Гистологический метод при вирусах
История вирусологии. Этапы развития вирусологии
Вирусология – биологическая наука, которая изучает природу, морфологию, химический состав, взаимодействие с клеткой вирусов, которые являются неклеточными инфекционными агентами, воспроизводящимися только в живой клетке.
Вирусология как наука делится на общую и частную.
Общая вирусология изучает природу, происхождение, строение, химический состав, генетику вирусов, взаимодействие их с клеткой хозяина, противовирусный иммунитет и методы диагностики вирусных болезней.
Частная вирусология изучает свойства возбудителей вирусных инфекций растений, животных, бактерий, вопросы патогенеза (учение о развитии болезни и механизме протекания биологических процессов), лабораторной диагностики, специфической профилактики и терапии вирусных заболеваний.
Открытие вирусов связано с именем Д. И. Ивановского и датируется 1892 г.
История развития вирусологии делится на четыре периода.
Первый период (древнейший мир - 1892). Вирусология как наука не существовала, а все исследования носили эмпирический характер. Сначала английским врачом Э. Дженнером предложена живая вакцина против натуральной оспы прививая неопасный для человека вирус коровьей оспы, в качестве метода иммунизации людей против этого заболевания. В 1796г. Э. Дженнер впервые сделал прививку от оспы восьмилетнему мальчику. Э. Дженнер является основателем метода вакцинации.
Затем Л. Пастер занимается бешенством. Создав первую вакцину против вирусного заболевания, он, однако, не раскрыл сущности вирусов. Самая первая за пределами Парижа станция прививок против бешенства была создана в Одессе И.И. Мечниковым.
Преимущество вирусов перед бактериями в том, что первые изменяются быстрее, чем вторые.
После открытия вирусов, вызывающих болезни растений (мозаичная болезнь табака) и животных (ящур), были открыты возбудители желтой лихорадки человека (У. Рид). В этот период учеными доказана способность вирусов инфицировать не только клетки растений и животных, но и самих бактерий - бактериофаг (Ф. Д’Эррель, 1915г.). Этот уровень развития вирусологии назван организменным.
Третий период (1940–1960 гг.). Широкое использование в вирусологии получают культуры клеток, что дало возможность культивировать вирусы, изучать их культуральные свойства, получать вакцины. Было доказано, что вирусы способны репродуцироваться только в живой клетке, вызывая при этом специфические изменения морфологии клеток (цитопатическое действие – ЦПД) или функциональное нарушение метаболизма клеток (цитопатический эффект – ЦПЭ). Этот уровень развития вирусологии назван клеточным.
Четвертый период (1970 г. – наши дни). Вирусы стали использовать для изучения фундаментальных проблем генетики, молекулярной биологии. Этот уровень развития вирусологии назван молекулярно-биологическим.
Методы исследования, применяемые в вирусологии: вирусоскопический, выделение и культивирование вирусов, биологический, серологический
Методы исследования, применяемые в вирусологии, аналогичны методам микробиологии.
1. Вирусоскопический метод. Этот метод исследования основан на использовании различных видов микроскопов: световой, люминесцентный (МИФ – метод иммунофлуоресценции, метод флуорохромирования), электронный (изучение морфологии вирусов).
Световая микроскопия позволяет выявлять крупные вирусы (вирусы оспы, эктимы овец), обнаруживать внутриклеточные включения, а также регистрировать цитопатическое действие вирусов на чувствительных тестобъектах.
Метод флуорохромирования люминесцентной микроскопии основан на свечении (люминесценции) вирусов после обработки их веществами – флуорохромами. Этот метод позволяет решать все те же задачи, что и световая микроскопия, однако за счет различного свечения двух типов нуклеиновых кислот вирусов (РНК, ДНК) дает возможность дифференцировать их по содержанию нуклеиновой кислоты.
Метод иммунофлуоресценции люминесцентной микроскопии основан на специфическом взаимодействии вирусного антигена с антителами, меченными флуорохромами. Этот метод позволяет идентифицировать вирусы.
Электронная микроскопия позволяет визуально наблюдать вирусные частицы за счет формирования изображения в электронном микроскопе потоком электронов. При этом становится возможным изучать морфологию вирионов, что позволяет дифференцировать вирусы по семействам (прямая электронная микроскопия).
2. Выделение и культивирование вирусов. Этот метод исследования основан на способности вирусов репродуцироваться (культивироваться) в живых клетках. В вирусологической практике нашли широкое применение три типа тест-объектов: РКЭ (развивающиеся куриные эмбрионы), культуры клеток и организм лабораторных животных. Использование этих тест-объектов позволяет обнаруживать присутствие вирусов в исследуемом материале, поддерживать его в активном состоянии, титровать вирусы, изучать их патогенные свойства, а также проводить постановку реакции нейтрализации и получать вакцины для профилактики вирусных инфекций.
3. Биологический метод. Этот метод исследования заключается в постановке биопробы на лабораторных животных с целью изучения патогенности вирусов. Данный метод исследования соответствует организменному уровню исследования.
4. Серологический метод (с участием жидкости – крови). В основе этого метода лежит постановка серологических реакций, т. е. реакций взаимодействия антигена с антителом in vitro. При этом возможно проводить идентификацию вируса, а также обнаруживать противовирусные антитела в сыворотке крови животных. Это основной метод диагностики вирусных инфекций, требующий минимум затрат и времени для проведения исследования.
Вирусологи́ческие методы исследования
Методы изучения биологии вирусов и их идентификации. В вирусологии широко используются методы молекулярной биологии, с помощью которых удалось установить молекулярную структуру вирусных частиц, способы проникновения их в клетку и особенности репродукции вирусов, первичной структуры вирусных нуклеиновых кислот и белков. Развиваются методы определения последовательности составляющих элементов вирусных нуклеиновых кислот и аминокислот белка. Появляется возможность связать функции нуклеиновых кислот и кодируемых ими белков с последовательностью нуклеотидов и установить причины внутриклеточных процессов, играющих важную роль в патогенезе вирусной инфекции.
Вирусологические методы исследования основаны также на иммунологических процессах (взаимодействие антигена с антителами), биологических свойствах вируса (способность к гемагглютинации, гемолизу, ферментативная активность), особенностях взаимодействия вируса с клеткой-хозяином (характер цитопатического эффекта, образование внутриклеточных включений и т.д.).
В диагностике вирусных инфекций, при культивировании, выделении и идентификации вирусов, а также при получении вакцинных препаратов широко применяют метод культуры ткани и клеток. Используют первичные, вторичные, стабильные перевиваемые и диплоидные клеточные культуры. Первичные культуры получают при диспергировании ткани протеолитическими ферментами (трипсином, коллагеназой). Источником клеток могут быть ткани и органы (чаще почки) эмбрионов человека и животных. Суспензию клеток в питательной среде помещают в так называемые матрацы, бутыли или чашки Петри, где после прикрепления к поверхности сосуда клетки начинают размножаться. Для заражения вирусами используют обычно клеточный монослой. Питательную жидкость сливают, вносят вирусную суспензию в определенных разведениях и после контакта с клетками добавляют свежую питательную среду, обычно без сыворотки.
Клетки большинства первичных культур могут быть пересеяны, такая культура называется вторичной. При дальнейшем пассировании клеток формируется популяция фибробластоподобных клеток, способных к быстрому размножению, большая часть которых сохраняет исходный набор хромосом. Это так называемые диплоидные клетки. При серийном культивировании клеток получают стабильные перевиваемые клеточные культуры. При пассажах появляются быстро делящиеся однородные клетки с гетероплоидным набором хромосом. Стабильные линии клеток могут быть однослойными и суспензионными. Однослойные культуры растут в виде сплошного слоя на поверхности стекла, суспензионные — в виде суспензий в различных сосудах с использованием перемешивающих устройств. Существует более 400 линий клеток, полученных от 40 различных видов животных (в т.ч. от приматов, птиц, рептилий, амфибий, рыб, насекомых) и человека.
В искусственных питательных средах можно культивировать кусочки отдельных органов и тканей (органные культуры). Эти типы культур сохраняют структуру ткани, что особенно важно для выделения и пассирования вирусов, которые не репродуцируются в недифференцированных тканевых культурах (например, коронавирусы).
В зараженных клеточных культурах вирусы можно обнаружить по изменению морфологии клеток, цитопатическому действию, которое может иметь специфический характер, появлению включений, путем определения вирусных антигенов в клетке и в культуральной жидкости; установления биологических свойств вирусного потомства в культуральной жидкости и титрования вирусов в культуре ткани, куриных эмбрионах или на чувствительных животных; путем выявления отдельных вирусных нуклеиновых кислот в клетках методом молекулярной гибридизации или скоплений нуклеиновых кислот цитохимическим методом с помощью люминесцентной микроскопии.
Выделение вирусов является трудоемким и длительным процессом. Его осуществляют с целью определения циркулирующего среди населения типа или варианта вируса (например, для идентификации сероварианта вируса гриппа, дикого или вакцинного штамма вируса полиомиелита и т.д.); в случаях, когда это необходимо для проведения срочных эпидемиологических мероприятий; при появлении новых типов или вариантов вирусов; при необходимости подтверждения предварительного диагноза; для индикации вирусов в объектах окружающей среды. При выделении вирусов учитывают возможность их персистирования в организме человека, а также возникновения смешанной инфекции, вызванной двумя и более вирусами. Генетически однородная популяция вируса, полученная от одного вириона, называется вирусным клоном, а сам процесс получения его — клонированием.
Для выделения вирусов применяют заражение восприимчивых лабораторных животных, куриных эмбрионов, но чаще всего используют культуру ткани. Наличие вируса обычно определяют по специфической дегенерации клеток (цитопатический эффект), образованию симпластов и синцитиев, обнаружению внутриклеточных включений, а также специфического антигена, выявляемого с помощью методов иммунофлюоресценции, гемадсорбции, гемагглютинации (у гемагглютинирующих вирусов) и т.д. Эти признаки могут обнаруживаться лишь после 2—3 пассажей вируса.
Для выделения ряда вирусов, например вирусов гриппа, используют куриные эмбрионы, для выделения некоторых вирусов Коксаки и ряда арбовирусов — новорожденных мышей. Идентификацию выделенных вирусов проводят с помощью серологических реакций и других методов.
При работе с вирусами определяют их титр. Титрование вирусов проводят обычно в культуре ткани, определяя наибольшее разведение вируссодержащей жидкости, при котором происходит дегенерация ткани, образуются включения и вирусоспецифические антигены. Для титрования ряда вирусов можно использовать метод бляшек. Бляшки, или негативные колонии вирусов, представляют собой очаги разрушенных под действием вируса клеток однослойной культуры ткани под агаровым покрытием. Подсчет колоний позволяет провести количественный анализ инфекционной активности вирусов из расчета, что одна инфекционная частица вируса образует одну бляшку. Бляшки выявляют путем окрашивания культуры прижизненными красителями, обычно нейтральным красным; бляшки не адсорбируют краситель и поэтому видны как светлые пятна на фоне окрашенных живых клеток. Титр вируса выражают числом бляшкообразующих единиц в 1 мл.
Очистку и концентрацию вирусов обычно осуществляют путем дифференциального ультрацентрифугирования с последующим центрифугированием в градиентах концентраций или плотности. Для очистки вирусов применяют иммунологические методы, ионно-обменную хроматографию, иммуносорбенты и т.д.
Лабораторная диагностика вирусных инфекций включает обнаружение возбудителя или его компонентов в клиническом материале; выделение вируса из этого материала; серодиагностику. Выбор метода лабораторной диагностики в каждом отдельном случае зависит от характера заболевания, периода болезни и возможностей лаборатории. Современная диагностика вирусных инфекций основана на экспресс-методах, позволяющих получать ответ через несколько часов после взятия клинического материала в ранние сроки после заболевания, К ним относятся электронная и иммунная электронная микроскопия, а также иммунофлюоресценция, метод молекулярной гибридизации, выявление антител класса lgM и др.
Электронная микроскопия вирусов, окрашенных методом негативного контрастирования, позволяет дифференцировать вирусы и определять их концентрацию. Применение электронной микроскопии в диагностике вирусных инфекций ограничивается теми случаями, когда концентрация вирусных частиц в клиническом материале достаточно высокая (10 5 в 1 мл и выше). Недостатком метода является невозможность отличать вирусы, принадлежащие к одной таксономической группе. Этот недостаток устраняется путем использования иммунной электронной микроскопии. Метод основан на образовании иммунных комплексов при добавлении специфической сыворотки к вирусным частицам, при этом происходит одновременная концентрация вирусных частиц, позволяющая идентифицировать их. Метод применяют также для выявления антител. В целях экспресс-диагностики проводят электронно-микроскопическое исследование экстрактов тканей, фекалий, жидкости из везикул, секретов из носоглотки. Электронную микроскопию широко используют для изучения морфогенеза вируса, ее возможности расширяются при применении меченых антител.
Метод молекулярной гибридизации, основанный на выявлении вирусоспецифических нуклеиновых кислот, позволяет обнаружить единичные копии генов и по степени чувствительности не имеет себе равных. Реакция основана на гибридизации комплементарных нитей ДНК или РНК (зондов) и формировании двунитчатых структур. Наиболее дешевым зондом является клонированная рекомбинантная ДНК. Зонд метят радиоактивными предшественниками (обычно радиоактивным фосфором). Перспективно использование колориметрических реакций. Существует несколько вариантов молекулярной гибридизации: точечная, блот-гибридизация, сэндвич-гибридизация, гибридизация in situ и др.
Антитела класса lgM появляются раньше, чем антитела класса G (на 3—5-й день болезни) и исчезают через несколько недель, поэтому их обнаружение свидетельствует о только что перенесенной инфекции. Антитела класса lgM выявляют методом иммунофлюоресценции или с помощью иммуноферментного анализа, используя анти- μ-антисыворотки (сыворотки против тяжелых цепей lgM).
Серологические методы в вирусологии основаны на классических иммунологических реакциях (см. Иммунологические методы исследования): реакции связывания комплемента, торможения гемагглютинации, биологической нейтрализации, иммунодиффузии, непрямой гемагглютинации, радиального гемолиза, иммунофлюоресценции, иммуноферментного, радиоиммунного анализа. Разработаны микрометоды многих реакций, техника их непрерывно совершенствуются. Эти методы используют для идентификации вирусов с помощью набора известных сывороток и для серодиагностики с целью определения нарастания антител во второй сыворотке по сравнению с первой (первую сыворотку берут в первые дни после заболевания, вторую — через 2—3 нед.). Диагностическое значение имеет не менее чем четырехкратное нарастание антител во второй сыворотке. Если выявление антител класса lgM свидетельствует о недавно перенесенной инфекции, то антитела класса lgC сохраняются в течение нескольких лет, а иногда и пожизненно.
Для идентификации индивидуальных антигенов вирусов и антител к ним в сложных смесях без предварительной очистки белков используют иммуноблоттинг. Метод сочетает фракционирование белков с помощью электрофореза в полиакриламидном геле с последующей иммуноиндикацией белков иммуноферментным методом. Разделение белков снижает требования к химической чистоте антигена и позволяет выявлять индивидуальные пары антиген — антитело. Такая задача актуальна, например, при серодиагностике ВИЧ-инфекции, где ложноположительные реакции иммуноферментного анализа обусловлены наличием антител к клеточным антигенам, которые присутствуют в результате недостаточной очистки вирусных белков. Идентификация антител в сыворотках больных к внутренним и наружным вирусным антигенам позволяет определять стадию заболевания, а при анализе популяций — изменчивость вирусных белков. Иммуноблоттинг при ВИЧ-инфекции применяют как подтверждающий тест для выявления индивидуальных вирусных антигенов и антител к ним. При анализе популяций метод используют для определения изменчивости вирусных белков. Большая ценность метода заключается в возможности анализа антигенов, синтезируемых с помощью технологии рекомбинантных ДНК, установлении их размеров и наличия антигенных детерминант.
Библиогр.: Букринская А.Г. Вирусология, М., 1986; Вирусология, Методы, под ред. Б. Мейхи, пер. с англ., М., 1988; Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования, под ред. М.О. Биргера, М., 1982.
Молекулярно-биологическое исследование влагалищного отделяемого на вирус папилломы человека (Papilloma virus) может быть назначено при планировании беременности, бесплодии, выкидышах и патологиях вынашивания.
Проходить молекулярно-биологическое исследование отделяемого из уретры на вирус папилломы человека (Pailloma virus) рекомендуется раз в три года, начиная с 20–25-летнего возраста.
Молекулярно-биологическое исследование влагалищного отделяемого на вирус папилломы человека (Papilloma virus) требует правильной подготовки: за 2 суток до исследования нельзя вступать в половые контакты, проводить спринцевание, проводить антибактериальную терапию.
На результат исследования могут повлиять такие факторы, как прием лекарств, использование антисептиков, принятая накануне пища и даже стресс.
При выборе медцентра стоит обратить внимание на наличие собственной лаборатории — в таком случае, как правило, нет необходимости транспортировать биоматериал, а значит, результат приходит быстрее.
Вирус папилломы человека может быть причиной возникновения рака гениталий у женщин и плоскоклеточного рака у мужчин и женщин.
Существуют десятки видов вируса папилломы человека (ВПЧ). Часть из них не наносит никакого особенного вреда. Другие вызывают появление бородавок и папиллом на коже и слизистых. А самые опасные могут спровоцировать развитие онкологического заболевания, особенно у женщин. Именно поэтому ранняя и точная диагностика ВПЧ может спасти жизнь.
Что такое вирус папилломы человека (ВПЧ) и чем он опасен
Вирус может присутствовать в организме, но при этом никак не проявлять себя. Наша иммунная система способна долго сдерживать его. Но достаточно какого-либо сбоя в работе организма — тяжелого инфекционного заболевания, продолжительного стресса, воздействия алкоголя, никотина или наркотиков, — чтобы вирус активировался и прорвал защитный заслон.
Если врач обнаружит на вашем теле признаки деятельности вируса, он направит вас на обследование. Мало знать, что вирус как таковой присутствует в организме — гораздо важнее выяснить его тип, поскольку, как уже было сказано, ВПЧ может быть как относительно безвредным, так и смертельно опасным.
Анализ на вирус папилломы человека необходимо сделать и в том случае, если вы планируете беременность, а также при выявлении причин бесплодия, выкидышей и патологий вынашивания. Причем обследование должны пройти оба партнера — ВПЧ передается при незащищенных половых контактах очень легко, и если один из партнеров инфицирован, то и второй, наверняка, тоже.
Существует несколько методов лабораторной и инструментальной диагностики вируса папилломы человека. Они преследуют несколько целей: во-первых, выявить сам факт наличия вируса, во-вторых, узнать его разновидность, и в третьих — оценить нанесенный им ущерб, а также выяснить, не начался ли уже процесс перерождения безобидной кондиломы в злокачественную опухоль.
Кольпоскопическое исследование назначается женщинам для обнаружения кондилом, расположенных в области шейки матки. Исследование достаточно простое — при помощи специального микроскопа врач осматривает слизистые оболочки шейки матки и влагалища. Многократное (8–16-кратное) увеличение позволяет увидеть даже очень маленькие кондиломы. Результат обычно выдается на руки сразу после обследования.
Цитологическое исследование. Материалом для этого лабораторного исследования является мазок, который содержит клетки эпителия. Образцы клеток рассматриваются под микроскопом. Такое исследование позволяет заметить видоизмененные клетки, указывающие на вирусную инфекцию. Метод этот прост и дешев, но не очень точен — есть высокий риск ложноотрицательного результата. Результат анализа выдается через 5–7 дней и обозначается в бланке цифровым кодом. 1 — пораженных клеток нет, 2 — обнаружены клетки, измененные из-за воспалительных процессов, 3 — результат вызывает сомнения, необходимо дополнительное обследование, 4 или 5 — наличие пораженных клеток.
Гистологическое исследование обычно назначают в дополнение к цитологическому. Это лабораторный метод исследования биоптата, то есть маленького фрагмента тканей. Специалист рассматривает препарат в микроскоп и оценивает состояние пораженных клеток. Гистологическое исследование дает возможность определить характер новообразования и отличить кондилому от опухоли. Обычно результат можно получить на руки через 3 дня.
Как правило, после гистологического анализа назначают ПЦР-анализ.
ПЦР-диагностика — один из самых достоверных способов диагностики, который применяется для выявления многих бактерий и вирусов. При помощи ПЦР-диагностики можно выявить ДНК вируса даже в том случае, если количество возбудителя в крови крайне мало и он никак себя не проявляет. Точность метода приближается к 100%, однако на нее сильно влияет соблюдение техники проведения исследования. Поэтому ПЦР-анализ лучше проводить только в тех лабораториях, где строго следят за соблюдением всех стандартов. Материалом для исследования чаще всего становится мазок, но иногда исследуют околоплодные воды, мочу или кровь. Результаты исследования будут готовы через 1–2 дня, в некоторых случаях их можно получить даже в день обращения, поскольку само исследование как таковое занимает всего 4–5 часов.
ПЦР позволяет очень точно определить количество вируса в биоматериале. Конечная цифра обозначает количество геномных эквивалентов на 100 тысяч клеток. Если вирус вообще не обнаружен, то в бланке это будет указано. Если же вирус присутствует, в результатах обозначат его концентрацию.
- Lg 5 — высокая вирусная нагрузка.
Если любое из этих исследований даст положительный результат, врач, скорее всего, направит вас на повторный анализ. При современных методах лабораторных исследований риск ошибки низкий, однако ненулевой. Чаще всего ложноположительный результат бывает следствием загрязнения биоматериала и нарушения техники его забора, неправильно выбранного времени для исследования (например, вы прошли лечение и вирус был уничтожен, однако его следы в биоматериале еще можно обнаружить) или несоблюдения пациентом правил подготовки к анализу.
У пациентов вызывает много вопросов неоднозначная ситуация, при которой папилломы есть, тем не менее анализы не выявляют самого вируса. Так бывает, если в какой-то момент в прошлом вирус был активным и привел к формированию кондилом и папиллом, однако впоследствии иммунная система окрепла и подавила его деятельность. Но папилломы не могут рассосаться сами собой. В таком случае наилучшее решение — просто удалить папилломы и не забывать регулярно проходить обследование.
Основной биоматериал для проведения анализа на вирус папилломы человека — клетки эпителия, полученные методом мазка из уретры у мужчин и из цервикального канала — у женщин. Технически для проведения ПЦР-анализа возможно исследование крови, выделений из влагалища и уретры, околоплодных вод и мочи, однако на практике эти типы биоматериала практически не используются.
Для проведения гистологического исследования необходим биоптат, маленький образец тканей из пораженного участка, который отщипывают специальным прибором.
Мазок берут при помощи миниатюрной мягкой щетки-ершика, напоминающей щеточку от туши для глаз. Раньше для этой цели использовалась так называемая ложка Фолькмана — крошечная ложка на очень длинном тонком черешке, однако сегодня данный инструмент почти никто не использует.
Щеточку осторожно вводят в канал и вынимают вращательным движением. На ворсинках остаются клетки эпителия. После этого щеточку помещают в специальную стерильную емкость и отправляют на исследование.
Для того чтобы результат анализа был точным, к забору мазка нужно подготовиться. За 2 суток для проведения исследования нельзя вступать в половые контакты, пользоваться антибактериальным мылом для интимной гигиены, проводить спринцевание. Если мазок берется из уретры, забор биоматериала производится до мочеиспускания. Перед забором мазка желательно принять душ без моющих средств.
На результат могут повлиять такие факторы, как прием антибиотиков, пробиотиков и местных антисептиков. Если за последние два месяца вы принимали какие-либо препараты, обязательно предупредите врача об этом.
Забор биоптата из шейки матки — дело гораздо более серьезное. Как и при заборе мазка, за 2 дня до биопсии нельзя вступать в половые контакты, спринцеваться, пользоваться любыми местными антибактериальными средствами и тампонами. После биопсии как минимум 2–3 недели нельзя вступать в половые контакты, при кровотечении разрешено пользоваться только прокладками, но не тампонами. Запрещены существенные физические нагрузки, перегрев, купание в бассейне или открытом водоеме, любые препараты, разжижающие кровь (в том числе обычный аспирин) и любые вагинальные средства — гели, спреи, свечи и т.п.
Все описанные выше диагностические методы широко распространены, и сдать анализ на папилломавирусную инфекцию у женщин и мужчин можно практически в любой коммерческой или муниципальной лаборатории.
Многие люди предпочитают заплатить, чтобы избежать общения с государственными медучреждениями — и это их право. Впрочем, следует сказать, что, несмотря на явный недостаток комфорта и неудобство для пациентов, муниципальные поликлиники и диагностические центры в крупных городах прекрасно оснащены, и врачи, работающие там — специалисты высочайшего класса. Что, увы, не отменяет очередей, бюрократии и неудобного графика работы.
Если вы предпочитаете сдать анализ на вирус папилломы человека в частном медцентре, выбирайте крупное и известное учреждение, имеющее собственную лабораторию — это гарантия точности и соблюдения всех правил забора и обработки биоматериала. И, кроме того, в серьезных диагностических центрах результат можно получить быстрее, чем в маленьких компаниях. Небольшие центры часто отдают материал на исследование в сторонние лаборатории, с которыми сотрудничают на условиях аутсорса, а это заметно замедляет получение результата.
Стоимость исследования зависит и от уровня медицинского центра, и от его расположения. Мы приведем лишь средние для Москвы цены на анализы на вирус папилломы человека.
Кольпоскопия обойдется приблизительно в 700–1500 рублей. Цитологическое исследование стоит около 1100–2500 рублей, к этой сумме нужно прибавить стоимость забора мазка — 300–600 рублей.
Гистологическое исследование стоит 2000–3000 рублей, а забор биоптата — около 400 рублей.
Стоимость ПЦР-анализа на вирус папилломы человека с определением типа в московских лабораториях составляет 700–1900 рублей.
Сдавать анализ на вирус папилломы человека нужно регулярно, начиная с 20–25-летнего возраста. Особенно это касается женщин — не выявленный вовремя ВПЧ может привести к проблемам с зачатием, бесплодию, невынашиванию, дисплазии шейки матки и появлению злокачественных новообразований. Проходить обследование нужно раз в три года. Если вы входите в группу риска — то есть курите или употребляете алкоголь в больших количествах, часто меняете половых партнеров и болеете инфекционными заболеваниями — обследование должно проводиться раз в год.
В медицине разработаны специальные методы исследования для диагностики заболеваний с вирусной природой. Это необходимо, чтобы идентифицировать вирус, изучить его биологию и способность воздействовать на клетки животного и человека. Таким образом, появляется возможность понять патогенез вирусных заболеваний и, соответственно, правильно выбрать методику лечения.
В чем заключается диагностика?
Вирусы размножаются в живых клетках. Чтобы его исследовать, необходимо культивирование на уровне подопытного организма или культуры клеток. Для этого в медицинской практике и микробиологии в целом проводятся вирусологические методы исследования, которые имеют следующие основные подходы:
Вам будет интересно: Пенализация и депенализация - это. Понятие, определение и виды в уголовном праве
Материал могут исследовать непосредственно на наличие нуклеиновых кислот, вирусного антигена или, например, изолировать и идентифицировать вирус из клинического материала.
Кроме возможности установить этиологию заболевания, мониторинга терапевтического эффекта, вирусологические методы исследования играют большую роль в противоэпидемических мероприятиях. Для выделения и культивирования вируса используют куриные эмбрионы, лабораторных животных или культуры клеток.
Как исследуют?
Самый быстрый – это прямой метод. Он позволяет обнаружить вирус, антиген или НК (нуклеиновую кислоту) в самом клиническом материале. Занимает время от двух часов до суток.
В чем смысл исследований?
Вам будет интересно: Куда направлен вектор импульса тела? Чему сонаправлен вектор импульса тела?
Для успешного выделения вирусов клинический материал берут в соответствии с патогенезом и как можно раньше. Часто этот процесс требует проведения нескольких пассажей, прежде чем применить определенные вирусологические методы исследования.
Микробиология изучает микроскопические существа. И ее область – это не только медицина. Она является основополагающей наукой для сельского хозяйства, ветеринарии, космической и технической промышленности, геологии.
Но безусловно все создано для человека и его развития на этой прекрасной планете. Поэтому очень важно вовремя обнаружить опасность и нейтрализовать ее. Вирусы отличны от бактерий. Это структуры, попадающие в организм и вызывающие образование нового поколения. Они похожи на кристаллы и направлены на управление процессом своего размножения, хотя сами не питаются, не растут и не выделяют продуктов обмена.
Вирус способен вызвать тяжелое заболевание у любого живого организма, в который он попал. К тому же он может эволюционировать. Именно поэтому вирусологические методы исследования в микробиологии должны развиваться и совершенствоваться, так как под угрозой может быть человеческая цивилизация в целом.
Материалы
Для обнаружения и идентификации вирусов в медицине, как правило, берутся:
- носоглоточный смыв (респираторные инфекции);
- смыв и фекалии (энтеровирусные инфекции);
- соскобы, содержимое пузырьков (поражения кожи, слизистых оболочек, как герпес, ветряная оспа);
- смывы (экзантемные инфекции, как корь, краснуха);
- кровь, спинномозговая жидкость (арбовирусные инфекции).
Все этапы вирусологического метода исследования включают в себя:
- забор материала;
- выбор, получение тест-системы, определение ее жизнеспособности;
- заражение тест-системы;
- индикация вируса;
- определение типа вируса.
В основном, патогенные вирусы отличаются наличием тканевой и типовой специфичности. Взять, к примеру, полиовирус, который репродуцируется только у приматов (в их клетках). Соответственно, для выделения определенного вируса используют определенную культуру ткани. Если речь идет о неизвестном возбудителе, то целесообразно будет одномоментно заразить три, а лучше четыре культуры клеток.
Таким образом, возможно, одна из них окажется чувствительной. Чтобы определить наличие вируса в зараженных культурах, смотрят на развитие специфической дегенерации клеток, внутриклеточные включения, выявление специфического антигена, положительные реакции гемагглютинации и гемадсорбции.
Все вирусологические методы исследования (прямые и непрямые, серологические) должны быть выбраны, как наиболее подходящие для конкретного случая предполагаемого инфицирования.
Непрямые методы основываются на выделении и идентификации вируса. Они трудоемкие, длительные, но точные.
Серодиагностика
Под такой диагностикой подразумевается метод, основанный на реакции антиген-антитело. Чаще всего используют парные сыворотки крови, взятые с интервалом в несколько недель. Если нарастание титра антител в 4 и больше раз, реакцию считают за положительную. Чтобы определить типоспецифичность вируса, применяют реакцию вируснейтрализации. Для определения группоспецифичности нужно получить реакцию связывания комплемента.
Широко используют различные варианты иммуноферментного анализа, реакции торможения гемагглютинации, пассивной гемагглютинации, обратной пассивной гемагглютинации, РИФ. Еще в генной инженерии был разработан метод получения моноклональных антител. Преодолеть узкую специфичность моноклонов можно применением нескольких моноклональных антител к различным вирусным детерминантам. Таким образом, была повышена специфичность и чувствительность исследования с определением антигенов.
Некоторые особенности
Сегодня создано много разных тест-систем для иммунологической диагностики инфекций, возникших вследствие попадания вируса в живой организм.
Таким образом, вирусологические методы исследования – это способы выделения вирусов, изучение их свойств и установление их этиологической связи с определенными заболеваниями.
Что касается животных, используемых в этих исследованиях, то они должны быть достаточно восприимчивы к определенной вирусной инфекции, они не должны являться носителями латентной инфекции и каких-то паразитов. Значение также имеет вид животного, его возраст, порода, вес тела, упитанность, половая принадлежность и условия содержания. В опыте участвуют животные одного вида, возраста, с одинаковыми условиями содержания. Иногда могут быть использованы разные виды животных, с различной чувствительностью к одному и тому же вирусу. Это помогает выявить все разнообразие инфекционных форм.
Читайте также:
