Анализ на вирусы ротовой полости пцр

Мазок изо рта – забор клинического материала, с помощью которого можно обнаружить ряд инфекций. Это как неспецифические воспалительные процессы, так и венерические заболевания.

Обсудим вопрос, на какие вирусные и бактериальные патологии изо рта могут взять мазок, а также кому требуется это исследование.

Симптомы, при которых берут мазок изо рта

Главная причина, зачем берут мазок изо рта, это наличие признаков инфекции.

Таковыми становятся:

• появление во рту воспалительных процессов (инфильтраты, отечность, гиперемия)
• наличие гнойных очагов
• появление опухолевидных образований
• язвы или эрозии во рту
• налеты
• увеличение рядом расположенных лимфоузлов
• боль или першение в горле после орального полового контакта

Также мазок могут брать при появлении системных симптомов. Например, при цитомегаловирусной инфекции или инфицировании вирусом Эпштейна-Барр локальных симптомов может не быть. Эти заболевания часто проявляются общими признаками, такими как увеличение печени, лихорадка, хроническая усталость и т.д. Но мазок изо рта подтвердит факт наличия инфекции в организме.

Какие ЗППП могут обитать во рту

Оральный секс стал широко распространен в обществе. Поэтому стали все чаще регистрироваться случаи передачи инфекций оральным путем.

Так можно заразиться многими бактериальными инфекциями:

Некоторые вирусы передаются через оральный половой контакт.

Это цитомегаловирус, ВПЧ (папилломавирус), герпес, вирус Эпштейна-Барр.

Во рту также иногда возникает грибковое воспаление – кандидоз. Теперь вы знаете, на что берут мазок изо рта.

Поговорим более подробно о каждой инфекции, которая может поражать ротовую полость.

Соскоб на сифилис изо рта

Сифилис может передаваться через оральный секс. В результате во рту формируется первичная сифилома. Случается это не очень часто.

Болеют в основном женщины. Одно из исследований показало, что из 29 пациенток женского пола, у которых обнаруживается сифилис, одна заразилась через оральный секс. Это более 3% всех случаев.

Также определенный риск заражения присутствует среди гомосексуальных мужчин. Так, одно исследование показало, что таким путем инфицировались 10 из 728 гомосексуалистов. Это более 1% от всех случаев заражения.

Гетеросексуальные мужчины оральным путем сифилисом почти не заражаются. Подобные случаи казуистически редки. При заражении сифилисом через оральный секс во рту, на миндалинах или глотке появляется первичная сифилома. Обычно она выглядит как язва.

Она имеет красноватое дно, может быть покрыта налетом.

Соскоб из этого участка кожи берут для выявления бледной трепонемы микроскопическим или молекулярно-генетическим методом. Микроскопия может использоваться темнопольная или фазово-контрастная.

Возбудителя инфекции также выявляют при помощи ПЦР.

Мазок исследуют на наличие бактериальной ДНК. Если её находят, диагноз считается подтвержденным.

Кроме того, при вторичном сифилисе во рту могут появляться высыпания. Причем, они там образуются, вне зависимости от того, как произошло заражение.

Передача инфекции могла состояться через классический половой акт или парентерально. Высыпания во рту появляются в любом случае только после диссеминации инфекции. То есть, после того как она попадет в кровь и разнесется по организму.

Мазок изо рта в этом случае тоже поможет выявить бледную трепонему. Потому что отделяемое элементов сыпи содержит много бактерий. Это делает человека заразным во вторичном периоде. Он может передать инфекцию даже через поцелуй.

Мазок изо рта на гонококк

Наиболее часто при заражении при оральном сексе возникает гонококковый фарингит. Он развивается у женщин.

Но и мужчины, которые предоставляют оральные ласки партнерше, тоже могут подхватить эту инфекцию. В таком случае у них болезнь проявляется гонококковым стоматитом.

Наибольшую распространенность гонорея во рту имеет у гомосексуальных мужчин – до 25% от всех случаев заражения этой патологией.

На втором месте гетеросексуальные женщины – 10% случаев.

Реже всего таким способом заражаются гетеросексуальные мужчины – в среднем 5%.

Большинство случаев оральной гонореи протекают без симптомов. То есть, пациент ни на что не жалуется. И обнаружить инфекцию можно разве что взяв мазок изо рта. Только 15% больных жалуются на боль в горле. У 5% заболевших развивается гнойный тонзиллит.

Для выявления заболевания можно взять мазок и исследовать его микроскопическим методом. Однако такой способ эффективен далеко не всегда. При отсутствии признаков воспаления гонококков в биоматериале может быть очень мало. Поэтому врач их может не заметить.

Кроме того, во рту обитает множество других микроорганизмов. Некоторые из них похожи на гонококков, хотя являются сапрофитами. То есть, безобидными микроорганизмами, питающимися остатками пищи во рту и не вызывающими воспалительные реакции.

Врач может перепутать бактерий, так как результаты оцениваются визуально. Это ограничивает специфичность исследования.

Возможны ложноположительные результаты. Поэтому чаще используется более точная диагностика при помощи ПЦР. Может также проводиться культуральное исследование.

Посев мазка изо рта на гонококк

Альтернативой ПЦР является бактериологический посев. Взятый изо рта материал помещается в питательную среду. В течение нескольких дней происходит рост колоний на ней.

После этого специалист проводит идентификацию микроорганизмов по свойствам, которые присущи только определенному виду. Он устанавливает, гонококк это или другая инфекция.

При обнаружении гонококков проводится определение восприимчивости к антибиотикам. В ходе процедуры в питательную среду добавляются разные препараты и оценивается реакция колоний бактерий на них. Препараты, которые показали наилучшую чувствительность к ним гонококков, в последующем будут использованы для терапии заболевания.

Мазок на хламидию изо рта

Хламидия через оральный секс передается редко. Но такие случаи бывают.

В среднем оральный хламидиоз составляет чуть более 3% от общего числа клинических случаев заболевания. Встречаемость немного выше у мужчин, чем у женщин.

Чаще хламидии изо рта выделяются у пациентов с ослабленным иммунитетом. Симптомы слабо выражены. Отмечается покраснение горла при осмотре. Больной может жаловаться на чувство легкого першения.

В большинстве случаев патология остается недиагностированной. Хотя её можно выявить, взяв мазок изо рта. Биоматериал исследуется методом ПЦР.

Мазок изо рта на кандиду

Кандидоз официально не относится к заболеваниям с половым путем передачи. Потому что этот путь имеет гораздо меньшее эпидемиологическое значение, чем другие этиологические факторы возникновения кандидозной инфекции.

Тем не менее, установлено, что заражение при половом акте возможно. В том числе может возникать инфицирование при оральном сексе.

Мужчина может передать инфекцию женщине. После чего у неё развивается кандидозный вульвовагинит.

Случаи передачи инфекции из гениталий в ротовую полость не известны. Они маловероятны. Если кандидоз проявляется во рту, в основном это следствие сниженного иммунитета.

Чаще всего используют микроскопическое исследование. Если кандиды начинают обнаруживаться в мазке, это говорит о том, что их концентрация достаточно большая.

Врач обнаруживает псевдомицелий. Более достоверным методом является ПЦР. С его помощью можно точно установить вид кандиды.

В 70-80% случаев это кандида альбиканс. Но в 20-30% случаев это другие кандиды. Вызванные ими заболевания труднее поддаются лечению.

Изредка мазок изо рта на кандиду высеивают на питательную среду. Это исследование информативно, но занимает много времени. Поэтому его применяют в основном у ВИЧ-инфицированных или при неуспешности курса противогрибковой терапии. Потому что посев на грибки позволяет оценить чувствительность к антимикотикам и выбрать лучший препарат для терапии заболевания.

Соскоб на герпес 2 типа изо рта

Половым путем может передаваться вирус герпеса 1 или 2 типа. Чаще всего 1 тип поражает ротоглотку. А 2 тип вызывают симптомы воспаления мочеполовой системы и кожи гениталий.

Но в связи с возрастающей распространенностью орального секса, часто 1 тип вызывает генитальные проявления герпеса, а 2 тип – оральные. По приблизительным оценкам 20-25 лет назад только 10% случаев герпеса во рту было вызвано вирусом 2 типа. Сегодня его доля выросла до 20-30%.

Входными воротами для вируса может стать слизистая оболочка губ, ротовой полости, носоглотки. Передается заболевание через любые виды контактов. Оно может распространяться и через поцелуи.

Заразный человек только в стадии активизации инфекции. То есть, когда на губах или во рту имеются высыпания.

Для подтверждения диагноза используют мазок изо рта. Он позволяет установить факт заражения и определить тип вируса.

Полученный материал исследуют методом ПЦР. Он выявляет вирусную ДНК, что позволяет идентифицировать возбудителя с точностью, близкой к 100%.

Мазок ПЦР на ВПЧ изо рта

Вирус папилломы человека относится к числу инфекций, которые передаются во время секса. Он может поражать различные участки тела.

Передается и при оральном половом акте, вызывая поражение слизистой оболочки ротовой полости. Болезнь может проявляться по-разному. Это зависит от состояния иммунитета человека и типа ВПЧ.

Вирус может поражать не только слизистую рта. Нередко он распространяется на гортань и пищевод.

Поражая пищевод, патоген приводит к дисфагии (нарушение глотания). В местах, куда проникает вирус, формируются кондиломы. Это бородавчатые разрастания. Они могут достигать достаточно крупных размеров. Особенно у лиц с иммунодефицитом.

При инфицировании гортани могут появляться крупные папилломы, нарушающие функцию внешнего дыхания. У иммунокомпетентных лиц образуются небольшие папилломы во рту. Они могут располагаться в уголках рта или на десне. Имеют размеры до 0,5 см. Хотя такие образования не нарушают жевательную или дыхательную функцию, они неприятны для человека и могут быть опасными.

Неприятность состоит в том, что папилломы могут инфицироваться или механически повреждаться. В этом случае они вызывают кровотечения. Располагаясь в углах рта эти разрастания неэстетично выглядят. Кроме того, возможно перерождение в рак.

Некоторые типы ВПЧ повышают вероятность возникновения рака пищевода или гортани. Диагностика инфекции проводится с помощью ПЦР.

У человека берут мазок изо рта на папилломавирус.

Первоначальной целью исследования является подтверждение факта наличия папилломавирусной инфекции. Ведь разрастания во рту вполне могут быть вызваны и другими патологиями. Это могут быть опухолевые процессы.

Вторая цель – определение типа ВПЧ. После этого можно будет понять, насколько высок риск злокачественного перерождения.

В случае положительного результата мазка на папилломавирус назначается лечение. Сами папилломы можно удалить в нашей клинике быстро и безболезненно.

Мазок на флору изо рта

Мазок на флору берут часто при обращении пациента с симптомами воспаления. Полученный материал изучают под микроскопом. Перед этим его окрашивают.

В мазке можно обнаружить ряд микроорганизмов. Это патогенные и условно-патогенные бактерии, а также грибы.

Выявляются повышенные лейкоциты, что подтверждает факт наличия воспалительного процесса. Также может быть проведен посев на флору. Он дает возможность установить возбудителей, спровоцировавших неспецифическое воспалительное заболевание ротовой полости.

Материал высеивают на питательную среду. А затем смотрят, какие бактерии на ней вырастут. После их идентификации врачу будет легче подобрать правильное лечение. Особенно если предыдущий курс терапии потерпел неудачу.

Мазок изо рта на цитомегаловирус

Цитомегаловирусная инфекция передается множеством путей. В том числе распространяется посредством половых контактов. Она относится к оппортунистическим инфекциям.

Вирус длительное время пребывает в организме в неактивном состоянии.

Он активизируется только при снижении иммунитета. Мазок изо рта могут брать при появлении мононуклеозоподобного состояния.

С профилактической целью его сдают:

• женщины, планирующие беременность
• ВИЧ-инфицированные
• получающие иммуносупрессивную терапию или цитостатики

Мазок на вирус Эпштейна-Барр

Вирус Эпштейна-Барр – это возбудитель инфекционного мононуклеоза. Он также может спровоцировать синдром хронической усталости.

Одним из методом диагностики является взятие мазка из полости рта. Он исследуется методом ПЦР.

Часто мазки берут у детей. Потому что у них несовершенна иммунная система. Антитела в крови могут ещё не определяться. Но и для взрослых такой метод исследования является приемлемым.

Показаниями к диагностике может быть:

• длительная лихорадка
• увеличение лимфоузлов: нижнечелюстных, затылочных
• увеличение печени и селезенки
• слабый иммунитет, ВИЧ, применение цитостатиков или иммунодепрессантов

Подготовка к забору мазка изо рта

Мазок берется до начала этиотропной терапии.

За 6 часов до забора клинического материала нельзя полоскать рот антисептиками. Запрещается в том числе использовать препараты для рассасывания. До взятия мазка нельзя чистить зубы и жевать жвачку. Непосредственно перед процедурой врач может попросить прополоскать рот водой.

Если проводится контрольное взятие мазка изо рта, то его назначают через 2 недели после курса антибактериальной терапии.

Куда обратиться для сдачи мазка изо рта

Вы можете сдать мазки в нашем медицинском центре.

У нас используются самые современные методы диагностики инфекционных заболеваний.

Благодаря им можно обнаружить ЗППП или условно-патогенные микроорганизмы. При необходимости может быть выполнен посев с определением чувствительности к антибиотикам.

После диагностики врач подберет для вас оптимальную схему терапии. Она позволит избавиться от проявлений заболевания, устранив его основную причину – возбудителя инфекции.

При необходимости сдать мазок изо рта обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.

Прием биоматериала по данному исследованию может быть отменен за 2-3 дня до официальных государственных праздников, в связи с технологической особенностью производства! Информацию уточняйте в контакт-центре.

РНК энтеровируса – один из основных анализов, позволяющих определить наличие вируса в образце кала. В ходе исследования используется метод полимеразной цепной реакции, он позволяет выявлять генетический материал энтеровируса и диагностировать инфицирование еще при первых проявлениях клинических симптомов. К достоинствам данного метода выявления заражения энтеровирусом относится высокая чувствительность и специфичность, минимальное время на проведения анализа. Поскольку метод выявляет единый для всех энтеровирусов фрагмент РНК, с его помощью может выделяться любой из более чем семидесяти представителей вирусов этой группы.

Анализ на РНК энтеровируса

используют в диагностике заболеваний, ассоциированных с вирусами этой группы, в частности, менингита, полиомиелита, миоперикардита, герпетической ангины.

Показаниями для назначения анализа РНК энтеровируса служит выявление таких симптомов, характерных для спровоцированных вирусом заболеваний. При подозрениях на менингит это:

• продолжительной и сильной головной болью,
• повышением температуры,
• боязнью света,
• слабостью затылочных мышц.
• При симптомах герпетической ангины, характерными признаками является:
• резкое повышение температуры,
• тошнота и рвота,
• характерные высыпания на миндалинах,
• болевые ощущения при глотании.

Анализ проводят при появлении симптомов экзантемы (сыпи) на слизистой рта, кожном покрове туловища, кистей и стоп.

РНК энтеровируса проверяют у пациентов с подозрениями на миоперикардит, появление одышки, боли в грудной клетке, периферических отеков и нарушений сердечного ритма, а также при симптомах полиомиелита, таких как лихорадка, головные боли, тошнота, нарушение глотания, тремор либо паралич конечностей.

Результата анализа имеет качественное выражение, референсным показателем считается отрицательный результат.

Анализ на энтеровирусную инфекцию образца биоматериала пациента – это верный способ обнаружить в его организме РНК вируса. Для этого используется высокоточная методика полимеразной цепной реакции (ПЦР). Она способна выявить инфицирование организма на ранней стадии и тем самым ускорить процесс выздоровления.

Проведение ПЦР на энтеровирусную инфекцию и показания к анализу

Сдать кровь или кал на энтеровирус рекомендуется при наличии в организме специфической симптоматики, а именно:

• боязни яркого света;
• сильной головной боли;
• слабости мышц затылка;
• высокой температуры;
• тошноты и рвоты;
• высыпаниях на миндалинах;
• затрудненном глотании.

Сдать мазок из зева на энтеровирусную инфекцию рекомендуется также при наличии экзантемы (сыпи) на коже тела, стоп, кистей и слизистой оболочке ротовой полости. На энтеровирусы анализ назначается врачом при подозрении на полиомиелит и миоперикардит. Первое заболевание сопровождается тремором или параличом конечностей, тошнотой, рвотой, сильными головными болями и высокой температурой. Второе – периферическими отеками, одышкой, нарушения в работе сердца и болями в области грудной клетки.

За 3-4 дня до проведения анализа придерживаться диеты, сбалансированной по содержанию белков, жиров, углеводов, желательно исключить из рациона орехи,
грибы, копченую колбасу. Рекомендуется отмена слабительных, препаратов висмута, железа, ректальных свеч на жировой основе, ферментов и других препаратов, влияющих на процессы переваривания и всасывания. После рентгенологического исследования желудка и кишечника проведение анализа кала показано не ранее чем через 2 суток. Стул должен быть получен без применения клизм и слабительных. Перед взятием биоматериала необходимо провести тщательный туалет наружных половых органов и области заднего прохода, промыв их под душем с мылом. Допускается сбор биоматериала вечером, в этом случае полученный биоматериал хранить в холодильнике при температуре 2-8°С, не замораживая.

Мазок изо рта – не самое распространенное исследование в дерматовенерологической практике.

Однако венерологи иногда предлагают своим пациентам обследоваться на заболевания, передающиеся половым путем (ЗППП) именно таким образом.

Бывает, что к дерматовенерологу таких больных направляют доктора других специальностей – стоматологи, терапевты, отоларингологи.

Многие возбудители ЗППП, кроме половых органов очень хорошо чувствуют себя в ротовой полости или на эпителии ЛОР-органов.

Кому и когда нужно сдать мазок изо рта, как и где он проводится – расскажем ниже.

Что это и для чего?

Ротовая полость каждого человека очень плотно населена микроорганизмами.

Большинство из них – безобидные сапрофиты, среди которых встречаются кокки, бациллы.

Даже спирохеты непатогенные есть.

Наш организм научился с ними благополучно соседствовать, и мы их просто не замечаем.

Но такое благополучие бывает не всегда.

Проблемы возникают тогда, когда в ротовую полость попадают чуждые ей микроорганизмы.

Например – возбудители венерических инфекций, которые очень хорошо чувствуют себя на слизистых оболочках рта и половых органов.

Список микробов, которые способны к такой смене среды обитания, достаточно широк:

• трихомонады
• бледная трепонема
• папилломавирусы человека (ВПЧ)
• вирусы герпетической группы
• гонококки
• хламидии

В принципе, в этот список можно включать практически всех возбудителей ЗППП.

Выявить их во рту и помогает мазок.

Диагностическая ценность мазка изо рта

По своей сути, это полностью, 100% аналог урогенитального мазка.

Отличие только в том, откуда берут диагностический материал.

Мазок изо рта помогает определить спектр микрофлоры ротовой полости у обследуемого человека, независимо от пола.

Этот метод относится к лабораторно-инструментальным методикам, выполняет одну задачу: получение диагностического материала для подробного изучения микрофлоры.

Пробы, полученные при помощи мазка изо рта, исследуются разными способами:

• микроскопия нативного материала и фиксированного, окрашенного мазка
• бактериологическое исследование (посев)
• иммунологические исследования
• молекулярно-генетические

Главное – правильно и точно собрать диагностические пробы.

Но перед тем, как их собирать – необходимо определить, кому это нужно.

Показания к проведению мазка из полости рта

Поводы к проведению такого исследования отличаются для врачей разных специальностей.

Что касается венерологии, то вот основные симптомы, при которых берут мазок изо рта дерматовенерологи:

• жжение и боль во рту
• болезненная сыпь на слизистых оболочках рта и щек
• увеличенные миндалины без выраженных клинических признаков
• жалобы на першение в горле на протяжении длительного времени
• появление во рту, на и под языком безболезненных уплотнений и ран
• неприятный запах при исключении кариозных поражений зубов
• кислый привкус, пенистая слюна

В принципе, каждый раз все решается индивидуально.

Мы перечислили только несколько признаков, какие указывают на основные ЗППП, характерные для поражения ротовой полости.

Типичные признаки ротовой локализации ЗППП

Часто бывает так, что к дерматовенерологам приходят люди от стоматологов или ларингологов.

После того, как лечение у этих врачей оказалось неэффективным.

Или после того, как пациенту было проведено исследование мазка изо рта на микрофлору.

И в материале нашли инфекции венерического профиля.

Как они туда попадают, иногда бывает выяснить достаточно сложно.

Самый распространенный способ – оральные ласки.

Также необходимо помнить, что при глубоком поцелуе передается более 200 тыс. микробов.

И, если у партнера были герпетические высыпания во рту – заражения не избежать.

То же самое касается атипичных форм первичного сифилиса, гонореи и других ЗППП.

Гонорея передается при оральном сексе.

Проявляется першением, в горле, охриплостью голоса и прочими симптомами затянувшейся простуды.

Сифилис – так же.

Характерные признаки – безболезненные уплотнения и красноватые язвы на языке, красной кайме губ.

Может протекать как хронический вялый тонзиллит.

Трихомонады, хламидии и микоплазмы при локализации во рту, специфических симптомов не вызывают.

Заподозрить их можно только по затяжному кашлю, тонзиллиту.

Общее самочувствие пациента при этом не ухудшается.

Герпес обнаружить легко: боль и жжение, высыпания на слизистых оболочках, трансформирующиеся в эрозии.

Рецидивы до 5-6 раз в год.

На фоне иммунодефицита возможна постоянная персистенция высыпаний во рту.

Папилломавирусные поражения безболезненные, обычно имеют вид остроконечных кондилом.

Достигнув крупных размеров, могут затруднять глотание, речь.

Нельзя исключить заражения и бытовым путем.

Все инфекции могут передаваться через зубную щетку.

Из-за чего часто страдают дети, у которых родители болеют ротовой формой той или иной венерической инфекции.

Еще, зачем берут мазок изо рта, это – необходимость оценить распространенность ЗППП при обследовании пациента с установленным поражением репродуктивных органов.

Куда обращаться, чтоб сдать мазок изо рта

Есть немало сознательных людей, которые хотят обследоваться самостоятельно.

Например, через 3-5 дней после поцелуев на вечеринке с малознакомым человеком во рту возникают неприятные ощущения и подозрительные явления (какие – мы писали немного выше).

Понятно, что к простуде такое вряд ли имеет отношение и не мешало бы провериться на предмет ЗППП.

То же касается и тех, у кого после случайного незащищенного секса появляются симптомы воспаления одновременно во рту и со стороны половых органов (жжение, выделения из уретры и влагалища).

Для того, чтоб обследоваться по описанным поводам, необходимо обращаться к любому ближайшему дерматовенерологу.

Врачи такой специальности есть во всех поликлиниках, имеются и частные кабинеты.

Как правило, доктора частной практики имеют лучшую оснащенность и доступ к самым современным методам обследования.

При этом обеспечивается полная анонимность каждого обращения.

Чтоб повысить ценность посещения, желательно связаться с врачом заранее – по телефону или с помощью интернет.

Так можно записаться на прием ко времени, чтоб не сидеть в очереди.

За звучной аббревиатурой ПЦР скрывается сложная и не слишком понятная для рядового пациента расшифровка — полимеразная цепная реакция. Что же такое ПЦР-диагностика, на чем она основана и почему в последнее время ее стали считать самой перспективной технологией в постановке диагнозов, касающихся инфекционных и вирусных заболеваний? Мы расскажем о преимуществах ПЦР-метода, его особенностях и этапах проведения.

ПЦР-диагностика: что это такое?

Диагностика методом ПЦР существует чуть более 30 лет. Значительно эволюционировав за это время, она зарекомендовала себя как один из наиболее точных способов выявления инфекций. В основе метода лежит принцип многократного увеличения микроскопических концентраций фрагментов ДНК возбудителя в биологической пробе пациента в искусственных условиях. В результате сложного процесса, называемого амплификацией, под воздействием ферментов и изменения температуры (от 50 до 95°С) из одной молекулы ДНК образуется две. При этом происходит копирование участка ДНК, который присутствует только у того вида патогенного микроорганизма, который интересует врача.

Цикл образования новой молекулы ДНК занимает всего около 3 минут, а тридцати-сорока циклов вполне достаточно, чтобы получить количество молекул, необходимое для достоверного визуального определения методом электрофореза.

Кроме амплификации, то есть простого увеличения числа копий молекулы ДНК, с помощью ПЦР можно производить и другие манипуляции с генетическим материалом, например, сращивать фрагменты ДНК, вводить мутации и т.д. Это позволяет использовать ПЦР не только для диагностики инфекционных и генетических заболеваний, но и для установления отцовства, клонирования и выделения новых генов.

ПЦР-диагностика проводится в специальных лабораториях с помощью амплификационного оборудования. На сегодня существует множество различных модификаций ПЦР, включая технологии с использованием не только ДНК, но и фрагментов рибонуклеиновой кислоты (РНК). В некоторых из них амплификация осуществляется при постоянной температуре, и для их проведения специальное оборудование не требуется.

Еще одна популярная модификация ПЦР — мультиплексная амплификация (МПА), которая позволяет проводить исследование сразу нескольких изучаемых фрагментов в одной пробирке. Это не только ускоряет и удешевляет проведение анализа, но и позволяет рассматривать одни фрагменты, получившиеся в результате реакции, в качестве положительных маркеров для других, что еще больше увеличивает точность исследования методом ПЦР.

В клинической медицине ПЦР-диагностика является одним из наиболее востребованных методов анализа в самых разных сферах:

• Прямое определение возбудителя инфекции. Некоторые традиционные методы, такие как иммуноферментный анализ (ИФА), выделяют только белки-маркеры, которые являются продуктом жизнедеятельности возбудителей инфекции, а потому только косвенно указывают на присутствие микроорганизмов. Наличие специфического участка в ДНК, выявленное с помощью ПЦР, безошибочно или почти безошибочно указывает на присутствие конкретной инфекции.
• Высокая специфичность метода . Она обусловлена тем, что в исследуемом материале выявляется фрагмент ДНК, характерный только для конкретного возбудителя инфекции. Специфичность исключает возможность ложных результатов анализа, тогда как в иммунологических методах исследований ошибки вполне вероятны из-за перекрестной реакции антигенов.
• Высокая чувствительность . При помощи ПЦР-диагностики можно выявить присутствие в организме даже единичных клеток вирусов или бактерий в тех случаях, когда обычными методами сделать это практически невозможно. ПРЦ определяет наличие всего 10–100 клеток в пробе, тогда как иммунологическими и микроскопическими тестами можно определить наличие инфекции при количестве клеток не менее 103–105.
• Универсальность . Сходство состава всех ДНК или РНК дает возможность применять универсальные методы лабораторных исследований, диагностируя сразу несколько возбудителей из одной биологической пробы.
• Скорость получения результатов . Поскольку для проведения ПЦР-диагностики не нужен посев и выделение культуры возбудителя, то и большого количества времени на нее не требуется. Весь цикл — от забора биоматериала до получения результатов — занимает 4–5 часов.
• Диагностика латентных инфекций . ПЦР-методом диагностируются трудно культивируемые и некультивируемые формы микроорганизмов, встречающиеся в тех случаях, когда заболевание протекает в скрытой форме.

Методом ПЦР можно выявлять возбудителей инфекции не только в организме человека, но и в почве, воде, продуктах питания.

Тем не менее не стоит думать, что ПЦР-диагностика не имеет недостатков. У нее есть свои ограничения, но их количество настолько незначительно, что не может отрицательно повлиять на популярность и эффективность метода:

• Вероятность амплификации ДНК не только живого, но и погибшего микроорганизма . При проведении ПЦР-диагностики для контроля эффективности лечения необходимо соблюдать определенные требования. В частности, проводить ПЦР нужно после определенного промежутка времени (1–2 месяца), за который происходит полное исчезновение возбудителя инфекции в организме.
• Возможность возникновения перекрестной реакции . Подбор фрагментов ДНК (праймеров) осуществляется на основе знаний о генетическом строении конкретного микроорганизма. Но теоретически такой же фрагмент может присутствовать и у других микроорганизмов, геном которых на сегодняшний день еще не расшифрован. Их присутствие в пробе может привести к ложноположительному результату анализа.
• Изменчивость микроорганизмов . Эта способность возбудителей к мутации иногда приводит к тому, что некоторые их штаммы становятся неуловимыми в процессе ПЦР-анализа.

Чтобы уменьшить риски, разработаны стандарты объемов испытаний тест-систем ПЦР-диагностики, включающие проверку на перекрестные реакции и тестирование всех известных штаммов конкретного возбудителя.

ПЦР-диагностика проводится в специальной лаборатории в несколько этапов.

1. Забор биоматериала . Процедура, предшествующая непосредственному анализу, которая осуществляется в процедурном кабинете соответствующего профиля. Забор делается с помощью стерильного оборудования только в стерильные пробирки. Материалом для исследования могут быть:
   • Эпителиальные соскобы со слизистых оболочек: из уретры, из цервикального канала, со слизистой дыхательных путей и зева, из конъюнктивы. Забор проводится с помощью специального ершика, при этом недопустимо попадание в материал следов крови.
   • Моча . Собираются первые 50 г утренней мочи в стерильную емкость. Материал используется для диагностики мочеполовых инфекций.
   • Мокрота . Используется для ПЦР-диагностики туберкулеза и респираторных форм микоплазмоза и хламидиоза. Мокроту собирают в стерильный флакон в количестве 15–20 мг.
   • Кровь, сыворотка, плазма . С их помощью диагностируются гепатиты, герпес, ВИЧ-инфекция. Для анализа используется венозная кровь (1–1,5 мл), собранная у пациента натощак в стерильную пробирку. Хранить биоматериал можно не более суток при температуре 4°С. Замораживать кровь категорически запрещается.
   • Биологические жидкости . К ним относятся слюна, сок простаты, околоплодная, плевральная, спинномозговая, суставная жидкости. Собираются при помощи пункции с использованием стерильного инструментария в количестве 0,1–1,5 мл в стерильные пробирки.
   • Биоптаты , т.е. материалы, полученные путем биопсии. Обычно на анализ отправляют биоптаты двенадцатиперстной кишки или желудка, чтобы выявить хеликобактерную инфекцию. Объем материала 2–3 мм 3 .
2. Хранение и транспортировка биоматериала . Хранить образцы можно при комнатной температуре не более 2 часов. Если необходимо длительное хранение, то пробы помещают в холодильник с температурой 2–8°С на срок не более одних суток. Допустимо хранение некоторых биоматериалов в течение двух недель в замороженном виде при температуре -20°С. Оттаивание и повторное замораживание проб запрещено. Транспортировка, если она необходима, должна проводиться в специальных термоконтейнерах или термосах с соблюдением всех правил хранения и перевозки биоматериалов.
3. Выделение ДНК из образца . Способ выделения зависит от вида определяемого микроорганизма и от вида биологического образца. Если, например, анализируется соскоб эпителиальных клеток, используется так называемый метод твердофазной сорбции, заключающийся в добавлении в образец специального вещества, концентрации ДНК на сорбенте и его многократной отмывке буферным раствором.
4. Проведение ПЦР . Некоторое количество образца из биологической пробы переносится в специальную микроцентрифужную пробирку. Туда же добавляется амплификационная смесь, имеющая сложный состав, в объеме 25 мл. Пробирки устанавливают в программируемый термостат, и автоматическом режиме проводится амплификация. Время ее проведения зависит от заданной программы и составляет 2–3 часа. Одновременно с опытными пробами проводятся контрольные — положительные , включающие в себя контрольный препарат ДНК исследуемого возбудителя, и отрицательные , не содержащие исследуемую ДНК. Количество циклов амплификации варьирует от 30 до 40, более 40 циклов проводить не рекомендуется, так как это способствует увеличению количества неспецифических продуктов в пробе.
5. Регистрация результатов . Фрагмент ДНК, характерный для возбудителя инфекции, выделяют методом электрофореза в присутствии специального вещества — бромистого этидия. Его соединение с фрагментами ДНК дает светящиеся полосы при облучении ультрафиолетовым излучением. Образец помещают в камеру для электрофореза и в течение 35–40 минут проводят разделение продуктов амплификации. После этого образец просматривают в ультрафиолетовом свете — наличие оранжевой светящейся полосы свидетельствует о положительном результате.
6. Интерпретация результатов исследования . Результат ПЦР-диагностики может быть либо положительным, либо отрицательным. Положительный результат говорит о том, что в организме человека обнаружены следы инфекции, причем именно в данный момент времени. Количественный результат ПЦР-анализа оценить может только врач, они индивидуальны для разных типов инфекций. На основании количественного результата можно сделать вывод о степени активности заболевания и определить характер лечения.

Цена ПЦР-диагностики зависит от того, на какую конкретно инфекцию пациент планирует проверяться, от вида анализируемого материала, методики тестирования — качественной или количественной. Цена за определение одной инфекции составляет от 200 до 800 рублей в разных клиниках. Кроме того, к стоимости анализа добавится и плата за забор биоматериала — около 400 рублей. Средняя стоимость ПЦР-диагностики разных видов приведена в таблице 1.

Таблица 1 . Примерные цены на анализы ПЦР в Москве

Название анализа	Цена, руб.
Определение ДНК хламидия	750
Определение ДНК микоплазмы хоминис	540
Определение микоплазмы гениталиум	350
Определение ДНК уреаплазмы	350
Гонококк, определение ДНК	350
Определение ДНК герпеса (разные типы)	350–600
Определение ДНК кандиды	570
Вирус краснухи, определение РНК	800
Дифференцированное определение ДНК ВПЧ (разные типы)	350–1900 [1]