Исследование почвы на наличие яиц и личинок гельминтов
Изобретение относится к области профилактической медицины и санитарной паразитологии, экологии человека и может быть использовано как экспресс-способ для обнаружения яиц гельминтов в пробах почвы.
Геогельминты - гельминты, передающиеся через почву, являются наиболее распространенными паразитами в мире. Заболеваемость геогельминтозами, по оценкам Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), более одного миллиарда жителей нашей планеты (Acceleratingworktoovercometheg-lobalimpactofneglectedtropicaldiseases. A roadmap for implementation. Executive summary. \\WorldHealthOrganization, 2012, p. 12). Геогельминты -Ascaris lumbricoides, Ascaris suum, Toxocara canis встречаются практически повсеместно не только в местностях, характеризующихся плохими санитарными условиями, но и очень часто в благополучных мегаполисах в песке на детских площадках и в песочницах. Наиболее подверженная группа риска заражения геогельминтами - дети. В современных условиях необходимы быстрые - экспресс способы обнаружения яиц геогельминтов для проведения профилактических мероприятий и постоянного мониторинга за очагами геогельминтозов и факторами риска распространения инвазий и эпидемиологически значимыми объектами мегаполисов, растениеводческих хозяйств и пищевой промышленности, а также за объектами питьевого и хозяйственного водоснабжения (SingerBH, CastroMC (2007) Bridgestosustainabletropicalhealth. \\ProcNatlAcadSciUSA 104: 16038-16043).
Существующие на сегодняшний день способы санитарно-гельминтологического исследования почвы трудоемки и требуют значительного времени (3-3,5 часа, включая пробоподготовку) для проведения исследований, кроме того, проведение таких исследований возможно только в специализированных лабораториях.
Все известные способы основаны на применении различных флотационных растворов. Для обнаружения яиц гельминтов в почве используется комбинированный способ Романенко, где в качестве флотационного раствора используется насыщенный раствор нитрата натрия (Романенко НА., Падченко И.К., Чебышев Н.В. Санитарная паразитология. - М.: Медицина, 2000, стр. 231 -275). Для исследования по способу Романенко отбирают 25 г почвы, помещают в центрифужную пробирку вместимостью 250 мл и заливают 150 мл воды. Смесь тщательно размешивают стеклянной палочкой в течение 5 мин или с помощью электромешалки 1 мин.
Всплывшие крупные частицы сразу же удаляют. После центрифугирования в течение 3 мин при 800-1000 об/мин воду сливают, а в пробирки добавляют 150 мл насыщенного раствора нитрата натрия. Перемешивают палочкой и вновь центрифугируют 3 мин.
Пробирки устанавливают в штатив, доливают тем же раствором до образования выпуклого мениска, накрывают обезжиренным предметным стеклом так, чтобы оно касалось слоя жидкости. Через 15 мин предметное стекло снимают, на влажную поверхность добавляют несколько капель 50% водного раствора глицерина и микроскопируют. С целью повышения эффективности выявления яиц рекомендуется снятие препарата повторить 2-3 раза.
Основными недостатками данного метода являются:
- насыщенный раствор нитрата натрия, а также другие альтернативные растворы, такие как растворы тиосульфата натрия и натриевой селитры, очень быстро кристаллизуются, что затрудняет просмотр проб и снижает вероятность выявление яиц гельминтов;
- применение нескольких последовательных промывок приводит к потери исследуемого материала, что в свою очередь влияет на точность определения количества яиц геогельминтов в пробе почвы;
- значительное время на подготовку флотационного раствора и проведение исследования образца почвы на наличие гельминтов 3-3,5 часа.
Способ выявления яиц гельминтов, клещей и ооцист простейших в пробах почвы заключается в том, что пробу почвы весом 25 г помещают в центрифужную пробирку вместимостью 250 мл и заливают 150 мл воды, смесь тщательно размешивают стеклянной палочкой в течение 5 мин или с помощью электромешалки 1 мин и центрифугируют в течение 3 мин при 800-1000 об/мин, воду сливают, а в пробирки добавляют 150 мл трехкомпонентной флотационной системы, состоящей из насыщенных растворов цинка хлорида (2 кг ZnCl2 на 1 л), натрия хлорида (0,42 кг NaCl на 1 л) и глицерина, взятых в соотношении 1:1:1, в пробирку доливают тот же раствор до образования выпуклого мениска, пробирку накрывают обезжиренным предметным стеклом так, чтобы оно касалось слоя жидкости, через 20-30 мин стекло снимают и микроскопируют, снятие препарата рекомендуется повторить 2-3 раза.
Основными недостатками данного способа являются:
- использование сложного флотационного раствора;
- быстрая кристаллизация флотационного раствора;
- потеря исследуемого материала при центрифугировании и удаления раствора;
- значительное (2-2,5 часа) время на исследование.
Задача изобретения - повышение точности определения яиц гельминтов в пробах почвы (за счет избавления от кристаллизации флотационного раствора и уменьшения потери исследуемого материала путем исключения последовательных промывок), снижение трудоемкости процесса и значительное уменьшение (до 30-35 мин) времени обнаружения яиц гельминтов в исследуемых образцах почвы.
Поставленная задача решается способом обнаружения яиц гельминтов в пробах почвы, включающим смешивание исследуемого образца почвы с флотационным раствором и последующее микроскопирование, отличающимся тем, что в качестве флотационного раствора используют 25 мл 1,4-1,6% раствора перекиси водорода на 25 г пробы почвы.
Практически способ осуществляют следующим образом. К 25 г образца почвы, помещенного в большую центрифужную пробирку, добавляют 25 мл 1,4-1,6% перекиси водорода. Содержимое перемешивают маленькими стеклянными палочками и отстаивают в течение 4-6 минут. Перемешивание повторяют дважды. Затем пробирку оставляют отстаиваться на 20-25 минут. В процессе реагирования почвы и перекиси водорода почва поднимается выше уровня жидкости и оседает на стенках пробирки. Ее смывают небольшим количеством раствора перекиси водорода, также смывают частички почвы с палочки, которую используют для перемешивания образца, с целью недопущения возможных потерь в пробе. В процессе отстаивания на линии соприкосновения перекиси водорода с верхней границей образца почвы формируется зона, отличающаяся по цвету от основной массы исследуемого образца, из которой пипеткой забирается материал для микроскопирования на предметном стекле. Для обнаружения яиц геогельминтов, которые могут находиться в образце, необходимо микроскопировать не более трех предметных стекол. Полученные препараты просматривают под увеличением ×40, для удобства просмотра можно добавить раствор Люголя.
Предлагаемый способ обнаружения яиц гельминтов в пробах почвы позволяет в 98% случаев в 2-2,5 раза быстрее по сравнению с используемыми на сегодняшний день способами обнаружить яйца геогельминтов.
Основой предлагаемого способа является способность перекиси водорода в определенной концентрации взаимодействовать с частичками почвы исследуемого образца и поднимать вверх яйца гельминтов. Подбор концентрации раствора перекиси водорода был определен экспериментальным способом. Его результаты представлены в табл. 1.
|
Были проведены по 100 испытаний с образцами почвы и песка. Авторами проведены сравнительные исследования заявленного способа со способом Романенко (табл. 2).
|
Пример 1. Проба песка общей массой 300 г. Забор пробы осуществлялся в соответствии со способом Романенко.
При исследовании способом Романенко яиц гельминтов не было выявлено.
Применение заявленного способа позволило выявить яйца Тохосаrasp.и Trichuristrichiura.
Пример 2. Проба почвы общей массой 200 г. Забор пробы осуществлялся в соответствии со способом Романенко.
При исследовании методом Романенко яиц гельминтов не выявлено.
По предлагаемому способу при исследования почвы выявлено яйцо Toxocarasp.
|
Из представленных данных следует, что предлагаемый способ обнаружения яиц гельминтов в пробах почвы позволяет повысить точность определения яиц гельминтов в пробах почвы, снизить трудоёмкость процесса и значительно уменьшить (до 30-35 мин) время обнаружения яиц гельминтов в исследуемых образцах почвы.
Это позволяет использовать предлагаемый способ как для проведения санитарно-паразитологических исследований, так и для проведения научных исследований.
Дата публикации: 05.06.2017 2017-06-05
Статья просмотрена: 178 раз
Эколого-эпидемическая оценка почв городских территорий на загрязнённость яйцами гельминтов является актуальной проблемой в Российской Федерации. Токсокароз имеет широкое распространение среди домашних и бездомных плотоядных животных по всему миру. Щенки в возрасте до 1 месяца имеют 100 % зараженность гельминтами, у кошек наибольшая зараженность приходится на зрелый, репродуктивный возраст. В крупных городах и мегаполисах непрерывно возрастает численность плотоядных. Инвазированные животные загрязняют окружающую среду яйцами токсокар. Исследования на обсемененность яйцами рода Toxocara показали, что самыми загрязненными территориями являются придомовые участки.
Ключевые слова: геогельминтозы, токсокароз, toxocara canis, toxocara cati собаки, кошки, почвы, инвазионные яйца гельминтов, заболевания человека, зоонозы
Геогельминтозы широко распространены, как в мире, так и на территории Российской Федерации. По оценкам ВОЗ в мире примерно 2 млрд. человек инвазированны геогельминтами. В Российской Федерации ежегодно регистрируется около 30 тыс. случаев геогельминтозов. В структуре геогельминтозов лидирующее положение занимает аскаридоз — 90 %, далее следует токсокароз — 9 % и трихоцефалез — 1 %, на долю другсих геогельминтозов приходится всего 0,1 %. [5, с.1–2]
В Российской Федерации ежегодно регистрируется не более 30 тыс. случаев геогельминтозов [1,7]. Так за 2015 год на территории Российской Федерации было зарегистрировано 26 828 случаев геогельминтозов. В структуре геогельминтозов на территории нашего государства токсокароз находится на втором месте, после аскаридоза. На его долю приходится почти 9 %. Ежегодно выявляется до 5 тыс. случаев данного заболевания. Количество зарегистрированных случаев токсокароза за период 2012–2015 гг. представлено на рисунке 1. [4, с. 1, 3; 5, с. 2, 3]
Наряду с тем, что, согласно статистическим данным о заболеваемости населения РФ токсокарозом, наблюдается тенденция к снижению случаев заболевания данным геогельминтозом; однако с каждым годом количество субъектов Российской Федерации, в которых регистрируются случаи токсокароза, увеличивается. Из данных фактов следует, что на территории России в ряде субъектов РФ внедряются, а в ряде — улучшаются, методы диагностики токсокароза; снижение случаев токсокароза может свидетельствовать о санитарном просвещении населения относительно данного заболевания и проведении профилактических мероприятий, и как следствие, о соблюдении, как владельцами собак, так и остальным населением, правил гигиены.
Однако представленные статистические данные, не дают полного представления о степени заболеваемости населения РФ токсокарозом. Истинный уровень заболеваемости токсокарозом на территории Российской Федерации значительно выше. Причиной тому может служить недостаточная информированность врачей, в первую очередь педиатров, об особенностях клинической картины заболевания и возможностях лабораторной диагностики данного заболевания. Не редко токсокароз проходит под различными диагнозами, например, хроническая пневмония, аллергоз, дерматит и др. [2]
Несоответствие статистических данных реальной картине заболеваемости населения РФ, может быть следствием того, что в некоторых субъектах РФ в недостаточной степени отработана диагностика токсокароза. В данных субъектах РФ либо вовсе не зарегистрированы случаи токсокароза, либо выявлены единичные случаи, что не отражает фактической ситуации по данному заболеванию в регионе.
Для определения роли компонентов окружающей среды в распространении яиц гельминтов и попадании их в организм человека, для определения степени обсемененности и загрязненности окружающей природной среды, для выбора и разработки профилактических мероприятий проводят анализы почвы, снежного покрова, воды и т. д.
Для исследования используют 100 г (4 порции по 25 г) почвы объединенной пробы. Порции почвы помещают в центрифужные пробирки, объем которых составлял 250 мл, и затем к почве добавляют 3 % раствор NaOH в соотношении 1:1. Содержимое пробирок перемешивается и отстаивается 25–30 мин. Затем пробирки помещают в центрифугу и центрифугируют в течении 5 мин при 800 об/мин. Образовавшуюся надосадочную жидкость сливают, а почву промывают водой 2–5 раз. Промывку осуществляют до тех пор, пока надосадочная жидкость не станет чистой, также при каждой промывке осадок тщательно перемешивают. После промывки к осадку добавляется 150 мл насыщенного раствора NaNO3 — для обнаружения яиц власоглава и аскариды, или 150 мл смеси насыщенного раствора ZnSO4 с 5 % раствором KIO3 — для обнаружения яиц токсокар. Почву тщательно перемешивают и повторно центрифугируют. После чего в каждую пробирку добавляют насыщенный раствор NaNO3, уровень раствора при этом не должен достигать 2–3 мм до краев пробирки. Затем пробирки устанавливают в штатив и накрывают предметными стеклами.
За счет более низкой плотности, чем плотность раствора, яйца гельминтов всплывают, концентрируясь в поверхностной пленке раствора. Приподнимая предметное стекло не более чем на 10 мм, в пробирки добавляют насыщенный солевой раствор, в количестве, при котором обеспечивается его соприкосновение с нижней стороной предметного стекла. После 25 мин отстаивания предметные стекла заменяются (2–3 раза). На стекла с поверхностной пленкой наносятся 1–3 капли 30 % раствора глицерина, а затем на них накладываются тонкие покровные стекла. Полученные микропрепараты изучаются под микроскопом при увеличении в 80 раз.
Оценка результатов. Для получения показателя содержания количества яиц в 1 кг почвы совокупность обнаруженных яиц гельминтов в 100 г почвы умножается на 10.
Отбор проб почв для исследований на обсемененность яйцами токсокар производился на территории г. Красногорск в период с августа 2016г по март 2017 г. Отбор проб почв производился с территорий детских игровых площадок (песочницы и территория рядом с ними), парков, придомовых территорий в соответствии с методами санитарно-паразитологических исследований.
В целях недопущения заражения домашних животных (собак и кошек) следует:
‒ соблюдать правила гигиены (регулярно мыть питомца после прогулки);
‒ давать антгельминтные и препараты (в особенности сукам и щенкам);
‒ регулярно мыть обувь после улицы (во избежание поедания питомцами потенциально контаминированной почвы).
‒ соблюдать правила личной гигиены (в особенности детьми или после земляных работ);
‒ ограничить и исключить общение маленьких детей с собаками и щенками, соответственно;
‒ избегать купания на несанкционированных (диких) пляжах;
‒ проводить плановую уборку жилых помещений с применением дезинфектантов.
Обеспечение и поддержание чистоты и безопасности городской среды может быть достигнуто исключительно при совместной работе и участии территориальных органов местного самоуправления, территориальных центров госсанэпиднадзора, жилищно-эксплуатационных организации и населения. С учетом, всего вышесказанного, основными профилактическими мероприятиями, в силу их эффективности или доступности, следует выделить:
‒ экологическое просвещение и воспитание населения (просветительская работа в образовательных и медицинских учреждениях, установка информационных стендов на территории рекреационных зон; уборка фекалий за своим питомцем);
‒ организация специальных площадок для выгула собак;
‒ ограждение детских и рекреационных зон, исключающее доступ к ним животных;
‒ регулярная дегельминтизация домашних животных;
‒ соблюдения правил гигиены;
‒ плановая дератизация и дезинсекция жилых зданий;
‒ контроль численности бездомных собак и кошек (отлов и стерилизация);
Токсокароз является насущной и актуальной проблемой во всем мире, в том числе и в России. Несмотря на широкое распространение данного зоонозного паразитоза, зачастую ему уделяется недостаточно внимания. В структуре геогельминтозов Российской Федерации токсокароз занимает второе место. На территории России ежегодно регистрируется до 5 тыс. случаев токсокароза. На фоне наблюдаемой тенденции к снижению случаев токсокароза в стране, установлен рост количества субъектов РФ, в которых данный паразитоз регистрируется. Что свидетельствует о внедрении и улучшении методов диагностики токсокароза, а также о санитарном просвещении населения касательно данного заболевания. Тем не менее, уровень заболеваемости токсокарозом в действительности значительно выше, ввиду некоторых особенностей самого паразита и трудности диагностирования заболевания. По причине того, что токсокароз у человека проявляется полиморфными клиническими проявлениями, его проявления схожи с симптомами дерматита и др.
Аннотация научной статьи по ветеринарным наукам, автор научной работы — Долбин Д.А., Лутфуллин М.Х., Соколина Ф.М.
Предложен метод исследования проб почвы на яйца гельминтов , который превосходит по своей эффективности предложенный ранее метод Романенко и может быть использован на практике и при проведении научных исследований. Данный метод был применен для обследования объектов внешней среды города Казани и позволил выявить большую загрязненность яйцами геогельминтов. Разработанный метод позволил дополнительно выявить приблизительно 36 % яиц аскарид, чем по методу Романенко, что обусловлено применением нескольких компонентов в флотационной жидкости: растворов хлорида цинка, хлорида натрия и глицерина. Компоненты предлагаемой флотационной системы не нарушают морфологию яиц паразитов и не создают затруднений с морфологической идентификацией возбудителя
Похожие темы научных работ по ветеринарным наукам , автор научной работы — Долбин Д.А., Лутфуллин М.Х., Соколина Ф.М.
Examination of soil for the presence of helminths eggs
The method of research of tests of the soil on eggs of helminths which surpasses the method of Romanenko offered earlier in the efficiency is offered and can be used in practice and when carrying out scientific researches. This method was applied to inspection of objects of environment of Kazan city and allowed to reveal big impurity eggs of geohelminths. The developed method allowed to reveal in addition about 36 % of eggs of ascarids than on Romanenko's method that is caused by application of several components in flotation liquid: solutions of chloride of zinc and sodium chloride and glycerin. Components of the flotation liquid don't break morphology of eggs of parasites and don't create difficulties with morphological identification of the helminths
Биохимия, биотехнология и диагностика
ОБСЛЕДОВАНИЯ ПОЧВЫ НА ЯЙЦА ГЕЛЬМИНТОВ
Д.А. ДОЛБИН1 кандидат биологических наук М.Х. ЛУТФУЛЛИН 2 доктор ветеринарных наук Ф.М. СОКОЛИНА3 доктор биологических наук
1 Казанский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии, 420015, Казань, Большая красная, 67, e-mail: dda sns@mail.ru
2 Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана, 420029, Казань, Сибирский тракт, 35, e-mail: parasitology-kazan@mail.ru
3 Казанский (Приволжский) Федеральный университет, 42008, Казань, ул. Кремлевская, 18, e-mail: fsokolin@kpfu.ru
Предложен метод исследования проб почвы на яйца гельминтов, который превосходит по своей эффективности предложенный ранее метод Романенко и может быть использован на практике и при проведении научных исследований. Данный метод был применен для обследования объектов внешней среды города Казани и позволил выявить большую загрязненность яйцами геогельминтов. Разработанный метод позволил дополнительно выявить приблизительно 36 % яиц аскарид, чем по методу Романенко, что обусловлено применением нескольких компонентов в флотационной жидкости: растворов хлорида цинка, хлорида натрия и глицерина. Компоненты предлагаемой флотационной системы не нарушают морфологию яиц паразитов и не создают затруднений с морфологической идентификацией возбудителя.
Ключевые слова: яйца, гельминты, почва, контаминация, Республика Татарстан.
При изучении эпидемиологии и эпизоотологии токсокароза слабо уделяется внимание обследованию резервуарных хозяев токсокар: свиней, грызунов и птицы, которые могут заглатывать инвазионные яйца [5].
Освободившиеся личинки второй стадии паразитируют в организме резервуарного хозяина до тех пор, пока его не съест окончательный, в пищеварительном тракте которого происходит дальнейшее развитие личинки. Имеются данные о роли тараканов и мух как механических переносчиков яиц токсокар [7].
Согласно последним данным, у сук в поздний период щенности и во время лактации может происходить реинвазия, которая приводит к трансмиссивному заражению щенков-сосунов, а при клиническом проявлении заболевания - к контаминации окружающей среды яйцами гельминтов. Минимальный инкубационный срок составляет: при прямом заражении 4-5 нед, а при пренатальном - 3 нед [10].
Данные о зараженности токсокарами населения довольно противоречивы. Пораженность сельского населения значительно выше, чем городского,
также как и обсемененность почвы яйцами токсокар. Например, в Еврейской автономной области обсемененность почвы яйцами токсокар в городских условий была в четыре раза выше. Причем, наибольший процент обсемененных проб приходится на почву теплиц [11].
Однако, в Тульской области корреляционной связи между заболеваемостью, благоустройством жилья и наличием собак не выявлено [4].
Высокую зараженность детей токсокарами отмечают большинство авторов [11].
При обследовании населения в Свердловской области доля инвазирован-ных взрослых по результатам серологических исследований была в два раза выше, чем детей [8].
В 1996-2004 гг. зараженность людей токсокарами по Республике Татарстан составила 0,0005-0,003 % на 100 тыс. человек [9]. С 2000 г. число больных токсокорозом увеличилось, в среднем, в 7 раз, что, вероятно, обусловлено внедрением более эффективных лабораторно-диагностических методов. Токсокороз зарегистрирован у 4 % населения республики [9]. Загрязненность почвы яйцами Toxocara spp. почвы достигает 10 % [10].
Загрязненность почвы и пораженность людей токсокарами зависят от климатических, гидрологических и гигиенических условий в конкретной местности.
Из других факторов окружающей среды в передаче яиц токсокар можно назвать воду, овощи, зелень, волосяной покров собак.
В Хабаровском крае установлено, что 8,6 % проб воды в г. Николаевск-на-Амуре и 15,4 % проб воды в г. Хабаровске содержат яйца токсокар. Наиболее часто положительные пробы регистрировали в водах акватории речного порта р. Амур, в местах стока ливневых и паводковых вод, районах неорганизованных пляжей, т. е. в местах скопления населения, бродячих собак и выгула домашних животных. В питьевой воде яйца гельминтов не обнаружены. На шерсти 16,4 % собак найдены яйца нематод. Наиболее интенсивные показатели обсемененности характерны у щенков в области ануса -30-40 %, крупа - 18-20 и живота - 10-12 %. Обсемененность яйцами токсо-кар столовой зелени из индивидуальных огородов, рынков городов составила 6,4 % овощей. Яйца паразита находили также на моркови, свекле, луке, картофеле [1].
Анализ результатов гельминтоовоскопических исследований показал высокую зараженность щенков. Инвазированность взрослых собак составила 19,2 %, щенков 47,8 %. На контаминацию окружающей среды яйцами токсо-кар влияет численность бродячих животных. Собаки в сельской местности более поражены токсокарами, чем в городских условиях [1].
Наиболее актуальна оценка загрязненности почвы детских площадок яйцами Toxocara canis, T. cati и Ascaris lumbricoides.
Наиболее часто используемым методом исследования почвы с целью выявления яиц гельминтов является комбинированный метод Романенко. Для этого в качестве флотационной жидкости используют насыщенный раствор нитрата натрия [3].
При планировании и организации мероприятий по искоренению гельминто-зов необходимо выявление новых случаев заболевания с целью контроля эпидемиологической ситуации, совершенствование методов обследования.
С этой целью нами усовершенствован метод гельминтоовоскопии и был разработан новый метод выявления яиц гельминтов и цист простейших в пробах почвы [12, 13].
Материалы и методы
Пробы почвы берут с поверхности и на глубине 10-20 см. На однотипном участке собирают в 5-10 различных местах по 10-20 г, объединяя пробы в одну, общей массой не менее 100-200 г.
На территории одного объекта (усадьба, детская площадка и т. д.) берут 10 проб. Пробу помещают в закрытую стеклянную посуду или полиэтиленовый пакет. Внутрь вкладывают этикетку с указанием места и условий отбора пробы. Пробы, доставленные в лабораторию, желательно исследовать немедленно, так как яйца ряда гельминтов или личинки могут погибнуть и разрушиться. Хранить пробы рекомендуется в холодильнике (5 °С) не более месяца.
Для исследования по методу Романенко [3] из общей пробы отбирают 25 г почвы, помещают в центрифужную пробирку вместимостью 250 мл и заливают 150 мл воды. Смесь тщательно размешивают стеклянной палочкой в течение 5 мин или с помощью электромешалки 1 мин.
Всплывшие крупные частицы сразу же удаляют. После центрифугирования в течение 3 мин при 800-1000 об./мин воду сливают, а в пробирки добавляют 150 мл насыщенного раствора нитрата натрия. Перемешивают и вновь центрифугируют 3 мин.
Пробирки устанавливают в штатив, доливают тем же раствором до образования выпуклого мениска, накрывают обезжиренным стеклом (размер 6 х 12 см) так, чтобы оно касалось слоя жидкости. Через 15 мин стекло снимают, на влажную поверхность добавляют несколько капель 50%-ного водного раствора глицерина и микроскопируют.
Выявление яиц гельминтов в пробах почвы авторским способом проводят по следующей схеме. Вначале готовят комбинированную флотационную смесь из трех ингредиентов: насыщенный раствор хлорида цинка (2 кг ZnCl2 на 1 л воды); насыщенный раствор хлорида натрия (0,42 кг NaCl на 1 л воды); глицерин. Компоненты смешивают в равном соотношении. Всплывшие крупные частицы сразу же удаляют. После центрифугирования в течение 3 мин при 800-1000 об./мин воду сливают, а в пробирки добавляют 150 мл трехкомпонентной флотационной системы. Перемешивают и вновь центрифугируют 3 мин.
Пробирки устанавливают в штатив, доливают тот же раствор до образования выпуклого мениска, накрывают обезжиренным стеклом (размер 6 х 12 см) так, чтобы оно касалось слоя жидкости. Через 20-30 мин стекло снимают и микроскопируют. С целью повышения эффективности выявления яиц рекомендуется снятие препарата повторить 2-3 раза.
Результаты и обсуждение
При использовании разработанной методики был проведён сравнительный анализ методов исследования почвы: Романенко и разработанного метода выявления яиц гельминтов. В пробу песка искусственно вносили яйца As-caris suum, Toxocara canis и Ascaris lumbricoides в количестве 100 яиц на 1 г песка. Яйца были получены из матки самок аскарид. Результаты сравнительного анализа с использованием яиц A. suum и T. canis приведены в таблицах 1 и 2.
1. Сравнение эффективности метода выявления яиц в пробах почвы с искусственным внесением яиц A. suum по Романенко и авторского способа
Читайте также:
