Коллекция бактерий вирусов и микозов фгу вгнки

Отдел создан в 1980 г. в связи с решением Президиума АН СССР о передислокации Всесоюзной коллекции микроорганизмов в ИБФМ РАН из Института микробиологии РАН. С момента создания и до 2003 г. отдел возглавлял член-корр. РАН Лев Владимирович Калакуцкий, ныне Советник РАН. С 2003 г. руководителем отдела является д.б.н. Людмила Ивановна Евтушенко (evtushenko@ibpm.pushchino.ru).

Общая информация

• Характер и направление деятельности ВКМ как центра сбора, изучения, сохранения и предоставления широкого спектра микроорганизмов и информации о них для научных, образовательных и других учреждений, определены Постановлениями Президиума АН СССР (№942 /25.09.80) и Президиума РАН (№233 /01.07.03).

• С 1987 г. ВКМ выполняет функции Международного органа по депонированию культур для целей патентной процедуры в соответствии с Будапештским договором (Budapest Treaty).

• В последние годы усилия специалистов ВКМ направлены на решение задач по достижению уровня мировых стандартов по всем видам коллекционной деятельности и созданию на базе ВКМ Биологического ресурсного центра (БРЦ) – коллекции культур нового поколения. Подобные центры, объединенные в информационные сети, рассматриваются ОЭСР в качестве ключевых элементов инфраструктуры современной биотехнологии и биологической науки. В фокусе внимания коллектива ВКМ – развитие фонда, научно-сервисных услуг и информационных ресурсов.

Фонд ВКМ

Фонд ВКМ включает представителей всех основных надцарств (грибы, бактерии, археи) и физиологических групп (в т.ч., анаэробы, экстремофилы), типовые штаммы видов (более 2500), объекты интеллектуальной собственности, депонированные в ВКМ в связи с патентной процедурой (более 800), широкий спектр других культур с уникальными свойствами и биотехнологическим потенциалом, а также и представителей пока не описанных новых таксонов. Открытый каталожный фонд ВКМ (www.vkm.ru) содержит культуры более 750 родов и 3300 видов, идентифицированные в соответствии с современной системой классификации. Каталожный фонд ВКМ значительно превосходит каталогизированные фонды других микробных коллекций РФ по таксономическому разнообразию.

Услуги

Фонд ВКМ (http://www.vkm.ru/rus/Catalogue.htm) и наукоемкие сервисные услуги востребованы широким кругом пользователей в стране и мире. Ежегодно заключается около 150 договоров на предоставление штаммов и наукоемких сервисных услуг со сторонними организациями. По запросам организаций ежегодно предоставляется более 500 штаммов микроорганизмов, относящихся к различным родам и видам. ВКМ лидирует среди всех отечественных коллекций микроорганизмов по показателю цитирования штаммов фонда в публикациях и числу ссылок на штаммы в международных базах данных.

База для научных исследований

ВКМ сегодня располагает полным комплексом современных методов и оборудования, необходимых для точной идентификации микроорганизмов (в том числе на уровне вида), обнаружения и описания новых таксонов различных групп микроорганизмов (бактерии, археи, мицелиальные и дрожжевые грибы) в соответствии с международными стандартами. В числе новых методов ВКМ – метод МАЛДИ масс-спектрометрии.

Основные направления научных исследований

· Оценка биологического (генетического) разнообразия микроорганизмов слабоизученных экосистем, в т.ч., экстремальных.

· Введение в культуру и всестороннее изучение новых микроорганизмов, выявление и описание новых таксонов, совершенствование системы классификации, развитие методов идентификации.

· Поиск и изучение новых биополимеров, ферментов и вторичных метаболитов микробного происхождения, в том числе, перспективных для решения таксономических задач и практического использования в биотехнологии.

Научно-педагогическая деятельность

ВКМ является одним из центров повышения квалификации микробиологов из различных научных учреждений РФ и стран СНГ в области таксономии микроорганизмов и коллекционной деятельности. На базе ВКМ проходят практику и выполняют дипломные и диссертационные работы студенты, магистранты и аспиранты ПущГЕНИ и ряда других университетов страны. Специалисты ВКМ читают основные и факультативные курсы для магистрантов ПущГЕНИ, регулярно проводят мастер-классы по коллекционному делу во время тематических научных конференций.

Квалификация и профессиональная репутация специалистов ВКМ

В составе отдела ВКМ работают 5 докторов наук, 17 кандидатов наук, 17 специалистов с высшим образованием и высококвалифицированный технический персонал. Показателями профессиональной репутации специалистов отдела могут служить их избрание и работа в разные периоды времени в составе редколлегий российских и зарубежных научных журналов (FEMS Microbiol. Lett., Int. J. Syst. Evol. Microbiol., Микробиология, Успехи современной биологии и др.), Подкомитетов по таксономии отдельных групп микроорганизмов Международного комитета по систематике прокариот (ICSP), Исполкома Всемирной федерации коллекций культур (WFCC), экспертов ОЭСР по вопросам доступа к генетическим ресурсам, группы разработчиков единой информационной системы биоресурсных центров, присвоение зарубежными учеными названий новых родов и видов микроорганизмов в честь микробиологов из ВКМ и т. п.

Наиболее значимые результаты научных исследований

• Результаты приоритетных исследований антифунгальной активности дрожжевых грибов выявили высокую степень корреляции группирования штаммов по чувствительности к микоцинам, последовательностям генов 28S рРНК и ряду других весомых таксономических характеристик. Метод микоцинотипирования эффективен в качестве таксономического инструмента и позволяет, в частности, выявлять гетерогенность ранее описанных видов дрожжей, сходных по традиционным таксономическим признакам.

• Результаты приоритетных исследований анионных полимеров клеточных стенок актинобактерий показали наличие высокой степени корреляции состава и структур полимеров с филогенетическим положением организмов. Полученные результаты открывают новые возможности для выявле6ния и описания новых видов среди филогенетически близких бактерий (более 99.5% сходства генов 16S рРНК), сходных с известными видами по традиционным фенотипическим признакам. Обнаружено более трех десятков новых структур гликолимеров, в их числе, нового класса – тейхулозоновые кислоты. (Совместно с Институтом органической химии РАН и Биологическим факультетом МГУ им. М.В.Ломоносова).

• Впервые исследовано разнообразие культивируемых и некультивируемых грибов (метагеномика) в образцах глубинных многолетнемерзлых отложений Арктики и Антарктики. Выявлены грибные комплексы и доминирующие виды более чем в 200 изученных образцах отложений различного генезиса, возраста, глубины залегания и географии. Результаты исследований представляют интерес в связи с оценкой численности и разнообразия микроорганизмов на планете и перспективами их использования в биотехнологии.

• Впервые обнаружены и изучены жизнеспособные микроорганизмы (бактерии, археи, грибы) в незамерзающих хлоридно-натриевых линзах рассолов (криопэгах) многолетнемерзлых отложений Восточной Сибири – уникальных природных объектах, характеризующихся постоянной низкой температурой (от -9 до -11оС), высокой соленостью и изолированностью от воздействия внешних факторов. Результаты исследований представляют интерес в связи с выяснением механизмов, обеспечивающих выживание и активность микроорганизмов при отрицательных температурах, и перспективами их биотехнологии.

• В образцах многолетнемерзлых отложений Арктики, содержащих метан, найдены и изучены метанобразующие археи, представители не известных ранее таксонов. Результаты исследований свидетельствуют об активном состоянии метаногенов в течении геологически значимого времени до периода промерзания и являются важным аргументом в пользу биогенного происхождения метана в вечной мерзлоте Арктики.

• Обнаружены новые бактериальные ассоцианты фитопатогенных галлообразующих нематод подсемейства Anguininae. В большинстве случаях доминирующие бактерии оказались представителями новых родов семейства Microbacteriaceae (описанными впоследствии как Agreia, Herbiconiux, Leifsonia), или относились к новым видам известных родов (Clavibacter, Curtobacterium, Microbacterium, Rathayibacter).

• Впервые осуществлена оценка мирового коллекционного фонда культивируемых грибов. На основе созданной базы данных FungalDC (www.vkm.ru), интегрированной с основными информационными ресурсами мира по грибам (WDCM, Index Fungorum, MycoBank, GenBank, StrainInfo), разработана информационно-справочная система, обеспечивающая доступ к имеющейся в мире информации (таксономия, номенклатура, биотехнология, вопросы биобезопасности и др.) по различным видам грибов.

Публикации

Избранные публикции коллектива, касающиеся коллекционной деятельности

• Евтушенко Л.И., Голубев В.И., Озерская С.М., Соколов А.П., Калакуцкий Л.В. Всероссийская коллекция микроорганизмов: путь к биологическому ресурсному центру. История науки и техники. 2015, 5:19-36.

• Калакуцкий, Л. В. Доступ к генетическим ресурсам. Вестник Российской Академии наук, 2001, 71: 396-404.

• Калакуцкий, Л. В. Обращение с микроорганизмами: правила писаные и неписаные. Вестник Российского фонда фундаментальных исследований. 2005, №2: 35-60.

• Калакуцкий Л.В., Озерская С.М. Биологические ресурсные центры: современное состояние в России и мире, проблемы организации, перспективы развития. Вестник биотехнологии и физико-химической биологии им. Ю.А.Овчинникова. 2011, 7(1): 28-40.

• Casaregola, S., Vasilenko, A., Romano, P., Robert, V., Ozerskaya, S., Kopf, A., Glöckner, F.O. & Smith, D. An information system for European culture collections: the way forward. SpringerPlus, 2016, 5: 772-782.

• Declerck S., Willems A., van der Heijden M.G., Varese G.C., Turkovskaya O., Evtushenko, L., Ivshina I., Desmeth P. PERN: an EU–Russia initiative for rhizosphere microbial resources. Trends in biotechnology. 2015, 33: 377-380.

• Kalakoutskii L.V. Microbial сulture сollections in Russia and former USSR - the сurrent ыituation and future prospects. Trends in Biotechnology, 1993, 11:443-450.

• Ozerskaya S.M., Vasilenko A.N, Verslyppe B., Dawyndt P. FungalDC: a database on fungal diversity in culture collections of the world. Inoculum, Suppl. to Mycologia. 2010, 61(3): 1-5.

• Schumann P., Kampfer P., Busse H.-J., Evtushenko L.I. Proposed minimal standards for describing new genera and species of the suborder Micrococcineae. Int. J. Syst. Evol. Microbiol., 2009, 59: 1823-1849.

• Vasilenko A., Ozerskaya S., Stupar O. Life science databases and possible interconnection with mBRC data. In: The 50th Anniversary of World Data Center for Microorganisms, p. 37. China, Beijing, September 6-8, 2016.

• Vasilenko A., Ozerskaya S., Stupar O. Current WFCC CC catalogues as a starting ground for networking efforts. WFCC Newsletter, 2011, 50: 5-15.

• Wu, L., Sun, Q., Sugawara, H., Yang, S., Zhou, Y., McCluskey, K., Vasilenko, A., Suzuki, K.-I., Ohkuma, M., Lee, Y., Vincent, R., Ingsriswang, S., Guissart, F., Desmeth, P., Ma, J. Global catalogue of microorganisms (GCM): a comprehensive database and information retrieval, analysis, and visualization system for microbial resources. BMC genomics, 2013, 14(1), 1.

• Wu L., Sun Q., Desmeth Ph., Sugawara H., McCluskey K., Smith D., Vasilenko A., Lima N., Ohkuma M., Robert V., Zhou Y., Li J., Fan G., Ingsriswang S., Ozerskaya S., Ma J. WDCM: an information infrastructure for the exploration and utilization of microbial strains preserved worldwide // Nucleic Acids Research. - 2017. - Vol. 45, N D1. – P. D611-D61

Некоторые выполненные проекты по коллекционной деятельности

• Таксономические исследования, развитие информационных ресурсов и научно-организационные мероприятия, направленные на повышение качества фонда и услуг Всероссийской коллекции микроорганизмов в интересах пользователей, 2012-2013, Госконтракт № 14.518.11.7069.

• Исследования и мероприятия, направленные на повышение качества фонда и услуг Всероссийской коллекции микроорганизмов (ВКМ), 2007-2008, Госконтракт № 02.518.11.7092.

• Создание информационной системы по номенклатуре и таксономии микроорганизмов, 1996-1998.

ИЗБРАННЫЕ ДОКУМЕНТЫ

коллекции микроорганизмов ФГУ ВГНКИ,

имеющей в активе ПБА III-IV групп патогенности (опасности)

Руководитель учреждения - доктор ветеринарных наук, профессор, академик РАСХН Панин Александр Николаевич

Название коллекции, специализация (бактерии, вирусы, грибы) –Всероссийская государственная коллекция штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве

Факс 8-495- 253-14-91

Адрес электронной почты: Vgnki-vet@

АдресWEB-сайта в Интернете:

Юридический адрес коллекции: Россия, 123022, г.Москва. Звенигородское шоссе, дом 5

Нормативно-правовое обеспечение деятельности коллекции

Основание создания коллекции (основополагающие документы) с указанием даты, номера

-дата основания коллекции- 18.08.1931 года постановление Коллегии Наркомзема СССР № 39

-постановление Правительства Российской Федерации - № 725-47 от 24.07.1996г.

-лицензия на вид деятельности с использованием ПБА III-IV группы патогенности (опасности) - № 77.99.15.001.Л.001108.08.05 от 30/08/2005 г. выдана руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Г.Г.Онищенко Срок действия до 30.08.2010 г.

-санитарно-эпидемиологическое заключение на работу с ПБА III-IV группы патогенности (опасности) и гельминтами III-IV группы патогенности (опасности) - санитарно-эпидемиологические заключения главного санитарного врача по г. Москве 1) на Отдел качества и стандартизации фармакологических лекарственных средств для животных и биологически активных препаратов - № 77.01.16.000.М.000007.01.09 от 11.01.2009г.,

действительно до 30.08.2010г.

2) на Отдел биотехнологии - № 77.01.16.000.М.000126.-1.09 от 12.01.2009г., действительно до 11.01.2012г. 3) на Отдел качества и стандартизации лекарственных средств против микозов и микотоксинов - №77.01.16.000.М.000141.01.09 от 13.01.2009г., действительно до 30.08.2010г.

4) на Отдел качества и стандартизации лекарственных средств против вирусных болезней животных - № 77.01.16.000.М.000016.01.09 от 11.01.2009г., действительно до 30.08.2010г.

5) на Отдел качества и стандартизации лекарственных средств против бактерийных болезней животных - № 77.01.16.000.М.000018.01.09 от 11.01.2009г., действительно до 30.08.2010г.

Наличие коллекции в перечне, утвержденном Постановлением Правительства Российской Федерации от 24.07.1996г. № 725-47 – уполномочена как коллекция по работе с производственными штаммами микроорганизмов, используемыми в промышленном изготовлении средств диагностики, терапии и специфической профилактики инфекционных болезней сельскохозяйственных животных и птиц

Основатель (учредитель) коллекции - МСХ РФ

- в ведомстве - да

- в международном справочнике - нет

Правовая основа обращения штаммов:

СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности(опасности) и возбудителями паразитарных болезней (М., Минздрав России, 2008г.).

- передача внутри коллекции – по распоряжениям руководителя подразделения

- передача внутри организации - по распоряжениям дирекции ФГУ ВГНКИ

- передача за пределы организации на территории России – производственных авирулентных штаммов - по заявкам, на договорной основе с разрешения дирекции ФГУ ВГНКИ; производственных контрольных (патогенных штаммов) – с письменного разрешения Россельхознадзора

- передача за пределы России (СП, Постановление Правительства, Список, утвержденный Президентом РФ, Экспорт контроль) – в последние годы передачи штаммов микроорганизмов за пределы России не осуществлялись

Наличие отдельного структурного подразделения, закрепленного Уставом учреждения, функционирующего в качестве коллекции - отдел мониторинга производственных штаммов микроорганизмов и безопасности, сектор – музей (хранилище) производственных штаммов

Ограничение доступа на территорию подразделения, обеспечение охраны – круглосуточная вневедомственная охрана, пропускная система

В настоящее время усилиями специалистов центра Коллекция формируется как депозитарий патогенных микроорганизмов. В коллекционном фонде содержатся:

5961 изолятов вирусов – представителей семейств Arenaviridae, Filoviridae, Togaviridae, Flaviviridaе, Rhabdoviridae, Retroviridae, Picornaviridae, Herpesviridae, Reoviridae, Paramyxoviridae, Orthomyxoviridae, Coronaviridae, Poxvirida, в том числе и особо опасные патогенны Ласса, Марбург, Эбола.

5516 изолятов бактерий – Chlamydia trachomatis, Mycobacterium tuberculosis, Corynebacteriaceae, Spirochaetaceae, Enterobacteriaceae, Staphylococcocaceae, Enterococcocaceae, Pseudomonadacea, аэробные неферментирующие грамотрицательные палочки и кокобациллы.
плазмиды – оригинальные авторские векторные конструкции.

Целью работы коллекции является обеспечение правовой охраны штаммов микроорганизмов, а также гарантированное сохранение микроорганизмов в жизнеспособном состоянии и создании условий для длительного хранения с целью стандартизации исследований с различными микроорганизмами.

В задачи исследований коллекции входит:

накопление и гарантированное сохранение вирусов, в том числе и выделенных на территории Республики Беларусь;
	хранение штаммов, подлежащих элиминации в окружающей среде;
подбор оптимальных методов консервации и длительного хранения вирусов;
	гармонизация правил депонирования оригинальных штаммов вирусов, выделенных на территории республики Беларусь референс-штаммов, штаммов-продуцентов вакцинных и лечебных препаратов, генетически измененных штаммов вирусов, а также рекомбинантных плазмид, содержащих вирусспецифические вставки;
обеспечение международного сотрудничества и обмена информацией по вопросам выполнения Будапештского договора по депонированию и поддержанию штаммов микроорганизмов, предоставления доступа и пересылки штаммов, в соответствии с международными соглашениями и стандартами.

Сотрудники Коллекции организуют и проводят работы по подготовке ежегодной информации в рамках Конвенции о запрещении разработки, производства и накопления запасов бактериологического (биологического) и токсинного оружия (КБТО), а также участвуют в системе контроля трансграничного перемещения патогенных микроорганизмов.

Общую информацию о коллекции можно скачать здесь.

Коллекция включена в Государственный регистр информационных ресурсов 21.11.2012 № 1761203264

Адрес:
ул. Филимонова, д. 23
220114, г. Минск, Республика Беларусь

Сибирский институт физиологии и биохимии растений
СО РАН (СИФИБР СО РАН)

Россия, 664033, г. Иркутск,
ул. Лермонтова, д.132
(3952) 42-67-21

Коллекция микроорганизмов

Поддерживается в подразделении

Лаб. физиологии трансгенных растений

Лаб. физиологии трансгенных растений
Лаб. физиол. генетики

Лаб. физиологии трансгенных растений

Лаб. генетической инженерии растений

Лаб. физиологии трансгенных растений
Лаб. физиол. генетики

Лаб. физиологической генетики

EHA105 содержит AtHSP101↑

E. Vierling (University of Arizona, USA)

Лаб. физиологической генетики

EHA105 содержит AtHSP101↓

Лаб. физиологической генетики

штамм Az d10, ВКМ В-2272 Д

Лаб. физиологии устойчивости растений

Bacillus megaterium var. phosphaticum

штамм Pl-04, ВКМ В-2357 Д

Лаб. физиологии устойчивости растений

Лаб. растительно-микробных взаимодействий

РАСХН, С.-Петербург, Пушкин

Лаб. физиологии устойчивости растений

Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus

Лаб. растительно-микробных взаимодействий

Лаб. физиологической генетики

Университет Гумбольдта, Берлин, Германия

Лаб. генетической инженерии растений

K. Cunningham (Johns Hopkins University, Baltimore, USA)

Лаб. физиологической генетики

dH5α с плазмидой pKC147

Лаб. физиологической генетики

JM103 с плазмидой pTZ19R

Лаб. физиологической генетики

JM103 с плазмидой pEZZ18

Лаб. физиологической генетики

JM103 с плазмидой pTZ19

Лаб. физиологической генетики

SURE с плазмидой pRSET A

Лаб. физиологической генетики

SURE с плазмидой pRSET B

Лаб. физиологической генетики

SURE с плазмидой pRSET C

Лаб. физиологической генетики

SURE с плазмидой pQE60

Лаб. физиологической генетики

Лаб. физиологической генетики
Лаб. растительно-микробных взаимодействий.
Лаб. генетической инженерии растений

XL-1-BLUE с плазмидой pBlue-Script

Лаб. физиологической генетики

Лаб. растительно-микробных взаимодействий

Выделен из клубеньков Oxytropis riphylla Pallas (Остролодочник трехлисточковый)

Лаб. физиол. устойчивости растений

Выделен из клубеньков Hedysarum zundukii (Копеечник зундукский)

Лаб. физиол. устойчивости растений

Лаб. растительно-микробных взаимодействий

Rhizobium legumi-nosarum bv.viceae

RCAM1064(248б), неэффективен для гороха,бобов, чины, вики и чечевицы, высокая конкурентоспособность.

ВНИИСХМ РАСХН, С.-Петербург, Пушкин

Лаб. физиологии устойчивости растений

Rhizobium legumi-nosarum bv.viceae

249б (неэффективный по азотфиксации)

ВНИИСХМ РАСХН, С.-Петербург, Пушкин

Лаб. физиологии устойчивости растений

Rhizobium legumi-nosarum bv.viceae

RCAM1022 (245a), штамм-эталон, эффективный азотфиксатор

ВНИИСХМ РАСХН, С.-Петербург, Пушкин

Лаб. физиологии устойчивости растений

Rhizobium legumi-nosarum bv.viceae

CIAM 1026 (250a) (эффективный)

ВНИИСХМ РАСХН, С.-Петербург, Пушкин

Лаб. физиологии устойчивости растений

Pseudomonas sy-ringae pv. pisi

1845 (штамм вирулентный и токсичный для двудольных);

2 (штамм получен из однодольных).

ВНИИФ, Московская область

Лаб. физиологии устойчивости растений

Поддерживается в подразделении

Лаб. физиологической генетики

Д.А. Кнорре (Институт физико-химической биологии им. А.Н. Белозерского, МГУ, Москва)

Лаб. физиологической генетики

K. Cunningham (Johns Hopkins University, Baltimore, USA)

Лаб. физиологической генетики

H. Iida (Tokyo Gakugei University, Japan)

Лаб. физиологической генетики

L. Sabova (Cancer Research Institute, Slovakia)

Лаб. физиологической генетики

J. Thevelein (Instituut voor Plantkunde en Microbiologie, Belgium)

Лаб. физиологической генетики

S. Lindquist (Chicago University, USA)

Лаб. физиологической генетики

Bопросы по работе сайта отправляйте по адресу: iio@sifibr.irk.ru

Для повышения удобства работы с сайтом СИФИБР СО РАН использует файлы cookie. В cookie содержатся данные о прошлых посещениях сайта. Если вы не хотите, чтобы эти данные обрабатывались, отключите cookie в настройках браузера.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при изготовлении средств специфической профилактики и диагностики вирусной геморрагической болезни кроликов.

Вирусная геморрагическая болезнь кроликов - ВГБК (некротический гепатит, геморрагическая пневмония кроликов) - остро протекающая высококонтагиозная болезнь вирусной этиологии, наносящая значительный экономический ущерб кролиководству.

ВГБК характеризуется явлениями геморрагического диатеза во всех органах кроликов, в особенности в легких и печени. Поражаются кролики старше 1,5-месячного возраста. О заболевании этим вирусом животных других видов и человека не сообщалось. При ВГБК заболеваемость достигает 70-80%, а летальность - 90-100%. Болезнь широко распространена в мире, где есть восприимчивые животные, европейские кролики (Oryctolagus cuniculus).

Экономический ущерб, наносимый ВГБК, складывается из-за высокого процента гибели взрослых особей и молодых кроликов с момента отъема.

Вакцинопрофилактика ВГБК занимает основное место в комплексе противоэпизоотических мер, направленных на борьбу с этим заболеванием. Для вакцинопрофилактики вирусной геморрагической болезни кроликов применяют инактивированные моно- и ассоциированные вакцины. Рекомбинантные вакцины против ВГБК в настоящее время тоже получены, но коммерчески широко не применяются.

Целью настоящего изобретения явилось получение нового производственного и диагностического штамма вируса геморрагической болезни кроликов, сохраняющего свои иммунобиологические свойства после инактивации и пригодного для изготовления высокоиммуногенных вакцинных препаратов, диагностических систем (из неконцентрированного вируса), способных защитить поголовье европейского кролика (Oryctolagus cuniculus) от эпизоотического возбудителя геморрагической болезни кроликов и идентифицировать его, при заносе на территорию Российской Федерации.

Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в расширении арсенала штаммов вируса геморрагической болезни кроликов, отличающихся геномом и иммунобиологическими свойствами, обладающих высокой биологической антигенной и иммуногенной активностью, сохраняющих свои нативные иммунобиологические свойства после инактивации и пригодных для изготовления высокоэффективных вакцинных, лечебных и диагностических препаратов.

Сущность предлагаемого изобретения поясняется примерами его исполнения.

У инфицированных кроликов через 15-25 ч отмечали характерные клинические признаки болезни: угнетение, отказ от корма, повышение температуры тела до 40,7°C, носовое кровотечение и гибель в течение 24-96 ч. Трупы животных погружали на 5-10 мин в раствор марганцевокислого калия (1:10000), затем во вскрывочной комнате инфекционного вивария подвешивали на вешалки, снимали шкурки, обрабатывали брюшную полость раствором марганцевокислого калия (1:10000), разрезали брюшные мышцы по белой линии, извлекали печень, отделяли желчный пузырь. Печень брали только от трупов, при вскрытии которых обнаружены специфические паталогоанатомические изменения, свойственные ВГБК: геморрагии в трахее, геморрагическая пневмония, кровоизлияния под капсулой почек, селезенки, печень дряблой консистенции, которая легко рвется и имеет желто-коричневый цвет, местами с красноватым оттенком. Некроз печени и увеличение селезенки - первичные поражения. Острое поражение легких - результат венозного тромбоза, вызывающего острый отек, пенистый серозный или с примесью крови транссудат, который заполняет пеной трахею и выделяется постоянно из ноздрей. Инфаркты наблюдали почти во всех органах, а почки полностью инфарктны и имеют темно-коричневый цвет.

Материал помещали в стерильные флаконы, плотно укупоривали, снаружи дезинфицировали 5%-ным раствором хлорамина, помещали в термос со льдом и доставляли в стерильный бокс.

Из полученной от павших кроликов печени готовили 10%-ную вирусную суспензию на забуференном физрастворе (pH 7,0-7,4). В материал вносили хлороформ (конечная концентрация 2%) и помещали в холодильник при 4°C на 18 часов. Затем суспензию печени центрифугировали в течение 1 ч при 6000 g, при 4°C. Вирусная суспензия, используемая для изготовления тканевой инактивированной вакцины, должна иметь активность в РГА не менее 1:1280-1:2560 ГАЕ.

Инактивацию вируса проводили с помощью 4%-ного раствора формалина. Исходя из концентрации формальдегида готовили 4%-ный раствор формалина (т.е. 1,1-1,4% раствор формальдегида) на стерильной дистиллированной воде. Раствор формалина готовили в стеклянных бутылях в день составления сырья для вакцины и вносили в вирусную суспензию до конечной концентрации 0,14-0,1% формальдегида.

Инактивировали вирус при температуре 27-28°C в течение 3-х суток с периодическим перемешиванием (1 раз в час в течение 5 мин).

Началом инактивации считали время после доведения температуры в емкости до 27-28°C и добавления формалина. После инактивации формалином к суспензии при постоянном перемешивании добавляли метабисульфит натрия (1М раствор) до полной нейтрализации остаточного формальдегида.

Из инактивированного материала брали пробу для проверки стерильности, активности и полноты инактивации. Для проверки полноты инактивации двум кроликам массой 2,5-3,0 кг, не имеющим антител к вирусу геморрагической болезни кроликов, вводили по 3,0 см 3 внутримышечно инактивированный материал. Животные в течение 7 суток наблюдения оставались здоровыми.

После окончания инактивации вируссодержащей суспензии в емкость с вирусной суспензией добавляли гель гидрата окиси алюминия (ГОА) с 3% сухого остатка после размола из расчета на 1000 см 3 суспензии 150 см 3 ГОА (20%) при pH 7,2-7,4 и температуре 4-8°C. Сорбцию проводили в течение 1-2 часов с периодическим перемешиванием. Вакцину хранили при 8°C до получения результатов контроля препарата. Смесь перед фасовкой перемешивали при температуре 10-12°C в течение 1 часа.

Содержание антигена в дозе вакцины на уровне 640-1280 ГАЕ является его оптимальным количеством в препарате, обеспечивающим достижение технического результата.

Полученную вакцину проверяют на внешний вид, стерильность, уровень pH, полноту инактивации вируса, иммуногенность и безвредность.

Вакцина представляет собой прозрачную жидкость серо-коричневого цвета с рыхлым осадком, образующимся при хранении, который при встряхивании легко разбивается в гомогенную взвесь.

Стерильность вакцины определяют в соответствии с ГОСТ 28085-89. Безвредность препарата определяют путем его введения четырем кроликам внутримышечно по 3 см 3 . Вакцина считается безвредной, если она не вызывает гибель или заболевания кроликов, а также изменений некротического характера на месте введения в течение 14 суток наблюдения.

Полноту инактивации вируса в вакцине проверяют на 4 кроликах, которым вводят внутримышечно в область средней трети бедра по 3,0 см 3 .

За кроликами ведут наблюдение в течение 10 дней. Вакцину считают не содержащей инфекционного вируса, если она не вызывает гибели кроликов от вирусной геморрагической болезни в течение 10 суток после введения препарата.

В используемых флаконах с вакциной определяют pH, средняя величина показателей должна быть в пределах 7,2-7,4.

Гемагглютинирующую активность антигена каждой серии вакцины определяют в реакции гемагглютинации (РГА) с эритроцитами человека 0 (I) группы и выражают в гемагглютинирующих единицах. Гемагглютинирующий титр в вакцине должен быть не ниже 8,0 log 2 , что соответствует разведению 1:256 ГАЕ.

Таким образом, приведенная выше информация свидетельствуют о выполнении при использовании предлагаемого изобретения следующей совокупности условий:

1. Molecular epidemiology of Rabbit haemorrhagic disease virus; Moss S.R., Turner S.L., Trout R.C., White P.J., Hudson P.J., Desai A., Armesto M., Forrester N.L., Gould E.A.; J. Gen. Virol. - 2002. - Vol.83. - P.2461-2467.

2. Manual of standards Diagnostic Tests and Vaccines 2004; PART 2; SECTION 2.8.; CHAPTER 2.8.3. RABBIT HAEMORRHAGIC DISEASE.

3. Патент РФ № 2077340 от 06 августа 1993 г.

4. Патент РФ № 2039570 от 20 июля 1995 г.

5. Авторское свидетельство № 294945 от 22.08.1989 г.

Классы МПК:	C12N7/00 Вирусы, например бактериофаги; их композиции; приготовление или очистка их A61K39/125 Picornaviridae, например calicivirus
Автор(ы):	Луницин Андрей Владимирович (RU) , Николаев Александр Владимирович (RU) , Глухарева Елена Николаевна (RU) , Малоголовкина Нина Владимировна (RU) , Коломыцев Алексей Александрович (RU) , Бобровская Нина Константиновна (RU) , Колбасов Денис Владимирович (RU) , Гузалова Анна Григорьевна (RU)
Патентообладатель(и):	Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии (RU)
Приоритеты:

Таблица 2
Гемагглютинирующая активность тканевой инактивированной гидроокисьалюминиевой вакцины
№ п/п	Серия вакцины	Гемагглютинирующая активность (ГАЕ)
1	Экспериментальная серия № 10 от 16.12.2003	1:2048
2	Производственная серия № 13 от 27.04.2004	1:1024

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Читайте также: