Гост 26075-2013 животные методы лабораторной диагностики бешенства
Купить ГОСТ 26075-2013 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее
Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль"
Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.
- Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
- Курьерская доставка (7 дней)
- Самовывоз из московского офиса
- Почта РФ
Распространяется на все виды млекопитающих животных и устанавливает следующие методы лабораторной диагностики бешенства: - метод флуоресцирующих антител (МФА); - метод выделения вируса бешенства в культуре клеток мышиной нейробластомы CCL-131 (или невриномы Гассерова узла крысы – НГУК-1); - биопроба на белых мышах; - метод иммуноферментного анализа (ИФА); - реакция диффузионной преципитации (РДП).
Оглавление
1 Область применения
2 Нормативные ссылки
3 Термины, определения и сокращения
4 Условия выполнения исследований и требования безопасности
5 Средства измерений, оборудование, материалы, реактивы и животные
7 Метод флуоресцирующих антител (МФА)
8 Метод выделения вируса бешенства в культуре клеток мышиной нейроблатомы CCL-131 (или невриномы Гассерова узла крысы - НГУК-1)
9 Биопроба на белых мышах
10 Метод иммуноферментного анализа (ИФА)
11 Реакция диффузионной преципитации (РДП)
| Дата введения | 01.01.2015 |
|---|---|
| Добавлен в базу | 01.10.2014 |
| Актуализация | 01.02.2020 |
- Раздел Экология
- Раздел 11 ЗДРАВООХРАНЕНИЕ
- Раздел 11.220 Ветеринария
- Раздел 11 ЗДРАВООХРАНЕНИЕ
- Раздел Электроэнергия
- Раздел 11 ЗДРАВООХРАНЕНИЕ
- Раздел 11.220 Ветеринария
- Раздел 11 ЗДРАВООХРАНЕНИЕ
| 27.06.2013 | Утвержден | Межгосударственный Совет по стандартизации, метрологии и сертификации | 57-П |
|---|---|---|---|
| 30.09.2013 | Утвержден | Федеральное агентство по техническому регулированию и метрологии | 1127-ст |
| Издан | Стандартинформ | 2014 г. | |
| Разработан | ФГБУ ВГНКИ |
- ГОСТ 12.0.004-90Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения. Заменен на ГОСТ 12.0.004-2015.
- ГОСТ 12.1.005-88Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны
- ГОСТ 12.1.008-76Система стандартов безопасности труда. Биологическая безопасность. Общие требования
- ГОСТ 12.4.011-89Система стандартов безопасности труда. Средства защиты работающих. Общие требования и классификация
- ГОСТ 17.0.0.01-76Система стандартов в области охраны природы и улучшения использования природных ресурсов. Основные положения
- ГОСТ 6709-72Вода дистиллированная. Технические условия
- ГОСТ 12026-76Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
- ГОСТ 13739-78Масло иммерсионное для микроскопии. Технические требования. Методы испытаний
- ГОСТ 16317-87Приборы холодильные электрические бытовые. Общие технические условия
- ГОСТ 177-88Водорода перекись. Технические условия
- ГОСТ 21241-89Пинцеты медицинские. Общие технические требования и методы испытаний
- ГОСТ 22967-90Шприцы медицинские инъекционные многократного применения. Общие технические требования и методы испытаний
- ГОСТ 24861-91Шприцы инъекционные однократного применения
- ГОСТ 25046-81Иглы инъекционные однократного применения. Основные размеры. Технические требования. Методы испытаний
- ГОСТ 25336-82Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
- ГОСТ 2603-79Реактивы. Ацетон. Технические условия
- ГОСТ 2768-84Ацетон технический. Технические условия
- ГОСТ 29230-91Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 4. Пипетки выдувные
- ГОСТ 4204-77Реактивы. Кислота серная. Технические условия
- ГОСТ 8074-82Микроскопы инструментальные. Типы, основные параметры и размеры. Технические требования
- ГОСТ 9147-80Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия
- ГОСТ 9284-75Стекла предметные для микропрепаратов. Технические условия
- ГОСТ ИСО/МЭК 17025-2009Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий. Заменен на ГОСТ ISO/IEC 17025-2019.
- ГОСТ ISO 7218-2011Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям. Заменен на ГОСТ ISO 7218-2015.
- Показать все
Чтобы бесплатно скачать этот документ в формате PDF, поддержите наш сайт и нажмите кнопку:
ТЕРРИТОРИАЛЬНЫЕ ЕДИНИЧНЫЕ РАСЦЕНКИ НА РАБОТЫ ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ ОБСЛУЖИВАНИЮ И РЕМОНТУ ОБОРУДОВАНИЯ ГОРОДСКОГО ХОЗЯЙСТВА
ЯМАЛО-НЕНЕЦКИЙ АВТОНОМНЫЙ ОКРУГ
Часть 14
КАНАЛИЗАЦИОННЫЕ КОЛЛЕКТОРЫ
ТЕРРИТОРИАЛЬНЫЕ ЕДИНИЧНЫЕ РАСЦЕНКИ НА РАБОТЫ ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ ОБСЛУЖИВАНИЮ И РЕМОНТУ ОБОРУДОВАНИЯ ГОРОДСКОГО ХОЗЯЙСТВА
ТЕРтр 81-07-14-2001 ЯМАЛО-НЕНЕЦКИЙ АВТОНОМНЫЙ ОКРУГ Часть 14
КАНАЛИЗАЦИОННЫЕ КОЛЛЕКТОРЫ
ББК 65.31 УДК 338.5:69 (083)
Территориальные сметные нормативы.
Территориальные единичные расценки на работы по техническому обслуживанию и ремонту оборудования городского хозяйства. Ямало-Ненецкий автономный округ.
ТЕРтр 81-07-14-2001 Часть 14. Канализационные коллекторы
Салехард, 2011 - 9 стр.
Территориальные единичные расценки на работы по техническому обслуживанию и ремонту оборудования городского хозяйства (далее - ТЕРтр) предназначены для определения затрат при выполнении на работы по техническому обслуживанию и ремонту оборудования городского хозяйства и составления на их основе сметных расчетов (смет) на производство указанных работ.
РАЗРАБОТАНЫ Сибирским центром ценообразования в строительстве, промышленности и
УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Правительства Ямало-Ненецкого автономного округа от 13.10.2011 № 755-п.
Настоящие территориальные сметные нормативы не могут быть полностью или частично воспроизведены, тиражированы и распространены в качестве официального издания без разрешения Департамента строительства и жилищной политики Ямало-Ненецкого автономного округа.
ТЕРРИТОРИАЛЬНЫЕ ЕДИНИЧНЫЕ РАСЦЕНКИ НА РАБОТЫ ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ ОБСЛУЖИВАНИЮ И РЕМОНТУ ОБОРУДОВАНИЯ ГОРОДСКОГО ХОЗЯЙСТВА ЯМАЛО-НЕНЕЦКИЙ АВТОНОМНЫЙ ОКРУГ
Наименование и характеристика строительных работ и конструкций
| Статус документа: | Взамен |
| Что заменяет: |
|
| Дата начала действия: | 01 янв. 2015 г. |
| Количество страниц: | 12 стр. |
| Дата издания: | 01 апр. 2014 г. |
| Когда и где опубликован: | Бюллетень нормативных актов федеральных органов исполнительной власти от 20 апреля 2009 г. N 16 |
| Страна-разработчик: | Российская Федерация |
| Разработан: |
|
| Издан: |
|
| Утвержден: |
|
| Содержание: | 1 Область применения 2 Нормативные ссылки 3 Термины, определения и сокращения 4 Условия выполнения исследований и требования безопасности 5 Средства измерений, оборудование, материалы, реактивы и животные 6 Отбор проб 7 Метод флуоресцирующих антител (МФА) 8 Метод выделения вируса бешенства в культуре клеток мышиной нейроблатомы CCL-131 (или невриномы Гассерова узла крысы - НГУК-1) 9 Биопроба на белых мышах 10 Метод иммуноферментного анализа (ИФА) 11 Реакция диффузионной преципитации (РДП) Библиография |
| Ссылки в документе: |
|
| Разделы классификатора: |
|
Отзывы
Нет отзывов, пока еще.
ГОСТ 26075-2013 Животные. Методы лабораторной диагностики бешенства
Стандарт распространяется на все виды млекопитающих животных и устанавливает следующие методы лабораторной диагностики бешенства: - метод флуоресцирующих антител (МФА); - метод выделения вируса бешенства в культуре клеток мышиной нейробластомы CCL-131 (или невриномы Гассерова узла крысы – НГУК-1); - биопроба на белых мышах; - метод иммуноферментного анализа (ИФА); - реакция диффузионной преципитации (РДП).
ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА БЕШЕНСТВА
По данным Роспотребнадзора, за январь-декабрь 2015 г. в Российской Федерации зарегистрировано 6 случаев инфицирования человека вирусом бешенства, что превышает показатели 2014 г. в два раза. Так же в стране зарегистрировано 3739 случаев заболеваемости животных, сообщает Центральная научно-методологическая ветеринарная лаборатория. Из них на долю диких животных, приходится 48,8%, собак и кошек – 37,9%, сельскохозяйственных животных – 12,4% эпизодов.
Полученные данные свидетельствуют о резком усугублении эпизоотической ситуации по бешенству, что заставляет обратить специалистов ветеринарной медицины усиленное внимание на данную проблему.
Наиболее действенным методом контроля бешенства среди животных является своевременная иммунопрофилактика и диагностика.
Возбудителем заболевания является вирус бешенства Rabies lyssavirus.
Family/ Семейство – Rhabdoviridae;
Genus/ Род – Lyssavirus;
Species/ Вид - Rabies lyssavirus.
Методы лабораторной диагностики бешенства стандартизированы. Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 30-09-2013 г. № 1127-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 26075-2013 введен в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2015 г.
Настоящий стандарт распространяется на все виды млекопитающих животных и устанавливает следующие методы лабораторной диагностики бешенства: метод флуоресцирующих антител (МФА); метод выделения вируса бешенства в культуре клеток мышиной нейробластомы CCL-131 (или невриномы Гассерова узла крысы - НГУК-1); биопроба на белых мышах; метод иммуноферментного анализа (ИФА); реакция диффузионной преципитации (РДП).
Для диагностики используются:
1. Метод флуоресцирующих антител. Выявление антигена вируса бешенства меченными флуоресцеинизотиоцианатом антирабическими антителами, с образованием характерных светящихся комплексов-включений, обнаруживаемых в поле зрения люминесцентного микроскопа.
Для выявления вирусного антигена в мазках-отпечатках мозга используют прямую и непрямую реакцию иммунофлюоресценции. Мазки фиксируют в холодном ацетоне в течение 8-10 ч при температуре 4° С и обрабатывают во влажной камере 30 мин. антирабический иммуноглобулин, меченым ФИТЦ, промывают фосфатным буфером, высушивают и исследуют в люминесцентном микроскопе. Антигены вируса наблюдается в виде зеленых гранул разной формы и величины. В случае отрицательного результата, требуется провести другие методы диагностики.
2. Метод выделения вируса в культуре клеток мышиной нейробластомы CCL-131. Основан на размножении вируса в культуре клеток и его идентификации методом флуоресцирующих антител.
Суспензированый пат. материал вносят в культуру клеток, оставляя лунки для контроля. Положительный контроль - суспензия мозга мыши со штаммом вируса бешенства CVS, отрицательный - суспензия мозга клинически здоровой мыши. Далее инкубируют во влажном CO2 инкубаторе с содержанием 5 CO2% при 37±1°С в течении 42-28ч. Высушивают, фиксируют в холодном ацетоне в течении 30 мин, вновь высушивают. Далее с добавлением ФАГ в рабочем разведении, помещают во влажную чашку Петри и инкубируют при 37±1°С в течении 30 мин. По окончании трехкратно промывают, погружая на 10 мин в сосуд с ФБР, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают. Наносят нефлуоресцирующее иммерсионное масло и просматривают в люминесцентном микроскопе. Антиген вируса бешенства выявляется в цитоплазме культуры клеток в виде ярких зеленых гранул различной формы с четкими краями.
3. Метод биопробы. Выделение вируса бешенства на белых мышах путем введения им суспензии патологического материала с последующей идентификацией вируса методом флуоресцирующих антител.
Наиболее пригодными для заражения являются мыши-сосунки. Для постановки биопробы используют 15-20 животных. Заражение проводят под наркозом путем интрацеребрального введения 0,03 мл суспензии исследуемого материала. При наличии в исследуемом материале вируса бешенства у мышей возникает тремор мышц, параличи. В большинстве случаев животные погибают в течение пяти дней. Наличие вируса бешенства в зараженных и погибших мышах необходимо подтвердить с помощью прямой реакции иммунофлуоресценции или обнаружения телец Бабеша-Негри. Идентификацию обнаруженного вируса бешенства проводят также с помощью реакции нейтрализации на белых мышах.
4. Метод иммуноферментного анализа. (ELISA) Основан на специфическом взаимодействии вирусного антигена с антирабическим антителом, иммобилизованном на твердом носителе, с последующим выявлением связавшегося антигена с помощью второго, меченного ферментом, антитела, путем окрашивания продукта реакции хромогеном.
Готовые разведения антирабической сыворотки вносят в приготовленные лунки в агаровом геле. Чашки Петри помещают в термостат при 37±1°С на 48 часов. Реакцию считают положительной при появлении одной или 2-3 линий преципитации любой интенсивности между лунками, содержащими суспензию мозга и антирабический гамма-глобулин. Отрицательный результат подтверждается другими методами.
Принимая во внимание высокую опасность болезни, обусловленную полной летальностью, специалисту ветеринарной медицины нужно знать, что окончательный диагноз может быть поставлен только методами лабораторной диагностики. Поэтому трудно переоценить значимость вышеперечисленных методов для практической ветеринарной медицины.
Библиографический список
Гайсаров, М.С. Эпизоотологическая характеристика бешенства животных в Республике Башкортостан, профилактика и меры борьбы с ним [Текст] : автореферат дис. канд. биол. наук : 16.00.03 / Гайсаров М. С.; Башкирский ГАУ. - Уфа : [б. и.], 2009. с. 18-19
Гулюкин, А.М. Значимость современных методов лабораторной диагностики и идентификации возбудителя бешенства для иммунологического мониторинга данного зооноза [Текст] / А.М. Гулюкин // М.:Вопросы вирусологии № 3, 2014 г. - с. 5-10.
Методы лабораторной диагностики бешенства. [Текст] : ГОСТ 26075-2013 - Введ. 2015-01-01. - М.: Госстандарт России, 2013. - 19с.
Стандартизация - деятельность по установлению правил и характеристик в целях их добровольного многократного использования, направленная на достижение упорядоченности в сферах производства и обращения продукции и повышение конкурентоспособности продукции, работ или услуг.
Экспертиза нормативных документов
Разработка национальных и межгосударственных стандартов
Очень важным аспектом работы отдела технического регулирования и стандартизации является разработка национальных и межгосударственных стандартов по программам, утвержденным Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандартом).
Разработка стандартов осуществляется для:
- формирования области аккредитации Органа по сертификации и Испытательного центра;
- взаимного признания результатов испытаний при регистрации лекарственных средств и кормовых добавок на территории государств Евразийского экономического союза;
- формирования нормативной базы по методам испытаний Технических регламентов Таможенного союза (ТР/ТС);
- повышения конкурентноспособности продукции;
- продвижения продукции российских производителей на международные рынки.
Работа Технического комитета 454
Технический комитет – регулируемая национальным органом по стандартизации форма сотрудничества заинтересованных организаций, органов власти и физических лиц при проведении работ по национальной, межгосударственной и международной стандартизации в определенной сфере деятельности.
Технический комитет решает следующие задачи:
- формирование программы разработки национальных стандартов по закрепленной за данным ТК областью деятельности;
- проведение научно-технической, правовой и нормативной экспертиз проектов национальных и межгосударственных стандартов и проектов изменений к действующим стандартам, а также представление их на утверждение (принятие) в национальный орган по стандартизации;
- регулярная проверка действующих в Российской Федерации и закрепленных за ТК национальных и межгосударственных стандартов с целью выявления необходимости их обновления или отмены;
- проведение экспертизы проектов правил стандартизации и проектов рекомендаций по стандартизации, если они относятся к области деятельности ТК;
- проведение экспертизы проектов стандартов организаций и технических условий;
- сотрудничество с техническими комитетами в смежных областях деятельности (ТК 335, ТК 004, ТК 300)
При планировании и проведении доклинических и клинических исследований лекарственных препаратов для ветеринарного применения разработчикам следует руководствоваться документами:
При отсутствии необходимой информации в приведенных выше документах, можно использовать международные руководства, размещенные на официальных сайтах соответствующих организаций:
Первая редакция
Окончательная редакция
Типовой договор на проведение экспертизы регистрационных материалов /внесения изменений в РД.
Информация о количестве представляемых для проверки качества и безопасности образцов и требованиях к сопровождающей их документации:
Заявитель представляет для анализа лабораторную пробу в четырех повторностях (одной партии): для проведения испытаний по показателям качества и безопасности, для проведения микробиологического контроля, микологического контроля, контроля на ГМО.
Отбор лабораторных проб проводят с учетом требований нормативного или технического документа на конкретную продукцию в соответствии с ГОСТ 13496.0.
При этом:
- для микробиологического контроля заявитель предоставляет 1 упаковку добавки в потребительской таре, но не менее 100 г (мл). Если масса (объем) потребительской упаковки превышает массу (объем) лабораторной пробы ее отбирают асептическим способом (исключающим микробное загрязнение продукции из окружающей среды) в стерильные емкости, полиэтиленовые пакеты, фольгу;
- для микологического контроля заявитель предоставляет 1 упаковку добавки в потребительской таре, но не менее 100 г (мл). Если масса (объем) потребительской упаковки превышает массу (объем) лабораторной пробы ее отбирают асептическим способом (исключающим микробное загрязнение продукции из окружающей среды) в стерильные емкости, полиэтиленовые пакеты, фольгу;
- для контроля на ГМО заявитель предоставляет 1 упаковку добавки в потребительской таре, но не менее 100 г (мл). Если масса (объем) потребительской упаковки превышает массу (объем) лабораторной пробы ее отбирают в отдельные емкости, полиэтиленовые пакеты, фольгу.
Лабораторную пробу маркируют с указанием:
- наименования организации-производителя добавки, ее адреса;
- наименования и назначения добавки;
- номера и объема партии;
- даты изготовления;
- срока хранения добавки;
- даты отбора лабораторной пробы;
- массы (объема) пробы;
- должность и фамилию лица, осуществляющего отбор пробы.
Информация о порядке подачи дополнительных материалов на кормовые добавки, процедура которых приостановлена:
В соответствии с письмом Россельхознадзора № ФС-НВ-2/3301 от 21.02.2017 г. дополнительные материалы на кормовые добавки, процедура которых приостановлена, а также представляемые заявителями для учета при проведении экспертизы кормовой добавки (переименование добавки и др), направляются заявителями в Россельхознадзор.
Национальные стандарты
Межгосударственные стандарты
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ЖИВОТНЫЕ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ
МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ БЕШЕНСТВА
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ст_. .
М осква промышленная безопасность опасных производственных объектов РАЗРАБОТАН Министерством сельского хозяйства СССР
ИСПОЛНИТЕЛИ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮ ЗА ССР
ЖИВОТНЫЕ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ
ГОСТ Методы лабораторией диагностики бешенства 2 6 0 7 5 -8 4 Agricultural animals .
(CT СЭВ 3452— 81) Methods of labor#ton- diagnostics of rabies О К С Г У 9809 Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 9 января 1984 г. М 48 срок действия установлен ® С 01.07.84 д о 01.07.89 ^Несоблюдение стандарта преследуется по закону Настоящий стандарт распространяется на все виды животных и устанавливает методы лабораторной диагностики заболевания бешенством, вызываемого рабдовирусом .
Стандарт применяют при диагностике заболевания животных в лабораториях ветеринарных научно-исследовательских учрежде ний. республиканских и областных ветеринарных лабораториях Стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 3452—81 .
1. МЕТОД ОТБОРА ПРОБ
1.1. Для проведения исследований па бешенство в лабораторию направляют свежие трупы мелких животных целиком, от крупных животных - - головной мозг .
Для постановки биопробы допускаетсяиспользовать пробы моз га. консервированные в 30—50% ном растворе глицерина, !.2. Отобранный для исследования патологический материал упаковывают во влагонепроницаемую тару и в металлических кон тейнерах доставляют в лабораторию .
1.3. Патологический материал сопровождают документом, со держащим следующие данные:
наименование и адрес отправителя;
анамнестические и клиннко-эпизоотологнческие данные .
2. МЕТОД ИММУНОФЛУОРЕСЦЕНЦИИ
2.1. Аппаратура, материалы, реактивы и растворы Микроскоп люминесцентный .
Термостат с температурой нагрева 37°С .
Стекла предметные по ГОСТ 9234—75 .
Пробирки бактериологические по ГОСТ 25336—82 .
Чашки Петри по ГОСТ 25336—82 .
Пипетки мерные по ГОСТ 20292—74 .
Набор инструментов для вскрытия черепной полости и извле чения головного мозга животных .
Пинцеты по ГОСТ 21241—77 .
Горелка газовая или спиртовая .
Ацетон но ГОСТ 2603—79 .
Диагностический иммуноглобулин флуоресцирующий антира бический (ДАФИ) .
Масло нефлуоресцирующее иммерсионное по ГОСТ 13739—78 .
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709—72 .
Раствор фосфатный буферный, pH 7,4 .
2.2. Подготовка к исследованию 2.2.1. Из каждого отдела головного мозга (аммонова рога, моз жечка. коры больших полушарий и продолговатого мозга) готовят по два препарата — мазка-отпечатка .
2.2.2. Препараты высушивают на воздухе и фиксируют в ох лажденном ацетоне при плюс 4 или минус 12°С в течение 4—12 ч .
Затем препараты извлекают из ацетона, высушивают на воздухе 10 15 мин и помещают их во влажную камеру (чашки Петри с увлажненным дном) .
2.2.3. Диагностический антирабический флуоресцирующий им муноглобулин (ДАФИ) в рабочем разведении наносят равномерно иа всю поверхность препарата при помощи пипетки (примерно 0,1 см3 на один препарат), закрывают камеру с препаратами, по мешают в термостат и выдерживают 30 мин при 3Т°С. Затем пред метные стекла с препаратом троекратно промывают, погружая их каждый раз на 10 мин в сосуд, наполненный фосфатным ГОСТ 26075— W Стр. 3 буфером pH 7,4, промывают дистиллированной водой и высу шивают на воздухе .
На окрашенные препараты наносят иммерсионное нефлуоресцнрующее масло .
2.3. Проведение исследования 2-3.1. Подготовленные препараты просматривают под люминес центным микроскопом с иммерсионной системой .
2.4. Обработка результатов 2.4.1. При положительных результатах исследования в препа ратах, содержащих антиген вируса бешенства, обнаруживают раз ной величины и формы ярко светящиеся желто-зеленым цветом гранулы в нейронах и вне клеток. Размер их колеблется от елва заметных в виде песчинок образований до 15—20 мм Не пораженная вирусом бешенства мозговая нервная ткань све тится тусклым серовато-желтым или зеленоватым цветом .
3. МЕТОД ПОДАВЛЕНИЯ ИММУНОФЛУОРССЦЕНЦИИ
Сущность метода заключается в способности рабического ан тигена, связанного с нефлуоресцирующими антителами, вторично не входить в соединение с флуоресцирующим специфическим коньюгатом. Это свойство используется для доказательства специ фичности свечения комплекса «антиген-антнтело при исследова нии препаратов, предварительно не обрабатываемых нефлуоресцирующимн антителами .
3.1. Аппаратура, материалы, реактивы и растворы 3.1.1- Аппаратура, материалы, реактивы и растворы, указанные в п. 2.1, и дополнительно:
иммуноглобулин 5%-иый антирабический нсфлуореспнрующин моноспецифический;
раствор физиологический нейтральный .
3.2. Подготовка к исследованию 3.2.1. На фиксированные препараты, приготовленные из иссле дуемых участков головного мозга, наносят пипеткой 5%-ный анти рабический нефлуоресцирующий моноспецифический иммуногло булин, выдерживают их в течение 30 мин во влажной камере в тер мостате г.рн 37 °С. Затем препараты промывают двукратно нейт ральным физиологическим раствором и окрашивают антираби ческим флуоресцирующим иммуноглобулином (ДАФИ) по п. 2.2.3 .
3.3. Проведение исследования 3.3.1. Препараты просматривают под люминесцентным микрос копом с иммерсионной системой .
3.4. Обработка результатов 3.4.1. В препаратах, содержащих антиген вируса бешенства, предварительно обработанных нефлуоресцирующим и затем флуоCip. 4 ГОСТ Ив75— «4 ресцирующнм иммуноглобулином, свечения не должно быть, а в препаратах, ранее обработанных только флуоресцирующим' им муноглобулином наблюдают специфическое свечение .
4. МЕТОД РЕАКЦИИ ПРЕЦИПИТАЦИИ
Этим методом допускается исследовать несвежий патологичес кий материал, контаминнрованный бактериальный микрофлорой
4.1. Аппаратура, материалы и реактивы Термостат .
Осветитель для бактериологических работ .
Пипетки мерные и пастеровские по ГОСТ 20292—74 .
Чашки Петри по ГОСТ 25336 82 .
Трубка металлическая тонкостенная диаметром 4—5 мм .
Перо писчее ученическое .
Натрий хлористый по ГОС Г 4233—77 .
Метиловый оранжевый, 1%-ный раствоор в 50%-ном этилоном спирте но ГОСТ 5962—67 .
Диагностический иммуноглобулин антирабический .
Антиген отрицательный контрольный .
Антиген положительный контрольный .
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709—72 .
Гель агаровый биофабрнчного изготовления или приготовлен ный по реиептуое:
Агаровый гель с pH 7,2—7,4 разливают в стерильную посуду, автоклавируют при 0,5 атм в течение 30 мин, хранят в холодиль нике при 4°С .
42. Проведение исследования 4.2.1. Реакцию преципитации (РП) ставят на обезжиренных предметных стеклах, на которые предварительно наносят каплю расплавленного агара, пипеткой равномерно распределяя се по стеклу, и делают тонкий мазок. На застывший слой агара налива ют сверху 2.5 см3 агарового геля толщиной приблизительно 2 мм .
ГОСТ 26075— 84 Стр. 5 После застывания агара делают в нем лунки металлической тонкостенной трубочкой диаметром 4—5,6 мм согласно трафарету .
Агаровые столбики осторожно извлекают ученическим пером, не допуская отслаивания от стекла тонкого слоя агарового геля .
В РП исследуют от крупных животных (лошадей, крупного рогатого скота, собак, лисиц и др.) следующие части головного мозга—кору полушарий левой и правой сторон, аммоновы рога левый и правый, мозжечок и продолговатый мозг. У мелких живот ных РП ставят с какими-либо тремя отделами мозга. От мышей ис следуют весь головной мозг, который растирают в ступке или в са мой черепной коробке в массу пастообразной консистенции .
пикя с рвэвеаеяиеи гаобупвяа соответственно 1:2. 1:4. 1:8. |;1б Черт. I Подготовленные предметные стёкла помещают во влажную ка меру (чашки Петри с увлажненным дном) и при постановке реак ции лунки заполняют патологическим материалом и диагности ческим антирабическим иммуноглобулином (черт. 1—4) .
В центральные лунки, обозначенные на трафарете А,В,С.Д.Е,Ж, вносят исследуемый патологический материал, в периферические лунки 1,2,3,4. (см. черт. 1) — диагностический антирабический иммуноглобулин (1—2 капли) в разведениях 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 (от исходного разведения) на физиологическом растворе .
Одновременно ставят контрольные опыты с положительными и отрицательным антигенами, но каждый на отдельном стекле, ис пользуя тс же разведения иммуноглобулина .
После заполнения лунок соответствующими компонентами чаш ки Петри (влажные камеры) помещают в термостат при 37°С на 6 ч. Затем выдерживают чашки при комнатной температуре еще 42 ч .
Стр. 6 ГОСТ 2 6 0 7 3 -8 :
Сущность метода заключается в выявлении в клетках нервной ткани специфических цитоплазматических включений — телец Бабеша-Негри .
Метод выявления телец Бабешэ-Негрн является вспомогатель ным и имеет диагностическое значение только при обнаружении типичных, специфических включений .
5.1. Аппаратура, материалы и реактивы Микроскоп биологический по ГОСТ 8284—78 .
Стекла предметные по ГОСТ 9284—75 .
Пипетки мерные по ГОСТ 20292— 74 .
Буфер фосфатный pH 7,0—7,5 .
5.2. Подготовка к исследованию 5.2.1. Готовят мазки-отпечатки из аммонового рога, коры боль ших полушарий, мозжечка, продолговатого мозга и окрашивают по методу Селлерса .
5.3. Проведение исследования 5-3.1. Препараты просматривают под биологическим микросхопом е иммерсионной системой .
5.4. Обработка результатов 5.4.1. Положительным результатом исследования считают нали чие специфических телец. Бабеша-Негри, которые представляют собой четко очерченные овальные или продолговатые гранулиро ванные образования диаметром 2—10 мм, розово-красного цве!а, расположенные в нейтронах, а также, вне их .
От типичных гранулированных включений, обнаруживаемых при бешенстве, следует отличать включения нсгранулированные, обнаруживаемые при некоторых других инфекциях, поражающих центральную нервную систему .
6. МЕТОД БИОЛОГИЧЕСКОЙ ПРОБЫ
Сущность метода заключается в выделении вируса от больных убитых или павших животных путем инокулнрования патологичес кого материала белым мышам и последующей его идентификации .
Биопробу проводят, если выявление рабического антигона ме тодом нммунофлуоресценцнн (или РП и определение телец Бзбеша-Негрн) в первичном материале окажется отрицательным .
6.1. Аппаратура, материалы и растворы Центрифуга с частотой вращения 2000 об/мин .
Шприцы с иглами .
Посуда для содержания мышей. ' Антибиотики (стрептомицин, пенициллин) .
Раствор нейтральный физиологический .
6.2. Подготовка к исследованию 62.1. Материал для заражения мышей готовят из равных час тей нервной ткани лммонова рога, мозжечка, коры полушарий, продолговатого мозга .
Ткань измельчают ножницами и растирают в ступке (или гомо генизаторе), постепенно прибавляя нейтральный физиологический раствор до получения 10%-ной суспензии .
6.2.2. Суспензию центрифугируют с частотой нращения 2000 об/мин в течение 5—10 мин. Надосадочную жидкость перено сят в стерильную пробирку и.хранят в холодильнике при темпе ратуре 0—4 °С до ее использования. При подозрении на бактери альную нестерильность в суспензию добавляют 500 ME нениниллп .
Стр. 8 ГОСТ 26075— 34 на и 500 ME стрептомицина на I см3 суспензии и затем выдержи вают ес при комнатной температуре 30 мин .
6.3. Проведение исследования 6.3.1. Для биопробы берут белых лабораторных мышей мас сой 16—20 г или сосунков в возрасте 20—25 сут массой 6—8 г .
Мышей заражают подготовленной суспензией нитрацеребрачьно в дозе 0,015—0,03 см* в зависимости от массы мышей или под кожно в верхнюю губу в дозе 0,1—0,2 см* .
Па одну бнопробу заражают 6—10 мышей .
Зараженных мышей помещают в клетки или банки, на кото рые наклеивают этикетку с указанием даты заражения, коли чества мышей, способа заражения и номера экспертизы. Горло вину банки накрывают сеткой, препятствующей проникновению насекомых .
Зараженных мышей осматривают ежедневно в течение 30 сут .
Количество здоровых, больных н погибших мышей регистрируют в журнале .
6.4. Обработка результатов 6.4.1. При оценке результатов учитывают проявление клини ческих признаков у зараженных мышей:
нарушение координации движения;
Гибель зараженных мышей в срок до 48 ч не учитывают в оценке результатов. От мышей, павших после указанного срока, головной мозг исследуют, как указано в разд. 2—5 .
6.4.2. Биологическую пробу на бешенство считают положи тельной, если в препаратах из мозга зараженных мышей обнару живают тельца Бабеша-Негри или выявляют антиген методами иммунофлуоресценцин или в реакции преципитации .
6.4.3. Отрицательный диагноз на бешенство может быть дан только по истечении 30-суточной постановки биопробы при отсут ствии специфической гибели мышей .
7. МЕТОД СПЕЦИФИЧЕСКОЙ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ПРОБЫ
Сущность метода заключается в том, что мыши, зараженные мозговой тканью больных бешенством животных, заболевают бешенством, а зараженные тканью, предварительно обработанной антирабической сывороткой (иммуноглобулином), не заболевают .
7.1. Аппаратура, материалы, реактивы и растворы 7.1.1. Аппаратура, материалы и реактивы, указанные и п .
6.1, и дополнительно:
ГОСТ 26075— М Стр. 9 баня водяная;
сыворотка гипериммунная антирабическая (или иммуноглобу лин);
сыворотка нормальная или физиологический раствор. pH 7,2— 7,4 .
7.2. Подготовка к исследованию 7.2.1. Д ля проведения специфической биопробы отбирают 12 белых мышей (п. 6.3.1). Материал для заражения мышей готовят но п. 6.2 .
7.2.2. Подготовленную для заражения суспензию разливают в две пробирки по 3 см3. Затем в одну из них вносят 3 см3 анти рабическом гипериммунной сыворотки или иммуноглобулин. в другую — 3 см* нормальной сыворотки или физиологический раствор pH 7.2—7,4. Обе пробирки выдерживают в водяной бане в течение 10 мин при 37°С .
7 3. Проведение исследования Каждой смесью заражают по шесть белых мышей интрацеребрально н дозе 0,015—0.03 см3 или в губу в дозе 0,1—0.2 см* .
7.4. Обработка результатов 7.4.1. Положительным на бешенство результатом специфичес кой биопробы считают гибель мышей, зараженных материалом, обработанным нормальной сывороткой или физиологическим раст вором в течение 30 сут. При этом мыши, инфицированные мате риалом после обработки антирабической иммунной сывороткой или иммуноглобулином, должны остаться живыми .
7.4.2. Отрицательный диагноз на бешенство может быть дан только но истечении 30 сут постановки бнопробы, если нет спе цифической гибели мышей .
Тираж I60W Цеаа 3 коп .
Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.
Читайте также:
