Гриппозные вакцины по способу получения

Ростех к 2022 году планирует войти в пятерку крупнейших в мире производителей основного компонента вакцин от гриппа – гемагглютинина.

Красивый и с шипами: как устроен вирус гриппа

Когда мы видим названия штаммов гриппа, вроде A(H1N1) или A(H3N2), то H и N – это обозначения гемагглютинина и нейраминидазы. Именно эти два белка обусловливают такие свойства вируса гриппа, как иммуногенность и изменчивость.

Простыми словами описать работу этих белков можно так – гемагглютинин обеспечивает прикрепление вируса к клетке, а нейраминидаза отвечает за способность вирусной частицы проникать в клетку хозяина и выходить из нее после размножения. Некоторые противовирусные препараты как раз подавляют работу нейраминидазы, чтобы вирусные частицы не могли мигрировать в новые клетки.

Гемагглютинин является основным компонентом гриппозных вакцин, так как именно он индуцирует в организме человека образование защитных антител. На сложной трехмерной структуре этого белка располагаются такие участки, которые очень важны с точки зрения профилактики гриппа, – это так называемые антигенные домены. Когда антитела образуются, они блокируются именно с этими участками и лишают вирус возможности входить в клетку. Но вирус гриппа пытается любыми путями обмануть иммунную систему человека. В структуре его поверхностных белков происходят различного рода мутации, которые приводят к изменению свойств вируса, или его дрейфу.

Нейраминидаза также меняется. Возможно изменение одного или двух антигенов одновременно. В настоящее время известны 18 подтипов гемагглютининов (Н1 – Н18) и 11 подтипов нейраминидаз (N1 – N11).

Вариантов вируса гриппа очень много, они подразделяются на типы: А, B, С. Вирусы гриппа А являются самыми опасными,так как именно они ответственны за пандемии и тяжелые эпидемии. Эти возбудители более патогенны и заразны, чем вирусы гриппа В и С. Дело в том, что вирус А содержит два типа нейраминидазы (N1, N2) и четыре типа гемагглютинина (Н0, H1, H2, НЗ), благодаря чему он более изменчив, а вирусы В не подразделяются на подтипы (только на две линии). Вирус гриппа С содержит только гемагглютинин и не содержит нейраминидазу. Вирусы гриппа С, в отличие от вирусов А и В, не вызывают эпидемий, только лишь приводят к заболеваниям в легкой и бессимптомной форме у детей и пожилых пациентов.

В эпидемическом 2019-2020 гг. в Северном полушарии, по данным ВОЗ, будут доминировать следующие штаммы: A/Brisbane/02/2018 (H1N1)pdm09; A/Kansas/14/2017 (H3N2); B/Colorado/06/2017 (линия B/Victoria-подобных); B/Phuket/3073/2013 (линия B/Yamagata-подобных). Первые три предназначены для трехвалентных вакцин от гриппа, четвертый – дополнительный штамм для включения в четырехвалентные вакцины.

О том, какие виды гриппа будут угрожать в текущем году, ВОЗ объявляет заранее, до начала эпидсезона. Для этой цели Организация имеет сеть лабораторий – 149 Национальных лабораторий по гриппу в 121 стране, которые во время эпидемий выделяют от больных штаммы, изучают антигенные и генетические свойства, определяют наиболее актуальные из них. Специалисты ВОЗ анализируют также многие другие факторы – перемещение людей, миграция птиц. На основе всей этой информации и прогнозируется перечень опасных штаммов. В этом году ВОЗ предоставила производителям вакцин актуальные штаммы в конце марта, на месяц позже обычного, – эксперты долго не могли определить, какой штамм вируса A/H3N2 нужно включать в вакцины.

Во многих развитых странах сегодня переходят на четырехвалентную вакцину от гриппа, то есть содержащую два актуальных штамма А и два актуальных штамма гриппа B. Отечественная четырехвалентная вакцина прошла регистрацию в Минздраве в июле 2019 года. В этом сезоне ею будут прививать тех, кто в группе риска – работников социальной сферы, транспорта и здравоохранения. Полностью на прививки с четырьмя штаммами Россия перейдет к 2023 году. Кстати, наша страна является седьмой в мире, где по полному циклу производится четырехвалентная вакцина.

Новая защита: белок вместо целого вируса

Позже ученые поняли, что целый вирус для вакцины не нужен, можно использовать только белок, на который, собственно, и формируется иммунный ответ. То есть теперь для защиты от гриппа человек получает лишь порцию белка гемагглютинина – 15 мкг на каждый штамм гриппа.

Завершающая стадия производства выполняется в стерильных асептических зонах, в которых гемагглютинин от четырех вирусов объединяется в одном реакторе. После чего следует автоматический розлив вакцины в шприцы. Готовые шприцы с вакциной попадают в зону инспектирования и этикетирования препарата. Там они проверяются на отсутствие повреждений и соответствие дозе с помощью автоматических оптических камер, а затем на них наклеивается этикетка.

Сейчас вакцинация от гриппа в самом разгаре. Традиционно пик распространения гриппа приходится на конец января – начало февраля, но начаться волна может уже в ноябре. Организму требуется 2–4 недели, чтобы выработать иммунитет после прививки. Поэтому сейчас самое время задуматься о прививке. Напоминаем, что у вакцинации есть противопоказания, поэтому не забудьте проконсультироваться с врачом.

И напоследок немного статистики:
– около 35 млн больных гриппом каждый год фиксируется в России;
– грипп ежегодно становится причиной 250-500 тыс. смертей и 3-5 млн случаев серьезных заболеваний;
– своевременная вакцинация на 60-80% предотвращает заболеваемость гриппом и осложнений после болезни у людей среднего возраста.

Кардиостимулятор: сердце в правильном ритме

Действующее вещество:

Содержание

Фармакологическая группа

Нозологическая классификация (МКБ-10)

Состав

Суспензия для в/м и п/к введения	1 доза (0,5 мл)
действующие вещества:
антиген вируса гриппа типа A (H1N1)* с содержанием гемагглютинина	5 мкг
Антиген вируса гриппа типа A (H3N2)* с содержанием гемагглютинина	5 мкг
Антиген вируса гриппа типа В* с содержанием гемагглютинина	5 мкг
Полиоксидоний ® (азоксимера бромид)	500 мкг
вспомогательные вещества: фосфатно-солевой буферный раствор — до 0,5 мл
*Штаммы антигенов вируса гриппа — в соответствии с рекомендациями ВОЗ на текущий эпидемический сезон

Описание лекарственной формы

Бесцветная или с желтоватым оттенком слегка опалесцирующая жидкость.

Характеристика

Вакцина представляет собой протективные антигены (гемагглютинин и нейраминидаза), выделенные из очищенных вирусов гриппа типов А и В, выращенных на куриных эмбрионах, связанные с водорастворимым высокомолекулярным иммуноадъювантом N-оксидированным производным поли-1,4-этиленпиперазина (Полиоксидоний ® , МНН — азоксимера бромид). Антигенный состав вакцины изменяется каждый год в соответствии с эпидемической ситуацией и рекомендациями ВОЗ . Не содержит консервант.

Фармакологическое действие

Фармакологические (иммунобиологические) свойства

Вакцина вызывает формирование высокого уровня специфического иммунитета против гриппа. Защитный эффект после вакцинации, как правило, наступает через 8–12 дней и сохраняется до 12 мес, в т.ч. и у пожилых людей. Защитные титры антител к вирусам гриппа после вакцинации лиц разного возраста определяются у 75–95% вакцинированных.

Включение в вакцинный препарат иммуномодулятора Полиоксидоний ® , обладающего широким спектром иммунофармакологического действия, обеспечивает увеличение иммуногенности и стабильности антигенов, позволяет повысить иммунологическую память, существенно снизить прививочную дозу антигенов, повысить устойчивость организма к другим инфекциям за счет коррекции иммунного статуса.

Показания препарата Гриппол ® плюс Вакцина гриппозная тривалентная инактивированная полимер-субъединичная

Специфическая профилактика гриппа у детей с 6-месячного возраста, подростков и взрослых без ограничения возраста.

Вакцина особенно показана в следующих случаях:

лица с высоким риском возникновения осложнений в случае заболевания гриппом: старше 60 лет; дети дошкольного возраста, школьники; взрослые и дети, часто болеющие ОРЗ , страдающие хроническими соматическими заболеваниями, в т.ч. болезнями и пороками развития ЦНС , сердечно-сосудистой и бронхо-легочной систем ( в т.ч. бронхиальной астмой), хроническими заболеваниями почек; сахарным диабетом, болезнями обмена веществ, аутоиммунными заболеваниями, аллергическими заболеваниями (кроме аллергии на куриный белок); хронической анемией, врожденным или приобретенным иммунодефицитом; ВИЧ-инфицированные;

лица, по роду деятельности имеющие высокий риск заболевания гриппом или заражения им других лиц: в т.ч. медработники, работники образовательных учреждений, сферы социального обслуживания, транспорта, торговли, полиции, военнослужащие.

Противопоказания

аллергические реакции на куриный белок и компоненты вакцины;

аллергические реакции на раннее вводимые гриппозные вакцины;

острые лихорадочные состояния или обострение хронического заболевания (вакцинацию проводят после выздоровления или в период ремиссии);

нетяжелые ОРВИ , острые кишечные заболевания (вакцинацию проводят после нормализации температуры).

Применение при беременности и кормлении грудью

Доклинические исследования показали, что вакцина гриппозная инактивированная полимер-субъединичная не обладает эмбриотоксическим и тератогенным действием.

Решение о вакцинации беременных должно приниматься врачом индивидуально, с учетом риска заражения гриппом и возможных осложнений гриппозной инфекции. Наиболее безопасна вакцинация во II и III триместрах.

Кормление грудью не является противопоказанием для вакцинации.

Побочные действия

Вакцина является высокоочищенным препаратом, хорошо переносится детьми и взрослыми.

Часто (>1/100, 1/1000, сут .

Редко (>1/10000, в т.ч. немедленного типа.

Очень редко (>1/10000)

Со стороны нервной системы: невралгия, парестезия, неврологические расстройства.

Со стороны опорно-двигательного аппарата: миалгия.

Пациент должен быть проинформирован о необходимости сообщить врачу о любых выраженных или не указанных в данном описании побочных реакциях.

Взаимодействие

Вакцина Гриппол ® плюс может применяться одновременно с инактивированными и живыми вакцинами Национального календаря профилактических прививок (за исключением БЦЖ и БЦЖ-М) и инактивированными вакцинами календаря профилактических прививок по эпидемическим показаниям (за исключением антирабических). При этом должны учитываться противопоказания к каждой из применяемых вакцин, препараты должны вводиться в разные участки тела разными шприцами.

Вакцина может вводиться на фоне базисной терапии основного заболевания.

Вакцинация пациентов, получающих иммуносупрессивную терапию (кортикостероиды, цитотоксические препараты, радиотерапия), может быть менее эффективной.

Способ применения и дозы

В/м, п/к . Вакцинация проводится ежегодно в осенне-зимний период. Возможна вакцинация в начале эпидемического подъема заболеваемости гриппом.

Детям старше 3 лет, подросткам и взрослым вакцину вводят в/м или глубоко п/к в верхнюю треть наружной поверхности плеча (в дельтовидную мышцу); детям младшего возраста — в переднебоковую поверхность бедра в/м.

Детям от 6 до 35 мес включительно — по 0,25 мл двукратно с интервалом 3–4 нед .

Детям старше 36 мес и взрослым вакцину вводят однократно в дозе 0,5 мл.

Ранее не болевшим гриппом и невакцинированным детям возможно 2-кратное введение вакцины с интервалом 3–4 нед .

Пациентам с иммунодефицитом и получающим иммуносупрессивную терапию возможно 2-кратное введение вакцины по 0,5 мл с интервалом 3–4 нед .

Перед применением вакцину следует выдержать до комнатной температуры и хорошо встряхнуть. Снять защитную крышку с иглы и удалить воздух из шприца, удерживая его в вертикальном положении иглой вверх и медленно нажимая на поршень.

Для иммунизации детей, которым показано введение 0,25 мл (1/2 дозы) вакцины, необходимо удалить половину содержимого шприца, надавив на поршень до специальной риски, отмеченной на корпусе шприца, или до метки красного цвета, нанесенной на край этикетки, и ввести оставшиеся 0,25 мл.

Вскрытие ампул и флаконов и процедуру вакцинации осуществляют при строгом соблюдении правил асептики и антисептики: перед вскрытием ампульный нож, шейку ампулы или пробку флакона протирают ватой, смоченной 70% этиловым спиртом, вскрывают ампулу или прокалывают иглой резиновую пробку флакона, набирают вакцину в шприц одноразового применения и удаляют из шприца избыток воздуха. Спиртом протирают кожу в месте инъекции. Препарат во вскрытой ампуле или флаконе хранению не подлежит.

Передозировка

Случаи передозировки не зарегистрированы.

Меры предосторожности

В кабинетах, где проводится вакцинация, необходимо иметь средства противошоковой терапии.

Вакцинированный должен находиться под наблюдением медработника в течение 30 мин после иммунизации.

Особые указания

В день прививки вакцинируемые должны быть осмотрены врачом (фельдшером) с обязательной термометрией. При температуре выше 37 °C вакцинацию не проводят.

Непригоден к применению препарат в ампулах, флаконах, шприцах с нарушенной целостностью или маркировкой, при изменении физических свойств (цвет, прозрачность), истекшем сроке годности, нарушении требований к условиям хранения.

Влияние на способность к вождению автомобиля или управление машинами и механизмами. Гриппол ® плюс не оказывает влияние на способность к вождению автомобиля или управлению машинами и механизмами.

Транспортирование. В сухом, защищенном от света месте при температуре от 2 до 8 °C в условиях, исключающих замораживание. Допускается транспортирование при температуре не выше 25 °C не более 24 ч.

Форма выпуска

Суспензия для внутримышечного и подкожного введения. По 0,5 мл (1 доза) в шприцах одноразового применения или в ампулах или флаконах, герметично укупоренных резиновыми пробками и обжатых алюминиевыми колпачками. По 1, 5 или 10 шприцев в контурной ячейковой упаковке из пленки ПВХ , покрытой фольгой алюминиевой с полимерным покрытием или бумагой ламинированной с полимерным покрытием. По 1 (содержащей 1 или 5, или 10 шприцев) или 2 (содержащих 5 шприцев) контурные упаковки в пачке картонной.

По 5 амп. или флаконов в контурной ячейковой упаковке из пленки ПВХ . По 1 или 2 контурные ячейковые упаковки в пачке картонной или 5 или 10 амп. или флаконов без контурной ячейковой упаковки помещают в пачку картонную.

Производитель

Юридический адрес и адрес производства: 142143, РФ, Московская обл., г. Подольск, с. Покров, ул. Сосновая, 1.

Тел./факс: (495) 926-21-07.

Условия отпуска из аптек

Условия хранения препарата Гриппол ® плюс Вакцина гриппозная тривалентная инактивированная полимер-субъединичная

Хранить в недоступном для детей месте.

Срок годности препарата Гриппол ® плюс Вакцина гриппозная тривалентная инактивированная полимер-субъединичная

Не применять по истечении срока годности, указанного на упаковке.

ВНИМАНИЕ! САЙТ ЛЕКЦИИ.ОРГ проводит недельный опрос. ПРИМИТЕ УЧАСТИЕ. ВСЕГО 1 МИНУТА.

Вид вакцины	Характеристика вакцины
Живая (аттенуированная)	Получена из живых ослабленных (аттенуированных) штаммов микроорганизмов, сохранивших антигенные свойства, но почти утративших вирулентность
Инактивированная (убитая)	Получена путем инактивации микроорганизмов без их разрушения
Субъединичная (химические)	Состоит из антигенов, полученных путем извлечения из микроорганизмов различных антигенных фракций: полисахаридов, белков, поверхностных и оболочковых антигенов
Генно-инженерная	Представляет собой продукт молекулярной биологии и генной инженерии; получена путем синтеза антигенов или введения генома в другие клетки

Живые вакциныотносят к наиболее эффективным биопрепаратам. Их основные преимущества: быстро формируется иммунитет, достаточно малых доз антигена и, как правило, однократной вакцинации. Технологию изготовления живых вакцин предложил Л. Пастер.

Живые вакцины изготавливают из авирулентных или слабовирулентных (аттенуированных) штаммов микроорганизмов, не способных возвращаться к первоначальным свойствам (реверсии), но сохранивших иммуногенность; дефектных мутантов; вирулентных (не ослабленных) микроорганизмов; гетерогенных возбудителей. Второй и третий способы в настоящее время практически не используют.

К основным методам аттенуации относят следующие:

ослабление возбудителя многократными пассажами на невосприимчивых или слабовосприимчивых животных и адаптация к ним (вакцины Конева против рожи; антирабическая Пастера; АСВ из штамма К против чумы свиней; из штамма ЛТ против чумы КРС);

ослабление путем многократных пассажей на куриных эмбрионах (вирусные вакцины: сухая ВГНКИ против болезни Ауески, 668-КФ против чумы собак, многие вакцины против болезней птиц);

ослабление возбудителя путем культивирования на питательных средах с добавлением неблагоприятных веществ (БЦЖ против туберкулеза);

ослабление возбудителя посредством ультрафиолетового облучения — УФО (против ИРТ КРС-ВИЭВ, листериоза из штамма АУФ);

отбор авирулентных штаммов: естественных или полученных путем селекции в лабораториях (вакцины из штамма 55 ВНИИВВиМ против сибирской язвы; из штаммов 19 и 82 против бруцеллеза; ВР-2 против рожи).

Инактивированные вакцины,как правило, вырабатывают менее напряженный иммунитет, чем живые. Особенности использования: необходимость значительно большего количества антигена, а также повторных вакцинаций (ревакцинаций) и депонирующих веществ (адъювантов) при введении — для усиления иммуногенности. Преимущества инактивированных вакцин: они более безопасны, так как не способны спровоцировать заболевание у животных и общие реакции при их использовании обычно слабее, чем в случае иммунизации живыми вакцинами. В то же время местная реактогенность при иммунизации депонированными вакцинами (особенно эмульгированными) может быть достаточно высокой.

Субъединичные и генно-инженерные вакцины(к последним относят также ДНК-вакцины) в ветеринарии распространены еще недостаточно широко (есть разработки в отношении сальмонеллеза, эшерихиоза, бруцеллеза, ящура). Как правило, их иммуногенность уступает иммуногенности вакцин, изготавливаемых по традиционным технологиям. Вместе с тем указанные вакцины практически лишены недостатков, свойственных вакцинам первых двух классов и могут быть использованы для иммунизации молодняка, беременных и ослабленных животных.

Сравнительная характеристика живых и аттенуированных вакцин приведена в таблице 13.

Вакцины выпускают в жидком или сухом (лиофилизированные) виде; выбор вакцины — живая или инактивированная — зависит от эпизоотической ситуации. Различают три вида иммунизации в зависимости от способа формирования иммунитета:

активная — применяют вакцины, при этом иммунитет вырабатывается самим организмом;

пассивная — применяют сыворотки или иммуноглобулины, при этом в организм вводят готовые антитела (полученные при иммунизации других животных — продуцентов);

Существуют также различные способы вакцинации и методы введения вакцин.

Общеизвестно большое социально-экономическое значение гриппа, который, периодически распространяясь по странам и континентам земного шара, в сравнительно сжатые сроки поражает миллионы людей, нанося не только вред здоровью населения, но и существенный экономический ущерб. Неудивительно, что поиск эффективных вакцин для специфической профилактики гриппа и разработка рациональной системы их применения являются одной из наиболее актуальных задач медицинской науки и практики здравоохранения. Если к тому же учесть способность вируса гриппа изменять свою антигенную структуру, вероятнее всего под влиянием формирующегося после очередных эпидемий иммунитета населения или, как говорят вирусологи, осуществлять антигенный дрейф путем смены одного, а то и двух поверхностных антигенов (гемагглютинина и нейраминидазы), то становится понятным, почему в нашей стране применяется несколько живых и убитых гриппозных вакцин. Наличие ряда вакцинных препаратов создает условия для более гибкой тактики иммунопрофилактики гриппа в преддверии ожидаемых эпидемий.

Живые гриппозные вакцины издавна широко применяются в нашей стране. В настоящее время используются две живые вакцины, технология производства и способы применения которых различаются.

Живая гриппозная аллантоисная вакцина служит для иммунопрофилактики взрослых в возрасте старше 16 лет и готовится из аттенуированных штаммов вируса типа А или В. Степень аттенуации, достигаемой путем пассажей вируса на куриных эмбрионах, полноценность его антигенной структуры, биологическая активность, безвредность, а также реактогенность и иммуногенность для человека регламентированы специальной инструкцией по подготовке вакцинных штаммов. Только при условии соответствия перечисленных свойств аттенуированного штамма требованиям этой инструкции он используется для производства вакцины.

Из специальных хозяйств получают партию куриных эмбрионов 10-11-дневного возраста, обжигают поверхность яиц спиртом, обрабатывают йодом и заражают 1000 заранее оттитрованных эмбриональных инфекционных доз вакцинного штамма. Такую дозу в объеме 0,1 мл вводят шприцем в аллантоисную полость, затем яйца инкубируют в течение 48-72 ч при 33-35°С, с помощью овоскопии отбирают жизнеспособные эмбрионы, охлаждают при 4°С в течение 18-24 ч, после чего, соблюдая условия стерильности, отсасывают вируссодержащую аллантоисную жидкость. Затем ее стабилизируют путем добавления равного объема 10% раствора пептона, вводят в качестве консерванта антибиотики (неомицин и микостатин - соответственно 500 и 200 ед. на 1 мл) и разливают в ампулы. После лиофилизации высушенную вакцину контролируют на:

-стерильность (недопустимо наличие посторонних микроорганизмов);

- физические свойства (таблетка должна иметь вид пористой массы с желтоватым оттенком, легко и полностью растворяться, а остаточная влажность не должна быть выше 3%);

- реактогенность и иммуногенность для людей.

Таким образом, эта вакцина не подвергается специальным процедурам очистки и концентрации, что во многом определяется способом ее применения.

Перед использованием таблетку растворяют в указанном в инструкции объеме дистиллированной или кипяченой воды, охлажденной до комнатной температуры. Применяется вакцина троекратно с интервалом 2- 3 недели интраназальным путем с помощью специального распылителя; введение ее с помощью иных приспособлений (пипеток и т. п.) зачастую снижает эффективность прививок.

Разовая прививочная доза содержится в 0,5 мл растворенного препарата. Так как препарат выпускается в виде двух моновакцин типа А и В, то при необходимости одновременной иммунизации против гриппа А и В прививаемому вводят по 0,25 мл вакцины каждого типа, не превышая ранее указанной величины объема разовой прививочной дозы.

Срок годности вакцины при условии соблюдения режимов ее правильной транспортировки и хранения в сухом темном месте при 2-4° равен 1 году.

Живая гриппозная тканевая вакцина в отличие от ранее описанной живой аллантоисной вакцины служит для иммунопрофилактики гриппа как взрослых, так и детей в возрасте старше 1 года. Эта вакцина применяется энтерально - через рот, что несколько упрощает проведение массовых прививок.

Принципы технологии получения этой вакцины следующие. С соблюдением условий стерильности получают почки 19-дневных куриных эмбрионов; измельченную с помощью вакуума почечную ткань взвешивают в специальной среде № 199, содержащей 2% сыворотки крови крупного рогатого скота, в случае инокуляции вирусом типа В и заражают аттенуированным вакцинным штаммом вируса типа А или В, свойства которого отвечают ранее перечисленным требованиям специальной инструкции. Затем сосуды с суспензией зараженных клеток помещают в роллерную установку, где они вращаются со скоростью 4-6 об/мин. После инкубирования вируссодержащую жидкость собирают, стабилизируют добавлением сорбита и желатина до концентрации соответственно 5 и 2,5%, разливают во флаконы и лиофилизируют. После этого препарат контролируют на:

- полноценность антигенной структуры;

- реактогенность и иммуногенность для людей.

Если результаты контроля соответствуют перечисленным требованиям, вакцина может использоваться, в частности, для профилактических прививок, которые проводят за 2 месяца до ожидаемого увеличения заболеваемости троекратно с интервалами в 2-3 недель.

Перед употреблением вакцину, выпускаемую во флаконах по 30 мл, растворяют указанным в инструкции количеством дистиллированной или охлажденной до комнатной температуры кипяченой воды до первоначального (до сушки) объема. Разовая прививочная доза дивакцины против типа А и В в зависимости от возраста прививаемых колеблется в пределах 0,5-2 мл. Вводится дивакцина через рот с помощью пипетки или шприца без иглы.

Срок годности правильно транспортировавшейся и хранившейся в сухом затемненном месте при 2-4°С вакцины 1 год.

Убитые гриппозные вакцины издавна применяются для иммунопрофилактики гриппа во многих странах мира. В последнее время и в нашей стране широко используются два вида убитых корпускулярных (из целых вибрионов) вакцин, отличающихся по технологии очистки и концентрации.

Гриппозная хроматографическая инактивированная вакцина. В производстве этой вакцины для получения больших объемов вируссодержащего материала 10-12-дневных куриных эмбрионов, получаемых из специальных хозяйств, в аллантоисную полость помещают 0,3 мл взвеси полноценного по биологическим свойствам неаттенуированного штамма вируса гриппа с избранной антигенной структурой и инкубируют 48 ч при 34-37°С (вирус типа А) или 72 ч при 32-35°С (вирус типа В). Затем после охлаждения при 4°С в течение 1 суток яйца с жизнеспособными эмбрионами вскрывают, вируссодержащую аллантоисную жидкость отсасывают, собирают во флаконы или бутыли и после взятия пробы на стерильность добавляют мертиолат в соотношении 1:10 000. Вируссодержащую жидкость с консервантом можно длительно хранить при 4°С.

Предварительная очистка и концентрация препарата в зависимости от содержания вируса осуществляется с помощью 1-7% суспензии формалинизированных куриных эмбрионов. При этом используется способность вирусов гриппа, обладающих особым антигеном - гемагглютинином, при 2-4°С за 16-18 ч практически полностью адсорбироваться на эритроцитах. Затем отделяют несколько раз вирусы от эритроцитов путем элюции - отмывания вирусов физиологическим раствором в термостате при встряхивании. В конечном итоге получают осадок освобожденных от вирусов эритроцитов и практически чистую взвесь вирусных частиц в физиологическом растворе.

Окончательная очистка этой взвеси с параллельным увеличением концентрации вирусных частиц достигается путем ее фильтрации через хроматографические колонки специально подготовленными гранулами микропористого натриево-борсиликатного стекла. Способность этого стекла к избирательной фильтрации обусловлена тем, что при подогреве до 450-600°С оно расслаивается на двуокись кремния и борнокислого натрия, выделяющегося в виде мельчайших диффузно расположенных капель, размеры которых возрастают по мере увеличения времени и температуры нагревания. После охлаждения борнокислый натрий растворяют, протравливая стеклокислотой, и на месте капель остаются поры желаемого размера. Один грамм такого стекла содержит до 2000 км поровых канальцев. В полученном фильтрате вирусы инактивируют ультрафиолетовыми лучами в специальной установке и практически готовую вакцину после добавления 0,2% альбумина (наполнитель) разливают в ампулы или флаконы.

После этого вакцину контролируют на:

- стерильность, в том числе на полноту инактивации вируса гриппа;

- реактогенность и иммуногенность для людей.

По итогам контрольных исследований решается вопрос о возможности передачи данной серии вакцины в практику.

Выпускается вакцина в виде двух монопрепаратов типа А или В в ампулах по 0,5 мл и флаконах по 20-100 мл. Срок годности правильно транспортирующейся (самолетом или с нарочным) и хранящейся в сухом, затемненном месте при 2-4°С вакцины 1 год.

Применяется эта вакцина для прививок взрослым в возрасте от 18 лет. Вакцину при прививках населению вводят однократно шприцем или безыгольным инъектором внутрикожно в объеме 0,2 мл (до 320 ME) или подкожно в объеме 0,5 мл (до 800 ME) при вакцинации доноров. В процессе контролируемых эпидемиологических опытов установлено, что приведенные прививочные дозы обеспечивают формирование поствакцинального иммунитета, достаточного для защиты от гриппа более 70% привитых во время эпидемий, вызванных вирусам, антигенная структура которого тождественна структуре вакцинного штамма.

Гриппозная градиентная инактивированная вакцина. При изготовлении этой вакцины все этапы технологического процесса, связанные с получением больших объемов вируссодержащего материала, принципиально не отличаются от таковых при производстве хроматографической вакцины. Действительно, в той же последовательности осуществляется подготовка и проверка свойств посевного штамма неаттенуированного вируса гриппа, заражение его заданными дозами крупной партии куриных эмбрионов и, наконец, сбор вируссодержащей аллантоисной жидкости. Правда, в последнюю сразу же добавляют не мертиолат, а формалин и сульфат магния, которые выполняют одновременно функцию консерванта и агента, обеспечивающего инактивацию вируса.

Однако дальнейший процесс очистки и концентрации производится совершенно иначе. Так, вначале осуществляется предварительная очистка (осветление) вируссодержащей жидкости путем ее "мягкого" центрифугирования со скоростью 8000-12 000 об/мин при температуре 4-6°С. И лишь после этого производится окончательная очистка и концентрация осветленной аллантоисной жидкости путем проточного центрифугирования в градиенте плотности сахарозы со скоростью 33 000-35 000 об/мин и последующего изоплотностного центрифугирования в течение 1-2 ч при 75 000 g. Затем градиент плотности сахарозы вытесняется стерильным фосфатным буферным раствором, фракции градиента собирают в стерильные флаконы, после чего отбирают те из них, которые содержат 35-46% сахарозы и обладают гемагглютинирующей активностью не менее 16 000 гемагглютинирующих единиц (ГАЕ).

Отобранные фракции объединяют, разводят тем же буферным раствором до 16 000-64 000 ГАЕ и выдерживают при температуре 4-6°С 5-7 суток, в течение которых происходит полная инактивация вируса гриппа под действием ранее добавленного формалина. После контроля полноты инактивации полуфабрикат разводят фосфатным буферным раствором до 20 000- 40 000 ГАЕ и стерилизуют путем фильтрования в специальной установке под давлением. Профильтрованный материал (по сути дела готовую вакцину) разливают во флаконы, а при необходимости в ампулы и контролируют, подобно тому как контролируют хроматографическую гриппозную инактивированную вакцину, что уже было описано ранее. Если результаты контроля вакцины положительны, она выпускается для практического применения.

Срок годности вакцины при правильной транспортировке и хранении в сухом затемненном месте при 2- 8°С 1 год.

Вакцину вводят внутрикожно в объеме 0,1 мл.

Основными противопоказаниями к введению инактивированных гриппозных вакцин являются повышенная температура тела, острые инфекционные и системные заболевания, аллергозы, в том числе идиосинкразия к яйцам кур.

Существуют разные мнения о имеете живых и убитых вакцин в системе иммунопрофилактики гриппа. С учетом простоты патогенетически обоснованного метода иммунизации, а также ряда технологических и экономических особенностей производства потенциальные возможности живых гриппозных вакцин чрезвычайно высоки. Эффективность массовых прививок этими вакцинами несомненно существенно возрастет после усовершенствования техники иммунизации с гарантированной аппликацией прививочной дозы и технологии получения вакцинных штаммов, которая должна обеспечить возможность своевременного производства и применения препаратов, изготовленных на основе аттенуированных штаммов вируса с антигенной структурой, тождественной структуре эпидемических штаммов вирусов гриппа, иными словами, штаммов, вызывающих развитие эпидемий гриппа. Не исключено, что именно возможность оперативного получения убитых гриппозных вакцин из не требующих аттенуации эпидемических штаммов вируса гриппа, а также методика их введения, гарантирующая аппликацию строго установленной оптимальной прививочной дозы, а следовательно и формирование напряженного поствакцинального иммунитета, определили широкое применение этих вакцин, эффективность которых не вызывает сомнений.