Ифа диагностика гепатита с у детей

При гепатите С больному перед лечением рекомендуется пройти ряд сложных и показательных анализов. Без адекватной оценки состояния печени избавление от вируса практически невозможно.

Признаки гепатита

Гепатит С проявляется у больных в виде острой и хронической формы. В зависимости от типа различаются и клинические проявления.

Острая стадия:

болевые ощущения в суставах без воспалительного процесса и разрушения;
резкое потемнение мочи;
желтушность кожи и склер;
ощущение тошноты, рвота;
изменение сна и аппетита.

Хроническая стадия:

общая слабость;
тяжесть и боль в правом подреберье;
высыпания, схожие с аллергией;
скачки температуры тела;
снижение аппетита или отвращение к еде;
вздутие живота, потеря веса;
образование венозных прожилок по всему телу.

При первых симптомах гепатита С важно обратиться к специалисту для установки диагноза и дальнейшего лечения.

Особенности диагностики

После первичной консультации терапевта и сдачи анализов крови и мочи, пациент переходит под наблюдение других узких специалистов. Они назначают более развёрнутые исследования, необходимые для тщательной оценки состояния печени.

Инфекционист. Это основной врач, специализирующийся во всех видах гепатита. Под его контролем осуществляется диагностика, лечение, установка тяжести состояния.
Гепатолог. Основная задача такого специалиста — наблюдение больного, который состоит на учёте с гепатитом С в стадии ремиссии. Имеет терапевтический профиль, лечит цирроз и алкогольную болезнь печени.
Гастроэнтеролог. Может выступать в качестве промежуточного врача, если больной пришёл с жалобами о тошноте, периодической рвоте и ухудшении аппетита. Обычно гастроэнтеролог сразу выделяет специфику симптомов и направляет к инфекционисту.

В этом видео вам расскажут методы диагностики и лечение гепатита с.

Методы диагностики с описанием

Существует целый комплекс исследований для больных с гепатитом С. Все они делаются поэтапно и создают полноценную картину развитию патологии.

Забор кусочка ткани необходим, чтобы вычислить уровень поражения печени. Биопсия является сложной и болезненной методикой, но после неё врач точно видит состояние клеток.

Такая диагностика является высокоточной при определении гепатита. С помощью специального прибора проводится анализ на клеточном уровне, определяются малейшие изменения печени. В некоторых случаях эластометрия даёт более точную картину, чем биопсия.

Ультразвуковые волны необходимы для определения поверхностных изменений ткани. Во время диагностирования определяются размеры органа, края и поражение некоторых участков.

Важно! Диагностирование гепатита С может быть осложнено присоединением других видов вирусного гепатита. Обычно для полного обследования используются все вышеперечисленные методы в той последовательности, которая необходима специалистам.

Анализы крови

С помощью анализов крови не только выявляют вирус, но и осуществляют полный контроль больного во время лечения и стадии ремиссии.

Серологическое обследование

Проводится специальный иммуноферментный анализ, позволяющий выявить антитела к гепатиту С. Их выработка происходит только при внедрении вируса в организм. Активизация защитных клеток начинается поздно. Обычно это происходит уже через 2 месяца после заражения. Но такой тест ещё не гарантирует наличие болезни. Антитела могли выработаться в предшествующем периоде, как результат борьбы с вирусом.

Тест иммуноглобулинов

Анализ необходим для выявления антител группы М. Обычно они проявляются через месяц после внедрения инородного агента. При острой стадии их выброс усиливается. Также иммуноглобулины меняют свой показатель при хронической стадии гепатита С.

Полимеразная цепная реакция

Точный и эффективный метод определения многих вирусов. Он основан на молекулярном уровне, что позволяет быстро выявить вирус и степень его агрессии.

Печёночные пробы

При гепатите С такое исследование необходимо для определения уровня билирубина, ферментов, белка и спектра крови, а также щелочной фосфатазы. Обычно специалист обращает внимание на уровень эндогенного фермента (АЛТ). Его уровень является основным ориентиром при выявлении гепатита С. Количество билирубина в крови при вирусном гепатите может быть очень высоким. Именно этот элемент даёт коже и склерам желтушный оттенок.

Кровь на генотип

Такой анализ проводится непосредственно перед лечением гепатита С, так как вирус обладает устойчивостью к препаратам и сохраняет способность к мутации. В нынешнее время существует несколько генотипов, 11 из которых известны медицине. Наиболее распространены генотипы 1, 2, 3.

Специальный анализ крови на свёртываемость. Если она понижена, время для этого процесса увеличивается, это говорит о вирусе. При гепатите С протромбин вырабатывается в меньшем количестве.

Это стандартное исследование необходимо при любой диагностике. В нём показан уровень эритроцитов и лейкоцитов. О воспалительном процессе в печени скажет низкий показатель тромбоцитов и высокий показатель лейкоцитов.

Особенности диагностики у детей

Восприимчивость к гепатиту С у детей находится в низком уровне в первый год жизни. Это обусловлено врождённым иммунитетом у грудничков. А уже последующие периоды до 10 лет риск заболеть вирусом повышается в максимальные разы.

Для диагностирования вируса у ребёнка применяются методики, как и для взрослого человека. Их последовательность, частоту и сочетание подбирает только лечащий врач в условиях стационара. Во внимание берётся состояние ребёнка, тяжесть и давность заболевания.

Что такое экспресс-диагностика и как ее проводят?

Быстрые тесты для определения вируса позволяют поставить диагноз в течение максимально быстрого времени. Это диагностика нового поколения с точностью определения агента до 98%.

Какие образцы используются для экспресс-теста:

слюна;
цельная капиллярная кровь;
венозная кровь;
плазма и сыворотка.

Тестирование легко проводится в клинических условиях. Большая группа людей может быть обследована одним специалистом. Определение вируса безболезненно, безопасно и не требует сложного оборудования. Время на анализ минимальное — всего через 20 минут определяется вирус гепатита С в организме. Экспресс-тестирование незаменимо в экстренных или аварийных ситуациях. Благодаря высокой точности вирус определяется на ранней стадии, а в некоторых случаях даже не требуется забор крови.

Важно! Положительный результат экспресс-теста ещё не будет являться точным диагнозом. Врачу потребуются и другие анализы для полного уточнения стадии заболевания.

Полноценная диагностика при гепатите С — залог правильно назначенного лечения, что позволяет предотвратить осложнения и летальный исход пациента. Рекомендуется давать согласие на все предложенные врачом исследования, даже биопсию. Это повысит шансы на положительный прогноз в лечении и приходу к стадии ремиссии.

Иммуноферментный анализ – это метод диагностики вирусных заболеваний. ИФА на гепатит С показывает реакцию иммунной системы на действие патогенных микроорганизмов. Для процедуры используют венозную кровь и ищут в ней антитела к вирусу гепатита. Иммуноферментный анализ недорогой, выполняется быстро, но требует подтверждения повторным ИФА или более дорогим ПЦР.

Сущность и достоверность метода

Метод основан на способности антител (клеток иммунной системы) образовывать комплексы с частицами вируса гепатита (антигенами). Для определения этих комплексов пользуются специальными маркерными ферментами. Анализ дает возможность выявить количество антител к вирусу в первые 6-12 недель болезни.

Подготовка к ИФА включает:

исключение физических нагрузок за сутки до исследования;
запрет на употребление алкогольных напитков, табачных изделий и жирной пищи;
временное прекращение приема лекарственных препаратов и оральных контрацептивов.

Кровь для иммуноферментного анализа на гепатит берут утром натощак. Достоверность данного метода повышается при повторном проведении ИФА спустя 2 недели после процедуры.

Результат анализа показывает:

уровень эффективности работы иммунной системы при борьбе с вирусом;
стадию заболевания;
течение – острый или хронический гепатит.

Женщинам в период беременности необходимо сдать кровь на ИФА минимум два раза:

на ранних сроках (4-5 недель);
перед родами;

Преимущества ИФА заключаются в:

доступной стоимости анализа для всего населения;

полной автоматизации процесса, исключающей ошибку человека;

быстром получении результата анализа;

возможности выявить инфекционное заболевание на ранних этапах;

высокой точности.

Показания к ИФА на гепатит С

Гепатит С – опасное вирусное заболевание, которое передается через кровь и разрушает клетки печени.

Показания к анализу крови на ВГС:

наличие ВИЧ-инфекции;
симптомы острого гепатита: рвота, вялость, чувство горечи во рту, отсутствие аппетита, желтушный цвет кожных покровов и др.;
хронический гепатит;
наличие в биохимическом анализе крови повышенного билирубина и изменение коэффициента де Ритиса (указывают на нарушения работы печени);
принадлежность к группе риска (врачи, медсестры, наркозависимые);
наркотическая и алкогольная зависимость.

Проверку на гепатит С обязаны проходить военные, сотрудники правоохранительных органов, работники общепита и социальных служб.

Какие антитела обнаруживает тест

Анализ на гепатит С, проведенный методом ИФА, способен обнаружить антитела двух типов:

IgM – иммуноглобулин, имеющий самую крупную молекулярную массу и неспособный проникать через плацентарный барьер. Антитела класса IgM вырабатываются в организме первыми – спустя 6 недель после заражения. Через полгода уровень иммуноглобулинов типа М снижается и остается таким до следующего рецидива болезни (при хроническом гепатите). Иммуноглобулины M являются основой первичного иммунного ответа зараженного организма.

IgG – основной иммуноглобулин сыворотки крови, является вторичным иммунным ответом. Обеспечивает иммунитет ребенка, рожденного от инфицированной матери. Иммуноглобулины G вырабатываются спустя 3 месяца после возникновения заболевания, достигают максимальной концентрации на пятом месяце и остаются в этом количестве на протяжении многих лет.

В периоде острого вирусного гепатита есть две стадии. На первой происходит активация и выделение IgM, на второй – IgG. В острой фазе болезни IgM и IgG образуются к нуклеокапсидному белку вируса Core. При латентном (скрытом) течении вырабатываются IgG к белку core и неструктурному белку NS.

Способы проведения

Диагностика гепатита включает два способа проведения ИФА – прямой и непрямой.

Прямой метод ИФА на антитела к гепатиту С основан на образовании комплексов антиген-антитело.

В специальную таблицу с лунками заносят биологический материал пациента (кровь) и оставляют на 30 минут. Важные элементы приклеиваются ко дну лунок.
Добавляют специальные меченые антитела. Они прикрепляются к антителам исследуемой крови (если такие есть). Здесь выжидают несколько часов.
Содержимое лунок сливают и промывают от лишних веществ.
В каждую лунку добавляют ферменты, которые распознают добавленные ранее антитела. Ферменты связаны со специальным маркером.
При положительной реакции маркерное вещество становится окрашенным.

Эта методика включает несколько простых шагов и обеспечивает достоверный результат.

Непрямой метод ИФА отличается тем, что в системе участвуют не два, а три компонента.

Он включает два варианта:

Расшифровка анализа

Существует четыре варианта расшифровки анализа:

Положительный результат. В исследуемом материале обнаружены IgM и IgG к вирусу гепатита – означает, что человек заражен давно (более 3 месяцев назад). Если обнаружены только IgM, то инфекция попала в кровь месяц назад, если только IgG – произошло выздоровление или хронизация гепатита.
Отрицательный результат. Иммуноглобулинов в исследуемой крови не обнаружено. Человек полностью здоров.
Ложноположительный результат. ИФА всегда нужно проверять полимеразной цепной реакцией (выявляет сам вирус в крови или печеночной ткани). Если ПЦР дает отрицательный результат, то ИФА следует провести заново.
Сомнительный результат. Если прошло очень мало времени после рискованной ситуации, ИФА может не выявить наличия антител. Для подтверждения результата необходимо провести повторный анализ через две недели.

Ложноположительный и ложноотрицательный результаты ИФА могут возникнуть вследствие ошибки в лаборатории или неправильной подготовке к анализу. У беременных ложные результаты встречаются чаще, чем у остальных людей.

Почему ИФА положительный, а ПЦР отрицательная

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – дополнительный метод диагностики вирусных заболеваний. Выявляет РНК вируса, то есть его генетическую информацию, применяется для подтверждения диагноза. В некоторых случаях ПЦР дает отрицательный результат при положительном показателе ИФА.

Почему так происходит:

Выздоровление: ПЦР реагирует только на РНК вируса гепатита, а ИФА может дать положительный результат и после выздоровления, ведь он выявляет клетки иммунной системы, которые сохраняются в крови на несколько лет.
Разный исследуемый материал: при заборе из разной локализации может возникнуть несоответствие результатов. Так, для ПЦР берут не только кровь, но и кусочек ткани печени.
Разные тестовые системы.

Что покажет ИФА после лечения гепатита

После пройденной терапии против гепатита С необходимо еще раз сдать кровь на ИФА.

Иммуноглобулины G сохраняются в организме несколько лет после выздоровления, поэтому повторный анализ на гепатит может быть положительным. В этом случае необходимо дополнительно сдать кровь на ПЦР. Отрицательный результат ПЦР на гепатит будет свидетельством того, что человек здоров, а положительный – подтвердит ИФА и укажет на некачественное лечение.

Отрицательный результат повторного ИФА является подтверждением выздоровления.

ИФА относится к лабораторным методам высокой точности и позволяет выявить заболевание на ранних сроках. При первых симптомах гепатита нужно срочно обратиться к врачу, который назначит необходимые анализы для подтверждения диагноза.

Если у вас так же обнаружен РНК гепатита С в крови (вирусная нагрузка), рекомендуем ознакомиться с материалом по расшифровке анализов при гепатите С.

Гепатит C у детей – диффузное инфекционно-воспалительное поражение печени, вызванное вирусом гепатита C. Клиническое течение хронического гепатита C у детей часто бессимптомное; для типичного острого процесса характерны астенический синдром, абдоминальные боли, повышение температуры, тошнота, рвота, желтуха. Диагноз гепатита C у детей основан на совокупных данных осмотра, анамнеза, функциональных печеночных проб, серологического и ПЦР-обследования, биопсии печени. Лечение гепатита C у детей включает противовирусную и симптоматическую терапию, прием индукторов интерферона и иммуномодуляторов, диету.

Общие сведения

Гепатит C у детей – воспалительный процесс, возникающий в паренхиме печени при инфицировании вирусом гепатита C, попадающим непосредственно в кровь больного. Гепатит С у детей характеризуется склонностью к хронизации с прогрессированием в цирроз, печеночную недостаточность и злокачественные новообразования. В структуре острых вирусных гепатитов у детей до 14 лет на гепатит C приходится около 1%, среди хронических вирусных гепатитов – до 41%.

Вирус гепатита C (HCV) – чрезвычайно опасный РНК-содержащий вирус, способный длительно (иногда пожизненно) персистировать в организме человека за счет высокой генетической изменчивости, способности маскироваться и легко уходить из под контроля иммунной системы. Главной мишенью вируса гепатита C являются гепатоциты. Вирус гепатита C оказывает прямое цитопатическое действие на печеночные клетки, активирует аутоиммунные реакции и иммунный цитолиз зараженных клеток, вызывает некроз и узловую пролиферацию паренхимы, разрастание соединительной ткани (фиброзирование) печени. Вирионы гепатита C могут проникать в ткани сердца, головного мозга, иммунные клетки, провоцируя тяжелые сопутствующие заболевания (васкулиты, артриты, полимиозит, энцефалопатии).

Причины гепатита C у детей

Источником гепатита C у детей является инфицированный человек, чаще всего больной хронической формой инфекции. Пути распространения вирусного гепатита C у детей – парентеральный и вертикальный (от матери плоду). Вирусом гепатита C дети и подростки могут заразиться при непосредственном контакте с инфицированной кровью или ее препаратами. Заражение детей гепатитом C может произойти при различных медицинских оперативных и инъекционных вмешательствах, гемодиализе, стоматологическом лечении (с повторным использованием плохо простерилизованных медицинских инструментов), трансплантации органов, гемотрансфузии и переливании препаратов крови (плазмы, фибриногена, антигемофильного фактора детям с гемофилией). Высок уровень распространения гепатита C среди наркоманов вследствие неоднократного использования загрязненных шприцев при внутривенном введении наркотиков.

Частота перинатальной передачи вируса гепатита C (в родах, при прохождении ребенком родовых путей инфицированной матери) составляет примерно 5%. При наличии у беременной женщины коинфекции HCV и ВИЧ, степень риска инфицирования ребенка вирусом гепатита C возрастает в 3-4 раза.

Существует возможность передачи гепатита C у детей подросткового возраста при несоблюдении правил и норм гигиены во время выполнении процедур, связанных с повреждением кожных покровов (татуировок, пирсинга); через порезы и ссадины при пользовании общими средствами гигиены (зубные щетки, бритвы, маникюрные приборы), при незащищенном половом контакте с носителем вируса.

Классификация гепатита C у детей

По продолжительности течения выделяют острые (до 6 месяцев) и хронические (свыше 6 месяцев) гепатиты C у детей. Хроническая форма гепатита C у детей может быть исходом остро начавшегося заболевания, но чаще всего развивается как первично хронический процесс, имеет длительное прогрессирующее течение и приводит к серьезному поражению печени и нарушению ее функций.

В зависимости от характера клинических проявлений острые гепатиты C у детей могут иметь типичные (сопровождающиеся симптомами желтухи) и атипичные (безжелтушные) варианты течения. У детей преобладают случаи атипичного течения гепатита C. Типичные острые гепатиты C у детей обычно протекают в легкой и среднетяжелой формах; крайне редко возможны тяжелые и злокачественные (фульминантные) формы заболевания.

Симптомы гепатита C у детей

Скрытый (инкубационный) период при гепатите C у детей в среднем составляет 7-8 недель. Острый гепатит C начинается постепенно с развития у ребенка астеновегетативного синдрома и диспепсических нарушений. У детей отмечается абдоминальный болевой синдром, иногда боли в крупных суставах, возможно повышение температуры тела до субфебрильных значений, обесцвечивание кала и потемнение мочи. Интоксикация сопровождается тошнотой, рвотой, головной болью.

Признаки желтухи у детей с гепатитом C (желтый оттенок склер и кожи) появляются не всегда (в 15-40% случаев); желтушный период продолжается от 1 до 3 недель и протекает легче, чем при других парентеральных гепатитах. Острое течение гепатита C у детей отмечается в 10-20% случаев, его частым исходом является формирование хронической формы заболевания.

Хронический гепатит C у детей в течение многих лет может протекать без клинически выраженных симптомов, выявляясь при случайных обследованиях. При относительно удовлетворительном состоянии детей и отсутствии жалоб, хронический гепатит C проявляется гепатомегалией, в 60% случаев сопровождающейся спленомегалией. У 1/3 детей с хроническим гепатитом C отмечается астения, повышенная утомляемость, внепеченочная симптоматика (телеангиэктазии, капилляриты).

Несмотря на минимальную и низкую степень активности хронического гепатита C у детей, наблюдается стойкая тенденция к фиброзированию печени (через год после инфицирования в 50% случаев, через 5 лет – в 87% случаев). Даже при слабо выраженной степени фиброзирования при хроническом гепатите C у детей имеется риск развития цирроза печени. К осложнениям острого гепатита C у детей относятся печеночно-клеточная недостаточность, кровотечения, тяжелая бактериальная инфекция, почечная недостаточность.

Диагностика гепатита C у детей

В диагностике гепатита C у детей учитывают данные клинического осмотра и эпидемиологического анамнеза, результаты биохимического, серологического (ИФА) и ПЦР исследований, пункционной биопсии печени.

У всех детей с гепатитом C в сыворотке крови отмечается повышение активности печеночных ферментов АЛТ и ACT, в некоторых случаях - повышение уровня общего билирубина (прямой фракции), снижение протромбинового индекса, диспротеинемия.

РНК вируса гепатита C появляется в плазме крови через 3-4 дня после инфицирования (задолго до образования антител). ПЦР в режиме реального времени является самым ранним методом диагностики гепатита C у детей, позволяющим обнаружить РНК HCV, определить генотип и концентрацию вируса в крови (вирусную нагрузку). Чем больше вирусная нагрузка, тем тяжелее прогноз гепатита C и тем заразнее считается больной. Генотип вируса гепатита C является достоверным прогностическим критерием дальнейшего развития инфекции, а также продолжительности и эффективности противовирусной терапии. Наиболее часто у детей с хронической формой заболевания выделяется генотип 1b вируса гепатита C, для которого характерна 90%-ная хронизация инфекции, более тяжелое течение, меньший процент устойчивого успеха лечения.

Серологическое исследование (ИФА) у детей позволяет подтвердить наличие маркеров гепатита C - антител к специфическим белкам (анти-HCV-core, -NS3, -NS4, -NS5), определить остроту и активность вирусной инфекции (анти-HCV IgM), стадию заболевания, давность инфицирования (анти-HCV IgG авидность).

Гепатит C у детей необходимо дифференцировать с другими вирусными гепатитами, прежде всего, гепатитом В, гемолитической болезнью, ангиохолециститом, обтурационной желтухой.

Лечение гепатита C у детей

Общие принципы терапии гепатита C у детей схожи с таковыми при других вирусных гепатитах и включают постельный режим, лечебную диету, симптоматические средства.

Лечение гепатита C у детей направлено на предотвращение хронизации острой формы инфекции и влияние на развившийся хронический процесс. В педиатрии при хроническом гепатите C применяются препараты рекомбинантного интерферона-альфа (ИФН-) в виде ректальных свечей и парентеральные формы. Схема лечения гепатита C ребенку подбирается индивидуально. В лечении гепатита C у детей в возрасте от 3 до 17 лет, не имеющих противопоказаний, назначается монотерапия или комбинация препаратов рекомбинантного ИФН- с рибавирином или ремантадином (у детей старше 7 лет). Также назначают индукторы (меглюмина акридонацетат) и иммуномодуляторы ( экстракты тимуса крупного рогатого скота). Продолжительность лечения гепатита C у детей зависит от многих факторов и составляет от 24 до 48 недель.

Прогноз и профилактика гепатита C у детей

Прогноз при вирусном гепатите C у детей вариабелен. Острая форма заболевания у детей может закончиться полным выздоровлением, которое наступает медленно (примерно через год) или исходом в хронический процесс, протекающий многие десятилетия и приводящим к развитию цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы.

При крайне тяжелых и злокачественных формах гепатита C возможен летальный исход.

Неспецифические меры профилактики вирусного гепатита C у детей включают предотвращение перинатального инфицирования новорожденных, использование одноразовых и стерильных многоразовых медицинских инструментов, тщательное обследование доноров крови и тестирование препаратов крови, соблюдение правил личной гигиены, борьбу с наркоманией.

Вирусом гепатита С заражено около 170 миллионов человек по всему миру. Болезнь коварная – при смазанной симптоматике начала заболевания ее дебют проходит незамеченным. Часто развиваются хронические формы, которые приводят к разрушению клеток печени.

Исходом гепатита С становятся цирроз или рак печени. Для выявления маркеров заболевания в первую очередь назначают иммуноферментный анализ – ИФА на гепатит С.

О чем я узнаю? Содержание статьи.

Что такое ИФА?

Именно присутствие антител определяется при ИФА. Появляются они в срок от нескольких дней до нескольких недель после заражения гепатитом С.

ИФА выявляет циркулирующие иммуноглобулины даже в малой концентрации. По их типу можно судить о давности заболевания. В острый период, когда вирус гепатита активно размножается, определяют иммуноглобулины класса М.

В хронической стадии (спустя 6 мес. от начала заболевания) при ИФА обнаруживают иммуноглобулины класса G. Последний тип также может свидетельствовать не о хронизации процесса, а о самом факте столкновения иммунной системы с вирусом гепатита С в прошлом.

Показания к ИФА на гепатит С

Обследование на маркеры гепатита С, к которым относятся антитела – иммуноглобулины, давно стала рутинной процедурой. ИФА назначают при:

острых и хронических заболеваниях печени;

желтухе неясного генеза;

обследовании перед хирургическими вмешательствами;

стандартном обследовании доноров крови;

постановке на учет в женской консультации при беременности. Повторно анализ сдают за 2-4 недели до предполагаемой даты родов;

прохождении гемодиализа;

профилактических осмотрах медработникам, контактирующим с компонентами крови и другими биологическими жидкостями;

незащищенном сомнительном половом контакте;

рождении детей от инфицированных матерей.

В порядке рекомендаций анализ на гепатит С назначают родственникам больного, близко с ним контактирующим. В 50% случаев парентеральный источник заражения выявить не удается. Инфекционисты предполагают бытовой путь передачи, когда зараженная кровь может попадать в кровоток здорового человека через кожные ранки и трещины. У этой версии много противников.

Как проводится анализ?

За 48 часов до ИФА исключают из пищи алкоголь, жареное, жирное и соленое. За 12 часов до забора крови из вены пациенту необходимо воздержаться от приема каких-либо лекарств. Анализ сдают утром натощак.

Вне зависимости от разновидности ИФА, в его проведении существует строгая этапность:

Виды ИФА

Вариантов выполнения анализа достаточно много. Их классифицируют:

По типу реагентов, используемых на первом этапе ИФА:
a) конкурентный;
b) неконкурентный;

По степени однородности среды, в которой происходят реакции ИФА:
a) гомогенные;
b) гетерогенные;

3) По принципу определения исследуемого вещества:
a) прямой;
b) непрямой. Именно непрямой метод ИФА используется при выявлении маркеров гепатита С.

При этом методе используют стандартные антитела к вирусу гепатита С, помеченные меткой – ферментом.

В лунки лабораторного планшета (если выбрали именно его в качестве твердой фазы) помещают сыворотку крови пациента. Выдерживают 20 минут, чтобы антигены (белки вируса гепатита С) успели прикрепиться к стенкам.
Добавляют стандартные помеченные ферментом антитела к гепатиту С. Выдерживают еще несколько часов – за это время образуются иммунные комплексы антиген-антитело с меткой. Чем больше антигенов в исследуемой сыворотке, тем больше таких комплексов образуется.
Содержимое лунок промывается от несвязанных белков. Затем добавляют субстрат. Это вещество при реакции с ферментом-меткой меняет цвет. Чем больше комплексов при ИФА образовалось, тем большее количество фермента может воздействовать на субстрат и тем ярче хроматографическая реакция. Она считывается ИФА-ридером и оценивается количественно.

При этом методе ИФА стандартный антиген связывается с антителами сыворотки пациента. К образовавшемуся иммунному комплексу добавляют меченые ферментом стандартные антитела к иммуноглобулинам.

В лунки лабораторного планшета помещают стандартный антиген гепатита С (частички вируса). Антиген прикрепляется к стенке, незакрепленные белки вымываются лаборантом.
В подготовленные таким образом лунки помещают исследуемый материал (сыворотку крови), инкубируют. Есть обязательные контрольные лунки со стандартными реагентами. За время инкубации образуются комплексы антиген-антитело. Непрореагировавшие компоненты опять вымывают.
В лунки добавляют меченые ферментом антитела к иммуноглобулинам М и G. Эти белки прореагируют с образовавшимся ранее комплексом, только если в исследуемом образце есть антитела к гепатиту С. Промывают.
Добавляют еще один компонент – субстрат. Это химическое соединение разрушается ферментом из комплекса антиген-антитело. При этом образуется окрашенное вещество, количество которого фиксируют специальным прибором – ИФА-ридером. Чем больше фермента, тем сильнее он прореагирует с субстратом и тем ярче будет цветовой сигнал.

Расшифровка результатов

Высокая чувствительность ИФА иногда играет с пациентом злую шутку. Не каждый положительный результат означает заболевание и не каждый отрицательный – гарантия свободы от вируса.

При положительном ИФА определяют генотип вируса и определяют количество циркулирующих в крови вирусов с помощью ПЦР (полимеразной цепной реакции).

При ИФА выявляют маркеры острой фазы заболевания (иммуноглобулины класса М (IgM)) и иммуноглобулины класса G (IgG). Последние могут означать, что у пациента хронический гепатит С или то, что иммунная система хотя бы раз в прошлом сталкивалась с этим вирусом и выработался иммунитет.

Выявление одновременно двух типов иммуноглобулинов при ИФА говорит об обострении хронического гепатита С.

Самый вероятный вариант – пациент не болен и его иммунная система никогда не сталкивалась с вирусом.

Наконец, нельзя полностью исключить ошибку лаборатории.

ИФА реже дает погрешности по сравнению с ПЦР. Тем не менее, исследуемые вещества – белки. Реагент может связаться с неспецифическим белком сыворотки крови. Ложноположительный ИФА на гепатит С нередок в случаях:

выполненной накануне вакцинации;

при аутоиммунных патологиях или туберкулезе, рассеянном склерозе, склеродермии;

опухолевом процессе;

инфекциях, протекающих с гипертермией (грипп, ОРЗ и пр.).

Грешат ложноположительными результатами исследования на маркеры гепатита С у беременных. Довольно часто ИФА дает ложное заключение о наличии антител пациентам со II группой крови.

ИФА положительный, а ПЦР отрицательный: что это значит?

Вариантов, при которых у пациентов с гепатитом С ПЦР отрицательный, а ИФА – положительный, два. Самый вероятный – сформировался иммунитет к вирусу, а сам он уничтожен иммунной системой или лекарствами.

Второй: нельзя исключить ошибку лаборатории при проведении ПЦР.

Диагностикой заболеваний должен заниматься врач. Он учитывает все нюансы обследования. А лабораторная диагностика, в том числе ИФА – только вспомогательный метод, не лишенный погрешностей.

Читайте также: