Антигенная структура вируса гепатита с

Неклассифицируемые вирусы

Глава 47. Возбудители гепатита

Инфекционный гепатит известен давно. Еще Гиппократ описал заразную форму желтухи. Но только в 1883 г. русский врач С. П. Боткин после длительных наблюдений и исследований пришел к выводу о том, что это заболевание инфекционной природы. В честь Боткина инфекционный гепатит был назван его именем "болезнь Боткина".

Предположение о вирусной этиологии гепатита было высказано в 1937 г. при изучении вспышки желтухи после массовой иммунизации солдат.

В настоящее время известно, что вирусный гепатит объединяет два самостоятельных заболевания: гепатит А - инфекционный, гепатит В - сывороточный, Возбудители этих заболеваний относятся к разным квалификационным группам.

Выявлен Фейстоном и другими в 1973 г. в фекалиях больного при помощи электронной микроскопии.

Морфологическая структура. Это мелкий вирус (20-25 нм). Тип нуклеиновой кислоты окончательно не установлен. Предполагают, что он содержит РНК. Форма вируса кубоидальная. Он состоит из нуклеоида и внешней оболочки.

Вирус типа А называют HAV (hepatitis A virus).

Культивирование. Вирусы не репродуцируются в клеточных культурах, но их удается культивировать в организме южноамериканских обезьян.

Антигенная структура. У вируса гепатита А не обнаружены серотипы. Он взаимодействует только с антителами HAV.

Устойчивость к факторам окружающей среды. Вирусы типа А довольно устойчивы. Полная их инактивация происходит только при кипячении в течение 30-40 мин. Они хорошо переносят низкие температуры, высушивание, воздействие кислот, эфира, не разрушаются под действием УФ-лучей. Обычные концентрации дезинфицирующих растворов губят их через 40-60 мин.

Восприимчивость животных. К вирусу гепатита типа А чувствительны обезьяны (шимпанзе).

Источники инфекции. Больные люди с клинически выраженной желтушной и безжелтушной формой заболевания.

Пути передачи. HAV передается преимущественно пищевым путем. Мухи могут быть механическими переносчиками. Вирус чаще передается в первые дни болезни.

Патогенез. Основной путь проникновения вируса - через слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта. Попав в желудочно-кишечный тракт, HAV проникает в эпителиальные клетки слизистой оболочки кишечника, а оттуда в кровь. Возникает вирусемия. С кровью вирусы разносятся по всему организму и поражают паренхиматозные органы. Наибольшим тропизмом HAV обладает к гепатоцитам (клеткам печени), в цитоплазме которых вирус репродуцируется. При этом нарушается белковый и углеводный обмен. В крови появляются желчные кислоты, кал обесцвечивается, а моча темнеет. Нарушение углеводного обмена приводит к увеличению в сыворотке крови ферментов: альдолазы и трансфераз. Вирусом гепатита А чаще заражаются дети в возрасте от 1 года до 15 лет.

Иммунитет. Постинфекционный иммунитет стойкий. Антитела относятся к IgM и IgG (см. главу 12).

Профилактика. Изоляция больных, обеззараживание испражнений, мокроты больных, общесанитарные мероприятия.

Специфическая профилактика. Детям в возрасте от 3 до 15 лет, контактировавшим с больным гепатитом, вводят иммуноглобулин, что снижает заболеваемость, а в случае заболевания облегчает тяжесть течения.

Парентеральный сывороточный гепатит вызывается вирусом типа В. Он называется HBV (hepatitis В virus).

В 1961 г. Блумберг с соавторами в сыворотке крови больных обнаружила антиген, который был назван австралийским. А в 1970 г. Дейн также в сыворотке крови больных гепатитом обнаружил более крупные частицы, которые назвали частицами Дейна.

Морфологическая структура. Вирус HBV встречается в трех морфологических формах.

1. Мелкие сферические частицы - 22 нм в диаметре.

2. Трубчатые частицы разной длины. Полагают, что эти две формы представляют собой свободные белковые частицы - капсиды.

3. Вирусоподобные частицы - 40 нм (описаны Дейном и называются частицами Дейна). Они имеют двунитчатую ДНК. У них обнаружены липиды, полипептиды, углеводы и двойная оболочка. В настоящее время их считают полноценным вирионом - собственно HBV.

Культивирование. Вирус гепатита типа В репродуцируется в культуре гепатоцитов эмбриона человека, в диплоидных клетках печени человека, а также в органах и тканях обезьян шимпанзе. Культивировать вирус сложно, что затрудняет диагностику.

Антигенная структура. У частиц Дейна обнаружен HBV-антиген. Это сложный антиген, в состав которого входят: полипептиды, углеводы, липиды. Антитела, образующиеся к нему, называются анти-HB_S. В сердцевине частицы Дейна имеется cor-антиген, - антитела к нему называются анти-НВс.

Устойчивость к факторам окружающей среды. При температуре 60° С вирус сохраняется 3-4 ч. Низкие температуры на него не действуют. В замороженных препаратах крови он остается жизнеспособным до 20 лет. HBV устойчивы к эфиру. 5% раствор формалина инактивирует их через 12 ч, 3% раствор хлорамина - через 2 ч.

Источники инфекции. Кровь больных и носителей антигена.

Пути передачи. Гепатит типа В передается парентерально при инъекциях вакцин, сывороток, лекарств, нестерильными зараженными вирусом гепатита иглами, шприцами, скарификаторами.

Патогенез. Инкубационный период при гепатите типа В - 2-6 мес (при гепатите А - 3-6 нед.) Проникнув гематогенно, лимфогенным путем, HBV попадает в печень, в дальнейшем заболевание развивается так же, как при гепатите, вызванном HAV. Дифференциальная диагностика гепатитов А и В по клиническим данным затруднена.

Профилактика. Наибольшее значение для профилактики гепатита типа В имеет правильная стерилизация инструментов и отбор доноров при использовании их крови. Донорскую кровь проверяют на наличие HB_S-антигена.

Профилактические мероприятия в отношении медицинского персонала, работающего с материалом, инфицированным HBV, основаны на соблюдении особой осторожности при работе с кровью (обработке рук, загрязненных кровью, 2% раствором перекиси водорода и т. д.).

Специфическая профилактика. Лицам, подвергшимся опасности заражения, вводят иммуноглобулин.

В настоящее время разрабатывается вакцина, приготовленная из НВ_S-антигена.

Для диагностики гепатитов А и В широко используются биохимические показатели сыворотки крови больных, которые отражают функциональное состояние печени. О нарушении пигментного обмена функции печени судят по количеству свободного и связанного билирубина в сыворотке. Для выявления нарушения белково-синтетической функции ставят тимоловую пробу. Все эти исследования проводят в клинических лабораториях.

Вирусологические тесты диагностики HAV. Вирусологическая диагностика проводится путем определения антигенов и антител в крови. Для этой цели применяют наиболее чувствительные серологические методы: РПГ (реакция преципитации в геле), встречный иммуноэлектрофорез и др. Разработаны серологические методы для ранней и ретроспективной диагностики вирусного гепатита: в острой форме диагноз сводится к выявлению вируса в фекалиях больных методом иммуноэлектронной микроскопии с сывороткой реконвалесцентов.

Ретроспективная диагностика гепатита А осуществляется методом исследования парных сывороток крови больного в РСК и РПГ (см. главу 12).

Вирусологические тесты диагностики HBV. 1. В острой стадии диагностика осуществляется путем выявления HB_S-антигена в сыворотке крови больного.

2. Выявление анти-НВ_S в РСК. Анти-HB_S появляются только через 2-4 нед после начала заболевания и длительно циркулируют в крови.

3. Ретроспективная диагностика гепатита В осуществляется путем определения анти-HB_S в парных сыворотках крови больного в реакции преципитации в геле (см. главу 12).

1. Какие заболевания вызывают вирусы гепатита и каковы пути передачи?

2. Какова устойчивость вирусов гепатита?

3. Какие иммуноглобулины обусловливают иммунитет после инфекционного гепатита А?

4. Что такое частицы Дейна?

5. Какие показатели используют для лабораторной диагностики гепатита А и В?

6. Какие исследования проводятся для ретроспективной диагностики при гепатитах А и В?

Вирус гепатита С (НСV) является самым коварным и опасным среди всех вирусов, поражающих печень. Ведущим фактором передачи инфекции является кровь. В 85% случаев заболевание принимает хроническое течение, что через 15 — 20 лет приводит к циррозу печени и развитию первичного рака печени. Длительное скрытое (бессимптомное) течение заболевания приводит к запоздалой диагностике. Лечение гепатита С дорогостоящее. Вакцина не разработана.

В мире насчитывается около 170 млн. инфицированных НСV лиц, что в 10 раз превышает количество таковых ВИЧ-больных. Ежегодно заражается от 3 до 4 млн. человек, 350 тыс. умирает от болезней печени. В РФ насчитывается около 3,2 млн. больных с хроническим гепатитом С, более половины из которых инфицированы первым генотипом НСV.

Рис. 1. Распространенность заболевания.

Микробиология возбудителя

Вирус гепатита С принадлежит к группе персистирующих патогенов, генетически неоднороден, является слабым антигеном, обладает средней степенью устойчивости и выраженной канцерогенностью, способен ускользать от иммунного надзора. HCV обнаруживается в крови и секретах. Продолжительность вирусемии длительная. Возбудитель, в основном, поражает клетки печени (гепатоциты), но доказано, что он также может размножаться в клетках крови — мононуклеарах.

Вирус гепатита С принадлежит к семейству флавовирусов (Flaviviridae), роду гепатовирусов (Hepacivirus).

HCV является оболочечным вирусом. Ом имеет сферическую форму. Диаметр вириона составляет от 30 до 75- нм. Поверх капсида располагается суперкапсид — внешняя оболочка, состоящая из липидов и белков. Оболочечный комплекс белков Е1 и Е2 обеспечивает связывание вируса с клеткой-мишенью и проникновение в нее. Усилия ученых сегодня направлены на изучение этих механизмов, так как создание лекарственных препаратов, нарушающих эти процессы, привели бы к полной победе над возбудителем.

Рис. 2. Строение HCV.

Геном вириона маленький (содержит один ген), представлен однонитевой РНК, состоящей из 9400 — 9600 нуклеотидов, окружен капсидом. Области РНК, кодирующие белки Е1 и Е2, обладают большой изменчивостью, что определяет длительное сохранение (персистенцию) вируса в активном состоянии в клетках инфицируемого организма.

В процессе репликации HCV быстро меняют свою антигенную структуру и начинают воспроизводить себя в несколько измененном антигеном варианте, что позволяет им ускользать от воздействия иммунной системы больного.

Для всех типов вируса общим является участок РНК, состоящий из 321 — 341 нуклеотидов, который используется при постановке ПЦР.

1 генотип вируса гепатита С составляет 46,2% среди всех генотипов. Его отличительными признаками являются:

• Обнаруживается у пациентов, которым переливалась кровь или ее компоненты.
• Тяжелое течение заболевания.
• В клинической картине преобладает астеновегетативный синдром. Не всегда развивается желтуха.
• Большая частота рецидивов. Хронизация инфекции достигает 90%.
• Лечение длительное. При использовании противовирусных препаратов прямого действия длительность лечения составляет не менее 48 недель.
• Стойкий эффект при монотерапии наблюдается только у 18% (у 55% при инфицировании другими генотипами вируса). Стойкий эффект при комбинированной терапии наблюдается только у 28% больных (66% при инфицировании другими генотипами вируса).
• Является основным фактором риска при развитии первичного рака и цирроза печени.

Рис. 2. Жизненный цикл HCV. У больных с хронической формой заболевания вирионы образуются со скоростью 1012 частиц в сутки.

Преобладающими (мажорными) являются антигены — структурные оболочечные белки вируса Е1 и Е2 и белок нуклеокапсида С, а также 7 неструктурных белков-ферментов (NS1, NS2 и NS3, NS4a и NS4b, NS5a и NS5b), РНК-полимераза и протеаза. Присутствуют также минорные полипептиды — р7 и белок F.

Вне живого организма (в «пробирке) культивировать HCV не удается. Возможность репликации достигается путем заражения высших приматов — шимпанзе.

Рис. 4. Фото HCV. Электронная микрофотография.

Во внешней среде при комнатной температуре HCV сохраняют свои свойства от 16 часов до 4-х дней, годами сохраняет патогенность при отрицательной температуре, устойчив к воздействию УФО. При кипячении вирус погибает в течение 5 минут, при 60 0 С — в течение 30 минут.

Как передается гепатит С

HCV необычайно широко распространен среди населения многих стран мира. В РФ общее число заболевших составляет от 2,5 до 3,2 млн. Около 46,2% из них инфицировано 1 генотипом вируса. Мужчины болеют гепатитом С в 4 раза чаще женщин. В группу высокого риска входят подростки (15 до 19 лет) и взрослые (20 -39 лет). В этих группах регистрируется максимальная доля наркоманов.

Источником инфекции являются больные активной и латентной формами гепатита С. Наиболее насыщенными вирусными РНК являются клетки печени. У больных с хронической формой заболевания их концентрация в 37 раз выше, чем в сыворотке крови. Возбудители также находятся в крови и секретах больных.

Гепатит С передается парентеральным (является основным), контактным (половым, через слюну) и вертикальным (от матери плоду) путями. Механизм передачи заболевания реализуется естественными и искусственными путями.

• При искусственном пути передачи инфекции в организм доставляются огромные дозы вирусов. Это происходит при переливании инфицированной цельной крови и ее продуктов, при проведении инвазивных медицинских и немедицинских процедур. Частота развития посттрансфузионных гепатитов зависит от уровня носительства возбудителей в донорской популяции, количества перелитой крови или ее продуктов. В группе риска находятся больные гемофилией. Наибольшую опасность для них представляют концентраты крови и факторы свертывания. Маркеры вируса С у них обнаруживаются в 70% случаев.
• Опасности заражения подвергаются больные, получающие лечение гемодиализом.
• Одно из первых мест в структуре инфицированных HCV занимают парентеральные наркоманы. В разных странах мира их доля составляет от 30 до 70%.
• Вирус гепатита С передается при оперативных вмешательствах, парентеральных манипуляциях в медицинских учреждениях (от 9 до 22% случаев заражений).
• В группе риска находятся медицинские работники, осуществляющие гемодиализ и другие медицинские процедуры. Профессиональное заражение среди них составляет 5 — 30%.
• Передается гепатит С при проведении немедицинских манипуляций: татуировок, пирсинга, проколов мочек ушей, обрезании, проводимом в домашних условиях нестерильными инструментами, стоматологических и парикмахерских услугах.

Последние два при передаче гепатита С играют второстепенную роль.

Рис. 5. Гепатит С передается при гемодиализе (фото слева) и переливании крови (фото справа).

Половой, вертикальный и бытовой пути передачи гепатита С являются естественными.

• Вертикальный путь передачи инфекции (мать — дитя) фиксируется в пределах 1,6 — 19% случаев. Чаще всего инфекция передается детям от ВИЧ-инфицированных матерей.
• Вирусы гепатита С находятся в вагинальном секрете и сперме мужчин. Половой путь передачи чаще регистрируется у проституток, гомосексуалистов и супругов-носителей антител к вирусу (HCV-серопозитивных). Удельный вес полового пути передачи гепатита С составляет от 4 до 8%. Частота заражения зависит от числа сексуальных партнеров и длительности контакта.

Способ передачи гепатита С невозможно установить в 20% случаев.

Рис. 6. Одно из первых мест в структуре инфицированных HCV занимают парентеральные наркоманы. В разных странах Мира их доля составляет от 30 до 70%.

Иммунитет

HCV обладает слабой иммуногенностью. В процессе репликации вирусы быстро меняют свою антигенную структуру и начинают воспроизводить себя в несколько измененном антигеном варианте, что позволяет им ускользать от воздействия иммунной системы больного.

После перенесенного заболевания специфическая невосприимчивость при повторных заражениях не проявляется, так больной получает вирусы с мутациями в антигенной структуре.

Рис. 7. Вирус гепатита С поражает клетки печени. В 85% случаев заболевание принимает хроническое течение. На фото цирроз печени.

Вирус гепатита В - семейс­тво Hepadnaviridae род Orthohepadnavirus.

Морфология:ДНК-содержаший вирус сферичес­кой формы. Состоит из сердцевины, состоящей из 180 белковых частиц, составляющих сердцевинный НВс-антиген и липидсодержащей оболоч­ки, содержащей поверхностный HBs-антиген. Внутри сердцевины находятся ДНК, фермент ДНК-полимераза, обладающая ревертазной ак­тивностью, и концевой белок НВе-антиген.

Геном представлен двунитевой ДНК коль­цевой формы.

Культуральные свойства.Не культиви­руется на куриных эмбрионах, не облада­ет гемолитической и гемагглютинирующей активностью. ВГВ культивируется только в культуре клеток.

Резистентность.Высокая к факторам окружающей среды и дезинфицирующим веществам. Вирус устой­чив к длительному воздействию кислой среды, УФ-излучению, действию спирта, фенола.

Антигенная структура.Слож­ная. В суперкапсиде вируса находится HBs-антиген, который ло­кализован в гидрофильном слое на поверх­ности вириона. В формировании HBs-антигена участвуют 3 полипептида в гликозилированной форме:preSl — большой полипептид; preS2 — средний полипептид; S — малый полипептид.

Эпидемиология: Развитие инфекционного процесса при попадании в кровь. Заражение проис­ходит при парентеральных манипуляциях (инъ­екциях, хирургических вмешательствах), пере­ливании крови.

Патогенез и клиника заболевания.Инкуба­ционный период 3—6 месяцев. Инфекционный процесс наступает после проникновения вируса в кровь. ВГВ из крови эндоцитозом прони­кает в гепатоцит. После проникновения вируса происходит достраивание плюс-нити ДНК ДНК-полимеразой до пол­ноценной структуры. Клиническая картина характеризуется сим­птомами поражения печени, в большинстве случаев сопровождается развитием желтухи.

Иммунитет.Гуморальный иммунитет, пред­ставленный антителами к HBs-антигену, защищает гепатоциты от вируса, элиминируя его из крови.

Клеточный иммунитет освобождает организм от инфицирован­ных гепатоцитов благодаря цитолитической функции Т-киллеров. Переход острой фор­мы в хроническую обеспечивается наруше­нием Т-клеточного иммунитета.

Микробиологическая диагностика.Исполь­зуют серологический метод и ПЦР. Методами ИФА и РНГА в крови определяют маркеры гепатита В: антигены и антите­ла. ПЦР определяют наличие вирусной ДНК в крови и биоптатах печени. Для острого гепатита ха­рактерно обнаружение HBs антигена, НВе антигена и анти-HBc-IgM антитела.

Лечение. Использование интерферона, интерфероногенов: виферона, амиксина, инги­битора ДНК-полимеразы, препарата аденинрибонозида.

Профилактика.Исключение попадания вируса при парен­теральных манипуляциях и переливаниях крови (применением одноразовых шприцев, проверкой на ге­патит В по наличию HBs-антигена в крови доно­ров крови).

Специфическая профилактика осущест­вляется вакцинацией рекомбинантной ген­но-инженерной вакциной, содержащей HBs-антиген. Вакцинации подлежат все новорож­денные в первые 24 часа жизни. Длительность поствакцинального иммуните­та — не менее 7 лет.

Вирус гепатита Сотносится к се­мейству Flaviviridae роду Hepacivirus.

Антигенная структура.Вирус обладает слож­ной антигенной структурой. Антигенами яв­ляются:

1. Гликопротеины оболочки

2. Сердцевинный антиген НСс-антиген

3. Неструктурные белки.

Культуральные свойства.ВГС не культиви­руется на куриных эмбрионах, не облада­ет гемолитической и гемагглютинирующей активностью. Резистентность.чувствителен к эфиру, УФ-лучам, нагреванию до 50С.

Эпидемиология.Заражение ВГС аналогично заражению ВГВ. Наиболее часто ВГС передается при переливаниях крови, трансплацентарно, половым путем.

Клиника:Часто встречаются безжелтушные формы, течение инфекции в острой форме, в 50 % случаев процесс переходит в хроническое те­чение с развитием цирроза и первичного ра­ка печени.

Микробиологическая диагностика:Используются ПЦР и серо­логическое исследование. Подтверждением активного инфекционного процесса является обнаружение в крои вирусной РНК ПЦР. Серологическое исследование направлено на определение антител к NS3 методом ИФА.

Профилактика и лечение.Для профилакти­ки – тоже, что и при гепатите В. Для лечения применяют интерфе­рон и рибовирин. Специфическая профилак­тика – нет.

Вирус гепатита D -дефектный вирус, не имеющий собственной оболочки. Вирион имеет сферическую форму, который состоит из однонитчатой РНК и сердцевинного HDc-антигена. Эти белки регулируют синтез генома ви­руса: один белок стимулирует синтез генома, другой — тормозит. Различают три генотипа вируса. Все генотипы относятся к одному серотипу.

Резервуаром BFD в природе являются но­сители ВГВ. Заражение BFD аналогично ин­фицированию ВГВ.

Микробиологическая диагностика осуществляется серологичес­ким методом путем определения антител к BFD методом ИФА.

Профилактика: все те мероприятия, которые исполь­зуют для профилактики гепатита В. Для ле­чения используют препараты интерферона. Вакцина против гепатита В защищает и от гепатита D.

Гепатит С микробиология рассматривает как наиболее опасный из всех гепатовирусов. Вирус HCV поражает гепатоциты – клетки печени – и обладает высокой онкогенностью (приводит к раковому перерождению). Часто болезнь протекает бессимптомно или со смазанными признаками, что затрудняет своевременную постановку диагноза. Без лечения приводит к летальному исходу.

Таксономия

Микробиология выделяет несколько семейств вирусов, поражающих печень. Вирус гепатита С входит в семейство Flaviviridae и принадлежит роду Hepacivirus.

Строение

Микробиологией хорошо изучено строение возбудителя гепатита С. HCV – это сферический вирион размером 55-65 нм из одной нити РНК, состоящей из нуклеотидов. Сфера имеет оболочку из липидов и белковых включений – суперкапсид, которая позволяет патогену быстрее проникать в клетки человека. А вот у вируса гепатита А суперкапсид отсутствует.

Под внешним липидным слоем расположен нуклеокапсид – оболочка, которая защищает микроорганизм от внешнего воздействия. Белок нуклеокапсида является в микробиологии генетическим маркером гепатита С, что используется для ПЦР-диагностики.

Генотипы вируса

Возбудитель гепатита С отличается высокой генетической изменчивостью. Это говорит о высокой способности к мутации генома вируса. В результате затрудняется защитное действие иммунной системы, возникают проблемы в лечении.

Сегодня микробиология идентифицирует 11 генотипов HCV, они имеют разный генетический набор. Каждый из них, в свою очередь, делится на подтипы. В медицинской номенклатуре существует только 6 генотипов – они обозначаются арабскими цифрами, а их подтипы (или квази-типы) – латинскими буквами. Например, генотип 1 подтип а (гепатит С 1а). Они не имеют разницы в строении по микробиологии, но отличаются течением болезни и прогнозом.

Самым опасным подтипом является HCV 1b. Этот микроорганизм имеет нестабильный генный набор, что позволяет ему приспосабливаться к лечению и действию иммунной системы. В 85% случаев, при отсутствии терапии, возникает хронизация заболевания. Это ведет к необратимым поражениям печени.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – в настоящий момент, наиболее информативное исследование в микробиологии. При анализе крови ПЦР вирусный геном определяется за счет многократного увеличения его фрагментов. Частицы РНК копируют до тех пор, пока их нельзя будет различить в микроскоп.

Антигены

Микробиологии известно, что геном вируса гепатита С кодирует около 10 белков. Вирусные белки являются антигенами, то есть веществами, на которые реагирует иммунная система – вырабатывает антитела. Для выявления инфицирования гепатитом С применяется метод ИФА (иммунноферментый анализ), который позволяет обнаружить специфические антитела IgM (появляются в крови через месяц после заражения) и IgG (вырабатываются через несколько месяцев, сохраняются до 10 лет).

В микробиологии выделяют структурные и нестуктурные белки гепатита С:

• Структурные (core, E1, E2) входят в состав нуклеокапсида и внешней оболочки – суперкапсида.
• Неструктурные (p7, NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A, NS5B) отвечают за биохимические процессы вириона.

Фрагменты этих белков, полученные с помощью генной инженерии, используются в микробиологии для создания тест-систем идентификации микроорганизма.

РНК вируса

РНК возбудителя гепатита С является единицей генетического материала, представленной одной цепочкой нуклеиновых кислот. Она содержит 9400-9600 нуклеотидов. Определенный участок цепочки, который имеет видоспецифичность, можно выделить при ПЦР и определить его количество, тип, субтип (генотип). Таким образом происходит обнаружение инфекции и определение стадии заболевания, вирусной нагрузки, эффективности лечения.

Устойчивость возбудителя

Микробиология выяснила, что вирус гепатита С обладает невысокой устойчивостью во внешней среде. Не очень крепкая оболочка не позволяет ему долго сохраняться вне организма человека:

• В засохшей крови может сохраняться и нести угрозу в течение 45 дней. Поэтому наибольшую опасность несут некачественно обработанные медицинские и маникюрные инструменты, бритвы и иглы в парикмахерских и тату-салонах.
• При нагревании до 60 градусов погибает через 30 минут, при 100 градусах – в течение 5 минут.
• При отрицательной температуре может оставаться заразным до нескольких лет (например, в крови для переливания).
• Чувствителен к антисептическим средствам (спирт, хлоргексидин, мирамистин).
• УФ-лучи не убивают вирус.

Несмотря на слабую устойчивость, ВГС более заразен, чем вирус иммунодефицита человека.

Механизм передачи заболевания

Выделяют 3 способа заражения гепатитом С:

1. Парентеральный – наиболее частый механизм. Происходит при попадании инфицированной крови в кровоток здорового человека. Это может произойти при переливании крови, через необработанные иглы и инструменты.
2. Вертикальный – заражение от матери. Чаще происходит при прохождении ребенка по родовым путям. Очень редко инфекция передается внутриутробно.
3. Половой – при незащищенном сексе. Это наиболее редкий путь заражения. В сперме, влагалищном отделяемом находится минимальное количество возбудителя, и его, как правило, недостаточно для инфицирования.

С развитием микробиологии и медицины стало возможным полное излечение от заболевания. При своевременно поставленном диагнозе и правильной терапии выздоровление наступает в 95-99% случаев.

Представление об этиологии, патогенезе, клинической картине, которую провоцирует вирус гепатита С, формировалось на протяжении многих лет. Досконально изучить сам возбудитель патологии, выделить его РНК и разработать технику скрининга удалось только после 1992 года с появлением новых иммунохимических и молекулярно-биологических методов исследования.

На сегодняшний день известны 9 ДНК- и РНК-содержащих вирусов, способных вызвать гепатит. В основу их клинической классификации положены различия в путях передачи. Фекально-оральный механизм заражения характерен для А и Е разновидностей заболевания. Hepatitis C Virus (вирус HCV) передается преимущественно через кровь.

По данным ВОЗ, гепатит С является одной из самых распространенных парентеральных инфекций.

До начала 1990-х годов основным способом заражения было переливание крови и/или пересадка донорских органов. Однако с появлением эффективных методик скрининга зарегистрированы единицы случаев инфицирования таким путем. Передача возбудителя возможно только при трансфузионных процедурах, проведенных с использованием не проверенного должным образом биологического материала.

В настоящее время инфицирование возможно при:

• посещении стоматолога, косметолога, медицинской лаборатории (вирус гепатита C попадает в кровь здорового человека с недостаточно и/или неправильно продезинфицированных инструментов);
• проведении эндоскопии и других инвазивных процедур;
• выполнении гемодиализа;
• частых медицинских манипуляциях (например, при длительном пребывании в больнице, необходимостью постоянного внутривенного или внутримышечного введения лекарственных препаратов, выполнение различных диагностических процедур);
• наличии ВИЧ (неадекватный иммунный ответ приводит к значительному повышению риска инфицирования при малейшем контакте с возбудителем);
• использовании одного шприца несколькими людьми для внутривенного введения наркотических средств;
• незащищенном половом контакте с носителем HCV;
• использовании общих с больным человеком предметов обихода (при условии наличия высохшей крови, реже – других биологических жидкостей, в которых вирус может долгое время сохранять жизнеспособность).

В такой форме заболевание протекает годами, в то время как в тканях печени происходят изменения, не поддающиеся ни лечению, ни восстановлению хирургическим путем, за исключением трансплантации. Первым этапом осложнений считают фиброз: замещение участков некроза гепатоцитов соединительнотканными структурами. Затем почти у половины пациентов развивается цирроз, сопровождающийся яркими нарушениями функциональной активности печени. У 7% больных конечным этапом HCV служит гепатоцеллюлярная карцинома, злокачественное новообразование, которое крайне сложно поддается терапии, особенно на фоне прогрессирующей вирусной инфекции.

История открытия HCV и эпидемиология

Практически сразу разработаны методики скрининга вируса, особенно важным были тесты, способные определять наличие РНК HCV в донорском биологическом материале. Таким образом удалось существенно снизить уровень заболеваемости в ходе трансфузионных процедур.

Но на сегодняшний день точных данных относительно эпидемиологии гепатита С нет. Имеется лишь информация из официальных статистических источников, в соответствии с которой HCV диагностирован почти у 200 млн. человек. Ежегодный прирост числа инфицированных составляет от 3 до 5 млн. человек. Однако при этом учитываются только известные случаи гепатита С, предполагают, что с учетом бессимптомного носительства, широкого распространения заболевания среди асоциальных категорий населения, реальные цифры гораздо выше официальных.

По мнению специалистов, долгое время занимающихся молекулярным изучением HCV, история болезни начинается на Африканском континенте. Передача вируса происходила в процессе проведения различных религиозных ритуалов, связанных с обменом кровью. Позже, при развитии мореплавания, HCV появился на Европейском и Американском континентах.

В настоящее время вирусный гепатит С встречается повсеместно. Однако отмечают четкую связь распространенности генотипа патологии и региона. В России и странах бывшего СНГ преимущественно диагностируют 1 и 3 разновидности, 1 и 2 – на территории Северной Америки, 4 и 5 – в Африке, 2 и 6 – в странах Азии. Но миграция населения создает условия для повсеместного распространения генотипов и их мутации.

Показатели заболеваемости HCV-инфекцией напрямую зависят от уровня среднего дохода населения. Чем ниже количество людей, употребляющих наркотики, чем лучше качество и доступность медицинской помощи, тем реже диагностируются случаи вирусного гепатита С. Инфекция поддается терапии, в отличие от вызываемых HCV осложнений. Поэтому доктора рекомендуют регулярно выполнять соответствующие исследования для своевременной диагностики заболевания.

Строение РНК вируса гепатита С

Основу генома вирусного гепатита С составляет 5’нетранслируемый участок с кодом для протеина-предшественника из 3000 аминокислот и 3’некодируемого региона.

После протеолитического расщепления протеина-предшественника клеточными и вирусными протеазами образуются 3 структурообразущие белковые структуры:

• ядерный С-core протеин;
• протеины оболочки Е1 и Е2;
• неструктурные белки NS2–NS5B.

Репликация вируса происходит при изменении полярности (транскрипции) РНК-нити генома с положительную на отрицательную. Как и другие РНК-содержащие вирусы, HCV склонен к мутациям, происходящим на уровне Е1 и Е2. Специалисты предполагают, что таким образом подавляется выработка антител (АТ), и это сопровождается хроническим течением патологии и постоянной репликации HCV в клетках печени.

Специалисты дают точное объяснение, что значит РНК вируса гепатита С. HCV относится к семейству Flaviviridae, роду Hepacivirus. Сама патогенная частица представляет собой сферу размером порядка 50 нм. Включает однонитевую линейную молекулу рибонуклеиновой кислоты (РНК), протяженность которой составляет более 9500 нуклеотидных остатков.

Кратко строение и жизненный цикл вируса представлены на схеме:

Структурные белки возбудителя гепатита С представлены:

Доктора сравнили образцы крови одного и того же пациента с гепатитом С, взятые в разные периоды заболевания. В процессе исследования обнаружен гипервариабельный регион в участке гена Е2. Именно его изменчивостью и объясняют ускользание вируса от иммунной системы человека и переход заболевания в хроническое течение.

В неструктурной зоне РНК HCV выделяют:

Большинство из этих белков необходимы для репликации вируса. Вырабатываемые на неструктурные протеины АТ не обладают протективными качествами.

Определение РНК вируса гепатита С – цель одного из основных диагностических тестов – полимеразной цепной реакции (ПЦР). А продуцируемые на структурные и неструктурные протеины антитела выявляют иммуноферментным анализом (ИФА). Если при проведении двух исследований HCV не обнаружен, повторное определение вируса либо не делается, либо выполняется через 4–6 недель.

Устойчивость возбудителя

Такой вопрос, как устойчивость вируса гепатита С во внешней среде, часто беспокоит родственников и членов семьи инфицированного человека. При комнатной температуре (стандартной влажности и прочих условиях) HCV остается заразным до 4 суток в высохшей крови (при высокой вирусологической нагрузке у больного достаточно нескольких капель).

Особенно в плане инфицирования (при условии совместного использования с зараженным человеком) опасны:

• полотенца;
• бритвы;
• зубные щетки;
• медицинские и косметологические инструменты;
• ножи (после случайных порезов в процессе приготовления блюд);
• постельное и нательное белье.

При кипячении (температурный режим 95–100°С) инактивация вируса происходит за 5–10 минут. Для уничтожения патогена при 60°С требуется не менее 20 минут. Поэтому для дезинфекции белья достаточно постирать его в автоматической машине в полноценном режиме, а затем с двух сторон прогладить утюгом.

Для обработки поверхностей и предметов обихода пользуются стандартными дезинфицирующими растворами. На вопрос, погибает ли от спирта возбудитель гепатита С, доктора дают положительный ответ. Кроме того, жизнедеятельность HCV останавливается под влиянием раствора хлорки и других средств, применяемых для обеззараживания и дезинфекции.

В донорской крови HCV остается заразным на протяжении длительного времени, в том числе и под влиянием низких температур: для сохранности биологический материал замораживают. Поэтому, начиная с 1992 года, кровь проверяют дважды: непосредственно после забора и спустя полгода. Таким образом практически полностью исключается риск инфицирования здорового человека при трансфузионных процедурах.

Где содержится HCV кроме крови? Вирус разносится по всему организму. Однако концентрации в слюне, сперме, менструальных выделениях незначительны. Исключение составляют пациенты с высокой вирусологической нагрузкой.

Поэтому для предупреждения заражения необходимо соответствующим образом обрабатывать предметы личной гигиены, постель, нательное белье инфицированного человека. После постановки диагноза, врач подробно объясняет пациенту, убивает ли спирт вирус, перечисляет меры профилактики заражения других людей.

Способы заражения

Основной путь инфицирования HCV – парентеральный. Здоровый человек может заразиться при любом контакте с контаминированной кровью: при медицинских манипуляциях, случайном порезе при проведении косметологических процедур и т.д. Также возможна передача инфекции при использовании общих с зараженным человеком предметов гигиены, на которых сохранились капли крови (слюны и спермы – в крайне редких случаях).

Существует 15–20% вероятность инфицирования при половом контакте, особенно, если партнеры отдают предпочтение нетрадиционному сексу и не пользуются презервативами. В настоящее время установлено, что HCV не способен пройти через плацентарный барьер, поэтому заражение ребенка происходит через кровь больной матери при прохождении по родовым путям.

Что происходит в организме после инфицирования

С момента обнаружения HCV, строение вируса, его жизнедеятельность и патогенез гепатита С изучались в образцах крови как инфицированных людей, так и шимпанзе. После заражения патоген выделяют не только в гепатоцитах, но и в гемопоэтических клетках.

Специалисты не могут с уверенностью сказать, осуществляется ли репликация вируса вне печени. Однако случаи повторного возникновения заболевания после тотальной трансплантации печени указывают на такую возможность. О внепеченочном развитии патологии свидетельствуют криоглобулинемия, поздняя кожная порфирия, гломерулонефрит и ряд других болезней.

Отдельные звенья развития вируса и иммунного ответа человека изучены не до конца. Вскоре после заражения в крови обнаруживаются антитела против структурных и неструктурных протеинов HCV: core, Е1, Е2, NS3–NS4. Данный физиологический защитный механизм лежит в основе одного из методов диагностики гепатита С.

Перенесенный HCV не приводит к формированию защитного иммунитета. После лечения возможно или реинфицирование, или заражение другим генотипом.

Опасны осложнения вирусной инфекции. Установлено, что репликация HCV приводит к некрозу клеток печени, а отмершие участки замещаются соединительной тканью. Впоследствии фиброз сменяется циррозом. У 5–6 человек из 100 с подтвержденным диагнозом гепатита С приблизительно через 20–25 лет (иногда раньше, т. к. многое зависит от генотипа) выявляют злокачественное новообразование в печени.

Чтобы подтвердить наличие инфекции в организме, доктора назначают специфические исследования, которые проводятся в несколько этапов.

Принципы диагностического процесса приведены на схеме:

В соответствии с общепринятым протоколом, диагностировать гепатит С начинают с серологического иммуноферментного анализа (ИФА). Данное исследование заключается в выявлении специфических иммуноглобулинов (IgG и IgM), которые являются реакцией организма на определенные протеины HCV.

Однако результаты ИФА нельзя считать 100% гарантией наличия или отсутствия гепатита С. Для подтверждения инфицирования (или же при сомнительных данных) в обязательном порядке проводят качественный анализ методом полимеразной цепной реакции. Исследование позволяет установить, есть ли в крови РНК возбудителя заболевания.

Если HCV не обнаружен, дальнейшее обследование пациента прекращают. Но если риск заражения высок (например, при контакте с кровью, половой акт с инфицированным, рождение ребенка от больной матери и т.д.) перечисленные исследования выполняют заново через несколько недель. При положительном результате качественной ПЦР необходим количественный анализ для определения РНК вируса, выяснение генотипа и ряд других тестов.

Аналитическая чувствительность РНК HCV современных тест-систем ПЦР позволяет выявить возбудителя через 1,5–2 недели после заражения.

Генотипирование вируса гепатита С

Генотипирование вируса гепатита С – обязательная часть обследования больного. Анализ проводится до начала курса лечения. В России и странах СНГ чаще всего выявляют 1 или 3 генотип HCV. Разновидность вируса – один из основных показателей, определяющих ход терапии и риск развития осложнений.

Первый генотип отличается склонностью к бессимптомному течению и быстрой хронизации патологического процесса. Третий характеризуется высоким риском серьезных осложнений. Гепатоцеллюлярная карцинома чаще встречается у пациентов именно с данной разновидностью HCV.

Но в некоторых случаях генотипирование непоказательно. Если не определился генотип вирусной инфекции, это означает, что РНК вируса либо отсутствует, либо его недостаточно для определения разновидности HCV.

Эффективные методы борьбы с вирусом

Возбудитель HCV – это вирус или бактерия? Специалисты дают однозначный ответ на этот вопрос. Гепатит С – поражение печени исключительно вирусной природы, требующее длительной терапии. При этом лечение подбирают после проведения всех диагностических тестов. Только квалифицированный специалист может объяснить пациенту, как убить вирус гепатита С. Самостоятельный прием каких-либо препаратов противопоказан.

Для предотвращения инфицирования необходимо избегать возможного контакта с кровью больного человека. С этой целью рекомендуют:

• тщательно подходить к выбору стоматологической клиники;
• по возможности следить, чтобы медицинские манипуляции проводились стерильными и/или одноразовыми инструментами;
• делать маникюр и педикюр с использованием стерильного инструментария;
• при половых контактах пользоваться презервативами;
• не применять бывшие в использовании шприцы, иголки и т.д.

Особенно важно соблюдать меры профилактики при постоянном проживании с больным человеком.

Правила дезинфекции и стерилизации

Для обработки поверхностей подходят стандартные дезинфицирующие растворы. Можно приобрести специальные средства в аптеке либо пользоваться хлоркой. Стирку одежды, белья, полотенец выполняют при максимально допустимой для ткани температуре с последующей обязательной глажкой. Необходимо регулярно кипятить предметы личной гигиены инфицированного.

Современные рекомендации ВОЗ подробно описывают, как лечить вирус гепатита С. Существующие на сегодняшний день медикаменты могут полностью вывести из организма инфекцию за несколько недель. В большинстве случаев при использовании комбинации из двух и более противовирусных средств положительный результат лабораторно подтверждается через 4 недели.

Для эффективного лечения назначают Софосбувир, Ледипасвир, Даклатасвир и другие средства. Иногда при реинфекции, резистентности, отсутствии результата от предшествующей терапии дополнительно прописывают Рибавирин либо Интерферон. Курс лечения в среднем продолжается 12 или 24 недели. Отрицательный результат качественной ПЦР на 48 неделе после окончания терапии характеризует полное выздоровление.