Что такое кандидозная вакцина

Лечение кандидоза слизистой полости рта требует индивидуального подхода к каждому случаю, так как обычно кандидоз развивается как вторичное заболевание, вызванное снижением иммунологической защиты, которое может быть обусловлено разными причинами. Поэтому главными направлениями в лечении больного кандидозом являются:

выявление этиологического фактора, лежащего в основе патогенеза кандидоза в каждом индивидуальном случае;
устранение или уменьшение дальнейшего отрицательного влияния этих факторов;
патогенетическая терапия;

Исходя из несостоятельности иммунной системы при кандидозах, особенно при хронических вялотекущих формах, рекомендуется кандидозная вакцина: моновалентная, поливалентная и аутовакцина.

С этой же целью в арсенале лечебных средств при кандидозе могут найти место пиримидиновые производные — пентоксил 0,2 г 3 раза в день в течение 3 недель, метилурацил 0,5 х 3 раза в день, курс лечения 3-4 недели. Препараты стимулируют выработку антител, фагоцитарную активность, активизируют лейкопоэз, повышают содержание гамма-глобулина в сыворотке крови, повышают регенеративную способность тканей.

Гамма-глобулин, гистаглобулин, гистаглобин по 2 мл 2 раза в неделю, на курс 7-10 инъекций. Через 2-3 мес. курс лечения повторяется.

При лечении кандидоза слизистой полости рта применяют Т-активин по 40 мкг в сутки подкожно или внутримышечно, в течение 7-10 дней. Кемантан 0,2-3 раза в день, в течение 14 дней. Либо диуцифон 0,1-2 раза в день, в течение 6 дней. Проводят 2-3 таких курса с интервалом 1-3 дня, под контролем биохимических и иммунологических показателей крови. Левамизол (декарис) по 150 мг 1 раз в день в течение 3 дней, проводят 2 таких курса с интервалом 3-6 дней. Спустя 2-3 месяца курс лечения стоит повторить;

общеукрепляющая терапия, снижающая микотическую сенсибилизацию, а также стимулирующая неспецифическую и специфическую резистентности организма;
включение в комплексное лечение противогрибковых препаратов.

При лечении кандидоза слизистой полости рта назначается диета с исключением сладостей и ограничением углеводов, богатая витаминами и белками.

При лечении кандидоза слизистой полости рта применяются полиеновые антибиотики — нистатин, леворин по 500 тыс. ед. 4-8 раз в день, таким образом, суточная доза 2-4 млн ед. препарата, на курс лечения — 56 млн ед. в течение 14 дней. Желательно таблетку разжевать и высасывать, так как в желудочно-кишечном тракте полиеноные антибиотики плохо всасываются. Регресс клинических симптомов кандидоза наблюдается уже на 5-6 день уменьшается гиперемия, отек, разрыхление слизистой оболочки полости рта, наблюдается эпителизация эрозии.

Амфотерицин В назначается в случаях отсутствия эффективности после применения нистатина, леворина. Аналогичным действием обладает амфоглюкамин. Декаминовая карамель по 1 карамельке 6-8 раз в сутки. Низорал, ламизил.

Поливитамины с микроэлементами, по 2-3 драже в день в течение 1 мес. Витамины группы В — В2, В6; С, РР и др. Витамин В2 (рибофлавин) обладает некоторым противогрибковым действием, регулирует окислительно-восстановительные процессы, принимает участие в процессах углеводного, белкового и жирового обменов.

Препараты кальция (глюконат кальция, глицерофосфат кальция, лактат кальция) как общеукрепляющие и гипосенсибилизирующие. Препараты пантотеновой кислоты — пантотент кальция 0,1 г 3-4 раза в день в течение 1 мес.

Препараты железа (драже ферроплекс, конферон, таблетки восстановленного железа). Алоэ с железом, гемостимулин и другие препараты, так как доказано, что при кандидозе наблюдается изменение и нарушение в обмене железа.

Десенсибилизирующая терапия — димедрол, супрастин, пипольфен, фенкарол.

Пациенты, длительно страдающие хроническими формами кандидозов, нуждаются в постоянном приеме седативных средств и транквилизаторов, психотерапии, гипнозе. Хороший эффект дает аутотренинг, электросон.

Аллергические формы кандидозов пищеварительной системы

Различают аллергический энтероколит, колит (спастический, язвенный), аноректит, дискинезии желчевыводящих путей и другие формы. Кандидозы пищеварительной системы чаще бывают вторичными, осложняют уже имеющуюся патологию органов пищеварения (колиты и др.). Присоединение микогенного аллергического компонента еще более утяжеляет течение этих заболеваний, которые становятся особенно резистентными к проводимой терапии.

Эффективным является лишь комплексное лечение с включением противокандидозных и десенсибилизирующих средств. К тяжелым проявлениям микотической аллергии относят язвенный колит. В связи с тем, что аллергические формы кандидозов пищеварительной системы не имеют специфических клинических признаков, диагностика их трудна.

Механизм аллергических реакций, обусловленных дрожжеподобными грибами, сложен. Одним из его возможных звеньев является выделение грибами рода кандида биологически активных веществ, участвующих в аллергических реакциях, в частности серотонина. Большинство исследователей считают, что серотонин образуется в основном в энтерохромаффинных клетках слизистой оболочки кишок. В экспериментальных исследованиях обнаружена способность кандида альбиканс выделять этот биогенный амин в питательную среду (И.М. Романенко, 1973). По мере размножения дрожжеподобных грибов количество серотонина возрастало.

На питательные среды, состоящие из аминопептида, разведенного в 3 раза водой с добавлением 4% раствора глюкозы, производились засевы 3-суточных культур кандида альбиканс. При исследовании в питательных средах с 7-дневной культурой содержание серотонина составляло 0,005±0,001 мкг/мл; в пробирках с 2-3-недельной культурой концентрация его возрастала до 0,03±0,01 мкг/мл.

Возможно, при кандидозах (особенно пищеварительной системы) серотонин, продуцируемый грибами кандида альбиканс, может, поступая в кровь, дополнительно влиять на течение воспалительного процесса. Так, этот биогенный амин может воздействовать на компоненты соединительной ткани, участвовать в регуляции тонуса гладких мышц и в связи с этим усиливать перистальтику кишечника, оказывать сосудосуживающее действие, влияя на микроциркуляцию и др.

Нами исследовался уровень серотонина в крови у 9 больных хроническим генерализованным кандидозом (кожи, слизистых оболочек и внутренних органов). Содержание серотонина в крови определяли биологическим методом (Dalgliesh и соавт.).

Сравнительные исследования провели у 13 практически здоровых лиц, у которых концентрация этого вещества в крови была 0,09+0,01 мкг/мл. У больных хроническим генерализованным кандидозом содержание серотонина в крови повышалось до 0,05+0,01 мкг/мл, Р

Дактакорт — мазь с 2% миконазола и 1 % гидрокортизона. Используют при аллергических формах микозов, вызванных дерматофитами, дрож-жеподобными грибами (в т.ч. в ассоциации с бактериальной инфекцией). Мазь наносят 1-2 р/сут на пораженную кожу (слегка втирают до полного впитывания&#.

Кандидоз висцеральный (Candidosis visceralis) — микоз, протекающий с поражением внутренних органов, чаще дыхательных путей, ЖКТ; реже — сердечно-сосудистой, мочеполовой, нервной системы. Сколько-нибудь точного статистического учета системных кандидозов и поныне не ведется. При этом, далеко н.

Мукоромикоз (Mucormycosic, мукороз) — плесневой микоз; вызывается грибами рода Мисог; характеризуется, помимо поверхностных поражений, изменениями в органах дыхания; иногда склонен к генерализации процесса. Мукоромикоз относят к редким заболеваниям человека, но возникнув, он может быть потен.

Принято считать, что дерматофиты обычно поражают кожу и ее придатки (волосы, ногти). В редких случаях трихофитоны обнаруживались на слизистих оболочках рта. В качестве казуистики описаны находки ахориона Шенлейна, фиолетового трихофитона в мозговой ткани, внутренних органах, хрящах (А.Н.

Плесневые микозы — заболевания, вызываемые плесневыми грибами; поражают кожу, подкожно-жировую клетчатку, слизистые оболочки, зрительный и слуховой аппараты, кости, суставы, а также внутренние органы (бронхолегочная система, печень, селезёнка, сердце, сосуды, ЖКТ, почки, ЦНС), иногда с разви.

Ундециленовая кислота — алифатическая монокарбоновая кислота, обладающая фунгистатическим и фунгицидным эффектом за счет повреждения цитоплазматической мембраны грибковой клетки (в отличие от длинноцепочечных жирных монокарбоновых кислот, действующих на Г+ и Гр- бактерии). Активна в отно.

Кандидемия — одна из форм тяжёлого грибкового инфицирования организма человека (в основном в послеоперационный период).

Довольно часто риску подхватить хворь подвержены преждевременно появившиеся на свет дети с маленьким весом. У них вообще большой риск заболеть не только грибковыми инфекциями, но и бактериальными (из-за несовершенства работ многих систем несформировавшегося окончательно организма).

Данное заболевание специфично, поэтому к людям, живущим в обычных условиях, практически не имеет никакого отношения. Однако, это заболевание сложное, трудно диагностируемое и требующее длительного лечения.

Причины кандидемии

Грибки Кандида — единственный возбудитель этого заболевания. В природе он находится повсюду: в почве, воздухе, воде, на поверхности различных предметов. Как и все представители рода грибов любит тепло, влажность и хорошее питание. При благоприятных условиях они стремительно размножаются, образуя обширные колонии и завоёвывая новые пространства.

Грибки не превращаются во врагов просто так. Перерождению обычной микрофлоры в патогенную способствуют некоторые факторы внешней и внутренней среды:

недоразвитие или сбои в работе иммунной системы;
генетические особенности;
онкология;
гормональные нарушения;
длительный прием противомикробных и гормональных препаратов;
острые, инфекционные и хронические болезни;
стрессы, нервное истощение;
болезни желёз внутренней секреции и желудочно-кишечного тракта;
нерациональное питание;
вредные привычки (курение, алкоголь);
частые переливания крови и растворов для внутривенного введения с нарушением правил асептики и антисептики;
некачественная обработка мединструментария и уход за медицинским оборудованием;
ожоги, охватывающие примерно 1/4 часть кожных покровов;
пожилой возраст.

Инвазивный кандидоз регистрируется именно там, где способствующие факторы наиболее выражены:

у лиц, находящихся на реабилитации после первичного либо повторного оперативного вмешательства. Пятьдесят процентов таких больных составляют прооперированные по поводу нарушений со стороны пищеварительной, около 20% — лёгочной системы.
пациенты, лечащиеся от злокачественных новообразований различных внутренних органов и крови;
перенесшие пересадку органов;
семимесячные недоношенные младенцы с массой тела до полутора килограмм.

Существует два известных пути передачи, связанные с нарушениями санитарно — эпидемического режима:

Кровотоком. При невнимательном отношении со стороны медиков к сроку использования катетеров, а также недостаточной предварительной обработке мест инъекций и рук персонала.
Через кишечник. Можно сказать, что грибки попадают в организм с обсемененной пищей либо через грязные руки самого больного или персонала медучреждения.

Формы болезни

Различают несколько форм заболевания. Их названия в народе нередко служат определением самой болезни. Разберем по порядку каждую из них и постараемся показать наиболее опасный ход событий.

Кандидемия. Самая безобидная из существующих форм. Её можно перепутать с неинвазивным кишечным кандидозом (дисбактериозом), который отличается расстройством стула и болями в области живота, но не такой силы. В этой стадии грибковое начало уже циркулирует по организму вместе с кровотоком, но кроме как нарушениями со стороны выделительной системы (почек) это никак не проявляется.
Инвазивный кандидоз. Чаще других им заражаются органы брюшной полости: кишечник и печень после проведённых операций, под действием мощных антибиотиков. Candida при этом закрепляется и обволакивает сыпью, характерной для молочницы, не более двух органов.
Висцелярный (диссеминированный или системный) кандидоз. Комбинированная форма, которая в последнее время широко распространилась по миру, поражая не только отдельные органы, но и заселяя кровь грибком. Самая опасная из всех форм. Токсичные продукты жизнедеятельности кандид могут привести к тяжелым последствиям — сепсису и летальному исходу. Куда внедриться инфекция, заранее предугадать не возможно, поэтому в заражение вовлекаются практически все системы.

Такая форма имеет острое и хроническое течение. В остром периоде заболевание может охватывать уже более трёх органов, продолжая сохраняться в крови и отравлять её. Развитие хронической формы свойственно для онкобольных с пересаженным костным мозгом.

При системной форме происходит поражение центральной нервной системы, мозга, приводящая к судорогам и образованию гнойных очагов.

Диагностика

Диагностирование осуществляется, можно сказать, на месте, не выходя за пределы больницы. Наблюдение за пациентами реанимационных палат постоянное, поэтому вряд ли удастся пропустить начинающийся процесс. Послеоперационники не всегда могут рассказать об изменениях в самочувствии, поэтому ответственность медиков в этом вопросе очень важна.

Установить точный диагноз — инвазивный кандидоз — только по внешним признакам на практике очень трудно даже светилу в медицине. Уж больно схожи многие симптомы с другими не менее тяжёлыми инфекциями. Ведь интоксикация присутствует как в одном, так и в другом случае.

Главным критерием служат результаты анализов. Зная специфику локализации возможного распространения, лаборант исследует:

трижды в течение суток венозную кровь с целью определения наличия и количества грибка;
посев крови на питательную среду (готовится 5 суток);
анализ мочи, мокроты и кала.

Кроме того проводятся инструментальное обследование:

рентгенография;
ультразвуковое исследование;
эндоскопия;
изучение глазного дна;
магнитно-резонансная томография (МРТ в трёхмерной картинке);
компьютерная томография (КТ дает объёмное изображение).

Симптомы инвазивного кандидоза

В формировании болезни важную роль играет конкретное место сосредоточения грибковой инфекции и масштаб интоксикации. Проявления кандидоза начинаются с нарушений в работе тех органов, которые наиболее подвержены заражению. Симптомы прогрессируют, приводя больного к тяжелейшему состоянию.

У больного отмечается значительное ухудшение общего состояния, недомогание, слабость, сильный озноб. Кроме того имеют место:

жар и головная боль (повышение температуры тела до 39°С и выше);
расстройство кишечника (жидкий стул чередуется с запором, метеоризм, бурление); в каловых массах видны прожилки крови, белые творожистые с кислым запахом выделения;
потеря аппетита, отказ от пищи вовсе;
иногда папулёзные высыпания на коже;
ухудшается зрение (двоится в глазах, размытые очертания предметов);

Конкретное базирование гриба добавляет характерную симптоматику со стороны сердца, желудка, почек, легких:

тахикардию (учащенный ритм сердцебиения) и боль в грудной клетке;
частую рвоту, спастические боли в области живота;
напряженность и болезненность в мышцах;
почечную колику, мочеиспускание становится болезненным;
кашель с отхождением мокроты с гноем.

Клиническая картина нарастает в течение 5-6 суток и может привести к осложнениям вплоть до сердечной недостаточности, абсцессу в мозге, отёку лёгких, отказу почек, которые впоследствии заканчиваются гибелью. Статистика неумолима. Половина смертей приходится на первые две недели. В целом заболевание длится около месяца.

В связи с таким положением необходимы экстренные меры результативного лечения.

Лечение

Терапия осуществляется только в стационаре под неусыпным наблюдением медперсонала. Тяжесть положения предполагает постельный режим в условиях палаты интенсивной терапии. В некоторых случаях требуется хирургическая помощь (операция).

Назначения доктора основываются на результатах исследований и анализов. В первый день, пока они не ясны, назначаются антибиотики широкого спектра действия, а затем противогрибковые лекарства, которые уничтожают грибок изнутри:

Леворин. Выпускается в таблетках капсулах и порошке для суспензий. Принимают по 1 таблетке четыре раза в день, сроком – 10 дней (при осложнениях – 12). Для детей доза рассчитывается в соответствии с весом. Оказывает побочное действие.
Натамицин. Можно найти в таблетированной форме и вагинальных свечах. В данном случае употребляют таблетки по 1х4 р. в сутки, курсом 10-20 дней.
Нистатин. Таблетки в оболочке, применяемые по 2-4 в сутки, для деток – 0,5-1 таб. В течение четырнадцати суток. Много побочных действий. В параллельном употреблении с клотримазолом, понижая его эффективность.
Вариконазол-агри. Высокоэффективное пролонгированное противогрибковое средство. Активно в отношении многих штаммов. Вводиться в вену или через рот. Врач назначает лечение под наблюдением по схеме, учитывая возраст и вес.
Каспофунгин-натив. Современное лекарство. Белый порошок дозируется по 50-70 мг для внутривенного вливания капельно за 1 час, 1 раз в сутки.
Флуцитозин. Применяется только для внутривенных капельных инфузий в сочетании с 0,9% физраствором или 5% глюкозой не менее 7 дней. Разовая доза колеблется в пределах 38-50 мг на кг массы тела. Осторожно! Множество побочных эффектов!

Последние препараты важны в терапевтических мероприятиях, касающихся острого диссеминированного кандидоза, ведь счёт идёт буквально на часы.

В ходе лечения с профилактической целью применяют флуконазол, который одинаково хорош в любом возрасте, даже у грудничков. Фармпредприятия выпускают его как в таблеточках и свечках, так и в ампулах для в/венных инъекций.

Лечение проводится с обязательным лабораторным контролем, дабы ещё больше не навредить здоровью и ускорить выздоровление.

Профилактика

Поскольку инвазивный кандидоз касается преимущественно стационарных больных, то огромное значение имеет как общее состояние пациентов, так и профилактика внутрибольничной инфекции:

в палатах трижды в день проводятся текущие уборки и проветривания, раз в неделю подключаются баклампы для дезинфекции воздуха;
медсестры процедурных кабинетов и реанимационных блоков ежедневно проводят осмотр и уход за всевозможными катетерами и повязками, следят за чистотой и соблюдением правил личной гигиены сотрудников, обслуживающих больных;
при проведении любых манипуляций соблюдается стерильность;
в запасах медикаментов учитывается возможность замены некоторых парентеральных средств на жидкие (флаконы, ампулы).

Заболевшие в обязательном порядке весь период лечения принимают противогрибковые профилактические препараты.

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к микологии, и может быть использовано для получения вакцин для профилактики кандидоза сельскохозяйственных животных.

Кандидоз (кандидамикоз, молочница) - инфекционное заболевание сельскохозяйственных животных, преимущественно молодняка двухмесячного возраста, вызываемое патогенными грибами из рода Candida, характеризующееся поражением слизистых оболочек (преимущественно пищеварительного тракта) в виде появления на них рыхлых или уплотненных наложений. Поражения локализуются у телят и ягнят в ротовой полости, пищеводе, преджелудках, у поросят - в желудке, кишечнике и реже в других органах. Болеют также птицы всех видов и люди.

Известна вакцина против кандидоза, включающая убитую культуру Candida albicans (см. заявка РФ 97105400 по кл. МПК А 61 К 39/116, опубл. 10.04.99г. ). Вакцина предназначена для предотвращения вагинальных инфекций и предназначена для введения в пищеварительный тракт. Вакцину получают путем смешивания убитого микроорганизма с фармацевтически или ветеринарно приемлемым носителем, разбавителем и/или другим вспомогательным веществом. Вакцина не содержит адьюванта.

Однако данная вакцина готовится из микроорганизмов, выделенных непосредственно от больных и применяется на них же. Такая вакцина не обладает стабильными антигенными свойствами и не может быть постоянно в наличии в лечебном учреждении. Кроме того, вакцина может быть использована только в гинекологической практике, а отсутствие в состваве адьюванта снижает ее потенциальную иммуногенность.

Известна также вакцина против кандидоза (см. заявка РФ 98104502 по кл. МПК А 61 К 39/00, опубл. 20.02.2000г.), содержащая растворимый антиген из штамма Candida albicans HKM 9656, депонированный в "Немецкой коллекции".

Однако для выделения антигенов данной вакцины необходимо использование агрессивных химических веществ: щелочи (едкого калия или едкого натра), органической или минеральной кислоты, которые существенно снижают иммуногенность растворимых антигенов штамма C.albicans. Кроме того, способ получения вакцины трудоемок и предусматривает дополнительный этап - концентрированно осаждением с помощью сульфата аммония и, как следствие, проведение в последующем диализа.

Наиболее близкой к заявляемой является вакцина (см. Effectiveness of a vaccine composed of heat-killed Candida albicans and a novel mucosal adjuvant, LT (R192G), against systemic candidiasis./Cardenas-Freytag L; Cheng E; Mayeux P; Domer JE; Clements JD// Infect. Immun. 1999 Feb. 67(2):826-33), содержащая термоубитый антиген и адьювант. При этом в качестве антигена используют цитоплазматическую фракцию гриба из штамма С. albicans, а в качестве адьюванта - детоксинированную форму термолабильного энтеротоксина E. coli.

Недостатком вакцины является и то, что образование специфических противокандидозных антител происходит только после искусственного заражения, а не после профилактической иммунизации данной вакциной.

Изобретение направлено на решение задачи создания эффективной и безопасной вакцины против кандидоза сельскохозяйственных животных, обладающей высокоиммуногенными и низкоаллергенными свойствами.

Штамм Candida albicans 253, предназначенный для изготовления вакцины, характеризуется следующими свойствами.

Морфологические признаки. Овальные (2:1) или почти круглые клетки с хорошо заметными вакуолями с небольшими ядрами.

Культуральные признаки. На агаре Сабуро через 48 часов культивирования при температуре 28 o С образуются выпуклые белые колонии с небольшим кремовым оттенком сметанообразной консистенции с гладкой блестящей поверхностью и ровными краями. На 5 сутки культивирования поверхность колонии гладкая, матовая, с кремовым оттенком, края слегка волнистые.

При культивировании на жидких питательных средах через 48 часов при 28 o С заметно помутнение бульона и образование компактного осадка.

Ферментативные свойства. Ферментативная активность проявляется на полужидкой среде Гисса: с глюкозой - образованием кислоты и газа; с мальтозой - также кислоты и газа; с сахарозой - только кислоты; с лактозой активность не проявляется.

Антигенные свойства. Антигены штамма - комплекс специфических белков, полисахаридов и липидов.

Для получения антигенов штамма Candida albicans 253, представляющих собой цитоплазматическую фракцию гриба, используют метод разрушения клеточных мембран микроорганизмов с помощью ультразвуковой дезинтеграции аппаратами типа У. Ф. А. - 11 (Польша), "Solana" (Еrlan industries) или малогабаритным лабораторным дезинтегратором (МЛ-1) производства НПО "Биоприбор" АН СССР.

Для этого из авирулентного штамма Candida albicans o 253 через определенные промежутки культивирования отбирают пробы. Пробы разводят физиологическим раствором в соотношении 1:5, после чего смесь подвергают воздействию ультразвукового дезинтегратора в течение 90 с, получая таким образом цитоплазматическую фракцию.

Освобождение от разрушенных и не разрушенных клеток проводят методом фильтрации через мембрану "Владипор" МФА - МА 3.

Отбор иммуногенной стадии антигенов проводят с использованием реакции агломерации лейкоцитов (РАЛ) по способу, описанному в патенте РФ 2176392, в соответствии с которым антигены смешивают с комплементом морской свинки, добавляют стабилизированную кровь кролика, смесь инкубируют, готовят мазки, подсчитывают фиксированное количество лейкоцитов и отмечают число агломерированных клеток белой крови. По величине индекса агломерации оценивают пригодность полученных антигенов для создания вакцины. Экспериментальным путем была подобрана величина индекса агломерации лейкоцитов, при которой антиген считается иммуногенным. Для антигена штамма Candida albicans 253 в виде цитоплазматической фракции величина индекса агломерации составляет 6-10%.

К выявленным вышеописанным методом растворимым антигенам с индексом агломерации лейкоцитов 6-10% добавляют для обезвреживания и повышения иммуногенных свойств формалин 0,3-0,4%-ной концентрации. После чего в полученный комплекс добавляют для повышения синтеза антител и замедления всасывания антигенов адьювант (например, 6%-ный раствор гидроокиси алюминия, неполный масляный адьвант Фрейнда, сапонин) в соотношении 10:1.

Антигенный комплекс помещают в термостат и инкубируют при температуре 37 o С в течение 21 суток.

Проверку вакцины на стерильность и безвредность проводят общепринятыми методами, а оценку иммуногенных свойств - на лабораторных животных.

Пример 1. Способ изготовления вакцины против кандидоза сельскохозяйственных животных заключается в следующем.

2. Выделяют цитоплазматическую фракцию полученной суспензии клеток, используя метод разрушения клеточных мембран микроорганизмов с помощью ультразвукового дезинтегратора "Solana" (Erlan industries). Воздействие дезинтегратором осуществляют в течение 60 мин. Освобождение от разрушенных и не разрушенных клеток проводят методом фильтрации через мембрану "Владипор" МФА - МА 3 при помощи вакуум-насоса. Полученный фильтрат представляет собой растворимый комплекс белково-полисахаридных антигенов.

3. Производят оценку полученных растворимых антигенов на иммуногенность и выявляют антигены с индексом агломерации лейкоцитов 6-10%.

Для этого фильтрат разводят физиологическим раствором в соотношении 1:5. В пробирки вносят по 0,04 мл полученной смеси и туда же добавляют по 0,02 мл комплемента морской свинки. Смесь выдерживают 30 мин при 37 o С, затем вносят по 0,2 мл цитратной крови кролика-донора. При этом контролем служат пробирки с антигеном с изотоническим раствором хлорида натрия вместо комплемента и стабилизированной кровью кролика. Другим контролем служили пробирки со стабилизированной кровью кролика, комплементом морской свинки и изотоническим раствором хлорида натрия вместо антигена. Содержимое пробирок встряхивают и инкубируют при 37 o С в течение 45 минут.

Смесь из пробирок наносят на предметные стекла и делают мазки, которые подсушивают и затем фиксируют метиловым спиртом в течение 20 мин. Окраску мазков проводят 0,1% раствором метиленовой сини в течение 5 мин.

Окрашенные мазки просматривают под микроскопом при увеличении х450. Для анализа выбирают 100 лейкоцитов и выявляют среди них число агломерированных (склеенных не менее 3-х). При наличии склеенных (агломерированных) лейкоцитов от 6 до 10% от общего числа лейкоцитов -100 антигены считаются наиболее иммуногенными и соответственно пригодными для конструирования вакцины против кандидоза.

4. К растворимым антигенам с индексом агломерации лейкоцитов 6 -10% добавляют формалин 0,3-0,4%-ной концентрации.

5. В полученный комплекс добавляют адьювант - 6%-ный раствор гидроокиси алюминия в соотношении 10:1.

6. Комплекс антиген - адьювант помещают в термостат и инкубируют при температуре 37 o С в течение 21 суток.

Пример 2. Оценка иммуногенных свойств вакцины.

Вакцину вводят внутримышечно в дозе: мышам - по 0,5 мл, морским свинкам - по 3 мл и кроликам - по 5 мл. Вакцину вводят двукратно с 7 - 10 дневным интервалом. Напряженный иммунитет наступает через 14 дней после ревакцинации.

Оценку напряженности иммунитета проводят с использованием внутривенного для кроликов и мышей и внутрисердечного для свинок способов заражения. Для заражения используют хламидоспоры трехсуточной вирулентной культуры С. albicans с концентрацией 3-10 9 спор в 1 см 3 и объеме: мышам - по 0,5 мл, морским свинкам и кроликам - по 1 мл. Результаты представлены в табл. 1.

Для серологической оценки гуморального иммунитета используют реакцию преципитации (РП) и иммуноферментные тест-системы (ИФТС) производства НПО "Аквапаст" (г. Санкт-Петербург). Кровь для исследований берут от иммунизированных кроликов через 14 суток после ревакцинации. Результаты представлены в табл. 2.

Вакцина была испытана на крупном рогатом скоте и свиньях.

С целью получения противокандидозного иммунитета вакцину вводят дважды с интервалом 7-10 дней внутримышечно телятам в дозе 5 мл на одно введение с двухмесячного возраста, а поросятам - в дозе 3 мл с месячного возраста.

У двукратно иммунизированных животных через 14 и 90 дней после вакцинации брали пробы крови. В полученных сыворотках крови определяли титры антител к кандидозным антигенам в ИФТС, которые были не ниже, чем у иммунизированных лабораторных животных.

Вакцина опробирована в условиях хозяйств, неблагополучных по кандидозу телят и поросят. У животных до применения вакцинации отмечали клинические и патологоанатомические признаки заболевания. Лабораторными исследованиями диагноз на кандидоз был подтвержден выделением возбудителя. После проведения иммунизации клинические признаки заболевания у вакцинированных животных не регистрировались.

Вакцина против кандидоза сельскохозяйственных животных, содержащая растворимый антиген из штамма Candida albicans, представляющий собой цитоплазматическую фракцию гриба и адьювант, отличающаяся тем, что она содержит в качестве растворимого антигена - антиген из штамма Candida albicans №253 с активностью спор 4,5·10 8 - 5,5·10 8 в 1 см 3 и индексом агломерации лейкоцитов 6-10% при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Антиген из штамма

Candida albicans № 253 Остальное

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 20.02.2004

Читайте также: