Как приготовить мазки на малярию

Цель:диагностическая.

Ресурсы:70% спирт, предметные стекла, обезжиренные смесью Никифорова, бланки направлений, ручку, стеклограф, спички, круглую резинку, конверт из крафт бумаги, лоток для сброса, емкость с дезраствором. Стерильные: лоток, индивидуальные перья-копья, ватные шарики.

Алгоритм действия:

1. Установить доверительные отношения с пациентом.

2. Объяснить цель и ход процедуры.

3. Вымыть и просушить руки.

4. Надеть перчатки и маску.

5. Обработать кожу 4-го пальца руки спиртом.

6. Проколоть последнюю фалангу 4-го пальца индивидуальным пером-копьем.

7. Поместить перо в лоток для сброса.

8. Снять первую каплю крови сухим ватным шариком.

9. Поместить ватный шарик в емкость с дезраствором.

10. Повернуть палец проколом вниз.

11. Прикоснуться предметным стеклом ко второй капле крови, отступив от узкого края стекла на 1,5-2 см.

12. Приложить ватный шарик к месту прокола.

13. Поставить шлифованное стекло перед каплей крови под углом 45 0 .

14. Продвинуть шлифованное стекло до соприкосновения с каплей крови правой руки.

15. Сделать мазок быстрым движением, когда кровь равномерно распределится между обоими стеклами.

16. Указать регистрационный номер с обратной стороны стекла.

17. Высушить препарат в воздухе в горизонтальном положении.

18. Поместить толстую каплю между двумя стеклами, используя спички и круглую резинку.

19. Оформить направление в паразитологическую лабораторию.

20. Поместить препарат в конверт и отправить немедленно в лабораторию.

Первый тип или полный противочумный костюмсостоит из: пижамы или комбинезона, большой косынки (капюшона), противочумного халата, ватно-марлевой маски, очков-консервов, резиновых перчаток, носков (чулок), сапог резиновых, полотенца.

Цель:противочумный костюм первого типа применяется при:

Алгоритм действия:

работе в госпитале, провизорном госпитале и др. с больными легочной или септическими формами чумы.
до установления окончательного диагноза у больных бубонной и кожной формами чумы и до получения отрицательного результата бактериологического исследования;
больных КВЛ (геморрагическими вирусными лихорадками);
работе в изоляторе для контактных с больными легочной формой чумы и больных КВЛ;
проведении текущей и заключительной дезинфекции (дезинсекции и дератизации) в очаге заболеваний легочной формой чумы;
вскрытии трупа погибшего от чумы;
проведении подворных обходов;
заборе материала для лабораторных исследований от больных с подозрением на чуму, КГВЛ.

Примечание: Для вскрытия трупа необходимо дополнительно иметь вторую пару перчаток, клеенчатый фартук, нарукавники.

Названия:

Второй тип противочумного костюма состоит: из пижамы или комбинезона, большой косынки (капюшона), противочумного халата, ватно-марлевой маски, резиновыфх перчаток, носков (чулок), резиновых сапог, полотенца.

Цель:противочумный костюм второго типа применяется при:

Алгоритм действия:

работе в госпитале, провизорном госпитале и др. с больными оспой обезьян;

Цель:Купирование острых нарушений функций кровообращения и дыхания: блокирование поступления лекарства-аллергена в кровоток: подержание жизненно важных функций организма.

Ресурсы: тонометр, фонендоскоп, стерильные: одноразовые шприцы, ватные шарики, спирт этиловый 70%, резиновый жгут, перчатки, пинцет в дезрастворе, лоток, лекарственные препараты: адреналин 0,1%- 0.5 мл, физиологический раствор 200 мл, преднизолон 30-60мг, 10-15мл. 5% р-ра глюкозы, супрастин 1% 2-4 мл или димедрол 1% 2-5мл. эуфиллин 2,4%-10мл, строфантин 0,05%-0,5мл.

Алгоритм действий:

1. Прекратить введение аллергена, наложить жгут выше места инъекции:

2. Уложить пациента и зафиксировать язык, голову на бок, удалить зубные протезы.

3. Приподнять ножной конец кровати:

4. Обеспечить доступ свежего воздуха, подать увлажненный кислород:

5. При пероральном приеме лекарства-аллергена промыть больному желудок, если позволяет его состояние.

6. Контролируйте пульс, дыхание, артериальное давление.

7. Ввести адреналин 0,1%- 0.5 мл с 5 мл физ. раствора в/в или п/к 0.5-1 мл в месте введения аллергена.

8. Ввести преднизолон 30-60мг, 10-15мл. 5% раствора глюкозы в/в медленно.

9. Ввести супрастин 1% 2-4 мл или димедрол 1% 2-5мл.

10. Ввести эуфиллин 2,4%-10мл в 10 мл физ.раствора в/в при затруднении дыхания.

11. Ввести строфантин 0,05%-0,5мл на 10 мл физ.раствора в/в по показанием.

12. Следить за состоянием пациента: измерять пульс, АД.

1. Уложите пациента в постель.

2. Расстегните стесняющую одежду.

3. Обеспечьте доступ свежего воздуха.

4. Измерьте температуру :

А.Если температура тела 37,0-37,5ºС назначьте обильное питание:

В. Если температура тела 37,5-38,0ºС , разденьте и проведите физическое охлаждение: разведите спирт 1:1, протрите и укройте, на лоб приложите холодный компресс, если температура тела 38,0-38,5ºС и выше дайте жаропонижающие препараты: панадол, парацетамол, ибупрофен и т.д.

5. В течение 20-30 минут от начала проведения мероприятия постарайтесь вызвать мочеиспускание ребенка.

6. Измерьте температуру тела через 20-30 минут.

7. Проведите коррекцию проводимых мероприятий с учетом показателей повторной термометрии.

2. проведении текущей и заключительной дезинфекции в очаге бубонной формой чумы, холеры, оспы обезьян;

3. вскрытие трупа погибшей от холеры, оспы обезьяны;

4. заборе материала от больных с подозрением на оспу обезьян.

Третий тип противочумного костюма состоит из: пижамы, противочумного халата, большой косынки, резиновых перчаток, носков, глубоких калош и полотенца.

Цель:противочумный костюм третьего типа применяется при работе в госпитале, провизорном госпитале с больными бубонной или кожной формой чумы, получающими специфическое лечение.

Противочумный костюм четвертого типа состоит из: пижамы, медицинского халата, шапочки или марлевой косынки, носков, тапочек (туфель).

Цель:противочумный костюм четвертого типа применяется при:

Алгоритм действия:

работе в госпитале, провизорном госпитале с больными холерой. При проведении туалета больного, надевают резиновые перчатки, при обработке выделений – маску;
заборе материала для лабораторных исследований от больных с подозрением на холеру (дополнительно надевают резиновые перчатки).

Рубрики

Бактериальные инфекции (41)
Биохимия (5)
Вирусные гепатиты (12)
Вирусные инфекции (43)
ВИЧ-СПИД (28)
Диагностика (30)
Зооантропонозные инфекции (19)
Иммунитет (16)
Инфекционные заболевания кожи (33)
Лечение (38)
Общие знания об инфекциях (36)
Паразитарные заболевания (8)
Правильное питание (41)
Профилактика (23)
Разное (3)
Сепсис (7)
Стандарты медицинской помощи (26)

Приготовление мазка крови и толстой капли для диагностики малярии.

Перед манипуляцией наденьте перчатки.
Подготовьте необходимое оборудование и инструментарий:

Скарификатор одноразового использования.
70% раствор этилового спирта.
Ватные шарики.
Предметное стекло.
Предметное стекло с шлифованной краем.
Чашку Петри.
Стерильный лоток.
Лоток для отработанного материала.
Сухое мыло.
Марлевую салфетку.

Инструментарий и материал должны быть стерильными. Предметное стекло — чистое, сухое, обезжиренное.

3. Подготовка пациента.

Предложите пациенту сесть удобно на стул.
Объясните ему суть манипуляции.
Выясните, какая рука у пациента нерабочая.
Помассируйте безымянный палец.
Обработайте кожу ногтевой фаланги ватным шариком, смоченным 70% этиловым спиртом по всем правилам и осушите вторым (сухим) ватным шариком.
Соблюдайте правила этики и деонтологии при общении с пациентом.

4. Приготовление мазка крови.

Сделайте прокол кожи скарификатором.
Первую каплю снимите сухим ватным шариком.
Прикоснитесь нижней поверхностью предметного стекла ко второй капле на пальце на расстоянии 1-1.5 см от края стекла.
Переверните стекло каплей вверх и возьмите в левую руку боковые ребра стекла. Капля располагается сверху и справа. Диаметр капли на стекле должен быть 2-3 мм.
Правой рукой установите стекло с шлифованной краем слева от капли под углом 45 0 с наклоном в сторону капли. Стекло с шлифованным краем должно быть немного уже предметного стекла с каплей крови. Продвигайте шлифованный край вправо до соприкосновения с каплей и подождите, пока кровь растечется по краю шлифованного стекла.
Не надавливая, быстрым равномерным движением проведите стеклом с шлифованной краем по предметному стеклу, пока капля не будет исчерпана. Мазок должен быть тонким и равномерным, иметь светло-розовую окраску, просвечивать, занимать ½ — ¾ стекла и заканчиваться щёточкой
Если крови выделилось недостаточно, предложите пациенту опустить руку вниз — выжимать каплю крови нельзя!
Не прикасайтесь предметным стеклом к коже!

На предметное стекло нанесите 2-3 капли крови на небольшом расстоянии друг от друга.
Стеклянной палочкой или углом другого предметного стекла смешайте их. Смешивайте легко, чтобы образовалась пятно диаметром 1,5 см. Слой крови не должен быть слишком толстым, иначе при высыхании образуется просто корка, которая отвалится.

6. Оформите сопроводительную документацию по известным Вам правилам и требованиям.

7. Транспортировка в лабораторию.

Подсушите мазок и толстую каплю на воздухе. На поверхности стекла ближе к началу мазка напишите номер, совпадающий с номером на направлении.
Изготовленные препараты уложите в чашку Петри и в таком виде транспортируйте в лабораторию.

8. Поместите использованное оборудование в дезинфицирующий раствор.

Показания:диагностика малярии, менингококковой инфекции.

Оснащение:

Предметные стекла, обезжиренные смесью Никифорова, 70% спирт, стерильные индивидуальные перья-копья, пинцет, ватные шарики, лоток для отработанного материала.

Техника взятия крови и приготовление тонкого мазка:

- установить доверительные отношения с пациентом;

- объяснить цель и ход процедуры;

- вымыть и просушить руки;

- надеть перчатки, маску;

- обработать спиртом нижнюю фалангу 4 пальца руки;

- проколоть мякоть нижней фаланги 4 пальца индивидуальным пером-копьем;

- поместить перо в лоток для отработанного материала;

- первую каплю крови снять сухим ватным шариком;

- повернуть палец проколом вниз;

- прикоснуться предметным стеклом ко второй капле крови (или нанести каплю крови с помощью капилляра Панченкова);

- поставить шлифовальное стекло перед каплей крови под углом 45 градусов;

- продвинуть шлифовальное стекло до соприкосновения с каплей крови;

- когда кровь равномерно распределится между обоими стеклами, сделать мазок быстрым движением шлифовального стекла;

- приготовленный мазок высушить на воздухе в горизонтальном положении;

- затем мазок фиксируют и окрашивают по Романовскому.

- приготовить тонкий мазок крови;

- на свежий мазок крови до того, как он высохнет нанести одну, две капли крови (дать им упасть);

Кровь растекается в правильный диск. При этом форменные элементы и паразиты не травмируются.

- высушить препараты на воздухе при комнатной температуре в горизонтальном положении в течение 3-4 часов;

- оформить направление в паразитологическую лабораторию;

- провести дезинфекцию лотка, пера-копья, пинцета, ватных шариков;

- снять маску, перчатки;

- вымыть и просушить руки;

Примечание:

- при взятии крови строго соблюдать правила асептики;

- предметные стекла держать пальцами за края, чтобы не оставить отпечатков;

- после высыхания капли через нее должен слабо просвечиваться крупный печатный текст;

ПРОДЕМОНСТРИРУЙТЕ ТЕХНИКУ ВВЕДЕНИЯ 500 000 ЕД НАТРИЕВОЙ СОЛИ БЕНЗИЛПЕНИЦИЛЛИНА ВНУТРИМЫШЕЧНО

Показание: этиотропная терапия многих инфекционных заболеваний.

Инструкция 2 курса – внутримышечная инъекция

ПРАВИЛА РАБОТЫ В БОКСЕ.

Бокс предназначен для приема, осмотра, обследования, оказания необходимой лечебной помощи, проведения консультации инфекционным больным.

Для предотвращения ВБИ при работе в боксе необходимо строго выполнять все правила санэпидрежима и придерживаться принципа поточно-пропускной системы. Этому способствует устройство бокса и его оснащение.

Бокс имеет два предбокса, смотровую бокса, санитарный узел. Один предбокс предназначен для медперсонала. Вход в него находится со стороны коридора приемного отделения. В этом предбоксе имеется кран с раковиной, мыло, дезинфектант для рук, 3 полотенца, 3 халата (для врача, медсестры и санитарки), бак для дезинфекции, тумбочка, на которой находятся две емкости для ветоши (чистой и отработанной), внутри тумбочки – флакон с дезинфектантом. Второй предбокс предназначен для входа и выхода больного со стороны территории больницы. Смотровая бокса приемного отделения снабжена всем необходимым для приема и осмотра больного: рожковая вешалка для верхней одежды пациента и сопровождающих его лиц, весы, ростомер, кушетка, стол (или пеленальный столик), стул, емкости для чистых шпателей, градусников и для их дезинфекции. Вся мебель должна быть деревянной, пластмассовой или с кожаной обивкой. Стены покрашены масляной краской. Каждый бокс снабжен уборочным инвентарем, предназначенным для использования только в данном боксе, имеет четкую маркировку.

В боксах предназначенных для лечения больных имеется санитарная комната, и окно для подачи пищи и лекарств.

В боксе должен приниматься только один больной, несмотря на сходство предварительных диагнозов во избежание последствий возможной ошибки в диагнозе и перекрестного заражения.

Перед входом в предбокс медперсонал надевает маску, плотно закрывает дверь в коридор (во избежание прямого потока воздуха между боксом и коридором), моет руки, просушивает их, надевает на халат второй халат, шапочку для работы именно в этом боксе, заходит в смотровую бокса, плотно закрывает дверь. Осмотрев больного, выходит в служебный предбокс, плотно закрывает дверь, снимает второй халат, шапочку, моет руки, дезинфицирует, просушивает их, выходит из предбокса, плотно закрывает дверь.

Каждый инфекционный больной осматривается на педикулез и заразные кожные заболевания. На него заполняется медицинская статистическая документация, а также карта экстренного извещения (ф. 058/у).

Осмотренный больной в сопровождении курьера направляется для лечения в отделение, соответствующее профилю его заболевания, выходя через тот предбокс через который входил.

После осмотра каждого инфекционного больного обязательно производится заключительная дезинфекция с кварцеванием и проветриванием (с учетом механизма передачи инфекции).

3.2. ПРОФИЛАКТИКА ПАРАЗИТАРНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

Паразитологическая диагностика малярии

Дата введения 2001-01-01

1. Методические указания подготовлены сотрудниками Института медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И.Марциновского Московской медицинской Академии им. И.М.Сеченова Минздрава России (к.м.н. Рабинович С.А., к.б.н. Кукина И.В., Mа. ская* Е.В., к.м.н. Морозов Е.Н.) и Федерального центра государственного санитарно-эпидемиологического надзора Минздрава России (к.б.н. Цыбина Т.Н., Сыскова Т.Г.).
________________
* Брак оригинала. - Примечание изготовителя базы данных.

2. УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 19 октября 2000 г.

3. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

1. Область применения и нормативные ссылки

Паразитологическую лабораторную диагностику малярии проводят клинико-диагностические лаборатории лечебно-профилактических учреждений (ЛПУ) системы Минздрава, ведомственных учреждений, а также другие лаборатории, независимо от принадлежности и форм собственности (НИИ, вузов, Минобороны, УВД, частных клиник и т.д.), имеющие лицензию и аккредитованные в системе госстандарта и госсанэпиднадзора в установленном порядке.

Органы и учреждения государственной санитарно-эпидемиологической службы Российской Федерации организуют и проводят эпидемиологический надзор за малярией, частью которого является:

контроль за уровнем лабораторной диагностики малярии в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений и других ведомств (в т.ч. исследования: 1) контрольные - не менее 10% препаратов крови, от числа отрицательных; 2) обязательные - 100% сомнительных и положительных препаратов крови с целью подтверждения лабораторного диагноза малярии);

обследование населения в очагах малярии, обследование населения по эпидпоказаниям и с консультативной целью.

В настоящих методических указаниях использованы ссылки на следующие нормативно-методические и правовые документы.

Федеральный закон "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" (30 марта 1999, N 52-ФЗ).

"Основы законодательства Российской Федерации об охране здоровья граждан" (22 июля 1993, N 5487-1).

Санитарные правила и нормы 3.2.569-96* "Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации".
_______________
* Действуют СанПиН 3.2.1333-03. - Примечание изготовителя базы данных.

Санитарные правила 3.1/3.2.558-96* "Общие требования по профилактике инфекционных и паразитарных заболеваний".
_______________
* Действуют СП 3.1/3.2.1379-03. - Примечание изготовителя базы данных.

Санитарные правила 1.2.731-99 "Безопасность работы с микроорганизмами 3-4 групп патогенности и гельминтами".

2. Общие положения

Возможность завоза малярии на территорию Российской Федерации, появление вторичных от завозных и местных случаев заболевания требуют своевременной лабораторной диагностики, необходимой для адекватного лечения и рационального проведения противоэпидемических мероприятий.

Малярию человека вызывают 4 вида паразитических простейших рода Plasmodium: Р. falciparum - возбудитель тропической малярии, Р. vivax - трехдневной малярии, Р. ovale - малярии типа трехдневной, Р. malariae - четырехдневной малярии. Неспецифические клинические проявления малярии, преимущественно в первые дни болезни, при наличии ряда объективных показателей эпидемиологического характера: географический анамнез (пребывание на территории стран с тропическим и субтропическим климатом) и клинического характера: лихорадочное состояние неясной этиологии, анемия, увеличение селезенки и ряд других - обязывают врачей лечебно-профилактических учреждений заподозрить малярию.

Безусловным подтверждением диагноза служит обнаружение малярийного паразита при микроскопическом исследовании крови. Особое значение имеет раннее выявление возбудителя тропической малярии, при несвоевременной диагностике которой возможен летальный исход. Определение вида паразита служит основанием для выбора рациональной терапии и правильной организации противоэпидемических мероприятий.

3. Характеристика развития малярийного паразита в эритроцитах

Проявления малярии обусловлены развитием паразита в эритроците - так называемой эритроцитарной шизогонией. В процессе эритроцитарной шизогонии образуются бесполые и половые формы паразита.

Бесполые формы за период времени, характерный для каждого вида паразита, проходят в эритроцитах ряд последовательных возрастных стадий своего развития, строение которых (морфология) и их окрашиваемость (тинкториальные свойства) хорошо различимы в "тонком мазке" крови. Трофозоиты - одноядерные растущие стадии: кольцевидные, развивающиеся (амебовидные, полувзрослые) и зрелые. Шизонты - делящиеся стадии: развивающиеся (незрелые), с последовательным делением ядер и общей цитоплазмой и зрелые, представляющие скопление дочерних клеток мерозоитов с обособленными ядрами и цитоплазмой. В динамике эритроцитарная шизогония в общем виде протекает следующим образом. Мерозоит, внедрившийся в эритроцит, быстро увеличивается в размере, в цитоплазме появляется пищеварительная вакуоль и образуется - кольцевидный трофозоит. На этой стадии цитоплазма имеет вид узкого ободка, огибающего пищеварительную вакуоль, ядро сравнительно мелкое, компактное с трудно различимой структурой хроматина, оттеснено к одному из полюсов клетки. По мере роста паразита увеличиваются его размеры, количество цитоплазмы нарастает: ядро становится более крупным, менее компактным. В цитоплазме могут появиться асимметричные утолщения, различающиеся по форме и числу, псевдоподии - образуется амебовидный трофозоит. В дальнейшем у развивающегося трофозоита постепенно исчезает вакуоль, продолжает увеличиваться ядро и количество цитоплазмы - образуется зрелый трофозоит. Зрелый трофозоит - округлая или несколько вытянутая клетка с относительно рыхлым ядром, правильной или несколько вытянутой формы, занимающая весь или часть пораженного эритроцита. Затем наступает стадия шизонта, начинается попарное деление ядер, образуется развивающийся (незрелый) шизонт. По окончании деления ядер одномоментно делится цитоплазма, обособляясь вокруг каждого из дочерних ядер - образуется зрелый шизонт, состоящий из мерозоитов; их число, размеры и расположение по отношению к скоплению пигмента характерны для каждого вида плазмодиев (см. таблицы). При отсутствии или неэффективном лечении мерозоиты внедряются в интактные эритроциты, и цикл вновь повторяется с присущей для каждого вида плазмодиев продолжительностью развития одной генерации. У Р. falciparum, P. vivax, P. ovale - 48 ч, Р. malariae - 72 ч.

В процессе роста паразита в его цитоплазме появляется малярийный пигмент - продукт метаболизма гемоглобина, представляющий собой включения от едва заметных мелких зерен и гранул до относительно более крупных, неправильной формы, от золотисто-коричневого до черного цвета. Количество пигмента, размеры его частиц и распределение в цитоплазме паразита меняются по мере его перехода в последовательные стадии развития.

У части трофозоитов деления ядер не происходит и они дифференцируются в половые формы, гаметоциты - женские (макрогаметоциты) и мужские (микрогаметоциты). Мужские и женские гаметоциты различаются между собой по морфологии, в первую очередь по структуре ядра, характеру и окраске цитоплазмы. В отличие от бесполых форм гаметоциты не имеют выраженной вакуоли, характеризуются значительно более обильным и грубым пигментом. Округлая форма присуща гаметоцитам Р. vivax, Р. ovale и Р. malariae, удлиненная серповидная (полулуния) - Р. falciparum. Гаметоцитов образуется меньше, чем бесполых форм. При этом женских гаметоцитов в 3-5 раз больше, чем мужских, что затрудняет выявление последних. Гаметоциты Р. vivax, Р. ovale, P. malariae значительно отличаются от гаметоцитов Р. falciparum по срокам созревания, появления в периферической крови и сохранения способности заражать переносчика (самок комара Р. anopheles).

Р. vivax, Р. ovale и Р. malariae развиваются в эритроцитах, циркулирующих в периферической крови. Развитие Р. falciparum происходит в синусах селезенки и мелких капиллярах внутренних органов в связи с адгезией пораженных эритроцитов к стенкам таких капилляров. В периферической крови обнаруживаются, преимущественно при неосложненном течении, только самые молодые стадии - кольцевидные трофозоиты. Их число очень быстро нарастает, поэтому при однократном исследовании периферической крови в начале болезни можно получить неправильное представление об истинном числе паразитов. При осложненном течении в периферической крови могут быть обнаружены более зрелые возрастные стадии паразита и гаметоциты в связи с нарушением сосудистого тонуса.

При оценке результатов исследования препаратов крови, наряду с типичной морфологией возбудителя, необходимо учитывать ряд особенностей, характеризующих паразитологическое развитие инфекции собственно и привходящих воздействий (предшествовавшее применение противомалярийных препаратов, неправильное приготовление и окраска препаратов крови).

4. Принцип метода паразитологической диагностики малярии

Паразитологическая диагностика малярии основана на обнаружении бесполых и половых форм возбудителя при микроскопическом исследовании крови, что возможно только в период его развития в эритроците. Для обнаружения плазмодиев и определения их вида используют препараты крови, приготовленные методом "тонкого мазка" и "толстой капли", окрашенные по Романовскому-Гимза. Оба метода, имеющие свои преимущества и недостатки, являются взаимодополняющими.

Основной метод - "толстая капля". Благодаря распределению относительно большего объема крови на меньшей площади, за один и тот же промежуток времени просматривается количество крови в 30-40 раз большее, чем в "тонком мазке", что значительно повышает шанс обнаружения паразитов, особенно при низкой паразитемии. Начинать надо всегда с просмотра "толстой капли".

Чувствительность метода "толстой капли" такова, что при просмотре 100-150 полей зрения можно обнаружить около 8 паразитов в 1 мкл крови. Концентрация исследуемой крови на ограниченной площади приводит к многослойному расположению эритроцитов. Для того чтобы паразиты были видимы, "толстую каплю" окрашивают нефиксированной; это приводит к гемолизу эритроцитов, и паразиты подвергаются деформации. Несмотря на определенную специфичность, такая деформация иногда может препятствовать идентификации вида паразита. Ограничиться просмотром "толстой капли" можно только, если вид паразита был первоначально установлен. "Толстая капля" относительно быстро позволяет выявить и других паразитов крови: трипаносом, микрофилярий, спирохет, бабезий и др. Отрицательный паразитологический результат изучения "толстой капли", но повышенное содержание остатков незрелых эритроцитов позволяет предположить перенесенную недавно малярию (при отсутствии соответствующих анамнестических данных), обнаружение повышенного содержания лейкоцитов, их видовой состав, а также повышенное содержание остатков незрелых эритроцитов, позволяют предположить иное заболевание, не связанное с малярией.

В "тонком мазке", фиксированном до окраски, сохраняются морфологические особенности как пораженного эритроцита, так и присущие данному виду паразита. Большое значение для дифференциального диагноза имеет характер изменения пораженных эритроцитов. "Тонкий мазок" крови делают в дополнение к "толстой капле". В тех случаях, когда вид возбудителя в очаге установлен, для эпиднадзора за очагом можно ограничиться методом "толстой капли".

5. Необходимые реактивы и оборудование

1. Этиловый спирт 96°.

2. Азур-эозин по Романовскому-Гимза (промышленный маточный раствор или сухая краска).

3. Метиленовый синий.

4. Этиловый эфир.

6. Тетраборат натрия (бура).

7. Калий фосфат однозамещенный безводный - KH PO .

Приготовление мазка и толстой капли крови при малярии.Основной метод лабораторной диагностики малярии - обнаружение эритроцитарных паразитов в толстой капле или мазке крови. В практической работе исследуют преимущественно толстые капли, так как за один и тот же промежуток времени в толстой капле можно просмотреть в 30 - 50 раз больший объем крови, чем в мазке, следовательно, и количество плазмодиев в ней больше. К мазку обращаются лишь в тех случаях, когда видовую принадлежность найденных паразитов по толстой капле установить не удается. Для выявления возбудителей малярии кровь берут при первом же подозрении на эту инфекцию независимо от температуры тела, поскольку паразиты циркулируют в крови и в интервале между приступами.

Предметные стекла, на которых готовят препараты, должны быть хорошо вымыты и обезжирены. Кровь берется с соблюдением правил асептики. Кожу пальца протирают спиртом и прокалывают простерилизованной иглой-копьем или толстой инъекционной иглой. Если кровь из мякоти пальца вытекает плохо, то больного просят сделать несколько энергичных движений рукой, кистью и слегка массируют палец. Первую выступившую каплю крови вытирают сухой ватой, затем палец поворачивают проколом вниз и ко второй капле прикасаются предметным стеклом.

Тонкие мазки крови приготавливают по методике, общепринятой для гематологических исследований. Мазок не должен доходить ни до конца, ни до краев предметного стекла. Поэтому капля крови должна быть диаметром не более 2 - 3 мм. Предметное шлифованное стекло, которым делается мазок, должно быть уже стекла, на которое наносят мазок. Для этого углы шлифованного стекла обламывают пинцетом. В целях приготовления мазка шлифованное стекло ставят перед каплей крови под углом 45° и продвигают вперед до соприкосновения с ней. Когда кровь равномерно распределится между обоими стеклами, быстрым движением делают мазок.

Для приготовления толстой капли крови на предметное стекло наносят каплю крови диаметром около 5 мм. Эту каплю размазывают иглой или углом предметного стекла в диск диаметром 10 - 15 мм. Толщина капли должна быть такой, чтобы сквозь нее можно было читать газетный шрифт Мазки не должны быть толстыми, поскольку после высыхания они растрескиваются и отстают от стекла. Обычно на стекло наносят 2 - 3 капли на некотором расстоянии одна от другой. Взятые капли должны быть отмечены. На обратной стороне стекла восковым карандашом указывается фамилия больного или соответствующий регистрационный номер.

Очень удобно наносить толстую каплю на влажный толстый мазок крови. В этом случае капля самостоятельно растекается в правильный диск. Простым карандашом на мазке делается маркировка препарата Такой препарат удобен еще и тем, что в мазке довольно хорошо сохраняется часть пораженных эритроцитов, а это важно для уточнения вида паразита. Преимущество данного метода в том, что капля, нанесенная на мазок, удерживается более прочно, чем нанесенная непосредственно на стекло.

Приготовленные толстые капли высушивают при комнатной температуре не менее 2 - 3 ч без какого-либо дополнительного подогревания во избежание фиксации крови. После высыхания капли на нее наливают краску Романовского - Гимзы, разведенную как обычно (2 капли краски на 1 мл дистиллированной воды). Продолжительность окраски в среднем составляет 30 - 45 мин. Окрашенную каплю осторожно ополаскивают водопроводной водой (сильная струя может смыть каплю) и просушивают в вертикальном положении. Фильтровальной бумагой ее высушивать нельзя. При окраске капли в водных растворах красок происходит выщелачивание гемоглобина из эритроцитов, вследствие чего в окрашенной капле эритроциты уже не видны. Из форменных элементов сохраняются лейкоциты и тромбоциты.

Мазки фиксируют, помещая их на 3 мин в метиловый или на 10 мин в 96% этиловый спирт. Зафиксированные препараты высушивают на воздухе, защищая от пыли и мух. Потом препараты помещают в специальный контейнер и окрашивают азур-эозиновым красителем по Романовскому - Гимзе на протяжении 20 - 30 мин.

По истечении этого срока контейнер подставляют под слабую струю воды и промывают. После того как из контейнера польется неокрашенная вода, остатки ее сливают и промывают еще раз. Не рекомендуется сначала сливать краску, а затем промывать мазок водой, поскольку пленка, образовавшаяся на поверхности красителя, может попасть на препараты и оказаться причиной диагностической ошибки. Капля на мазке окрашивается так же, как толстая капля.

Промытые препараты высушивают и исследуют под микроскопом. В зараженных эритроцитах видны плазмодии малярии с голубой цитоплазмой и ярко-красным ядром. Нахождение плазмодиев малярии в крови больного является неоспоримым доказательством болезни.

Определение интенсивности паразитемии при малярии. Достаточно точный метод сводится к подсчету среднего числа паразитов на одно поле зрения толстой капли. Если паразитов много, то подсчет ведут в 10 полях зрения, если мало в 100. Численность указывают отдельно для обнаруженных стадий паразита, например, р. falciparum кольца +++, гаметоциты +. Применительно к численности колец ВОЗ рекомендованы следующие символы:

1 – 10 в 100 п. зр = +.

более 10 в п. зр. = + + ++

более 100 в п.зр.=+ + + + +

Лаборанты с высоким уровнем подготовки применяют более точный метод, а именно, подсчитывают численность паразитов по отношению к числу лейкоцитов. Например, в толстой кишке на 100 лейкоцитов найдено 20 паразитов.

Допуская, что у больного 4.000 лейкоцитов в 1 мкл крови, легко установить:

в исследованных полях зрения – 100 лейкоцитов и 20 паразитов в 1 мкл имеется 4000 лейкоцитов и Х паразитов. Следовательно, в 1 мкл: 4000х20/100 = 800 паразитов. Подсчет будет еще более точным, если в формулу ввести конкретное, а не предположительное число лейкоцитов у данного пациента. При очень высокой паразитемии ее интенсивность может быть охарактеризована числом паразитов на 100 эритроцитов, подсчитанных в тонком мазке.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Читайте также: