Иммунный ответ к антигенам вируса ящура

Ящур — высококонтагиозное, в большинстве случаев остропротекающее заболевание парнокопытных животных, сопровождающееся образованием везикул и эрозий на слизистых оболочках пищеварительного тракта, в межкопытной щели и венчике, а также на других безволосых участках кожи.

Ящур пока еще остается проблемой для многих стран. Раньше профилактика его основывалась главным образом на вакцинации крупного рогатого скота. Вакцинацию мелкого рогатого скота и свиней хотя и проводили, но часто недостаточно эффективно.

Вирус ящура характеризуется большой вариабельностью антигенной структуры. Различают семь антигенных типов вируса: О, А, С, SAT1, SAT2, SAT3 и Азия 1. Иммунизация или переболевание одним из них не создает защиты против других типов вируса ящура. Кроме того, существуют несколько десятков подтипов и вариантов вируса, существование которых затрудняет специфическую профилактику данного заболевания.

После переболевания вирус ящура может быть обнаружен у КРС спустя более года, у овец — спустя 6 месяцев. Персистенция вируса не обнаружена у свиней. Вирус ящура удалось выделить из глоточно-пищеводной области крупного рогатого скота через 539 дней после заражения. Однако клинически здоровые вирусоносители не являются эффективными распространителями вируса. Во время персистентной инфекции наблюдается быстрая эволюция вируса. Точечные мутации могут сопровождаться изменением вирулентности и антигенности.

Из четырех структурных белков VP1, VP2, VP3 и VP4, образующих капсид вируса ящура, иммунодоминантным белком является VP1. Оказалось, что иммуногенность вакцины связана с полными вирионами (КОБ-частицами). Ан-тигенность вируса — значительно варьирует в зависимости от типовой и вариантной принадлежности. При испытании трехвалентной инактивированной вакцины установлено, что антиген А22 в 30 раз более иммуногенен, чем антиген О1. Антиген типа С3 занимал промежуточное положение. Для создания одинакового защитного эффекта требовалось 220 нг 1408-антигена типа О; 4,36 нг — типа С и 2,4 нг типа А. Продолжительность колострального иммунитета также зависит от типа вируса. Ревакцинация индуцирует более выраженный иммунный ответ, чем первичная вакцинация, при этом также отмечается расширение антигенной специфичности. Например, у животных, вакцинированных однократно, развивается выраженный типоспецифический иммунитет на введение только цельновирионного антигена (1408-антигена). В отличие от первичного иммунного ответа, ревакцинация гетеротипичными антигенами меньшей активности стимулирует образование гомо- и гетеротипических антител. У вакцинированных животных после реиммунизации цельновирионными (HOS-антигенами), инактивированными гомо- и гетеротипичными вакцинами наблюдается повышение уровня ВНА, выработанных на первичное введение антигена, а также появляются ВНА на вновь введенный антиген.

Основное значение в защите животных от заболевания принадлежит гуморальным факторам иммунитета. Местный клеточный иммунитет проявляется в перые дни после заражения и ярко выражен к моменту генерализованного афтообразования. Возможную роль на этом этапе играет опсонизация макрофагов.

Антигенспецифические Т-клетки играют важную регуляторную роль в развитии гуморального иммунитета. ВНА у КРС можно обнаружить через 3—4 дня после заражения. Они достигают максимума через 10—14 дней и удерживаются на этом уровне 30—40 дней, а затем их уровень постепенно снижается.

Клиническое выздоровление коррелирует с образованием антител. К концу первой недели вырабатываются ВНА, а спустя еще несколько дней — комплементсвязывающие антитела (КСА), и затем преципитирующие антитела (ПА). ВНА сохраняются в течение нескольких месяцев, а КСА и ПА — 2—3 месяца. IgM нейтрализуют гомо- и гетерологичные типы вируса, IgG — только гомологичный тип вируса или его субтипы.

У переболевших животных, в отличие от привитых инактивированной вакциной, присутствуют антитела к полимеразе. Иммунитет обычно длится около года и реже дольше. Он еще сохраняется после исчезновения нейтрализующих антител и зависит от свойств инфицирующего штамма вируса, а также от реактивности животного. Он всегда направлен против гомологичного типа вируса. Против вариантов данного типа, как правило, также образуется хороший иммунитет. При очень напряженном иммунитете может проявляться некоторая устойчивость к заражению другими типами вируса.

С развитием методов культивирования вируса был создан ряд высокоэффективных инактивированных вакцин, отличающихся способом размножения, инактивацией вируса и качеством адъювантов. Для крупного и мелкого рогатого скота, как правило, применяют сорбированные вакцины, а для свиней — эмульгированные. Современные инактивированные вакцины против ящура производят из вируса, выращенного в суспензии клеток. Вирус инактивируют N-ацетилэтиленимином и в качестве адъюванта добавляют ГОА или готовят двойную масляную эмульсию. Систематическое применение инактивированной вакцины во многих европейских странах привело к ликвидации болезни. Первоначально вакцину готовили из вируса больных животных. Затем выращивали в экплантах эпителия языка КРС, а позже в клеточных культурах. В начале использовали первичную культуру клеток почки телят, а затем линию клеток почки молодого хомяка. Последняя клеточная система была адаптирована к производству инактивированной противоящурной вакцины. Наконец появилась самая современная технология крупномасштабного культивирования в суспензии клеток. В основном используют линию клеток ВНК 21 или, реже, линию клеток эмбриона хомяка NIL-2 или IFA3.

Выбор производственного штамма вируса зависит от эпизоотической ситуации в соответствии с циркулирующими типами вируса. Актуальные эпизоотические штаммы вируса ящура предварительно размножали в однослойных культурах клеток почек крупного рогатого скота или свиней, а затем адаптировали к размножению в суспензионной культуре клеток. После размножения в суспензионной культуре вирус подвергают осветлению, фильтрации, инактивации, очистке и концентрированию. Все операции проводят при рН=7,0—8,0.

Содержание целых вирусных частиц (146S) является главной характеристикой вирусного сырья, определяющей иммуногенную активность вакцины. При составлении вакцины необходимое количество антигена в прививной дозе определяют исходя из концентрации 146S компонента. Необходимо иметь в виду, что VP1 чувствителен к разрушению протеазами, которые могут снижать его иммуногенность в процессе инактивации вируса.

Инактивация вируса является одним из наиболее критических этапов изготовления противоящурнои вакцины. Многие вспышки ящура в Европе в 1980-х годах были связаны с применением инактивированной вакцины. Первоначально использовали формальдегид для инактивации вируса адсорбированного на ГОА. По мере совершенствования эта система в основном была заменена использованием веществ, обладающих кинетикой инактивации первого порядка из группы азиридинов, и в первую очередь диаметром этиленимина. В идеале эта процедура выполняется дважды в различных сосудах.

Процесс инактивации контролируют титрованием вируса в чувствительной культуре клеток, спектрофотометрическим анализом и серологически.

С целью уменьшения объема и повышения эффективности вакцины используют концентрированный и частично очищенный вирусный антиген. После инактивации вирус в производственных условиях концентрируют ультрафильтрацией, или полиэтиленгликолем, или полиэтиленоксидом, что дает возможность повысить концентрацию антигена в десятки и сотни раз.

Безопасность готовой вакцины определяют на естественно восприимчивых серонегативных животных, а элюированный из нее антиген — в чувствительной культуре клеток. При 40°С вакцина сохраняет специфическую активность в течение 1 года.

Адъювант добавляют к инактивированной забуференной вирусной суспензии. В жидком виде (после адсорбции инактивированного вируса на ГОА — А1(ОН)3 и добавления сапонина) вакцину широко используют в мире для иммунизации жвачных. В связи с недостаточным иммунитетом после применения такой вакцины у свиней им стали применять концентрированную вакцину с масляным адъювантом. Такую же вакцину применяли для КРС в Южной Америке. Совершенствование такой вакцины было направлено на снижение реактогенности. Эмульгированная вакцина была необходима для зон, где требовался длительный иммунитет у КРС и преодоление материнского иммунитета. Простая эмульсия вода в масле получена эмульгированием жидкого раствора антигена с легким минеральным маслом и эмульгирующим агентом. Более легко вводимый препарат получают путем дальнейшего эмульгирования во второй водной фазе до получения стабильной эмульсии вода в масле в воде (двойная масляная эмульсия — DOE). DOE вакцина против ящура успешно применялась для иммунизации КРС и свиней. Ежегодно в мире методом суспензионного культивирования в перевиваемых клетках с использованием автоматизированных реакторов большой емкости производили 800-1000 млн доз вакцины.

Однократное введение инактивированной вакцины сопровождается кратковременным иммунитетом продолжительностью 3—6 мес. С целью более надежной иммунизации животных обычно первоначально вакцинируют дважды с интервалом 2—4 недели. Ревакцинацию проводят через 4—12 месяцев в зависимости от эпизоотической обстановки, качества вакцины и возраста животных.

- Вернуться в оглавление раздела "Микробиология."

При парентеральной вакцинации КРС противоящурной вакциной уровень местного иммунитета в большей степени, чем гуморального, зависит от концентрации иммунизирующего антигена вируса и количества адъюванта в прививной дозе. Ревакцинация животных даже меньшим, чем прививаемая доза, объемом вакцины способствует усилению местного иммунитета, в то время как уровень ВНА остается неизменным. Эго, видимо, указывает на относительную автономность местного иммунитета у КРС при профилактической вакцинации. К концу 1-й нед вырабатываются ВНА, а спустя еще несколько дней - КСА и затем ПА. ВНА сохраняются в течение нескольких месяцев, а КСА и ПА - 2-3 мес.

У животных-реконвалесцентов в отличие от привитых инактивированной вакциной отсутствуют АТ к вирусиндуцированной полимеразе.

Иммунитет обьино длится около года и даже дольше. Он еще сохраняется после исчезновения ВНА и зависит от свойств инфицирующего штамма вируса, а также от реактивности животного и всегда направлен против гомологичного типа вируса.

Доказана возможность пассивной передачи поствакцинального клеточного иммунитета. Показано участие цитотоксических лимфоцитов в ранние сроки формирования противо- ящурного иммунитета. Клеточный иммунитет связан с функционированием лимфоцитов, рецепторного аппарата и соединения их с антигеном. За клеточный иммунитет отвечают Т- клетки (50, 58, 73, 74).

В Российской Федерации и странах СНГ для специфической профилактики ящура применяют гидроокисьалюминиевую вакцину, которую готовят из инактивированного вируса, культивируемого в переживающей ткани слизистой оболочки языка не иммунного к ящуру КРС (метод Френкеля), а также из вируса, полученного в суспензионной культуре клеток ВНК-21/13. Вакцины содержат инактивированный формалином вирус и сообщают иммунитет взрослым животным до 4 мес.

Вирус в производственных условиях концентрируют ультрафильтрацией, полиэтиленг- ликолем или полиэтиленоксидом, что дает возможность повысить концентрацию антигена в десятки и сотни раз (44).

Первая инактивированная вакцина была предложена Вальдманом и Кобе в 1938 г. В дальнейшем эта вакцина была модифицирована в различных вариантах (81). В настоящее время для крупного и мелкого рогатого скота, как правило, применяют сорбированные, а для свиней - эмульгированные вакцины. Трехвалентная ГОА-формолвакцина из ВЯ типа А №550, О №1618 и С №564 авирулентна, безвредна, стерильна и отличается выраженной иммуногенной активностью (74, 75, 76).

Выраженный иммунитет у привитых животных наступает на 10-14-й день и достигает максимума через 3-4 нед. Иммунитет у взрослых животных длится 6-12 мес. КРС обьино ревакцинируют 1 раз, свиней - 2 раза в год. ВНА в сыворотке крови появляются уже к концу 1-й нед, достигают максимального титра в 3-5 нед, затем их концентрация постепенно снижается. При систематической иммунизации взрослых животных против ящура инактивированными моновакцинами у них поддерживается стабильный уровень АТ не ниже 4,5 log2 на протяжении 6 мес. В течение последующих 3 мес идет медленное снижение тнтров АТ до 3,5-

3,7 log2 к концу 6-го мес, что может служить основанием для уточнения схемы вакцинации молодняка этого возраста (56).

Колостральный иммунитет хорошо выражен, однако телята, не получавшие молозиво, не имеют сывороточных АТ, несмотря на то, что коровы были иммунизированы. После приема молозива титр АТ в сыворотке телят больше, чем в сыворотке матерей. АТ у телят сохраняются в течение 5 мес (39), хотя пассивная защита продолжается до 3-х мес (16). Продолжительность колострального иммунитета также зависит от типа вируса. Материнские АТ могут мешать образованию иммунитета у потомства.

Механизм протективного иммунитета к ВЯ in vivo отличается от механизма нейтрализации вируса in vitro (38). Образование ВНА у животных-реконвалесцентов вызывают только полные вирионы, (МОБ-частицы), а не их компоненты. На этом основании об иммуно- генности инактивированных вакцин можно судить по концентрации 140S антигена (32).

Опубликован ряд сообщений по усовершенствованию препаратов для профилактики ящура. Разработаны методы оценки производственных штаммов ВЯ для инактивированных вакцин. Примененный принцип оценки штаммов и метод их отбора рекомендован авторами для штаммов любого назначения при условии корректировки критериев оценки и коэффициентов их значимости (21).

Универсальная эмульсионная вакцина создает достаточно, напряженный иммунитет у супоросных свиноматок и обеспечивает их защиту от экспериментального ящура в первые дни после опороса при двукратной прививке. Поросята, родившиеся от 2-кратио привитых свиноматок, в большинстве своем не заболевали и оставались живы при контакте с зараженными матками. Введение таким поросятам инактивированной вакцины в 3-дневном возрасте сопровождается накоплением активных противоящурных АТ (20).

В настоящее время вакцинология переживает этап своего бурного развития. Так, для борьбы с ящуром на смену традиционным инактивированным вакцинам, отличающимся высокой профилактической эффективностью при их систематическом и массовом применении, разрабатываются новые препараты. Главная проблема при этом состоит в том, что современная технология изготовления вакцин не обеспечивает иммунного ответа адекватного по напряженности с иммунным ответом при естественной ящурной инфекции (9).

Быстрая защита от ящура супоросных и подсосных свиноматок обеспечивается препаратом из культурального ВЯ, инактивированного димером ЭИ, очищенного и концентрированного ПЭГ. Стерильный антиген вводили животным внутримышечно за ухом. Контрольное заражение проводили свиным афтозным вирусом в дозе 104 ИД50/0,2 мл под слизистую языка или венчик (59).

В настоящее время в качестве инактивантов используют ацетилэтиленимин (АЭИ) и бинарный этиленимин (Б ЭИ, диэтиленимин), поскольку они в отличие от формалина позволяют готовить более авирулентные вакцины, а АЭИ менее токсичен, чем БЭИ.

Кроме обычно применяемых методов инактивации ВЯ формальдегидом, предложен оригинальный метод инактивации его собственной эндонуклеазой. Для этого вирусную суспензию смешивают с 0,5М и 0,1М трис-буферным р-ром, pH смеси доводят до 8,5, после чего ее фильтруют через мембранный фильтр (0,45 мкм) и инкубируют при температуре 26 или 37°С. Через 4-5 ч инкубации при 37°С инфекционная активность вируса полностью подавляется. Д ля такой инактивации вируса при меньшей температуре необходимо более длительное время инкубации. РНК вируса в этих условиях полностью разрушается. В отличие от формолвакцины в инактивированной эндонуклеазой вакцине полностью сохраняются эпитопы протективного АГ вируса (16). Установлено, что иммуногенность инактивированной вакцины в значительной степени зависит от наличия и вида адъюванта. Включение ГОА в состав вакцины увеличивает ее активность в десятки раз (26). Для крупного и мелкого рогатого скота в качестве адъюванта применяют ГОА с сапонином (41).

Для свиней применяют инактивированные вакцины. Естественный иммунодефицит у свиней удалось преодолеть благодаря применению масляных адъювантов. Напряженный и продолжительный иммунитет у свиней наступал после 2-кратной вакцинации. Свиней прививают начиная с 2-мес возраста и ревакцинируют спустя 4 мес. Колостральные АТ подавляют вакцинальный иммунитет, особенно если поросят прививают в первые 30 дн жизни. Вакцины с масляным адъювантом создавали и у телят более выраженный и продолжительный иммунитет, чем ГОА-вакцина (46, 47, 47а). Оказалась возможной одновременная вакцинация КРС против ящура и чумы. Если инактивированную поливалентную ГОА-вакцину против ящура и живую - против чумы вводить одновременно подкожно в область шеи с разных сторон, то образуется такой же иммунитет, как и при раздельной вакцинации против каждого заболевания (36). Живые вакцины против ящура не разработаны. Многочисленные попытки в этой области не дали положительных результатов. Аттенуированные штаммы, как правило, оказывались или слабоиммуногенными или же реверсибельньми.

Разработан метод оценки активности противоящурной вакцины по уровню ВНА. Установлена зависимость от активности вакцины уровня ВНА которая выражена графически. На основании этой зависимости составлены вспомогательные таблицы, позволяющие по установленному уровню ВНА определить иммуногенную активность вакцины (57, 57а, 58).

Генно-инженерные и синтетические вакцины. Сконструирован гибридный белок, содержащий две АГ детерминанты структурного белка VP1 ВЯ, встроенный белок pho Е, экспонированный на наружной мембране E. coli. Иммунизация морских свинок таким белком индуцировала высокий уровень антител и полностью защищала их от вирулентного вируса (24). Эти белки инициируют образование ВНА и обеспечивают защиту животных (15).

Находит реальное воплощение идея создания синтетической противоящурной вакцины.

Об этом свидетельствуют результаты поисков последних лет. Так, синтезирован пептид VP1-(142-158)-MAP (Multiple Antigen Peptide Sistem) состоящий из 2-х частей - лизиновой матрицы, включающей три уровня остатков лизина , следующих друг за другом, и 8 фрагментов последовательности аминокислот VP1-(142-158) ВЯ А22550. Введение морским свинкам 20 мкг пептида с адъювантом Фрейнда защищало их от заболевания ящуром при заражении гомологичным вирусом в дозе 500 ИД50. Овец иммунизировали 1-кратно в дозе 1 мг. Прн 2-кратном введении пептида КРС в дозе 1,5 мг с неполным адъювантом на основе синтетического масла индуцировался высокий уровень ВНА. Как после первой (титр ВНА 5,3-11,0 log2 НД50/0Л мл), так и после второй иммунизации (титр ВНА 10,2-11,0 log2 НДго/одМл) заражение гомологичным вирусом не вызывало заболевания животных (6).

Изучены АГ свойства более 40 синтетических пептидов и на основании проведенных исследований для разработки противоящурной вакцины рекомендованы пептиды - 142-155 и 136-159. Разработаны критерии выбора синтетических антигенов-аналогов аминокислотных последовательностей различных фрагментов VP1 ВЯ А22, предложена схема оценки их иммуногенных свойств (10). Описано конструирование рекомбинантных плазмид, в которых единичные или тандемные, АГ детерминанты ВЯ соединены с С-концевым фрагментом фактора некроза опухолей человека (69).

Оценка поствакцинального иммунитета. Максимальные титры (в PH) поствакцинальных АТ обычно отмечаются на 28-й день после вакцинации; их уровень не зависит от разведения вакцины (в диапазоне 1:1-1:16) и прямо коррелирует со специфическим протек- тнвным иммунитетом (35).

На модели морских свинок показано, что нммуногенность противоящурной вакцины может быть оценена в реакции сероредукции бляшек без контрольного заражения животных. Эта оценка позволяет определить необходимую дозу испытуемой вакцины для обеспечения гарантированного иммунитета (3).

Показана коррелятивная связь между первичным иммунным ответом на клеточном уровне (тест бласттрансформации) и степенью развития гуморальной иммунной реакции (тесты иммуноферментной сероредукции) (13). Реакция гиперчувствительности замедленного типа позволяет изучить in vivo развитие противоящурного иммунитета в ранний период после вакцинации (68). Показано, что у взрослого КРС в зоне высокого радиоактивного заражения после иммунизации концентрированной противоящурной вакциной образуются специфические АТ, однако иммунитет при этом менее напряженный и более короткий по сравнению с необлученными животными (4).

Продолжительность иммунитета у животных, переболевших ящуром, составляет 8-12 мес, у свиней - 10-12, у овец - около 18 мес. Отдельные животные-реконвалесценты приобретают некоторую устойчивость против гетерологических типов вируса. При ящуре возникает тканевый и гуморальный иммунитет. Местный иммунитет формируется раньше, чем гуморальный, но он короче. Поэтому при реинфекции через 4-7 мес на месте введения вируса образуются афты, но генерализации процесса не происходит. Установлено, что при ящуре комплекс защитных реакций организма начинает действовать с момента контакта возбудителя со слизистыми оболочками, обусловливая определенную закономерность в развитии специфического местного иммунитета. На белых мышах ВАЬВ/с и морских свинках, иммунизированных одинаковыми дозами антигена ВЯ нескольких штаммов типа SАТ-1, продемонстрирована связь показателей тестов бласттрансформации, ИФА и сероредукции, которая определялась статистически значимыми коэффициентами корреляции. Эффективность первичной иммунной реакции организма на клеточном уровне может количественно детерминировать развитие гуморального фактора иммунитета. Для обеспечения устойчивого благополучия страны по ящуру в РФ реализуется система мероприятий, приоритетными в которой являются предупреждение заноса ВЯ на территорию, а в районах высокой степени риска - вакцинопрофилактика с централизованным обеспечением регионов вакцинами за счет федеральных противоэпизоотических средств.

Иммунитет обычно длится около года и даже дольше. Он еще сохраняется после исчезновения ВНА и зависит от свойств инфицирующего штамма вируса, а также от реактивности животного и всегда направлен против гомологичного типа вируса.

Доказана возможность пассивной передачи поствакцинального клеточного иммунитета. Показано участие цитотоксических лимфоцитов в ранние сроки формирования противоящурного иммунитета. Клеточный иммунитет связан с функционированием лимфоцитов, рецепторного аппарата и соединения их с антигеном. За клеточный иммунитет отвечают Т-клетки.

Вирус в производственных условиях концентрируют ультрафильтрацией, полиэтиленгликолем или полиэтиленоксидом, что дает возможность повысить концентрацию антигена в десятки и сотни раз.

Первая инактивированная вакцина была предложена Вальдманом и Кобе в 1938 г. В дальнейшем эта вакцина была модифицирована в различных вариантах. В настоящее время для крупного и мелкого рогатого скота, как правило, применяют сорбированные, а для свиней - эмульгированные вакцины. Трехвалентная ГОА-формолвакцина из ВЯ типа А №550, О №1618 и С №564 авирулентна, безвредна, стерильна и отличается выраженной иммуногенной активностью.

Выраженный иммунитет у привитых животных наступает на 10-14-й день и достигает максимума через 3-4 нед. Иммунитет у взрослых животных длится 6-12 мес. КРС обычно ревакцинируют 1 раз, свиней - 2 раза в год. ВНА в сыворотке крови появляются уже к концу 1-й нед, достигают максимального титра в 3-5 нед, затем их концентрация постепенно снижается. При систематической иммунизации взрослых животных против ящура инактивированными моновакцинами у них поддерживается стабильный уровень АТ не ниже 4,5 1оg2 на протяжении 6 мес. В течение последующих 3 мес идет медленное снижение титров АТ до 3,5-3,7 1оg2 к концу 6-го мес, что может служить основанием для уточнения схемы вакцинации молодняка этого возраста.

Колостральный иммунитет хорошо выражен, однако телята, не получавшие молозиво, не имеют сывороточных АТ, несмотря на то, что коровы были иммунизированы. После приема молозива титр АТ в сыворотке телят больше, чем в сыворотке матерей. АТ у телят сохраняются в течение 5 мес, хотя пассивная защита продолжается до 3-х мес. Продолжительность колострального иммунитета также зависит от типа вируса. Материнские АТ могут мешать образованию иммунитета у потомства.

Замена традиционных моновалентных инактивированных вакцин на би- и трехвалентные вакцины, приготовленные из очищенного концентрированного и инактивированного вируса типов А22, О1 и Азия1, формирует у привитых животных напряженный и продолжительный иммунитет более 12 мес после однократной прививки, в т. ч. у молодняка КРС на фоне колострального иммунитета.Универсальная эмульсионная вакцина создает достаточно напряженный иммунитет у супоросных свиноматок и обеспечивает их защиту от экспериментального ящура в первые дни после опороса при двукратной прививке. Поросята, родившиеся от 2-кратно привитых свиноматок, в большинстве своем не заболевали и оставались живы при контакте с зараженными матками. Введение таким поросятам инактивированной вакцины в 3-дневном возрасте сопровождается накоплением активных противоящурных АТ.

Молодняк, родившийся от иммунных животных, получает пассивно антитела с молозивом. Молодняк, полученный от многократно вакцинированных коров, имеет достаточно напряженный иммунитет в течение 4 мес.В настоящее время вакцинология переживает этап своего бурного развития. Так, для борьбы с ящуром на смену традиционным инактивированным вакцинам, отличающимся высокой профилактической эффективностью при их систематическом и массовом применении, разрабатываются новые препараты. Главная проблема при этом состоит в том, что современная технология изготовления вакцин не обеспечивает иммунного ответа адекватного по напряженности с иммунным ответом при естественной ящурной инфекции. Быстрая защита от ящура супоросных и подсосных свиноматок обеспечивается препаратом из культурального ВЯ, инактивированного димером ЭИ, очищенного и концентрированного ПЭГ. Стерильный антиген вводили животным внутримышечно за ухом. Контрольное заражение проводили свиным афтозным вирусом в дозе 10 4 ИД5о/0,2 мл под слизистую языка или венчик. В настоящее время в качестве инактивантов используют ацетилэтиленимин (АЭИ) и бинарный этиленимин (БЭИ, диэтиленимин), поскольку они в отличие от формалина позволяют готовить более авирулентные вакцины, а АЭИ менее токсичен, чем БЭИ.

Кроме обычно применяемых методов инактивации ВЯ формальдегидом, предложен оригинальный метод инактивации его собственной эндонуклеазой. Для этого вирусную суспензию смешивают с 0,5М и 0,1М трис-буферным р-ром, рН смеси доводят до 8,5, после чего ее фильтруют через мембранный фильтр (0,45 мкм) и инкубируют при температуре 26 или 37°С. Через 4-5 ч инкубации при 37°С инфекционная активность вируса полностью подавляется. Для такой инактивации вируса при меньшей температуре необходимо более длительное время инкубации. РНК вируса в этих условиях полностью разрушается. В отличие от формолвакцины в инактивированной эндонуклеазой вакцине полностью сохраняются эпитопы протективного АГ вируса. Установлено, что иммуногенность инактивированной вакцины в значительной степени зависит от наличия и вида адъюванта. Включение ГОА в состав вакцины увеличивает ее активность в десятки раз. Для крупного и мелкого рогатого скота в качестве адъюванта применяют ГОА с сапонином.

Для свиней применяют инактивированные вакцины. Естественный иммунодефицит у свиней удалось преодолеть благодаря применению масляных адъювантов. Напряженный и продолжительный иммунитет у свиней наступал после 2-кратной вакцинации. Свиней прививают начиная с 2-мес возраста и ревакцинируют спустя 4 мес. Колостральные АТ подавляют вакцинальный иммунитет, особенно если поросят прививают в первые 30 дн жизни. Вакцины с масляным адъювантом создавали и у телят более выраженный и продолжительный иммунитет, чем ГОА-вакцина. Оказалась возможной одновременная вакцинация КРС против ящура и чумы. Если инактивированную поливалентную ГОА-вакцину против ящура и живую - против чумы вводить одновременно подкожно в область шеи с разных сторон, то образуется такой же иммунитет, как и при раздельной вакцинации против каждого заболевания. Живые вакцины против ящура не разработаны. Многочисленные попытки в этой области не дали положительных результатов. Аттенуированные штаммы, как правило, оказывались или слабоиммуногенными или же реверсибельными.

Оценка поствакцинального иммунитета. Максимальные титры (в РН) поствакцинальных АТ обычно отмечаются на 28-й день после вакцинации; их уровень не зависит от разведения вакцины (в диапазоне 1:1-1:16) и прямо коррелирует со специфическим протективным иммунитетом. На модели морских свинок показано, что иммуногенность противоящурной вакцины может быть оценена в реакции сероредукции бляшек без контрольного заражения животных. Эта оценка позволяет определить необходимую дозу испытуемой вакцины для обеспечения гарантированного иммунитета.

Показана коррелятивная связь между первичным иммунным ответом на клеточном уровне (тест бласттрансформации) и степенью развития гуморальной иммунной реакции (тесты иммуноферментной сероредукции). Реакция гиперчувствительности замедленного типа позволяет изучить in vitro развитие противоящурного иммунитета в ранний период после вакцинации. Показано, что у взрослого КРС в зоне высокого радиоактивного заражения после иммунизации концентрированной противоящурной вакциной образуются специфические АТ, однако иммунитет при этом менее напряженный и более короткий по сравнению с необлученными животными.

Профилактика. Профилактику осуществляют в соответствии с действующей инструкцией: строгий карантин, изоляция эпизоотического очага, установление границ неблагополучного пункта и запрет перемещения животных, вывоза продуктов и сырья животного происхождения, необезжиренного молока; изоляция и лечение больных животных, установление границы угрожаемой зоны, вакцинация восприимчивых животных, дезинфекция помещений, одежды, предметов ухода, транспорта; обезвреживание навоза; уничтожение трупов животных. Карантин снимают через 3 нед после выздоровления последнего заболевшего животного, заключительной дезинфекции (с контролем её качества). Ограничения на ввоз и вывоз животных, использование пастбищ и скотопрогонных пунктов сохраняется в течение 1 года после снятия карантина.

Читайте также: