 31 Федерального закона № 44-ФЗ. Отсутствие в реестре недобросовестных поставщиков (подрядчиков, исполнителей) информации об участнике закупки, в том числе информации об учредителях, о членах коллегиального исполнительного органа, лице, исполняющем функции единоличного исполнительного органа участника закупки — юридического лица. |
все данные о заказчике
| Наименование позиции | Количество |
|---|---|
| Антигены вируса гриппа лошадей первого эталонного серотипа Антигены вируса гриппа лошадей второго эталонного серотипа Сыворотка специфическая к вирусу гриппа лошадей первого эталонного серотипа Сыворотка специфическая к вирусу гриппа лошадей второго эталонного серотипа Сыворотка контрольная набор компонентов | 3 шт |
всего в тендере 1 позиция
36 АД Набор Грипп лошадей.docx
НМЦК Набор гипп лошадей.xls
| Способ закупки | Дата размещения | НМЦК, o |
|---|---|---|
| Электронный аукцион | 01.10.2019 0:00:00 | 109 952 |
Протокол рассмотрения единственной заявки на участие в электронном аукционе от 28 октября 2019
Избранное, цветные метки и изменения в избранных закупках
доступны на тарифах Стандарт и Эксперт.
Подробные результаты доступны на тарифах Стандарт и Эксперт.
Попробуйте снова или обновите страницу
№ 0132100003619000035,
18.10.2019 13:25 (мск)
18 октября 2019
13:25 мск
28 октября 2019
10:00 мск
28 октября 2019
Комитет Государственного Ветеринарного Надзора Нижегородской обл.
ИНН 5260026264
КПП 526001001
в течение 30 календарных дней с даты заключения государственного контракта.
Нижегородская область,ул. Кащенко,9
Антигены вируса гриппа лошадей первого эталонного серотипа
Антигены вируса гриппа лошадей второго эталонного серотипа
Сыворотка специфическая к вирусу гриппа лошадей первого эталонного серотипа
Сыворотка специфическая к вирусу гриппа лошадей второго эталонного серотипа
Сыворотка контрольная
Требования к участникам
- Единые требования к участникам (в соответствии с частью 1 Статьи 31 Федерального закона № 44-ФЗ)
- Требования к участникам закупок в соответствии с частью 1.1 статьи 31 Федерального закона № 44-ФЗ
Ограничения и запреты
- Запрет на допуск товаров, услуг при осуществлении закупок, а также ограничения и условия допуска в соответствии с требованиями, установленными статьей 14 Федерального закона № 44-ФЗ
- Закупка у субъектов малого предпринимательства и социально ориентированных некоммерческих организаций
Участники и результаты
28 октября 2019
Электронный аукцион признан несостоявшимся.
- Поставка лекарственных препаратов
- Поставка химических реагентов в 2015 году
- Поставка антибиотиков
Напоминания доступны на тарифах Стандарт и Эксперт.
- Власова Наталия Геннадьевна
- email — n.vng52@yandex.ru
- телефон — 8 (831) 433-74-85
- обеспечение заявки — 1 304 руб.
- обеспечение контракта — 6 519 руб.
- преимущества и требования — установлены
Узнать, кто участвует и побеждает в похожих закупках?
Преимущества и требования
| 1 | Запрет на допуск товаров, услуг при осуществлении закупок, а также ограничения и условия допуска в соответствии с требованиями, установленными статьей 14 Федерального закона № 44-ФЗ |
| 2 | Преимущества при осуществлении закупок участникам, заявки или окончательные предложения которых содержат предложения о поставке товаров в соответствии с приказом Минэкономразвития России № 155 от 25.03.2014 |
| 3 | Единые требования к участникам (в соответствии с частью 1 Статьи 31 Федерального закона № 44-ФЗ) |
| 4 | Требования к участникам закупок в соответствии с частью 1.1 статьи 31 Федерального закона № 44-ФЗ. Отсутствие в реестре недобросовестных поставщиков (подрядчиков, исполнителей) информации об участнике закупки, в том числе информации об учредителях, о членах коллегиального исполнительного органа, лице, исполняющем функции единоличного исполнительного органа участника закупки — юридического лица. |
| 5 | Требования к участникам закупок в соответствии с частью 2.1 статьи 31 Федерального закона № 44-ФЗ |
все данные о заказчике
| Наименование позиции | Количество |
|---|---|
| Набор антигенов и сывороток для диагностики гриппа лошадей | 4 набор |
всего в тендере 1 позиция
14 АД Набор грипп лошадей.docx
14 Извещение Набор грипп лошадей.docx
Обоснование НМЦК набор грипп лошадей.rtf
| Способ закупки | Дата размещения | НМЦК, o |
|---|---|---|
| Электронный аукцион | 01.05.2018 0:00:00 | 130 376 |
Протокол рассмотрения единственной заявки на участие в электронном аукционе от 31 мая 2018
Договоры и контракты
Договор №1526002626418000016 от 14 июня 2018
Дата подписания договора
c 15.06.2018 по 03.08.2018
- Препараты диагностические — 4 усл ед
977113 ГК Набор грипп лошадей.docx
11 Доп уменьшение ЦК Ветснаб Набор грипп лошадей.docx
Читайте также:
