Культивирование вируса клещевого энцефалита

Синонимы: весенне-летний, таежный, русский, дальневосточный; Encephalitis ocarina.

Клещевой энцефалит — природно-очаговая трансмиссивная (передающаяся клещами) вирусная инфекция, характеризующаяся преимущественным поражением центральной нервной системы. Заболевание отличается полиморфизмом клинических проявлений и тяжестью течения (от легких стертых форм до тяжелых прогредиентных).

Первое клиническое описание болезни дали в 1936—1940 гг. отечественные ученые А. Г. Панов, А. Н. Шаповал, М. Б. Кроль, И. С. Глазунов. Возбудитель клещевого энцефалита — фильтрующийся вирус — был также открыт отечественными учеными Л.А.Зильбером, Е.Н.Левковичем, А. К. Шубладзе, М. П. Чумаковым, В. Д. Соловьевым, А. Д. Шеболдаевой в 1937 г.

В настоящее время клещевой энцефалит регистрируется в Сибири, на Дальнем Востоке, на Урале, в Беларуси, а также в центральных областях России.

Этиология. Вирус клещевого энцефалита (КЭ) относится к семейству Flaviviridae, роду Flavivirus (от лат. flavus - желтый). Выделяют три разновидности возбудителя — дальневосточный подвид, центрально-европейский подвид и возбудитель двухволнового менингоэнцефалита. Вирионы вируса клещевого энцефалита имеют сферическую форму с диаметром 40—50 им. Внутренним компонентом является нуклеокапсид. Он окружен наружной липопротеидной оболочкой, в которую погружены шипы, состоящие из гликопротеида, обладающего гемагглютинирующими свойствами. Нуклеокапсид содержит однонитчатую РНК. Вирус длительное время сохраняется при низких температурах (оптимальный режим минус 60°С и ниже), хорошо переносит лиофилизацию, в высушенном состоянии сохраняется много лет, но быстро инактивируется при комнатной температуре. Кипячение инактивирует его через 2 мин, а в горячем молоке при 60°С вирус погибает через 20 мин. Инактивирующим действием обладают также формалин, фенол, спирт и другие дезинфицирующие вещества, ультрафиолетовое излучение.

Эпидемиология. Клещевой энцефалит относится к группе природно-очаговых болезней человека. Основным резервуаром и переносчиком вируса в природе являются иксодовые клещи — Ixodes persulcatus, Ixodes ricinus с трансовариальной передачей. Дополнительным резервуаром вируса являются грызуны (заяц, еж, бурундук, полевая мышь), птицы (дрозд, щегол, чечетка, зяблик), хищники (волк). Для заболевания характерна строгая весенне-летняя сезонность заболевания. Динамика заболеваемости находится в тесной связи с видовым составом клещей и наибольшей их активностью. Чаще болеют лица в возрасте 20—40 лет. Основным путем инфицирования человека является трансмиссивная передача через укусы клещей. Возможна также передача инфекции алиментарным путем при употреблении в пищу сырого молока коз и коров, а также при раздавливании клеща в момент его удаления с тела человека и, наконец, воздушно-капельным путем при нарушении условий работы в лабораториях. При алиментарном заражении обращает на себя внимание наличие семейно-групповых случаев болезни.

Патогенез. Инфекционный процесс развивается вследствие внедрения нейротропного вируса и взаимодействия его с организмом человека. Эти взаимоотношения определяются путем внедрения, свойствами и дозой возбудителя, а также резистентностью и реактивностью макроорганизма. Вирус клещевого энцефалита проникает в организм человека в естественных условиях через кожу при присасывании клеща или через сырое молоко домашних животных.

После присасывания клеща вирус распространяется гематогенно и быстро проникает в мозг, фиксируясь здесь клетками. Параллельно с накоплением вируса развиваются воспалительные изменения сосудов и оболочек мозга. Соответствие места укуса клеща последующей локализации сегментарных расстройств указывает на возможность лимфогенного пути проникновения вируса в центральную нервную систему (ЦНС). В отдельных случаях преобладает тот или иной путь, что отражается в клинических особенностях клещевого энцефалита. Возникновение менингеальных и менингоэнцефалических синдромов соответствует гематогенному, а полиомиелитических и радикулоневритических — лимфогенному пути распространения вируса. Инвазия нервной системы возможна также и невральным путем посредством центростремительного распространения вируса через обонятельный тракт. Редкость поражения нижних конечностей при клещевом энцефалите не соответствует частоте присасывания клещей в кожных областях, иннервируемых поясничными и крестцовыми сегментами спинного мозга, что указывает на известную тропность вируса к клеткам шейных сегментов и их аналогов в бульбарных отделах продолговатого мозга.

Вирусемия при клещевом энцефалите имеет двухволновый характер: кратковременная первичная вирусемия, а затем повторная (в конце инкубационного периода), совпадающая по времени с размножением вируса во внутренних органах и появлением его в ЦНС.

Возможно длительное вирусоносительство, которое может быть различным по своим проявлениям и последствиям: латентная инфекция (вирус интегрирован с клеткой или существует в дефектной форме), персистентная инфекция (вирус репродуцируется, но не вызывает клинических проявлений), хроническая инфекция (вирус репродуцируется и вызывает клинические проявления с рецидивирующим, прогрессирующим или регрессирующим течением), медленная инфекция (вирус репродуцируется после длительного инкубационного периода, вызывает клинические проявления с неуклонным прогрессированием, приводящим к смерти).

Симптомы и течение. Выделяют следующие клинические формы болезни:

Независимо от клинической формы у больных наблюдаются общие инфекционные проявления болезни, характеризующиеся лихорадкой и другими признаками синдрома общей инфекционной интоксикации. Инкубационный период клещевого энцефалита длится в среднем 7—14 сут с колебаниями от одних суток до 30 дней. У ряда больных началу заболевания предшествует продромальный период, длящийся 1—2 дня и проявляющийся слабостью, недомоганием, разбитостью; иногда отмечаются легкие боли в области мышц шеи и плечевого пояса, боли в поясничной области в виде ломоты и чувства онемения, головная боль.

Лабораторным подтверждением диагноза служит нарастание титра антител, выявляемое с помощью РСК, РТГА, РПГА, РДНА и реакции нейтрализации. Диагностическим является нарастание титра антител в 4 раза.

Перспективным методом является выделение вируса на культуре ткани. Вирус и его антигены обнаруживаются в первые 7 дней болезни. В последнее время апробирован и хорошо зарекомендовал себя иммуноферментный метод (ИФА) диагностики клещевого энцефалита. С помощью ИФА выявляют антитела к вирусу клещевого энцефалита раньше и в более высоких разведениях сывороток, чем в РТГА и РСК, а также чаще определяют изменение напряженности специфического иммунитета, необходимое для подтверждения клинического диагноза.

Лечение больных клещевым энцефалитом проводят по общим принципам независимо от проводимых ранее профилактических прививок или применения с профилактической целью специфического гамма-глобулина.

Профилактика и мероприятия в очаге. Уничтожение и предотвращение укусов клещей. В течение первых суток после присасывания клеща — экстренная профилактика: донорский иммуноглобулин (титр 1:80 и выше) внутримышечно в дозе 1,5 мл детям до 12 лет, 2 мл — от 12 до 16 лет, 3 мл — лицам в возрасте 16 лет и старше. Для специфической профилактики применяют инактивированную культуральную сорбированную жидкую вакцину.

Сем Flavaviridae род Flavavirus. Основным переносчиком являются иксодовые клещи. У клещей происходит трансовариальная и трасфазовая передача вируса по ходу метаморфоза переносчиков. Поддержание циркуляции осущ за счет прокормителей клещей – грызунов, птиц. Для клещевого энц характерна весенне-летняя сезонность.

Вирусоформные клещи – от 0.01% до 25% по природным очагам. В свердловской области – 2%

Процесс передачи – клещ – прокаливает гнатосомой кожу – со слюной обезболивает и присасывается за счет отвердевания слюны – чередование актов всасывания крови и выброса слюны.

Клинические формы: лихорадочная, менингеальная, менингоэнцефалическая, полиомиелитическая (пораж спин мозга), смешанная

Патогенез – первичное рзмножение в месте укуса – в лимфу – в кровь – вирусемия – во внутренние органы (висцеральная).

Проникновение в ЦНС от 1 до 30% - неврнальная. Поражает нейроны ядер черепно мозговых нервов с 3 по 12 пары. Двигательные нейроны передних рогов шейного и грудного отделов спинного мозга с развитием вялых параличей.

Периоды заболевания: инкуб – 2 недели (до 30 дней)

Симтоматика – 1-2 дня жар, ломота, боли в мышцах и предплечье

Пути: алиментарный (с молоком коз), развитие молочной 2х волновой лихорадки – через не сколько дней повышение температуры, снижение, снова повышение

Диагностика: материал – парные сыворотки больного. Определение диагностического нарастания титра АГ в серологических реакцихя РТГА, иммуноферментный анализ

Молекулярно биологический метод – материал клещ – метод ПЦР, выделение РНК

Вирусологический – из клещей на мышах

Лечение – противовирусного НЕТ, симптоматическое и патогенетическое. Специфический гомологичный донорский иммуноглобоулин против клещевого энцефалита.

Профилактика: реппеленты, снятие клещей с одежды.

Вакцинация – убитые вакцины (кратковременный иммунитет)

Вирус краснухи.

Вирус краснухи относится к семейству Togaviriadae роду Rubivirus. Название происходит от лат. rubrum — красный, что связано с покраснением кожи у больных, обусловленным появлением на ней пятнисто-папулезной сыпи.

Морфология и химический состав вируса. Вирион вируса краснухи имеет сферическую форму, диаметр 60-70 нм. Геном вируса представлен однонитчатой плюснитевой РНК, окруженной капсидом с кубическим типом симметрии и внешней липидсодержащей оболочкой, на поверхности которой находятся шипы. В структуре вириона три белка: С, Е1 и Е2, два последние из которых — гликопротеины, или шипы, расположенные во внешней оболочке вириона.

Устойчивость к действию физических и химических факторов. Вирус краснухи чувствителен к эфиру и детергентам. Он малоустойчив к действию физических и химических факторов, неустойчив в окружающей среде. Вирус инактивируется при 100 °С за 2 мин. Разрушение вируса происходит под действием органических растворителей, хлорактивных соединений, формалина, УФ-лучей, солнечного света. При низких температурах в замороженном состоянии сохраняет свою активность годами.

Антигенная cтруктура вируса. Вирус краснухи представлен одним серотипом. Он имеет внутренний нуклеокапсидный антиген С, выявляемый в РСК, и внешние антигены: Е2, выявляемый в РН, и Е1, или гемагглютинин, выявляемый в РГА и РТГА. Лучше всего вирус агглютинирует эритроциты голубей, гусей и 1—3-дневных цыплят. Е2 — это протектив-ный антиген вируса.

Вирус краснухи способен культивироваться в различных культурах клеток, где он чаще всего не вызывает развития ЦПД, в связи с чем длительное время его не удавалось обнаружить (вирус выделен лишь в 1962 г.).

В отличие от других тогавирусов, вирус краснухи не культивируется в культурах клеток членистоногих и обладает нейраминидазной активностью.

Помимо культур клеток, к вирусу чувствительны куриные и утиные эмбрионы.

Вирус краснухи способен размножаться в организме различных лабораторных животных (обезьян, хомячков, крыс, кроликов, мор-ских свинок и мышей-сосунков), у которых инфекция обычно протекает бессимптомно.

Хорошей моделью для вируса краснухи является экспериментальная инфекция у хорьков, у которых вирус размножается в течение длительного времени в паренхиматозных органах и передается трансплацентарно, что характерно и для человека. Трансплацентарно передача вируса происходит также у обезьян.

Вирус краснухи относится к факультативным возбудителям медленных вирусных инфекций. Краснуха — антропонозное заболевание.

Источником вируса является человек, больной клинически выраженной или бессимптомной формой краснухи, который пред-ставляет эпидемиологическую опасность со второй половины инкубационного периода и в течение 7 дней с момента появления сыпи, а также дети с врожденной краснухой, выделяющие вирус в окружающую среду в течение многих месяцев (до 2 лет). Выделение вируса из организма происходит с носоглоточным секретом, а также с мочой и испражнениями.

Вирус, персистирующий в организме больного с врожденной краснухой, обладает повышенной вирулентностью. В отличие от других детских воздушно-капельных инфекций, таких как корь, эпидемический паротит, ветряная оспа, больной краснухой менее контагиозен, так как вирус нестоек в окружающей среде, поэтому для реализации аэрогенного механизма заражения необходим тесный и продолжительный контакт с источником инфекции.

Преимущественно болеют дети, посещающие организованные коллективы.

Врожденная краснуха — это медленная вирусная инфекция, развивающаяся в результате внутриутробного трансплацентарного заражения плода, персистенции вируса в его тканях, где он оказывает тератогенное действие.

Заболевание характеризуется развитием катаракты, глухоты и пороков сердца, а также других аномалий развития. Слепота в сочетании с глухотой и поражением ЦНС приводит к умственной отсталости.

Особую опасность представляет заражение краснухой в I триместре беременности, так как в этом периоде происходит формирование всех основных тканей и органов плода. Около 25 % детей, зараженных в этот период, рождается с симптомами врожденной краснухи, а у 85 % детей регистрируются другие формы патологии развития.

Тератогенное действие вируса обусловлено торможением митотической активности клеток, ишемией плода в результате пораже-ния сосудов плаценты, иммуносупрессивного действия избыточной антигенной нагрузки на развивающуюся иммунную систему, а также прямым цитопатогенным действием вируса на клетки плода.

Вирус поражает моноциты и лимфоциты, и длительно персистирует в них. У детей с врожденной краснухой определяется высокий уровень специфических антител, проникших трансплацентарно от матери. Иммунитет после врожденной краснухи менее стоек, так как формирование его происходит в условиях незрелой иммунной системы плода. Выздоровление при врожденной краснухе отмечается после гибели зараженных клеток.

На фоне персистенции вируса краснухи в макроорганизме, что наиболее характерно для лиц с врожденной краснухой, а также после перенесенной в детском возрасте инфекции у человека в течение второго десятилетия жизни может развиться прогрессирующий краснушный панэнцефалит — медленная вирусная инфекция, характеризующаяся комплексом прогрессирующих нарушений двигательной и умственной функции ЦНС, и завершающаяся летальным исходом. Больные с признаками прогрессирующего краснушного панэнцефалита не представляют эпидемиологической опасности для окружающих, поскольку у них отсутствует вирус в экскретах. Вирус краснухи интересен также тем, что он может быть причиной развития ювенильного диабета, панкреатита, дисфункции щитовидной железы, изменения психики и других заболеваний

Диагностика краснухи основана на выделении вируса из смывов со слизистой оболочки носа и зева, крови, мочи, реже — испражнений, а также внутренних органов погибших детей и на обнаружении антител (IgМ и IgG)в парных сыворотках и цереброспинальной жидкости при врожденной краснухе и прогрессирующем краснушном панэнцефалите, определения индекса авидности IgG и постановке ПЦР.

Выделение вируса осуществляют путем заражения чувствительных клеток. Индикацию вируса осуществляют на основании интерференции с цитопатогенными вирусами или по обнаружению ЦПД и в РГА.

Специфическое лечение и профилактика. Препараты для специфического лечения не разработаны. Учитывая актуальность врож-денной краснухи для здравоохранения, первоочередной задачей профилактики является защита женщин детородного возраста от внутриутробного инфицирования плода.

С этой целью в национальный календарь профилактических прививок в 1997 г. была включена вакцинация против краснухи в возрасте 12 месяцев, ревакцинации детей в 6 лет и иммунизация девочекв 13 лет.

Вирус простого герпеса.

ВПГ относится к семейству Herpesviridae роду Simplexvirus.

2 популяции ВПГ-1 и ВПГ-2.

Вирион имеет овальную форму, диаметр 150-200 нм. В центральной части ДНК, окружена капсидом. Снаружи оболочка с гликопротеиновыми шипами.

Репродукция: адгезия – сливается с мембраной – освобождение нуклеокапсида – транскрипция части вирусного генома - образование иРНК – проникновение в цитоплазму где синтез альфа, бета, гамма белков – формирование капсида и заполнение вирусной ДНК – экзоцитозный или литический выход из клетки

ВПГ вызывает герпетическую инфекцию или простой герпес характеризующийся везикулезными высыпаниями на коже слизистых оболочках, поражением ЦНС и внутренних органов, а также пожизненным носительством и рецидивами болезни

Вирус простого герпеса включает два типа: ВПГ-1 и ВПГ-2; распространен повсеместно, поражает большую часть населения земли и существует в организме в латентной форме до момента реактивации. ВПГ-1 поражает преимущественно область рта, глаз, ЦНС; ВПГ-2 — гениталии, за что и получил назва-ние генитального штамма.

Культивирование. Для культивирования вируса применяют куриный эмбрион (на хорион-аллантоисной оболочке образуются мелкие плотные бляшки) и культуру клеток, на которой он вызывает цитопатический эффект в виде появления гигантских многоядер-ных клеток с внутриядерными включениями.

Вирус патогенен для многих животных. При экспериментальном заражении кроликов в роговицу глаза ВПГ вызывает кератит, при введении в мозг — энцефалит. В естественных условиях животные не болеют.

Резистентность. Вирус нестоек, погибает через несколько часов на поверхности предметов обихода, чувствителен к солнечным и УФ-лучам, жирорастворителям, детергентам. Сохраняется в течение месяца при темпера-туре 4 °С.

Эпидемиология. Заболевания герпесом широко распространены в виде спорадичес-ких случаев и неболыхшх вспышек в детских коллективах, больницах. У 80—90 % взрослых людей обнаруживаются антитела к ВПГ. Источник инфекции — больной или вирусо-носитель.

ВПГ-1 и ВПГ-2 передаются преимущественно контактным путем (с везикулярноЙ жидкостью, при поцелуях — со слюной, поло-вых контактах — с влагалищными секретами), через предметы обихода, реже — воздушно-капельным путем, через плаценту, при рождении ребенка. Возможна реактивация вируса при снижении иммунитета (рецидивирующий герпес)

Оба типа вирусов могут вызывать оральный; и генитальный герпес. ВПГ-1 чаще поражает слизистые оболочки ротовой полости и глотки, вызывает энцефалиты, а ВПГ-2 — гениталии (генитальный герпес).

Патогенез. Различают первичный и рецидивирующий простой герпес. Чаще вирус вызывает бессимптомную или латентную инфекцию.

Первичная инфекция. Везикула — типичное проявление простого герпеса с дегенерацией эпителиальных клеток. Основу везикулы составляют многоядерные клетки (иногда называемые Тцанк-клетками) выявляемые в препаратах, окрашенных по Гимзе). Пораженные ядра клеток содержат эозинофильные включения. Верхушка везикулы через некоторое время вскрывается, и формируется язвочка, которая вскоре покрывается струпом с образованием корочки с последующим заживлением.

Минуя входные ворота эпителия, вирусы проходят через чувствительные нервные окончания с дальнейшим передвижением нуклеокапсидов вдоль аксона к телу нейрона в чувствительных ганглиях. Репродукция вируса в нейроне заканчивается его гибелью.

Некоторые вирусы герпеса, достигая ганглионарных клеток, способны приводить к развитию латентной инфекции, при которой нейроны не гибнут, но содержат в себе вирусный геном. Большинство людей (70-90% являются пожизненными носителями вируса, который сохраняется в ганглиях, вызывая в нейронах латентную персистируюищую инфекцию.

Наиболее изучена латентная инфекция, вызванная ВПГ-1. В латентно инфицированных нейронах около 1 % клеток в пораженом ганглии несет вирусный геном.

Реактивация герпесвирусов и обострение (рецидив) вызываются различными факторами (переохлаждение, лихорадка, травма, стресс, сопутствующие заболевания, дейс-твие УФ и др.), снижающими иммунитет. Интервал между действием этих факторов и проявлением клинических симптомов составляет 2—5 дней.

Клиника. Инкубационный период 2—12 дней. Болезнь начинается с возникновения на пораженных участках зуда, появления отека и пузырьков, заполненных жидкостью. В месте образования везикулы пациенты ощущают сильную, жгучую боль. После подсыхания пузырьков и отторжения корочек рубцы не образуются. ВПГ поражает кожу (везикулы, экзема), слизистые оболочки рта, глотки (стоматит) и кишечника, печень (гепатиты), глаза (кератит и др.) и ЦНС (энцефалит, менингоэн-цефалит). Рецидивирующий герпес обусловлен реактивацией вируса, сохранившегося в ганглиях. Он характеризуется повторными вы-сыпаниями и поражением органов и тканей.

Генитальная инфекция является результатом аутоинокуляции из других пораженных участков тела; но наиболее часто встречаю-щийся путь заражения — половой, включая урогенитальные контакты. Поражение проявляется в образовании везикулы, которая довольно быстро изъязвляется. Чаще поражаются у мужчин головка и тело полового члена, а у женщин — половые губы и вагина, возможно также распространение процесса и на шейку матки. Считают, что ВПГ-2 может вызвать рак шейки матки.

Иммунитет клеточный. Играет роль Т-лимфоциты.

Диагностика – содержимое везикул, слюны, соскобы, кровь на вирусоскопию. Наблюдаются гигантские клетки с увеличенной цитоплазмой.

Для выделения вируса заражают эмбриональные человеческие фибробласты, куриные эмбрионы.

Серодиагностика с помощью РИФ.

Лечение – препараты интерферона и противовирусные химические – ацикловир, фамцикловир

Профилактика – многократное введение инактивированной культуральной герпетической вакцины.

Методическая разработка для преподавателей

Практическое занятие № 16 по микробиологии

для студентов 3 курса лечебного и педиатрического факультетов.

Цель: способствовать формированию умений по изучению вирусных инфекций, освоению принципов их лабораторной диагностики.

рассмотреть биологические свойства вирусов – возбудителей клещевого энцефалита, краснухи, бешенства;

изучить эпидемиологию, патогенез, клинические особенности, вызываемых ими заболеваний, принципы их профилактики и лечения;

обучить методам лабораторной диагностики вирусных инфекций.

Студент должен знать:

1) до изучения темы – морфологию, строение, способы репродукции вирусов, методы лабораторной диагностики вирусных заболеваний;

2) после изучения темы – свойства возбудителей клещевого энцефалита, краснухи, бешенства, методы культивирования, эпидемиологию, патогенез и клинические проявления, специфическое лечение и профилактику вызываемых ими заболеваний.

Студент должен уметь:

отбирать патологический материал от больных для вирусологического исследования;

проводить исследования по изучению биологических свойств вирусов;

осуществлять серологические методы диагностики вирусных инфекций;

выполнять профилактические мероприятия.

Что Вам известно об истории изучения возбудителей клещевого энцефалита, краснухи, бешенства?

Каковы основные биологические свойства характерны для этих вирусов?

Какую роль они играют в патологии человека?

Опишите эпидемиологию, патогенез, клинические проявления, иммунитет краснухи, бешенства.

Какие методы применяются для лабораторной диагностики этих вирусных заболеваний?

Охарактеризуйте основные принципы их профилактики и лечения.

План практического занятия

Время на перерыв

Время на перерыв

Изучение демонстрационного материала

Уборка рабочего места

2. Содержание занятия:

2.1. Контроль исходного уровня знаний. Способ – программированный контроль.

2.2. Ориентировочные основы самостоятельной работы студентов:

- выполнение практической работы;

- оформление и защита протоколов.

3. Тезисы изучаемого материала

3.1. Вирусы клещевого энцефалита.

Клещевой энцефалит (син.: таежный энцефалит, дальневосточный менингоэнцефалит, клещевой энцефаломиелит, русский весенне-летний менингоэнцефалит, tick-borne encepalitis) – это острое вирусное заболевание, характеризующееся поражением серого вещества головного и спинного мозга, приводящих к развитию параличей и парезов.

История изучения заболевания.

Как нозологическая единица КЭ был выделен в 1937 г. в результате работы комплексной экспедиции, возглавляемой Л.А.Зильбером (в составе экспедиции работали видные вирусологи М.П.Чумаков, В.Д.Соловьев). Были установлены закономерности, природная очаговость, сезонность, связь с активностью клещей. Описаны особенности клиники и патоморфологии КЭ, разработаны методы профилактики и лечения.

Вторая экспедиция под руководством Е.Н.Павловского выявила роль и значение клещей, как переносчиков и естественного резервуара вируса в природе. Результаты послужили основой теории о природной очаговости КЭ.

Во время третьей экспедиции, возглавляемой И.О.Рогозиным, изучались подходы к разработке специфической профилактике КЭ.

Семейство – Flaviviridae (в 1984г. выделено в качестве самостоятельного из семейства Togaviridae). Название семейство и род получили по названию желтой лихорадки (лат.–flava–желтый), являющейся типичным представителем этой группы.

Род – Flavivirus, включает 63 представителя, сгруппированных в 10 антигенных комплекса. Различают два типа вируса клещевого энцефалита – западный (переносчики — клещи Ixodes persulcatus) и восточный (переносчики — клещи Ixodes ricinus), которые отличаются по тяжести клинического течения и антигенному составу вирусов возбудителя. В последние годы выделен третий тип вируса, изолированный в Греции из клещей Rhipicephalus bursa.

Форма вирусов сферическая. Размер – 40-45 нм. Тип симметрии – кубический. Организация – сложная, на поверхности расположены шипики гликопротеиновой природы. Молекулярная масса – 46*10 4 кД. Коэффициент седиментации – 175-218 С.

Геном представляет собой одноцепочечную, инфекционную, плюснитевая РНК с молекулярной массой 4,2х10 3 кД, константой седиментации 45 С, содержит около 14 пар нуклеотидов.

РНК – 5,5 - 6,3%, Белки – 57-60%, Липиды – 27-30%, Углеводы – 6,5%

Комплементсвязывающий, групповой; выявляется в РСК;

Гемагглютинин, типовой; выявляется в РН, РТГА.

Адсорбция при помощи фосфолипидных и гликопротеидных рецепторов.

Проникновение путем рецепторного эндоцитоза (виропексис), при слиянии вирусной оболочки со стенкой вакуоли вирусная РНК выходит в цитоплазму.

РНК выполняет функцию иРНК. Репликация идёт медленно (40- 60 ч).

Сборка: образование нуклеокапсида на ЭПС клетки.

Выход путем почкования (присоединение суперкапсида при выходе из клетки).

В мозговой ткани белых мышей (3-4 недельного возраста).

В культуре клеток – куриных фибробластов, почек обезьян, перевиваемых клеток. В КК наблюдается ЦПД.

На овокультурах – в желточном мешке и хорионалантоисной оболочке.

Вирус разрушается при действии эфира, детергентов, формалина, при кипячении — через 2 минуты. При нагревании до 56-60 о С в течении 10-30 мин., в молоке сохраняется до 2-х мес. Устойчив к УФО, длительно сохраняется в глицерине.

Трансмиссивное природно-очаговое заболевание с весенне-летней сезонностью.

Механизм заражения – трансмиссивный.

трансмиссивный (при укусе клеща);

алиментарный (при употреблении в пищу инфицированного сырого козьего, коровьего молока и молочных продуктов);

контаминация (при раздавливании и втирании присосавшегося клеща);

трансплацентарный (плоду от матери).

Переносчики — клещи Ixodes persulcatus и Ixodes ricinus.

Клещи не могут летать или прыгать, они могут только зацепиться за проходящую мимо и задевающую их жертву или же упасть на нее. Как и в случае других кровососущих насекомых, укус клеща может остаться незамеченным довольно долгое время, благодаря присутствию в его слюне особых разжижающих кровь (антикоагулянтов) и обезболивающих веществ. Именно по этой причине, простой, но очень эффективной мерой по обнаружению присосавшегося клеща являются само- и взаимоосмотры по выходе из леса и на привалах. Самцы клеща, в отличие от самок, присасываются на очень короткое время, что является еще одной причиной того, что многие заболевшие не помнят факта укуса.

Не исключено и заражение людей, не посещавших лес. Это может произойти при заносе клещей животными (собаками, кошками) или людьми — на одежде, с цветами, ветками и т. д.

Наибольшему риску подвержены лица, деятельность которых связана с пребыванием в лесу: работники леспромхозов, геологоразведочных партий, строители автомобильных и железных дорог, нефте- и газопроводов, линии электропередач, топографы, охотники, туристы. В последние годы в числе больных до 75% составляют жители города, заразившиеся в пригородных лесах, на садовых и огородных участках.

Вирус попадает через кожу или слизистые в клетки мононуклеарно-фагоцитарной системы, где происходит первичная репродукция вируса. Затем выходит в кровь (вирусемия), вызывая интоксикацию. С током крови попадает в клетки ЦНС, размножается, вызывая дегенеративные изменения в сером веществе спинного и головного мозга (особенно тяжелые поражения отмечают в нервных клетках передних рогов шейного отдела СМ, ядрах мозжечка и продолговатого мозга). В оболочках мозга, спинномозговых корешках, периферических нервах развивается экссудативное воспаление.

Инкубационный период в среднем составляет 1,5—2 недели, иногда затягиваясь до 3 недель. Разную длительность инкубационного периода можно объяснить характером укуса — чем дольше присасывался клещ, тем больше вирусов проникло в организм и тем быстрее будет развиваться заболевание.

Заболевание развивается остро, в течение нескольких дней.

Основные формы КЭ.

Вирус поражает мягкую мозговую оболочку, серое вещество (кору) головного мозга, двигательные нейроны спинного мозга и периферические нервы, что клинически выражается в судорогах, параличах отдельных групп мышц или целых конечностей и нарушении чувствительности кожи.

Позже, когда вирусное воспаление охватывает весь головной мозг, отмечаются общемозговые симптомы— постоянные головные боли, упорная рвота, потеря сознания, вплоть до коматозного состояния или, наоборот, развивается психомоторное возбуждение с утратой ориентации во времени и пространстве.

Могут отмечаться нарушения сердечно-сосудистой системы (миокардит, сердечно­сосудистая недостаточность, аритмия), пищеварительной системы — задержка стула, увеличение печени и селезенки.

Все перечисленные симптомы отмечаются на фоне токсического поражения организма — повышение температуры тела до 39—40°С.

Тяжесть заболевания зависит от возраста — вероятность выраженного поражения головного мозга резко повышается с возраста 40 лет, при возрасте старше 60 регистрируется максимальная летальность.

Осложнения клещевого энцефалита отмечаются у 30 — 80% переболевших клинически выраженной формой и в основном представлены вялыми параличами преимущественно верхних конечностей.

Летальность колеблется в пределах от 2% при европейской форме до 20% при дальневосточной (более тяжелой и опасной) форме. Смерть наступает в течение 1 недели от начала заболевания.

Реже встречаются нетипичные варианты заболевания — стертые, гриппоподобные формы; полиомиелитоподобная форма. Возможно длительное хроническое носительство вируса.

После перенесенной инфекции формируется стойкий пожизненный иммунитет в результате выработки вируснейтрализующих, комплементсвязывающих и гемагглютинирующих антител. Развивается ГЗТ.

Исследуемый материал – кровь, СМЖ, клещи, секционный материал.

Вирусологический метод – выделение и идентификация;

Серологический метод – РН, РСК, РТГА, ИФА, РЗГА, РНГА с парными сыворотками (нарастание в 4 и более раз);

Экспресс-метод – РИФ, РПГА, ИФА,РИА;

Иммунохимический и молекулярно-биологический методы – ИФА, РНГА

Общие меры по профилактике укусов клещей включают:

ношение в лесу специальной одежды — сапоги, куртки с плотно застегнутыми рукавами; платок или сетка, закрывающая шею; головной убор, закрывающий волосы; само- и взаимоосмотры на выходе из леса и на привалах; скашивание травы и низкорослого кустарника, рубка сухостоя, освобождение от завалов и пней; применение жидких и аэрозольных репеллентов (специальных химических веществ для борьбы с насекомыми); кипячение сырого козьего и коровьего молока на территориях, где регистрируется клещевой энцефалит.

Специфическая (для клещевого энцефалита) профилактика осуществляется с помощью инактивированных вакцин. Быструю (через 24 часа от момента введения) профилактику также можно осуществлять с помощью однократного введения иммуноглобулина, который защищает на срок до 1 месяца.

Первая помощь при укусе клеща. Для удаления присосавшегося клеща его предварительно смазывают каким-нибудь жиром (вазелином, кремом, подсолнечным маслом), а через 15—20 минут осторожно вытягивают нитяной петлей или пинцетом, покачивая из стороны в сторону. Следует избегать разрушения клеща. Снятое насекомое следует сжечь или залить кипятком, однако его также можно принести с собой в медицинский пункт для установления инфицированности клеща вирусом. Место укуса рекомендуется обработать йодом, перекисью водорода или спирт-содержащим препаратом и тщательно вымыть руки.

Ни в коем случае не следует раздавливать клеща, поскольку в этом случае также может произойти заражение вирусом, содержащимся во внутренних органах клеща.

Вакцины. Принципиально все вакцины для профилактики клещевого энцефалита представляют собой выращенные на куриных эмбрионах, инактивированные формалином вирусы, адсорбированные на адъюванте (вещество для усиления иммунного ответа) — гидроокиси алюминия. В качестве дополнительных, стабилизирующих компонентов применяют желатин или альбумин.

На настоящий момент в России применяются четыре вакцины.

Культуралъная вакцина (пр-во НПО Вирион, Томск). Показана для вакцинации детей с 4 лет и взрослых до 65 лет. Курс вакцинации состоит из трех доз по схеме: 0—1—4. Альтернативная схема для быстрой защиты состоит из двух доз с интервалом 1—2 месяца, причем последняя доза вводится не позднее, чем за 2 недели до входа в природный очаг инфекции.

Концентрированная культуральная вакцина (пр-во Института полиомиелита и вирусных энцефалитов, Москва, Россия; штамм Софьин). От первой отличается тем, что может применяться с 18 лет. Курс вакцинации состоит из двух доз с интервалом 5—7 месяцев. Первую ревакцинацию делают одной дозой вакцины через 1—2 года, вторую и последующие — через три года.

От предыдущей отличается наличием дополнительной схемы вакцинации — три дозы по схеме 0—1—3 недель. Второе отличие — несколько большее число побочных реакций в связи с присутствием в составе вакцины желатина.

Все перечисленные вакцины обладают высокой иммуногенной активностью. Через две недели после введения последней дозы первичного курса вакцинации иммунитетом обладают от 90 до 97% привитых.

Экстренная профилактика, т.е. профилактика после укуса клеща, может быть проведена с помощью иммуноглобулинов. Срок для проведения такой профилактики ограничен тремя днями, после этого срока она теряет смысл.

В России доступны:

Иммуноглобулин против клещевого энцефалита человеческий жидкий (пр-во Биомед-Пермь, Россия). Вводят внутримышечно, однократно в возрасте до 12 лет — 1 мл, 12—16 лет — 2 мл, 16 лет и старше — 3 мл.

Иммуноглобулин против клещевого энцефалита (из лошадиной сыворотки), пр-во Россия.

FSME-Bulin (Immuno AG, Австрия).

Выпускают во флаконах по 1, 2, 5 и 10 мл. В целях профилактики (до укуса клеща) вводят в дозе 0,05 мл на кг массы тела. Действие начинается через 24 часа и продолжается в течение 1 месяца. Возможно повторное введение для более длительной защиты.