Аденовирусный гепатит с включениями гидроперикардит

Вирусный гепатит куриц

Этиология. Возбудитель заболевания аденовирус с типичными физико-химическими свойствами. Хорошо сохраняется во внешней среде. Устойчив к действию эфира, хлороформа и некоторых растворителей липидов. Но хлороформ может снижать инфекционность аденовируссодержащего гомогената печени цыплят на 50%. При тем¬пературе -25°С вирус сохраняется до 3 и более лет. После прогревания в течение 1 часа при 60°С вируссодержащий гомогенат печени цыплят не инфекционен. Относительно стабилен при рН 6,0-9,0. Кислая рН среды — 3 и щелочная —.10 не влияют на инфекционные свойства вируса, находящегося в гомогенате печени. Возбудитель АДВГГ чувствителен к йодсодержащим препаратам. В организме птиц вирус вызывает выра¬ботку вируснейтрализующих и преципитирующих антител. Возбудителю присущи гепато- и эпителиотропные свойства, а при определенных условиях пантропизм.

При экспериментальном парэнтеральном заражении СПФ-цыплят гепатит с тельцами-включениями можно воспроизвести используя любой из 12 известных серотипов аденовирусов птиц. В естественных условиях АДВГГ чаще вызывают вирусы 4, не¬сколько реже 5, 6, 8 и 11 серотипов аденовирусов 1 группы. Определенная роль в этиопатогенезе АДВГГ периодически отводится аденоассоциированному (дефектно¬му) парвовирусу, а также вирусу инфекционной анемии кур. Заболевание лучше про¬является при стабильных нарушениях технолого-экологических режимов, чрезмерной эксплуатации птиц и систематических воздействиях на их организм иммунодепрессивных факторов, в том числе инфекционного и токсического происхождения (особенно микотоксины). Плохая вентиляция птичника, неудовлетворительные ветеринарно-санитарные мероприятия и присутствие в пылевом аэрозоле E.coli значительно усилива¬ет интенсивность течения АДВГГ. Наличие в популяции субклинических вирусоносителей предусматривает постоянную возможность впезапного и резкого обострения аденовирусной инфекции на птице любого возраста, даже при ее при контакте с лю¬бым, пусть условнопатогенным микроорганизмом.

За последние 20 лет заболевание в виде острой формы АДВГГ, с высокой смертностью птиц, зарегистрировано более чем в 30 птицехозяйствах СССР, СНГ, а затем России, расположенных в самых разных природно-климатических зонах, и специлизировавшихся как на разведении цыплят-бройлеров, так и яйценоской птице. При энзоотической вспышке АДВГГ в одном и том же хозяйстве заболевание может практически одновременно регистрироваться у птиц, значительно отличающихся по возрасту. В прежние годы АДВГГ часто протекал в ассоциации с субклинической формой болезни Гамборо, которая создавала благоприятные условия для развития аденовирусной инфекции. В настоящее время во многих хозяйствах АДВГГ (от острой до субклинической формы) начинает проявляться у 5-10-дневных и более MOЛОдых цыплят и теперь часто он провоцирует болезнь Гамборо (и активизацию вторпенной бактериальной флоры, в т. ч. E.coli) или ухудшает результаты вакцинации против болезни Гамборо, а также ньюкаслской болезни, инфекционного бронхит, болезни Марека, инфекционного ларинготрахеита, инфекционной анемии цыплят и других болезней.

В естественных условиях инкубационный период зависит от интенсивности тече¬ния инфекции, а также от наличия содействующих ее развитию факторов. Острое проявление болезни сопровождается смертностью цыплят 25-75% и более. При хроническом течении (смертность до 5-7%, клинические признаки хорошо выражены у птиц, для которых заболевание завершается летальным исходом, у остальных они незначительные и проявляются у отдельных групп цыплят, расположенных в различных участках птичника, в то время как основная масса птиц выглядит здоровыми. При субклиническом течении АДВГГ клинические признаки болезни встречаются лишь у отдельных особей. Длительность болезни, в зависимости от остроты проявления, в экспериментальных условиях 4-6 (до 10) дней, в естественных условиях при острой форме 9-14 дней.

У больных птиц отмечается снижение уровня гематокрита, эритропения, лейкопения. Повышение уровня молочной гедирогеназы, щелочной фосфатазы и аланинтрансферазы расценивается как следствие патологии печени и почек. Поражение печени сопровождается гипопротеинемией.

При гистологическом исследовании, независимо от формы проявления АДВГГ, отмечается гепатит с наличием внутриядерных эозинофильных и базофильных телец-включений в гепатоцитах, панкреатит с внутриядерными включениями в клетках железистой ткани, спленит с характерными включениями в ядрах ретикулярных клеток, нефрозо-нефрит, гипоплазия лимфоидных фолликулов фабрициевой сумки, у некоторых видов птиц с внутриядерными включениями в ядрах ее ретикулоэпителиальных клеток, гипоплазия тимуса и костного мозга, отек легких, неспецифический миокардит.

У эмбрионов кур встречается отек, утолщение, помутнение и гиперемия хориоал- лантоисной оболочки, наличие в ней очагов некроза и кистозных разрастаний. Эмбрионы отстают в развитии, гиперемированы, с подкожными кровоизлияниями. Печень эмбрионов гиперемирована, с очагами некроза и кровоизлияний. Максимальная смертность эмбрионов происходит на 4-5 день после заражения. Гистологически в ядрах эктодермального эпителия ХАО и гепатоцитов находят тельца-включения. При заражении культуры клеток отмечается сморщивание, округление и дегенерация клеток с наличием внутриядерных телец-включений.

Диагностика. Диагноз ставят на основании эпизоотологических, клинических, и патморфологических данных, результатов выделения вируса на развивающихся эмбрионах кур, в культуре клеток печени, почек, фибробластов эмбрионов кур, на восприимчивых цыплятах, идентификации выделенного вируса в реакциях нейтрализации, РДП, ПЦР или электронномикроскопически и постановке биопробы. Ретроспективная серологическая диагностика проводится выявлением антител к возбудителю в РДП, РН, МФА и ИФА.

Лечение и профилактика. Для специфической профилактики АДВГГ используются инактивированные гидроокисьалюминиевые и эмульсионные вакцины. Цыплят-бройлеров вакцинируют однократно в 10-17-дневном возрасте, внутримышечно или подкожно. Ремонтный молодняк и кур яйценоских пород вакцинируют дважды: в 10-17 дней и затем при переводе, в удвоенной дозе, не позднее, чем за 30 дней до начала яйцекладки. В некоторых хозяйствах, ремонтный молодняк, предназначенный для формирования родительских стад, в раннем возрасте вакцинируют дважды с 2-недельным интервалом, а затем третий раз в удвоенной дозе при переводе. Иногда вакцину применяют в суточном возрасте, одновременно с вакциной против болезни Марека. Иммунитет, регистрируемый в РДП, наступает через 14-21 день. Однако при использовании достаточно эффективной вакцины цыплята через 8-10 дней после вакцинации становятся невосприимчивыми к экспериментальному заражению массивными дозами возбудителя. Конкретную схему специфической профилактики для каждого птицехозяйства необходимо выбирать индивидуально, в зависимости от его энзоотической ситуации.

ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Аденовирусный гепатит с включениямигидронсрикардит
1.1.1. Характеристика вируса морфология, химический состав и устойчивость
1.1.2. Выделение, репродукция вируса и экспериментальная инфекция
1.1.3. Эпизоотология
1.1.4. Клинические признаки
1.1.5. Патогенез
1.1.6. Патоморфологические изменения
1.1.7. Диагностика
1.1.8. Профилактика аденовирусного гепатитагидроперикардита
1.2. Ассоциированное течение гепатита с включениями гидроперикардита с другими инфекционными болезнями птиц
1.3. Инфекционный бронхит кур ИБК. Классификация и биологические свойства вируса
1.3.1. Выделение, репродукция вируса ИБК и экспериментальная инфекция
1.3.2. Эпизоотология
1.3.3. Клинические признаки
1.3.4. Патогенез
1.3.5. Патоморфологические изменения
1.3.6. Диагностика, профилактика ИБК
1.4. Колибактериоз
1.5. Противовирусные препараты
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.2.1. Результаты эпизоотологического обследования птицеводческих хозяйств
, 2.2.2. Восприимчивость птиц различных кроссов к аденовирусной
инфекции и патоморфология экспериментальной формы аденовирусного гепатита с тельцами включениями гидроперикардита
2.2.3. Патоморфология спонтанной формы аденовирусного гепатита
с тельцами включениями гидроперикардита
2.2.4. Влияние аденовирусного гепатита с тельцами включениями гидроперикардита на развитие ИБК
2.2.5. Влияние аденовирусного гепати т с тельцами включениями гидроперикардита на восприимчивость цыплят к инфицированию Е.соН
2.2.6. Лечебнопрофилактическая и терапевтическая активность бонафтона при экспериментальном аденовирусном гепатите с тельцами
включениями гидроперикардите кур
2.2.7. Влияние бонафтона на естественную резистентность цыплят и устойчивость к аденовирусной инфекции
3. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
4. ВЫВОДЫ
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

В настоящее время выделены 3 группы аденовирусов птиц. В первую группу входят серотипов аденовирусов кур и других птиц, которые имеют общий группоспецифический преципитирующий антиген, например штаммы , i вируса и другие. Ко второй группе относятся аденовирусы, обладающие гемагглютинирующим антигеном и имеющие общий с первой группой преципитирующий антиген, например штаммы В8, 7 вируса Синдрома снижения яйценоскости ССЯ. В третью группу включены вирусы с наличием группоспецифического преципитирующего антигена, отличающегося от такового первых двух групп. Примером могут служить вирусы геморрагического энтерита индеек, болезни мраморной селезенки кур и фазанов Ибрагимов А. А., Горюнова Т. Д., . Различные серотипы аденовирусов выделены от кур и других птиц. От индеек и гусей выделено по 3 серотипа, от мускусных уток один серотип аденовирусов. Общими особенностями для различных синдромов, вызываемых аденовирусами, является преобладание трансовариального пути передачи вируса, а также то, что переболевшая птица остается вирусоноситслсм практически в течение всей своей жизни. По мере увеличения возраста птиц возрастает количество серотипов аденовирусов, которые можно выделить от них. В популяции птиц одного хозяйства могут персистировать все серотипы аденовирусов. Особенность заболевания проявляется в способности инфекции протекать латентно либо в бессимптомной персистенции вируса у одного вида птиц, являющегося источником остро протекающей инфекции у другого вида птиц iv . История изучения гепатита с тельцами включениямигидроперикардита инклюзионный гепатит, гидроперикардит, гепатитанемиягидроперикардит берет свое начало с работы , i , описавших заболевание цыплят под названием острая катастрофа печени. Болезнь встречалась чаще среди птиц мясных, реже яйценоских пород недельного возраста. Но были случаи гепатита с включениями среди I5дневных цыплят, молодок и даже у курнесушек. Болезнь отмечалась у индеек, перепелов, фазанов, цесарок, уток, гусей. Смертность обычно составляла , в экспериментальных условиях 0. Заболевание сопровождается поражением печени, а также других внутренних органов, анемией, развитием отеков и очаговых кровоизлияний. Наличие одновременно с поражением печени патологических изменений в других внутренних органах или системах послужило основанием для некоторых исследователей выделить их в самостоятельные синдромы. Так появился синдром гепатит с включениями анемия, гидроперикарднальный синдром гидроперикардит и другие. Все они, по сути, являются частными вариантами проявления аденовирусной инфекции с патогенетическими, патоморфологическими и клиническими особенностями, возникающими вследствие стабильного нарушения тсхнологоэкологических режимов и систематического воздействия на организм птиц иммунодепрессивных факторов, в том числе инфекционного происхождения. Изучение физикохимических свойств выделенного вируса, показало, что прогревание гомогената печени в течение I часа при С делает его неинфекционным. Хлороформ снижает инфекционность гомогената приблизительно на . Кислая 3 и щелочная не влияют на инфекционные свойства гомогената печени. Использование миллипоровых фильтров допускает размеры этиологического агента в пределах 0 нМ, что, по мнению некоторых авторов, не исключает возможности присутствия кроме аденовирусов второго агента А. Н. . М . Выделение возбудителя проводят от птиц с характерными клиническими признаками аденовирусного гепатита с тельцами включениями гидроперикардита, с патологоанатомическими изменениями в печени в виде увеличения органа, с наличием точечных кровоизлияний и очагами некроза, аплазией костного мозга, атрофией тимуса и бурсы. Взятые для вирусологического исследования пробы печени проверяют гистологическими исследованиями на присутствие в гепатоцитах характерных для болезни внутриядерных телецвключений. Выделение вируса проводят на культуре клеток, эмбрионах кур и восприимчивых цыплятах В. А., . Для экспериментального воспроизведения синдрома гепатит с включениямианемия V. V. с сотр.

Новое заболевание все больше вселяет ужас в жителей планеты. И у людей есть вполне обоснованные причины для паники — новое заболевание мало изучено и чрезвычайно заразно. К тому же, особую опасность COVID-19 несет для пациентов, страдающих от тяжелых хронических заболеваний. В первую очередь это касается астматиков и диабетиков. У таких пациентов болезнь протекает в особо тяжелой форме.

Но опасен коронавирус и для других больных с хроническими заболеваниями. В частности, к тяжелым последствиям может привести ко-инфекция с ВИЧ. Но чем опасен коронавирус при вирусном гепатите С? Находятся ли пациенты с ВГС в группе риска? Как протекает новое заболевание при вирусном поражении печени? Давайте попробуем разобраться во всем этом.

Группы риска коронавируса

Гепатит и коронавирус являются вирусными инфекциями. Однако и формы заболеваний, и возбудители совершенно разные. Возбудителем новой коронавирусной инфекции является COVID-19, впервые обнаруженный в Китае в 2019 году. Патоген передается воздушно-капельным путем, также в течение долгого времени может сохраняться на различных поверхностях и тканях.

В группу риска по заболеваемости коронавирусам входят:

Люди с низким иммунитетом
Пациенты с астмой, хроническим поражением бронхов или легких
Лица близко контактировавшие с больными, у которых зарегистрирован COVID-19
Люди пожилого или преклонного возраста
Больные с различными хроническими заболеваниями

Пациенты с хроническим гепатитом С также входят в группу риска. Причиной тому также является ослабление иммунной системы, характерное для ВГС.

Как протекает болезнь при гепатите С?

Чтобы понять, как протекает коронавирус при гепатите С, нужно учесть основные симптомы новой респираторной инфекции:

Повышение температуры тела, жар
Сухой кашель
Затрудненное дыхание
Реже наблюдаются: головные и мышечные боли, неприятное ощущение в горле, повышенная утомляемость, насморк и диарея.

При гепатите С коронавирусная инфекция чаще протекает в своей стандартной форме. Это означает, что заболевание постепенно переходит в пневмонию атипичного типа, однако не характеризуется тяжелыми осложнениями, которые даже при интенсивной терапии могут привести к летальному иходу.

Однако в случае гепатита С, у пациентов с коронавирусом нередко развивается один из побочных синдромом заболевания — диарея. Постоянное расстройство желудка может привести к обезвоживанию и ослабеванию организма.

Как лечить COVID-19 при ВГС?

Лекарство от коронавирусной инфекции начали искать с момента обнаружения нового опасного заболевания. Клинические опыты, проведенные в нескольких госпиталях Бангкока, привели к успеху — выявлена положительная динамика в процессе лечения COVID-19 с применением лекарства Калетра (Ритонавир и Лопинавир). Также этот препарат применяется для терапии ВИЧ-1 и ВИЧ-2.

С прямой доставкой из Индии можно приобрести высококачественный аналог рассматриваемого препарата — Aprazer Lopikast. В плане качества это лекарство не отличается от оригинала, однако стоит в несколько раз дешевле.

Однако препараты, содержащие Ритонавир и Лопинавир, несколько гепатоксичны. При вирусном гепатите С принимать их следует только под строгим надзором лечащего врача. Если у пациента обнаруживается острая печеночная недостаточность, прием Лопикаста или Калетры запрещается.

Также лекарство может оказывать нивелирующее влияние на действие Софосбувира, поэтому при возможности во время лечения COVID-19 терапию гепатита С можно приостановить. В любом случае,

Меры профилактики

Гепатит и коронавирус — сочетание не самое приятное и достаточно опасное. Поэтому нужно стараться избегать заражения новым заболеванием при ВГС. Вопреки популярному мифу, медицинские маски не помогают. Целесообразно закрывать рот и нос специальным респиратором только тем, кто уже заболел. При этом менять маску следует раз в 2 часа.

Действительно эффективными методами профилактики коронавируса являются:

Регулярное мытье рук, либо использование дезинфектора на спирту.
Использование банковских карт вместо наличных денег.
Соблюдение дистанции минимум в 1 метр с другими людьми во время пандемии.
Отказ от посещения многолюдных мест и собраний.

Также не рекомендуется трогать грязными руками рот, нос и глаза.

Эпизоотология
В естественных условиях к вирусу инфекционного гепатита восприимчивы собаки всех возрастов и пород, но особенно щенки старше 1,5-месячного возраста. Болеют также песцы, лисицы, волки и шакалы.
Основным источником возбудителя инфекции служат переболевшие собаки, из организма которых вирус выделяется во внешнюю среду с мочой, носовой слизью, слезами и калом. Длительное (иногда многолетнее) вирусоносительство — одна из характерных черт аденовирусного гепатита собак.
Резервуаром вируса служат дикие плотоядные и бродячие собаки. Заражение происходит в основном алиментарным путем. Описаны случаи заболевания собак, когда имела место механическая передача инфекции от больного животного восприимчивому через предметы ухода, одежду и т. д.
Заболеваемость и летальность зависят от наличия предрасполагающих факторов. Переохлаждение, перегревание и неполноценное кормление собак, наличие вторичных бактериальных инфекций и гельминтозов способствует процессу обострения заболевания и повышению тяжести его течения. Летальность при инфекционном гепатите в среднем составляет 20%.
Чаще всего инфекционный гепатит регистрируют весной и летом. Спорадические случаи болезни встречаются в любое время года и связаны в основном с обострением латентного или хронического течения болезни под влиянием неблагоприятных факторов.
У переболевших гепатитом животных независимо от тяжести перенесенного инфекционного заболевания наступает продолжительный ( чаще всего пожизненный ) иммунитет.

Патогенез
Вирус первоначально размножается в воротах инфекции в регионарных лимфатических узлах, откуда попадает в кровь. Через 2-3 суток он образовывает внутриядерные тельца-включения в клетках эндотелия кровеносных сосудов всех органов, особенно печени и селезенки. Это ведет к развитию дистрофических изменений в указанных органах, интоксикации и многочисленным кровоизлияниям в паренхиматозных органах. После проникновения агента в центральную нервную систему появляются локомоторные расстройства. На клинической стадии инфекции вирус выделяется во внешнюю среду со всеми секретами организма больного животного, а в первый период после переболевания — с мочой.

Симптомы
Инкубационный период при инфекционном гепатите составляет 3-9 дней. Различают три основные формы течения инфекции: острую, хроническую и латентную.
При остром течение гепатита у больной собаки наблюдают лихорадку, угнетенное состояние, вялость, отказ от корма, жажду, рвоту с примесью желчи, одно- или двусторонние кератиты и тонзилит. Походка у собаки становится шаткой, животное большую часть времени лежит и встает с большим трудом. Отмечают увеличение печени, на фоне которого развиваются клинические признаки гепато-энцефалического синдрома: желтушность слизистых оболочек, потемнение и пенистость мочи, нарушение процессов пищеварения, судороги, парез и паралич конечностей. Одновременно, вследствие нарушения гемодинамики заметно учащаются дыхание и сердечная деятельность. В начале болезни в крови отмечают резковыраженную лейкопению, а затем лейкоцитоз при одновременном резком сдвиге лейкоцитарной формулы влево. Продолжительность острой формы гепатита у собак колеблется от нескольких дней до 2-3 нед. Животные погибают, обычно находясь в глубоком коматозном состоянии.
При хроническом течении гепатита симптомы болезни выражены менее рельефно. Чаще всего больная собака худеет, у нее отмечают ремиттирующую лихорадку, анемию слизистых оболочек, гастроэнтерит, отечность подкожной клетчатки. У щенных сук может произойти аборт или они рожают нежизнеспособных щенков. Развивается кератит на одном или на обоих глазах.
Латентная форма инфекции протекает без клинического проявления, однако, при воздействии стресс-факторов на животное инфекция переходит в острую клиническую форму.

Лечение
Включает применение специфической антисыворотки (или иммуноглобулинов), иммуностимуляторов, гепатопротекторов, средств симптоматической терапии и диетотерапию.

Профилактика
Для специфической профилактики инфекционного гепатита применяют инактивированные и живые вакцины. Вакцинация последними создает наиболее напряженный иммунитет — достаточно одно-двухкратной вакцинации собак живой вакциной, чтобы создать у нее пожизненный иммунитет к инфекции.

Штамм относится к ДНК-содержащему семейству Adenoviridae. Обладает кубическим типом симметрии, не имеет суперкапсидной оболочки, размеры вирионов - 70-80 нм, форма - икосаэдрическая. Устойчив к температуре 56°С не менее 30 минут, а также к действию эфира и хлороформа. Инактивируется формалином, теотропином, димерэтиленэмином. Штамм культивируется в культуре клеток печени эмбрионов кур, через 72-96 часов после заражения вызывает характерные очаги грануляции (округления клеток), формирование отдельных округлых клеток и очагов дегенерации клеток. Титр вируса в пределах 10 5,5 ТЦД₅₀/мл. Штамм позволяет воспроизводить различные формы болезни для экспериментальных исследований, пригоден для производства диагностикумов и вакцин, обладает высокой антигенной и иммуногенной активностью.

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии, а точнее к производству диагностикумов и вакцинных препаратов против вируса "аденовирусного гепатита с включениями - гидроперикардита кур (АДВГГ)", и может быть использовано как для изготовления диагностикумов и вакцин, так и для экспериментального изучения болезни.

Важным средством борьбы против аденовирусной инфекции, получившей в настоящее время широкое распространение и наносящей значительный экономический ущерб птицеводству, является вакцинопрофилактика. Технология производства вирус-вакцин и диагностикумов такова, что используемые при их изготовлении штаммы должны обладать высокой биологической, иммуногенной и антигенной активностью, а также быть устойчивыми к действию факторов окружающей среды и различным химическим агентам и не терять при контакте с ними основные биохимические свойства, используемые при производстве биопрепаратов.

За рубежом известен ряд штаммов возбудителя гидроперикардита птиц, используемых для производства антигена и иммунной сыворотки (1, 2).

Известен используемый в отечественной ветеринарной практике штамм "АДВ" вируса гидроперикардита птиц семейства Adenoviridae №2330 (коллекция вирусов Института вирусологии им. Д.И.Ивановского АМН РФ), используемый для производства антигена и иммунной сыворотки для постановки реакции нейтрализации с целью лабораторной диагностики гидроперикардита птиц (3).

Штамм представляет собой генетически однородный, свободный от контаминации вирусный материал с высокой биологической и антигенной активностью.

Однако на практике часто возникает необходимость в воспроизведении различных форм болезни для проведения экспериментальных исследований, а также необходимость в получении высокоактивного антигена для наработки средств специфической профилактики АДВГГ и специфической высокоактивной иммунной сыворотки и антигена для постановки реакции диффузионной преципитации (РДП) с целью диагностики болезни.

Задачей, решаемой в рамках данного изобретения, является создание штамма вируса "аденовирусного гепатита с включениями - гидроперикардита кур (АДВГГ)" с многообразными биологическими и патогенетическими свойствами, позволяющими воспроизводить различные формы болезни для экспериментальных исследований, а также пригодного для производства диагностикумов и вакцин, обладающего высокой антигенной и иммуногенной активностью.

Указанная задача решается получением штамма "Т-12" вируса "Аденовирусного гепатита с включениями - гидроперикардита кур (АДВГГ)" для производства диагностикумов и вакцин и для экспериментального изучения болезни.

Штамм "Т-12" вируса "Аденовирусного гепатита с включениями - гидроперикардита кур (АДВГГ)" депонирован в Государственной коллекции вирусов ГВК №2358 (коллекция вирусов Института вирусологии им. Д.И.Ивановского АМН РФ).

Штамм "Т-12" аденовируса птиц относится к ДНК-содержащему семейству Adenoviridae. Обладает кубическим типом симметрии, не имеет суперкапсидной оболочки, размеры вирионов - 70-80 нм, форма - икосаэдрическая. Вирус устойчив к температуре 56С° не менее 30 минут, а также к действию эфира и хлороформа. Инактивируется формалином, теотропином, димерэтиленэмином.

Штамм "Т-12" культивируется в культуре клеток печени эмбрионов кур, вызывая через 72-96 часов после заражения характерные очаги грануляции (округление клеток), формирование отдельных округлых клеток и очагов дегенерации клеток. Титр вируса в пределах 10 5,5 ТЦД₅₀/мл.

При культивировании штамма на СПФ и коммерческих эмбрионах кур оптимальные результаты достигаются при заражении 6-суточных эмбрионов в желточный мешок. Отмечается отставание в развитии и гибель эмбрионов, отек и ухудшение прозрачности хориоаллатоисной оболочки (ХАО), отек головы, подчелюстного пространства и поверхности брюшной полости, разлитые кровоизлияния на коже головы, тела, конечностей. Печень эмбрионов, погибших на 3-4 сутки после заражения, кровенаполнена, темно-вишневого цвета, увеличена. На 5-6 сутки печень желто-коричневого цвета, пятнистая в связи с наличием множества некротических очагов. Культивирование вируса на эмбрионах, зараженных в аллантоисную полость и на ХАО менее эффективны. Несмотря на метод заражения эмбрионов, основным местом накопления вируса является печень.

Вирус активно репродуцируется в печени 10-20-суточных цыплят. Титр вируса при этом составляет 3,25 lg ИД₅₀/мл и 1,92 lg ЛД₅₀/мл. При заражении цыплят вирус индуцирует образование различных факторов специфического иммунитета, в том числе вируспреципитирующих и вируснейтрализующих антител, что было использовано для наработки специфической гипериммунной сыворотки для производства диагностических наборов и для производства средств специфической профилактики заболевания.

Штамм "Т-12" обладает наиболее оптимальным сочетанием биологических свойств, позволяющих воспроизводить различные формы болезни для экспериментальных исследований; возможность получения высокоактивного антигена для наработки средств специфической профилактики АДВГГ и специфической высокоактивной (от 1:64 до 1:128) иммунной сыворотки и антигена для постановки реакции диффузионной преципитации (РДП) с целью диагностики болезни.

Пример 1. На основе штамма "Т-12" был разработан набор компонентов для диагностики аденовирусного гепатита с включениями - гидроперикардита (АДВГГ) в реакции диффузионной преципитации (РДП).

Диагностический набор предназначен для обнаружения в патологическом материале от больной и павшей птицы антигена и выявления в сыворотках крови птиц антител к аденовирусу гепатита с включениями - гидроперкардита (АДВГГ) в реакции диффузионной преципитации (РДП), а также для выявления антител и антигена аденовирусов 1 группы, имеющих общий группоспецифический антиген с аденовирусом (АДВГГ) и вызывающих различные болезни цыплят, перепелов, фазанов, цесарок и других видов птиц.

Набор содержит следующие компоненты:

- инактивированный антиген штамма "Т-12" вируса (АДВГГ) - 2 ампулы по 0,5 см 3 ;

- отрицательный антиген - 2 ампулы по 0,5 см 3 ;

- положительная сыворотка - 2 ампулы по 0,5 см 3 ;

- отрицательная сыворотка - 2 ампулы по 0,5 см 3 .

Компоненты набора представляют собой пористую массу; положительный и отрицательный антиген - белого, бело-желтого или светло-коричневого цвета; сыворотки - белого или светло-розового цвета.

Для обнаружения антигена вируса (АДВГГ) в качестве патологического материала используют пробы печени 10-20-суточных цыплят. Материал гомогенизируют в соотношении 1:5 на стерильном физиологическом растворе (рН 7,2-7,4). После трехкратного замораживания и оттаивания центрифугируют при 5 тыс. оборотов в минуту в течение 20 минут. Надосадочную жидкость сливают и используют для исследования в РДП.

С целью выявления в РДП специфических антител к возбудителю АДВГГ исследуют сыворотку крови птиц в возрасте 1-го, 60-ти, 120-ти, 240-а, 360-ти дней. После постановки РДП учет результатов проводят через 24, 48, 72 часа после постановки реакции. Реакцию учитывают только при наличии линии преципитации между сывороткой и антигеном в контроле. За положительный результат принимают образование линии преципитации между лунками с исследуемым материалом и специфической сывороткой, а при выявлении антител - наличие линии преципитации между лунками с исследуемой сывороткой и положительным антигеном.

Пример 2. Использование штамма "Т-12" в вакцинном препарате обусловливает его высокую и длительно сохраняющуюся иммуногенную активность.

Вакцинный препарат получают следующим образом.

Из матричной расплодки производственного штамма "Т-12" вируса АДВГГ готовят разведение 1:10 на стерильном физиологическом растворе (рН 7,2) с добавлением антибиотиков (100 ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 50 ед/мл нистатина) и выдерживают для контакта в течение 2 часов при температуре 4-8С°.

Разведенный материал готовят в объеме, необходимом для заражения данной партии цыплят 25-30-дневного возраста. Зараженных цыплят убивают через 96 часов после заражения, отбирают пробы печени, гомогенизируют их в 0,01 М фосфатно-буферном растворе (рН-7,2) в соотношении 1:1 (вес/объем), трижды замораживают в течение 30 минут, собирают вируссодержащую надосадочную жидкость. В полученный вируссодержащий материал добавляют 500 ед/мл пенициллина, 500 мкг/мл стрептомицина и 200 ед/мл нистатина. После контакта при 4-8С° из каждого флакона берут пробу вируссодержащей жидкости в объеме 1 мл для контроля на стерильность и контаминацию микоплазмами. Затем из каждого флакона берут пробу в объеме 1 мл вируссодержащего материала и сливают в один стерильный флакон емкостью 100 мл. Эту взвесь проверяют на биологическую активность производственной расплодки. До получения результатов проверки на биологическую активность вся производственная расплодка вируса хранится в замороженном состоянии при температуре 25-30С°. Для приготовления вакцины используют только стерильную в бактериальном отношении вируссодержащую жидкость с титром для вируса АДВГГ не менее 3,5 lg ИД₅₀. Для инактивации инфекционных свойств вируса АДВГГ используют препарат теотропин (А-24). Готовая вакцина содержит также масляный адъювант - инфузолипол. По внешнему виду вакцина представляет собой эмульсию белого или бело-бежевого цвета. Допускается незначительное расслоение вакцины, которое легко устраняется при встряхивании флакона. Вакцину применяют для профилактической иммунизации молодняка кур против аденовирусного гепатита с включениями - гидроперикардита.

Исследования иммуногенной активности вакцины подтвердили эффективность препарата. Вакцинированные птицы после контрольного заражения патогенным штаммом "Т-12" в 80% и более были устойчивы к развитию болезни, при том, что смертность в группе контрольных невакцинированных птиц составила - 87,5%.

Таким образом, штамм "Т-12" представляет собой свободный от контаминации вирусный материал, обладающий высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью, и в зависимости от дозы и метода заражения вызывает либо острое (со смертностью птицы 80-100%), либо субклиническое течение болезни, выявляемое только при гистологических исследованиях, что удобно для проведения экспериментальных исследований различных патогенетических и иммунных процессов, отмечающихся при АДВГГ, а также для изучения морфогенеза самих аденовирусов, исследования их онкогенных свойств на лабораторных млекопитающих животных.

1. Barrett S.Cowen. Inclusion body hepatitis-anemia and hydropericardium syndromes: etiology and control / Word, s Poultry Science Journal, Vol.48, November, 1992.

2. Ahmad I., Afzal M., Malik M.J., Hussan Z., Hanif W. Studies on the disease pattern and etiology of hydropericardium syndrome in broiler chickens in Pakistan. Pakistan Journal of Agricultural Research. 1988, Vol.10, p.195-199.

3. Патент RU 2120993, 6 C 12 N 7/00, А 61 К 39/235, 27.10.98. "Штамм "АДВ" вируса гидроперикардита птиц семейства ADENOVIRIDAE." Алиев А.С., Джавадов Э.Д., Вихрева И.Н., Алиева С.Н., Алиев Т.С.

Штамм "Т-12" вируса аденовирусного гепатита с включениями - гидроперикардита кур (АДВГГ) ГКВ №2358, используемый для производства диагностикумов и вакцин и экспериментального изучения болезни.

Читайте также: