Патологический материал на микозы смотрится под микроскопом
27 апреля 2017, 11:38 Эксперт статьи: Блинова Дарья Дмитриевна 0 5,260
При поражении организма грибками крайне сложно вовремя обнаружить заболевание и выявить возбудителя. Довольно проблематична диагностика микозов, по той причине, что заболевание не проявляется никакими признаками либо имеет очень разнообразную симптоматику. В зависимости от того какой участок заражен паразитами для диагностики берут волосы, зараженные ногти, часть кожи, мокроту, кровь, небольшую часть внутреннего органа или лимфоузлов. Микоз — довольно серьезное поражение паразитами кожных покровов и внутренних органов, которое способно значительно навредить здоровью человека. Крайне важно своевременно провести качественную диагностику, которая заключается в лабораторных исследованиях.
Важность своевременной диагностики микоза
Микоз — достаточно серьезное поражение паразитами кожных покровов и внутренних органов. Заболевание способно нанести непоправимый вред здоровью, а порой и привести к летальному исходу. Поэтому крайне важно своевременно выявить патологию и предупредить развитие осложнений. В противном случае на коже возникают пятна, которые имеют свойство загнаиваться и лопаться с последующим вытеканием гноя. Возникает неприятный запах, который сложно устранить. С помощью ранних диагностических процедур у больных можно провести своевременное противогрибковое лечение с применением антифунгальных средств широкого спектра действия. Такая терапия позволит предотвратить распространение микоза по всему организму.
Первый прием
При подозрении на микоз кожи или внутренних органов следует незамедлительно обратиться к дерматологу, а если есть возможность, к микологу. Эти специалисты в первую очередь проводят опрос больного, чтобы выяснить возможные пути инфицирования. Врач уточняет, не работал ли больной последнее время с животными или птицами, которые переносят паразитов. Крайне важно выяснить, в каких жилищных условиях обитает человек, не был ли он в неблагоприятных регионах. Затем проводится осмотр, в результате которого выявляются поврежденные кожные покровы, и определяется масштабность поражения. В процессе осмотра врач обращается внимание на иммунодефицитные состояния больного. Для диагностики микозов производится забор материала, который затем отправляют на лабораторное исследование.
Лабораторная диагностика
Самыми эффективными методами диагностирования микозов кожи являются различные лабораторные исследования, которые способны выявить возбудителя и помочь в подборе схемы терапии. Для выявления возбудителя микоза назначают такие лабораторные исследования:
- гистологический анализ;
- бактериологический посев;
- иммунологическое исследование;
- ПЦР-диагностирование;
- культуральное обследование;
- микробиологические исследования.
Микробиологическая диагностика является наиболее распространенным и самым простым методом выявления микоза в крови и на коже. Для выявления точного диагноза, следует знать, как правильно собирать материал, который необходим при исследовании. Пораженные волосы следует собирать при помощи пинцета. Если инфицирована кожа, то для микроскопии следует соскоблить с поврежденного участка кожный покров. Весь забранный материал помещают в 30% раствор гидроксида калия, а затем на предметное стекло. Микробиологическая диагностика способна выявить, где именно расположен грибок (внутри или снаружи волоса, кожи) и его размеры.
Чтобы предотвратить ошибочный диагноз микоза, следует правильно и грамотно забирать материал для микробиологического обследования.
В медицине существуют такие методы микробиологической диагностики:
- Микроскопия с применением нативных или неокрашенных препаратов. Для этого материал осветляют с помощью 10—30% растворов гидроксида калия или натрия. Затем обработанный материал кладут на лабораторное стеклышко, куда предварительно накапали немного глицерины. Сверху прикрывают стеклянной пластинкой и проводят анализ.
- Микроскопию окрашенных препаратов проводят несколькими способами, которые идентифицируют бактерии, дифференцируют различные бактерии и выявляют разные грибы.
Сбор бактериологического посева на питательную среду является точным способом диагностики микоза. Учитывая внешний вид и характеристики выросшей колонии грибка, дерматолог устанавливает тип возбудителя, вызвавшего микоз. Единственный минус обследования в том, что требуется много времени, чтобы вырастить колонию. В среднем необходимо около 3-х недель, чтобы выяснить штамм возбудителя. В некоторых случаях метод не приносит ожидаемых результатов.
Метод ПЦР-диагностирования предполагает выявление возбудителя микоза с применением полимеразной цепной реакции. При обследовании увеличивается чувствительность гибридизации, что повышает содержимое вирусного ДНК в исследуемом материале. Этот метод обследования является новым и требует нескольких анализов от пациента. Считается, что такой вид диагностики достаточно затратный, но дает точные результаты.
Культуральные диагностические мероприятия рекомендуются на финальном этапе постановки диагноза. Метод заключается в получении культуры грибка, которая потом отправляется на обследование с помощью микроскопа. Полученный материал кладут на искусственно созданную питательную среду и выявляют род возбудителя, внешний вид, размеры. После чего показано специальное лечение, которое направлено на борьбу с конкретным видом возбудителя микоза.
Иммунологический анализ часто применяется при подозрении на микозы крови. Этот метод предполагает обследование крови, спинномозговой жидкости или урины на наличие возбудителя. При иммунологической диагностике используют коммерческие тест-системы, которые выявляют специфические антигены в биоматериале. С помощью этих методов можно выявить специфичные антитела в сыворотке крови.
Гистологический анализ способен выявить грибки в тканях, волосах, ногтях. При обследовании применяются гистологические окрасы. Чаще всего применяют периодическую кислотную реакцию, поскольку она является максимально информативной. При диагностике грибы проявляются в незначительном количестве и имеют вид спор или нитей мицелия.
Дифференциальный анализ
В связи с тем, что при разных видах микоза проявляются различные симптомы. Это затрудняет постановку точного диагноза. В таком случае медики прибегают к методу дифференциальной диагностики и сравнивают микоз с другими дерматологическими болезнями. Нередко симптомы псориаза путают с микозом, но важно знать, что при микозе соскабливаемые чешуйки не будут кровоточить, в отличие от псориатических бляшек.
Часто микоз путают с парапсориазом, который имеет похожую симптоматику, но не отмечается шелушением кожи.
Важно дифференцировать микоз от нуммулярной экземы. Такое заболевание является особым видом экземы, но выявить это можно лишь при лабораторной диагностике. Часто признаки микоза принимают за проявления полиморфного фотодерматоза, который свойствен только для взрослых. Он никогда не диагностируется у детей.
Проведение лабораторной и дифференциальной диагностики — важная мера при постановке точного диагноза и назначения необходимого лечения. Чтобы устранить до конца признаки микоза, требуется достоверно выявить возбудителя. При несвоевременном проведении диагностических процедур, патология прогрессирует и поражает все большую часть кожи и внутренних органов, вызывая осложнения.
МИКОЗЫ И ПСЕВДОМИКОЗЫ (тесты квалификационные)
Вопрос
1 К микозам человека, вызываемым грибами, поражающими животных относятся:
Варианты ответов
1 Микроспория (балл - 9)
2 Отрубевидный лишай (балл - 0)
3 Эпидермофития (балл - 0)
4 Руброфития (балл - 0)
5 кандидоз (балл - 0)
2 К заболеваниям, вызываемым зоофильными грибами, относятся:
Варианты ответов
1 микроспория (балл - 9)
2 эпидермофития (балл - 0)
3 кандидоз (балл - 0)
4 разноцветный лишай (балл - 0)
5 руброфития (балл - 0)
3 При диагностике микозов используются перечисленные лабораторные методы:
Варианты ответов
1 микроскопия пораженных волос и чешуек (балл - 9)
2 клинический анализ крови (балл - 0)
3 мазки-отпечатки с очагов поражения (балл - 0)
4 анализ мочи (балл - 0)
5 биохимический анализ крови (балл - 0)
4 Зоофильными грибами вызываются:
Варианты ответов
1 микроспория (балл - 9)
2 поверхностная трихофития (балл - 0)
3 кандидоз (балл - 0)
4 разноцветный лишай (балл - 0)
5 руброфития (балл - 0)
5 Для исследования на грибы берутся
Варианты ответов
1 чешуйки с кожи (балл - 9)
2 кровь (балл - 0)
3 моча (балл - 0)
4 спинномозговая жидкость (балл - 0)
5 слюна (балл - 0)
6 Для грибковых поражений кожи характерны:
Варианты ответов
1 яркая гиперемия в очагах поражения (балл - 0)
2 неопределенные очертания очагов (балл - 0)
3 отсутствие шелушения (балл - 0)
4 экссудация (балл - 0)
5 четкие границы (балл - 9)
7 К дерматомикозам относится:
Варианты ответов
1 микроспория (балл - 9)
2 хромикоз (балл - 0)
3 аспериллез (балл - 0)
4 эритразмы (балл - 0)
5 актимикоз (балл - 0)
8 К заболеваниям группы кератомикозов относятся:
Варианты ответов
1 разноцветный лишай (балл - 9)
2 руброфития (балл - 0)
3 микроспория (балл - 0)
4 кандидоз (балл - 0)
5 эпидермофития (балл - 0)
9 К заболеваниям, входящим в группу дерматомикозов относятся:
Варианты ответов
1 отрубевидный лишай (балл - 0)
2 микроспория (балл - 9)
3 кандидоз (балл - 0)
4 актимикоз (балл - 0)
5 аспериллез (балл - 0)
10 К дерматофитам, флюоресцирующим в лучах Вуда, относятся:
Варианты ответов
1 кандидоз кожи (балл - 0)
2 только виды микроспории (балл - 9)
3 только трихофитии (балл - 0)
4 кандидоз слизистых (балл - 0)
5 эпидермофития (балл - 0)
11 Патологический материал на микозы смотрится под микроскопом:
Варианты ответов
1 окрашенным по Граму (балл - 0)
2 окрашенным по Романовскому Гимзе (балл - 0)
3 окрашенным метиленовым синим (балл - 0)
4 нативным (балл - 9)
5 окрашенным бриллиантовым зеленым (балл - 0)
13 Зоофильная трихофития отличается под микроскопом от антропофильной:
Варианты ответов
1 наличием спор эндотрикса (балл - 0)
2 наличием спор эктотрикса (балл - 9)
3 наличием муфты (балл - 0)
4 расщепление волос (балл - 0)
5 скрученные волосы (балл - 0)
14 Микроскопические критерии пораженного волоса при микроспории:
Варианты ответов
1 эндотрикс (балл - 0)
2 эктотрикс (балл - 9)
3 споры расположены цепочкой (балл - 0)
4 споры расположены кругами (балл - 0)
5 споры расположены треугольником (балл - 0)
15 Заражение микроспорией может происходить:
Варианты ответов
1 в бассейне (балл - 0)
2 при контакте с кошками и собаками (балл - 9)
3 в душевой (балл - 0)
4 при работе на животноводческих фермах (балл - 0)
5 при работе в телятнике (балл - 0)
16 Чешуйки кожи с подозрением с подозрением на микоз микроскопируются после обработки щелочью не позднее чем через:
Варианты ответов
1 30 минут (балл - 0)
2 2 часа (балл - 9)
3 24 часа (балл - 0)
4 5 минут (балл - 0)
5 3 часа (балл - 0)
17 У больного на волосах головы обнаружены узелки белого цвета каменистой плотности. Следует думать, что у больного:
Варианты ответов
1 себорея (балл - 0)
2 педикулез (балл - 0)
3 пьедра (балл - 9)
4 псориаз (балл - 0)
5 микроспория (балл - 0)
18 Волосы обламываются на высоте 5-8 мм от уровня кожи:
Варианты ответов
1 при поверхностной трихофитии (балл - 0)
2 при микроспории (балл - 9)
3 при фавусе (балл - 0)
4 при трихофитии инфильтративно-нагноительной (балл - 0)
5 при алопеции (балл - 0)
19 При поверхностной трихофитии волосистой части головы для исследования под микроскопом берут:
Варианты ответов
1 "пеньки" (балл - 9)
2 "черные точки" (балл - 0)
3 высоко обломанные волосы (балл - 0)
4 длинные волосы (балл - 0)
5 чешуйки (балл - 0)
20 К клиническим формам микроспории волосистой части головы относятся:
Варианты ответов
1 поверхностная (балл - 0)
2 импетигиозная (балл - 0)
3 грануломатозная (балл - 0)
4 глубокая (балл - 9)
5 неправильное (балл - 0)
21 Основными клиническими разновидностями хронической трихофитии являются:
Варианты ответов
1 эритематозная (балл - 0)
2 черно-точечная, атрофическая (балл - 9)
3 трихофитийные гуммы (балл - 0)
4 скутулярная (балл - 0)
5 атрофическая (балл - 0)
22 При хронической трихофитии поражается:
Варианты ответов
1 кожа (балл - 9)
2 слизистые (балл - 0)
3 хрящи (балл - 0)
4 центральная нервная система (балл - 0)
5 кости (балл - 0)
23 Для трихофитии волосистой части головы характерны:
Варианты ответов
1 мелкие множественные очаги, в очагах поражения видимо неизмененные волосы (балл - 9)
2 у основания волос — белая муфта (балл - 0)
3 очертания очага — четкие (балл - 0)
4 очаги крупные, поражение волос сплошное (балл - 0)
5 волосы скрученные (балл - 0)
24 Клиническими особенностями инфильтративно-нагноительной трихофитии являются:
Варианты ответов
1 эритема (балл - 9)
2 воспаление хрящей (балл - 0)
3 гладкая кожа (балл - 0)
4 нечеткие (балл - 0)
5 фигурные очаги (балл - 0)
25 При хронической трихофитии при микроскопии волос обнаруживаются следующие изменения:
Варианты ответов
1 беспорядочное расположение спор (балл - 0)
2 цепочки спор внутри волоса (балл - 9)
3 цепочки спор и пузырьки воздуха в внутри волоса (балл - 0)
4 цепочки спор снаружи волоса (балл - 0)
5 разрушенные волосы (балл - 0)
26 Инкубационный период при микроспории:
Варианты ответов
1 3-7 дней (балл - 0)
2 7-14 дней (балл - 0)
3 21 день (балл - 0)
4 4-6 недель (балл - 9)
5 1-2 дня (балл - 0)
27 Инкубационный период при поверхностной трихофитии:
Варианты ответов
1 5-7 дней (балл - 0)
2 7-14 дней (балл - 0)
3 2-4 недели (балл - 9)
4 1-2 дня (балл - 0)
5 1 месяц (балл - 0)
28 Для отрубевидного лишая характерно:
Варианты ответов
1 воспалительное пятно (балл - 0)
2 шелушение (балл - 9)
3 атрофия (балл - 0)
4 гиперкератоз (балл - 0)
5 гипертрофия (балл - 0)
29 Для узловатой трихоспории характерно поражение:
Варианты ответов
1 кожи (балл - 0)
2 волос головы, бороды (балл - 9)
3 пушковых волос (балл - 0)
4 ногтей (балл - 0)
5 слизистых (балл - 0)
30 Зоофильная трихофития отличается от антропофильной:
Варианты ответов
1 наличием спор эндотрикса (балл - 0)
2 наличием спор эктотрикса (балл - 9)
3 наличием в волосе мицелия (балл - 0)
4 наличием расщепленных волос (балл - 0)
5 наличием скрученных волос (балл - 0)
31 Очаги рубромикоза в лучах люминисцентной лампы светятся:
Варианты ответов
1 красным цветом (балл - 9)
2 не светятся (балл - 0)
3 зеленым цветом (балл - 0)
4 желтым (балл - 0)
5 коричневым (балл - 0)
32 Для паховой эпидермофитии характерны:
Варианты ответов
1 локализация в крупных складках кожи (балл - 9)
2 отсутствие эритемы (балл - 0)
3 фликтены (балл - 0)
4 язвы (балл - 0)
5 лимфоденит (балл - 0)
33 Диагноз микоза стоп подтверждается:
Варианты ответов
1 диаскопией (балл - 0)
2 микроскопией (балл - 9)
3 граттажем (балл - 0)
4 наличием лимфоденита (балл - 0)
5 анамнезом (балл - 0)
34 Диагноз паховой эпидермофитии ставится на основании:
Варианты ответов
1 лимфоденитом (балл - 0)
2 микроскопии (балл - 9)
3 дерматоскопии (балл - 0)
4 посевом (балл - 0)
5 анамнезом (балл - 0)
35 Ногтевая пластинка при онихомикозе:
Варианты ответов
1 имеет вид наперстка (балл - 0)
2 имеет вид выпуклого стекла (балл - 0)
3 имеет вид вогнутого стекла (балл - 0)
4 гипертрофируется (балл - 9)
5 не изменяется (балл - 0)
36 Для общей терапии микозов используются:
Варианты ответов
1 микосептин (балл - 0)
2 циклоспарин (балл - 0)
3 пенициллин (балл - 0)
4 кетокеназол (балл - 9)
5 анилиновые красители (балл - 0)
37 Для трихофитона тонзуранс в культуре характерны:
Варианты ответов
1 многочисленные микронидии в культуре (балл - 0)
2 глубокий красный пигмент (балл - 0)
3 синий пигмент (балл - 0)
4 ветвистый септированный мицелий (балл - 0)
5 розовый пигмент (балл - 9)
38 При назначении имидазольных препаратов внутрь необходимо проводить исследование:
Варианты ответов
1 слюны (балл - 0)
2 пота (балл - 0)
3 мочи на порфирины (балл - 0)
4 наСОЭ (балл - 0)
5 печеночные пробы (балл - 9)
39 Для общей терапии дерматомикозов используют:
Варианты ответов
1 Орунгал (балл - 9)
2 Пенициллин (балл - 0)
3 Тетрациклин (балл - 0)
4 Стрептоцид (балл - 0)
5 Гепон (балл - 0)
40 Для наружного лечения онихомикозов применяется:
Варианты ответов
1 настойка йода (балл - 9)
2 дистиллированная вода (балл - 0)
3 белый стрептоцид (балл - 0)
4 раствор новокаина (балл - 0)
5 раствор резорцина (балл - 0)
41 Для культуры микроспорума канис характерны:
Варианты ответов
1 медленный рост (балл - 0)
2 быстрый рост (балл - 0)
3 порошковидная темно-желтая поверхность (балл - 9)
4 белесоватая гладкая поверхность (балл - 0)
5 розовый цвет (балл - 0)
42 Низорал (кетокеназол) в детской практике применяется:
Варианты ответов
1 у детей до двухлетнего возраста только по жизненным показаниям (балл - 0)
2 всем детям только по жизненным показаниям (балл - 0)
3 при хроническом течении кандидоза (балл - 0)
4 при остром течении кандидоза (балл - 0)
5 не применяется в возрасте до 3-х лет (балл - 9)
43 К побочным явлениям при лечении низоралом относятся:
Варианты ответов
1 тошнота (балл - 9)
2 утолщение ногтей (балл - 0)
3 истончение ногтей (балл - 0)
4 утолщение волос (балл - 0)
5 истончение волос (балл - 0)
44 Противопоказания для лечения низоралом являются:
Варианты ответов
1 повышенная чувствительность к препарату (балл - 9)
2 недостаточность кровообращения (балл - 0)
3 снижение слуха (балл - 0)
4 заболевания органов дыхания (балл - 0)
5 болезни органов мошонки (балл - 0)
45 Клиническими формы кандидоза являются:
Варианты ответов
1 кандидоз слизистых оболочек (балл - 9)
2 гиперемированная (балл - 0)
3 дисгидротическая (балл - 0)
4 гиперкератотическая (балл - 0)
5 атрофическая (балл - 0)
46 Наиболее опасными формами кандидозного процесса в период новорожденности являются:
Варианты ответов
1 кандидоз кожи рук (балл - 0)
2 кандидоз кожи щек (балл - 0)
3 кандидоз генитальный (балл - 0)
4 кандидозный сепсис (балл - 9)
5 кандидоз слизистой рта (балл - 0)
47 Белая кандида является нормальной частью флоры:
Варианты ответов
1 рта (балл - 9)
2 волос (балл - 0)
3 потовых желез (балл - 0)
4 ногтей (балл - 0)
5 сальных желез (балл - 0)
48 Диагноз поверхностного кандидоза подтверждается с помощью:
Варианты ответов
1 анамнеза больного (балл - 0)
2 микроскопического исследования патологического материала (балл - 9)
3 рассказа больного (балл - 0)
4 зуда (балл - 0)
5 анамнеза родителей (балл - 0)
49 Для подтверждения диагноза кандидоз гладкой кожи достаточно:
Варианты ответов
1 клинических проявлений (балл - 0)
2 обнаружения псевдомицелия при микроскопическом исследовании (балл - 0)
3 обнаружения почкующихся клеток при микроскопическом исследовании (балл - 9)
4 рост колоний при посеве (балл - 0)
5 анамнеза (балл - 0)
50 При кандидозном поражении ногтевых валиков и ногтей следует назначать:
Варианты ответов
1 раствор йода (балл - 0)
2 Низорал (балл - 9)
3 раствор бриллиантовой зелени (балл - 0)
4 Удаление ногтевых пластинок (балл - 0)
5 дистиллированную воду (балл - 0)
КЛАССИФИКАЦИЯ МИКОЗОВ
ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА МИКОЗОВ
Возбудителями грибковых заболеваний – микозов [от лат. мycoses гриб] являются паразитические грибы, в основном нитчатые. Грибы относятся к низшим растениям, состоящим из нитей мицелия и спор, с помощью которых они размножаются.
Заражение патогенными грибами происходит при контакте с больным человеком и больными животными (кошки, собаки, коровы, лошади), а также через предметы обихода (головные уборы, расчески, мочалки, белье и т.д.).
При микозах могут поражаться кожа и ее придатки (ногти, волосы), а также слизистые оболочки и внутренние органы. Грибковые заболевания кожи характеризуются очаговым поражением в виде отдельных пятен или участков шелушения, склонных к периферическому росту и слиянию. На коже могут также появляться корочки, чешуйки, пузырьки, трещины. Эти симптомы могут сопровождаться покраснением, отеком, болезненностью и зудом поврежденных участков. При поражении грибками волос они теряют блеск, тускнеют, покрываются налетом, а иногда обламываются, образуя плешины. Ногти при грибковом поражении тускнеют, крошатся, деформируются, могут утолщаться и разрушаться. Характер грибковых поражений внутренних органов зависит от локализации патологического процесса.
Микозы делятся на 4 группы.
1. Кератомикозы, при которых поражается только роговой слой эпидермиса. К ним относятся отрубевидный (разноцветный) лишай, подмышечный трихомикоз.
2. Дерматомикозы, при которых поражается дерма. К ним относятся эпидермофития, трихофития (стригущий лишай), фавус (парша), микроспория – наиболее распространенные и контагиозные грибковые инфекции.
3. Кандидомикозы кожи и слизистых оболочек вызываются грибами рода Candida.
4. Глубокие микозы поражают глубокие слои кожи и внутренние органы. К ним относятся висцеральные кандидомикозы, висцеральные плесневые микозы (пенициллиоз, аспергиллез, мукороз).
Кроме того, выделяют псевдомикозы, которые не являются грибковыми заболеваниями, но по клиническим проявлениям напоминают истинные микозы. К ним относится актиномикоз.
При грибковых заболеваниях для микроскопического исследования используют волосы, чешуйки кожи, ногти, при глубоких микозах - отделяемое язв, мокроту, желудочный сок, мочу, кал и т.д.
Для анализа необходимо выбирать заведомо патологический или подозрительный материал. С пролеченных участков материал брать не следует.
При поражении кожичешуйки, покрышки пузырьков соскабливают скальпелем или скарификатором с периферических участков очага поражения, так как там обычно процесс активнее.
При поражении волосистой части головывнимательно осматривают всю голову, обязательно на свету, лучше в проходящем свете. В участках облысения, поражения кожи подрывают чешуйки и захватывают их вместе с пораженным волосом при помощи специального эпиляционного пинцета. При этом за волос тянуть не следует, так как он может обломиться. При наличии нескольких мест поражения материал берут с каждого.
При поражении ногтейпроизводят соскабливание чешуек с поверхности и срезают пластинки из более глубоких слоев ногтя при помощи острой бритвы или скальпеля.
Волосы, чешуйки кожи, ногти, взятые для исследования, помещают в двойные пакеты из черной бумаги, на которых подписывают ФИО обследуемого, материал для исследования (волосы, ногти и т.д.), дату и место взятия материала, предполагаемый диагноз. Материал рекомендуется брать в достаточном количестве, чтобы в случае необходимости можно было провести повторное исследование. Полученный материал подвергают специальной обработке для растворения клеток эпидермиса и просветления пигмента волос, что облегчает обнаружение элементов грибков.
Волосы, чешуйки кожипомещают на предметное стекло, наносят на них 1-2 капли 30% раствора KOH и подогревают над пламенем спиртовки до появления на периферии капли нежного белого ободка, состоящего из кристаллов щелочи. До кипения не доводить! После прогревания препарат накрывают покровным стеклом, оставляют на 5-10 минут и микроскопируют вначале под малым, а затем под большим увеличением микроскопа с опущенным конденсором.
Гной, мокроту, осадок мочи и т.д.микроскопируют после добавления 1 капли 10% KOH без подогрева или (лучше) к исследуемому материалу добавляют 2 капли 10% раствора сульфида натрия и через 1-2 минуты – еще 1 каплю того же раствора. Накрывают покровным стеклом и микроскопируют.
Ногти и чешуйки со стоп, подошвтрудно поддаются растворению щелочью, поэтому их заливают 30% KOH на 1 сутки, или выдерживают в термостате при 37ºС в 10% растворе щелочи в течение 10-12 часов. Можно использовать метод обогащения (метод Черногубова): исследуемый материал заливают 4-5мл 30% KOH и кипятят на водяной бане до полного растворения роговых чешуек, затем центрифугируют 15 минут при 1000об/мин и надосадочную жидкость сливают. Осадок микроскопируют вначале под малым, а затем под большим увеличением микроскопа с опущенным конденсором.
Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет
Правильный сбор материала из пораженных ногтей - залог успешного микробиологического исследования. Забирая материал, не всегда захватывают участки ногтя, содержащие жизнеспособные грибы. Нежизнеспособные грибы в культуре, естественно, не вырастут, и их вид установить не удастся.
Участок ногтя, который надо взять, определяется формой онихомикоза.
Так, при поверхностной форме онихомикоза следует делать соскобы с поверхности ногтевой пластинки.
При самой распространенной дистальной подногтевой форме наиболее жизнеспособные грибы располагаются под ногтевой пластинкой. Материал, который направляют на исследование, должен включать не только обрезок ногтевой пластинки, но и соскоб с ногтевого ложа, из-под пластинки.
Кроме того, следует захватывать и области неизмененного ногтя, поскольку на границе между ними и пораженными участками ногтя располагаются самые активные грибы.
При проксимальной подногтевой форме брать материал трудно. В этих случаях иногда, особенно если собираются проводить гистологическое исследование или дифференциальную диагностику, предпринимают биопсию ногтя, изредка используют бормашину.
При паронихиях делают соскобы с проксимального валика и из-под него.
Во всех случаях, чтобы избежать бактериальной контаминации, перед взятием образца следует обработать ноготь этиловым спиртом.
МИКРОСКОПИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
Микроскопическое исследование патологического материала на грибы производят в нативных и окрашенных препаратах.
Для приготовления неокрашенных препаратов полученный материал размельчают при помощи скальпеля или препаровальной иглы и помещают на середину предметного стекла. Для более четкого выявления элементов гриба производят просветление (мацерацию) материала. С этой целью прибегают к помощи различных веществ, чаще всего едкой щелочи (КОН, NaOH), которые растворяют эпидермальные чешуйки, слизь, гной, просветляют пигмент волоса и тем самым делают грибы доступными для исследования.
На размягченные чешуйки кожи или ногтя, которые помещают на середину предметного стекла, наносят 1-3 капли 20 - 30% раствора КОН (NaOH). Исследуемый материал в каплях щелочи осторожно подогревают над пламенем спиртовки до появления нежного белого ободка из кристаллов щелочи по периферии капли. Подогревать до кипячения не следует. После подогревания каплю накрывают покровным стеклом, избегая попадания пузырьков воздуха.
Р. А. Аравийский и Г. И. Горшкова (1995) рекомендуют просветленные и накрытые покровным стеклом препараты кожных чешуек и волос оставлять на 5 - 10 мин, а ногтевых пластинок – на 30 - 40 мин до микроскопирования.
Просветление препаратов можно проводить без подогревания, для этого их оставляют в 20% растворе КОН на 30 - 60 мин или используют другие методы просветления патологического материала: хлораллактофенолом по Аману; лактофенолом; раствором, содержащим по 15% диметилсульфоксида и КОН в воде. Хорошие результаты получают после просветления ногтевых пластинок, помещенных в 5% раствор КОН на 24 ч, подогревания в этом случае не требуется.
Микроскопическое исследование производят на обычном лабораторном микроскопе без иммерсии.
Конденсор микроскопа должен быть опущен, диафрагма сужена. В начале препарат находят на стекле при малом увеличении (40х), последующее исследование производят при большем увеличении (100х);
детально препарат изучают при увеличении 400х. Необходимо исследовать несколько препаратов с тем, чтобы увеличить надежность анализа и избежать ложноположительных результатов.
Ошибки в микроскопической диагностике грибов могут возникнуть в связи как с дефектами приготовления препарата, так и с недостаточной опытностью лаборанта.
Дефекты изготовления прежде всего бывают связаны:
с перегреванием препарата, что может привести к выпадению кристаллов щелочи, разрушению волоса и появлению мелкозернистого распада в патологическом материале.
Линейное расположение удлиненных ровных кристаллов щелочи весьма напоминает нити септированного мицелия даже на чистом стекле без патологического материала.
Дифференциально-диагностическими признаками являются исключительное однообразие кристаллов, их стекловидная прозрачность, многогранность краев и отсутствие неразрывной связи одного элемента с другим. В сомнительных случаях рекомендуется добавить к препарату капельки слегка подогретой дистиллированной воды, которые быстро растворяют кристаллы щелочи.
За элементы гриба ошибочно могут быть приняты:
Липиды кожных покровов, жировой распад клеток и зерна кератогиалина, особенно имеющие правильную форму, могут напоминать отдельные споры гриба. Но разнообразие формы и, главное, размеров, отсутствие внутренней структуры образований (вакуоли, оболочки) говорят против грибковой природы данных элементов. Липиды также могут попасть в препарат при взятии патологического материала с недостаточно очищенного очага поражения.
Пузырьки воздуха могут напоминать споры дрожжеподобных клеток, но в отличие от последних они окружены плотной темной оболочкой, и даже самые маленькие пузырьки воздуха всегда больше клеток гриба.
Нити от ткани носков, одежды и т. п. обычно лежат отдельно от патологического материала, они всегда больше гифов, грубее и не септированы.
В некоторых лабораториях просветление препаратов для микроскопического исследования проводят 15 - 30% раствором КОН, в который добавляют 5 - 10% коммерческих темно-синих чернил фирмы Паркер (Parker's Superchrome Blue-Black Ink).
При этой окраске гифы и споры окрашиваются в голубой цвет.
При микроскопии обнаруживают нитевидные гифы грибов или почкующиеся клетки (рис.1).
Таким образом, микроскопия дает заключение только о грибковой природе инфекции, но не о виде гриба-возбудителя.
Конечно, результативность микроскопического исследования зависит от квалификации сотрудника лаборатории.
Следует учесть, что некоторые плесневые грибы, в том числе дерматофиты, в культуре вырастают медленно, за 2-3 нед.
Даже при соблюдении всех правил сбора материала, при хорошем оборудовании лаборатории и высокой квалификации ее персонала число положительных результатов культурального исследования очень невелико.
По данным зарубежной литературы, процент положительных исследований не превышает 50.
Процент положительных результатов в лучших отечественных лабораториях едва достигает 30.
Таким образом, в 2 из каждых 3 случаев онихомикоза его этиологию установить не удается.
ЛЮМИНЕСЦЕНТНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
В 1925 г. Margaret и Deveze обнаружили, что волосы, пораженные некоторыми дерматофитами, дают характерное свечение в ультрафиолетовых лучах, пропущенных через фильтр Byда. Стекло Byда состоит из сульфата бария, содержит около 9% окиси никеля; оно пропускает лучи длиной 365 нм. В качестве источника ультрафиолетовых лучей можно использовать различные приборы. Природа свечения точно не установлена. Волос продолжает светиться после гибели гриба и после попыток экстрагировать флюоресцирующий материал горячей водой или холодным раствором бромида натрия. Интенсивность и характер свечения зависят от рН раствора. Полагают, что флюоресцирующая субстанция появляется в процессе взаимодействия гриба и растущего волоса.
Свечение в ультрафиолетовых лучах, пропущенных через фильтр Вуда, характерно только для волос, пораженных грибами рода Microsporum (M. canis, M. audouinii, M. ferrugineum, M. distortium, изредка M. gypseum и M. nanum), a также Trichophyton schonleinii. Волосы, пораженные микроспорумами, особенно M. canis и M. audouinii, дают наиболее яркое свечение; волосы, пораженные Т. schonleinii, имеют тусклую зеленоватую флюоресценцию.
Свечение наблюдается только в полностью пораженных грибом волосах. Его может не быть в свежих очагах поражения. В этих случаях следует эпилировать волосы из краевой, наиболее активной зоны, и свечение можно обнаружить в корневой части волос.
Люминесцентный метод можно использовать как для диагностики и контроля за эффективностью лечения у отдельных больных, так и в эпидемиологических очагах. Компактные передвижные установки удобны для обследования контактных людей в школах, детских садах и т. п.
Люминесцентное обследование необходимо производить в затемненной комнате, очаги поражения должны быть предварительно очищены от корок, остатков мази и т. п. Люминесцентный метод можно использовать для диагностики отрубевидного лишая, особенно при локализации очагов поражения на волосистой части головы. Очаги поражения при этом заболевании имеют красновато-желтое или бурое свечение. Это свечение, однако, не является строго специфичным, так как может наблюдаться при наличии перхоти на волосистой части головы и даже у здоровых людей в области устьев волосяных фолликулов на лице и верхней части туловища. Выявленные с помощью люминесцентного метода пораженные волосы должны обязательно подвергаться микроскопическому исследованию.
ИММУНОЛОГИЧЕСКОЕ И БИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Иммунологические методы исследования используют для выявления специфической перестройки организма и серологической диагностики грибковых заболеваний. Для обнаружения специфических антител в сыворотке пробы проводят следующие серологические реакции: агглютинации, преципитации, связывания комплемента, иммунофлюоресценции с соответствующими антигенами.
Аллергическое состояние организма больного выявляют с помощью аллергических кожных проб. Аллергены наносят на скарифицированную кожу по Пирке или втиранием в кожу по Моро, внутрикожно по Манту, а также уколом в кожу. С помощью этих проб выявляют аллергические реакции как немедленного, так и замедленного типа, что позволяет оценить состояние гуморального и клеточного иммунитета.
Для выявления специфической сенсибилизации лимфоцитов используют реакции дегрануляции базофилов, агломерации и альтерации, тест бластной трансформации, подавления миграции макрофагов и т. п.
Сопоставление результатов серологических и аллергических реакций оказывается полезным как для диагностики, так и для прогноза течения микозов.
Биологический метод. Используется для лабораторной диагностики глубоких и особо опасных микозов. Основан на заражении животных патологическим материалом от больного или культурой исследуемого гриба. Осуществляется в специальных лабораториях.
ГИСТОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
Гистология микозов кожи, обусловленных дерматофитами
Патоморфологические изменения в очагах поражения обусловлены внедрением грибов в роговой слой эпидермиса, волосы и ногти и ответной воспалительной реакцией кожи, которая может быть острой, подострой или хронической. Диагноз можно считать установленным только в том случае, если в гистологических препаратах обнаруживают элементы грибов. Для этого используют различные гистологические окраски, наиболее информативной является периодическая кислотная реакция (PAS), позволяющая выявить полисахариды, имеющиеся в целлюлозе и хитине клеточной стенки большинства дерматофитов (окраска по Шифу и ее модификации). Можно также использовать реакции сульфатирования и импрегнацию гистологических срезов серебром [Хмельницкий О. К., 1973; Lewer W. F. и Schaumburg-Lewerl.,1983].
Грибы в роговом слое эпидермиса, даже при использовании специальных окрасок, выявляются в небольшом количестве в виде нитей мицелия и спор. В редких случаях, когда грибов в очагах поражения много, их можно обнаружить в срезах, окрашенных гемотоксилин-эозином, в виде нежных базофильных структур в роговом слое.
Воспалительные изменения в эпидермисе могут быть различными: от незначительного внутри- и внеклеточного отека шиповатых клеток до выраженного спонгиоза. Спонгиоз обычно развивается при дисгидротических вариантах микозов стоп и кистей, клинически в этих случаях отмечаются пузырьки. Причиной этой реакции обычно является Т. mentagrophytes var. interdigitale. Иногда в эпидермисе отмечается выраженный гиперкератоз, что чаще всего наблюдается при микозе, обусловленном Т. rubrum.
Гистологические изменения в дерме неспецифичны и соответствуют острому, подострому и хроническому воспалению.
При микозе гладкой кожи, вызванном Т. rubrum, грибы иногда выявляются в пушковых волосах и волосяных фолликулах. Вокруг фолликулов развивается воспалительная реакция, которая за счет попадания в дерму грибов может приобретать гранулематозный характер. Центральная часть инфильтрата в этих случаях может подвергаться нагноению и некрозу, а периферическая состоять из лимфоцитов, гистоцитов, эпителиоидных и многоядерных гигантских клеток, внутри которых иногда обнаруживаются споры гриба. Размеры спор здесь достигают 6 мкм в диаметре, в волосе обычно не превышают 2 мкм.
При инфильтративно-нагноительной форме микозов волосистой части головы и области роста бороды и усов элементы грибов обнаруживаются в волосяном фолликуле, внутри и вокруг волоса. В волосе они определяются чуть выше зоны начала кератинизации (примерно на уровне 30 мкм). В дерме отмечают воспалительную реакцию различной интенсивности, наиболее выраженную при kerion Celsii. При острой гнойной реакции в составе инфильтрата отмечают большое количество нейтрофильных лейкоцитов, элементы грибов в этом случае могут полностью исчезать. При хроническом течении процесса инфильтрат может приобретать гранулематозный характер, в нем появляются многоядерные гигантские клетки. Для подтверждения диагноза при отсутствии в инфильтрате грибов можно использовать иммунофлюоресцентные методы окраски. Для этих целей применяют меченную флюоресцином антисыворотку к Т. mentagrophytes, которая позволяет обнаружить антигены гриба в волосе и в перифолликулярном инфильтрате.
Формирование инфильтративно-нагноительной реакции кожи при микозе волосистой части головы (kerion Celsii) и области роста бороды и усов, обусловленных грибами М. саnis, Т. tonsurans и Т. verrucosum, представляет собой проявление иммунологической реакции. Об этом свидетельствуют:
1. Склонность очагов поражения к спонтанному разрешению.
2. Отсутствие элементов гриба при очень выраженной воспалительной реакции со стороны кожи при микозе, вызванном Т. verrucosum (faviforme) и Т. tonsurans.
3. Постоянная положительная реакция в ответ на внутрикожное введение трихофитина при инфильтративно-нагноительных формах микоза, вызванного зоофильными трихофитинами (например, Т. tonsurans), и отрицательная — при поверхностных микозах, обусловленных тем же Т. tonsurans.
При фавусе в роговом слое эпидермиса обнаруживается большое количество нитей мицелия и единичные споры гриба. Скутула представлена экссудатом, паракератотическими клетками эпидермиса, клетками воспалительного инфильтрата, а также нитями мицелия и спорами гриба, которые расположены преимущественно в периферической зоне скутулы. В активной стадии болезни в дерме вокруг дегенеративных волосяных фолликулов отмечается выраженный воспалительный инфильтрат, содержащий многоядерные гигантские и плазматические клетки. В старых очагах поражения волосы и сальные железы отсутствуют, имеются явления фиброза.
Гистология микозов кожи и слизистых оболочек, обусловленных дрожжеподобными грибами
При кандидозе кожи и слизистых оболочек грибы рода Candida обнаруживаются в роговом слое эпидермиса или в поверхностных слоях эпителия слизистой оболочки. Элементов гриба обычно мало, они хорошо окрашиваются PAS-peакцией или по Граму; представлены в виде нитей септированного ветвящегося мицелия, размером 2-4 мкм в диаметре, или овоидными спорами, размером 3 - 5мкм в диаметре. Диагностическое значение имеет обнаружение мицелиальной формы гриба.
При гистологическом исследовании хронического гранулематозного кандидоза кожи и слизистых оболочек элементы гриба также преимущественно обнаруживают в роговом слое эпидермиса или в самых верхних отделах эпителия слизистой оболочки, но иногда в шиповатом слое, внутри волоса и в дерме. Отмечается также выраженный гиперкератоз и папилломатоз; в дерме – густой воспалительный инфильтрат, состоящий из лимфоидных клеток, нейтрофилов, плазматических и многоядерных гигантских клеток. Инфильтрат может распространяться в подкожную жировую клетчатку.
При отрубевидном лишае в роговом слое эпидермиса обнаруживают большое количество элементов гриба в виде нежных базофильных структур, которые хорошо видны даже при окраске препаратов гемотоксилин-эозином. Грибы представлены как нитями, так и спорами.
При фолликулярной форме отрубевидного лишая отмечается скопление роговых масс и клеток воспалительного инфильтрата в расширенных устьях волосяных фолликулов. Вокруг фолликулов также отмечают воспалительный инфильтрат. При PAS-реакции сферические или овальные споры гриба, размером 2—4 мкм в диаметре, обнаруживают внутри устья волосяных фолликулов, а иногда в перифолликулярном инфильтрате. Мицелий никогда не выявляется.
Нарушение пигментации кожи у больных отрубевидным лишаем обусловлено способностью гриба Pityrosporum вырабатывать субстанцию, которая угнетает процесс пигментообразования в эпидермисе. Электронно-микроскопическое изучение биоптатов кожи с гипопигментированных участков показало, что в меланоцитах образуются очень маленькие меланосомы, которые не способны проникать в кератиноциты. В гиперпигментированных участках кожи, наоборот, меланосомы крупные и содержат большое количество меланина.
Читайте также:
