Методы диагностики герпетической инфекции

Значение лабораторной диагностики герпетической инфекции определяется трудностями клинической диагностики при полиморфизме симптомов и необходимостью своевременного назначения противовирусной терапии.

В настоящее время наиболее часто используются следующие лабораторные методы:

• 1) вирусологические методы обнаружения и идентификации вирусов простого герпеса;
• 2) методы выявления антигенов вирусов простого герпеса -- иммунофлюоресцентный и иммуноферментный анализ;
• 3) полимеразная цепная реакция (метод ПЦР);
• 4) цитоморфологические методы;
• 5) выявление антител с помощью ИФА (иммуноферментный анализ);
• 6) методы исследования и оценки иммунного статуса.

Материал для исследования берется в зависимости от локализации поражений.

Метод выделения вируса в культуре тканей является одним из наиболее чувствительных и специфичных методов диагностики герпетической инфекции. Материалы от больного вносят в культуральные флаконы и наблюдают в течение 24 часов и более до полного развития цитопатического действия. Недостатком метода является необходимость получения культуры клеток, что не всегда возможно в вирусологических лабораториях по техническим причинам.

Более доступным является метод обнаружения антигенов ВПГ в биологических субстратах. Исследуемый материал наносят на предметное стекло, фиксируют и затем проводят иммуноцитохимическое исследование с помощью моноклональных или поликлональных антител.

Наиболее чувствительным и быстрым методом диагностики герпетической инфекции является полимеразная цепная реакция (ПЦР), представляющая собой процесс, состоящий из повторных циклов амплификации (копирования) специфической последовательности молекулы ДНК с целью получения достаточно большого количества копий, которые могут быть выявлены обычными методами детекции. С помощью данного метода даже из нескольких молекул ДНК можно получить необходимое количество копий ее специфического фрагмента. Одним из существенных преимуществ метода ПЦР является высокая чувствительность.

Очень высокая чувствительность метода ПЦР требует от врачей новых подходов к оценке результатов, полученных в лаборатории. Диагностическая значимость результатов лабораторных исследований во многом зависит от выбора врачом-клиницистом соответствующего метода лабораторного исследования, правильного взятия биоматериала для анализа из очагов поражения, адекватной предварительной подготовки биоматериала и своевременного проведения исследования.

В качестве материала для исследования методом ПЦР на заболевания, передаваемые половым путем, служит соскоб эпителиальных клеток из уретры или цервикального канала, на инфекции новорожденных -- соскоб эпителиальных клеток с миндалин и мест поражений у детей, цереброспинальная жидкость, кровь, моча. Следует учитывать, что обнаружение в клинических пробах ДНК или РНК микроорганизмов, особенно возбудителей латентных инфекций, еще не означает наличия патологического процесса, не может автоматически интерпретироваться как диагноз заболевания и определять необходимость проведения этиотропной терапии.

Учитывая высокую диагностическую значимость метода ПЦР и наличие зависимости между летальностью у новорожденных и виремией, вызванной ВПГ-1 и ВПГ-2, Н.Н. Володин и соавт. (2000) рекомендуют использовать этот метод для лабораторного скрининга на генерализованную герпетическую инфекцию среди детей высокого риска.

Цитоморфологические методы диагностики герпетической инфекции заключаются в проведении световой микроскопии биологического материала после его окрашивания на предметном стекле определенным методом (по Папаниколу, по Селлеру-Павловскому и др.). При герпетической инфекции обнаруживаются характерные гигантские клетки и внутриядерные включения. Цитоморфологические методы являются быстрыми и дешевыми, но не позволяют дифференцировать изменения, вызванные ВПГ и другими герпесвирусами, а также их чувствительность, по сравнению с культуральным методом, составляет всего 60%.

Для диагностики герпетической инфекции можно использовать иммунофлюоресцентный метод. Мазки после специальной обработки флюоресцирующим препаратом просматривают под люминесцентным микроскопом. Положительным считается мазок, в котором содержится не менее 3 морфологически неизмененных клеток эпителия с интенсивной специфической флюоресценцией и типичной для ВПГ локализацией в ядре или ядре и цитоплазме одновременно.

Серологические методы лабораторной диагностики герпетической инфекции по своей информативности уступают другим методам и имеют незначительную диагностическую ценность. В настоящее время наиболее часто для выявления антител к ВПГ используют иммуноферментный анализ (ИФА). Определяются комплексные антитела классов IgG и IgM, которые свидетельствуют об инфицированности человека и не всегда позволяют связать клинические проявления с ВПГ. Известно, что антитела к ВПГ выявляются у 90-97% обследованных лиц, не имеющих клинической симптоматики герпетической инфекции. Нарастание титров антител к ВПГ происходит в поздние сроки (через несколько недель) после заражения или реактивации вируса и может не наблюдаться у иммунодефицитных больных. Титр антител не всегда соответствует клиническим проявлениям инфекции: у части бессимптомных носителей выявляются антитела в высоких титрах, тогда как у части пациентов с выраженной симптоматикой титры антител остаются низкими. Антитела класса IgM могут быть показателем активной инфекции, однако после первичного инфицирования обнаруживаются в крови в течение нескольких месяцев или лет. Использование ИФА бывает полезным при исследовании парных сывороток, полученных с интервалом 7-10 дней. Так, 4-х кратное нарастание антител к ВПГ класса IgG считается показателем первичной инфекции.

[youtube.player]

Вирусом герпеса заражено практически все население нашей планеты. Существует несколько видов герпеса, и если одни не особенно опасны, то другие могут создать серьезные проблемы со здоровьем, а в определенных ситуациях, например при беременности, последствия деятельности вируса могут стать фатальными.

Масштабы проблемы и роль диагностики герпеса

Герпес можно назвать самым распространенным вирусным заболеванием в мире. Заразиться им очень просто — он может передаваться при любых контактах (поцелуях, половом акте), во время родов от матери к ребенку, бытовым путем, иногда — воздушно-капельным. К моменту достижения взрослого возраста герпесом заражен практически каждый.

Попадая в кровь, вирус может жить в организме годами, никак не проявляя себя. Но рано или поздно он дожидается момента, когда наша иммунная система слабеет. Спусковым крючком может стать серьезная болезнь, стресс, переутомление и хроническая нехватка сна, переохлаждение, гормональная перестройка, словом, практически любая встряска для организма.

Проявления герпеса зависят от типа вируса.

Существует 8 типов герпеса:

• Герпес 1-го типа. Самый распространенный тип. Именно он вызывает появление зудящих пузырьков, наполненных жидкостью, на губах, языке, слизистых оболочках рта. Иногда за несколько часов перед появлением пузырьков человек чувствует повышение температуры и слабость, хотя очень часто вирус атакует без предупреждения.

Многие считают, что избавиться от герпеса невозможно. И в этом утверждении есть доля истины — но лишь доля. Да, на сегодняшний день нельзя полностью уничтожить вирус в организме. Но можно подавить его деятельность настолько, что проявления не будут вас беспокоить. Лечение обычно комбинированное, используются противовирусные препараты, средства, укрепляющие иммунитет, используются также физиотерапевтические методы (озонотерапия и другие), а при обострении — местные обезболивающие и противовирусные средства.

Диагностировать и лечить герпес необходимо, и это особенно важно для тех, кто готовится стать родителями. Взрослым вирус герпеса причиняет дискомфорт, но для новорожденных детей он может быть смертельно опасным.

Диагностика герпеса разделяется на два этапа — врачебный осмотр и лабораторные исследования, цель которых — найти и идентифицировать вирус герпеса в крови и других биоматериалах.

Зачастую уже при осмотре доктор в состоянии определить, с каким именно типом герпеса он имеет дело. Однако визуальные признаки могут ввести в заблуждение, например, генитальный герпес может походить на сифилис, а для некоторых типов герпеса внешние проявления вообще не характерны. Поэтому врач обязательно направит вас на анализы на герпес.

Лабораторные методы — основа диагностики герпеса. Они позволяют определить наличие вируса даже с том случае, если он неактивен, а также установить тип возбудителя и его концентрацию.

Анализы на герпес следует сдавать регулярно, даже если никаких проявлений болезни нет, — это нормальная мера контроля состояния здоровья. Но в некоторых случаях анализы на герпес обязательны.

• во время планирования и ведения беременности;
• перед подготовкой к трансплантации органов;
• при появлении на коже пузырьков и высыпаний, причину которых сложно определить во время осмотра.

Лабораторная диагностика герпеса включает в себя несколько видов анализов. Какой анализ на герпес необходим в каждом конкретном случае, решает лечащий врач. Иногда для полной уверенности потребуется пройти несколько разных исследований.

• Полимеразная цепная реакция (ПЦР) . Доступный и чрезвычайно простой метод, который позволяет быстро выявить вирус даже в том случае, если его концентрация в крови крайне мала. Методом ПЦР можно исследовать практически любой биоматериал. В основе ПЦР лежит метод многократного копирования части ДНК возбудителя болезни и последующей идентификации вируса и его типа.
• Иммуноферментный анализ (ИФА) . При помощи этого метода можно выявить наличие антител IgM и IgG (качественный ИФА) и подсчитать их концентрацию (количественный ИФА). При обострении высоко содержание IgM, а в хронической стадии — IgG. Таким образом, этот способ дает возможность установить фазу болезни.
• Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) . При этом методе биоматериал обрабатывается особым веществом, под воздействием которого антигены начинают светиться и их можно быстро обнаружить при микроскопическом исследовании. Этот способ хорошо работает в том случае, если концентрация возбудителя в крови высока.

• Культуральный метод . Точный и надежный метод, единственным существенным минусом которого является долгое ожидание результатов. При исследовании культуральным методом биоматериал переносится на питательную среду. Вирус начинает активно захватывать здоровые клетки и исследователь, наблюдая за их изменениями, получает возможность идентифицировать вирус. Ложноположительный или ложноотрицательный результат при использовании культурального метода почти исключен, но результата приходится ждать 1–2 недели.
• Серологический метод . Самый распространенный и доступный метод диагностики герпеса, определяющий антитела класса G. Часто назначают при подозрении на герпес 2-го типа (генитальный герпес). Биоматериалом для этого исследования является кровь из вены.
• Иммунограмма . Это не столько анализ на герпес или какой-либо другой вирус, сколько проверка работы иммунной системы. Специалист исследует кровь из вены и определяет общее количество иммунных клеток, а также их соотношение. Этот анализ позволяет определить, каких иммуноглобулинов не хватает. Иммунограмму назначают для подбора правильной терапии для стимуляции защитной системы организма.
• Дот-гибридизация . Метод, во многом похожий на ПЦР — он также направлен на выявление ДНК возбудителя. Способ диагностики можно использовать даже тогда, когда внешних проявлений болезни еще нет.
• Вульвокольпоцервикоскопия . Этот метод относится к качественным и применяется для диагностики генитального герпеса у женщин. Врач осматривает слизистые оболочки влагалища и шейки матки при помощи специального микроскопа — он дает не очень большое увеличение, однако этого достаточно для того, чтобы увидеть характерные для герпеса высыпания.

Стоимость анализов на герпес значительно различается в разных частных лабораториях Москвы, поэтому мы приводим средние расценки.

ПЦР-анализ обойдется примерно в 900–1500 рублей, если анализ проводится на все типы герпеса, и в 300–500 рублей, если анализ проводится на какой-то один тип. ИФА стоит в среднем 750–900 рублей, РИФ — 450–700 рублей.

К стоимости самого анализа нужно добавить и стоимость забора биоматериала — в среднем 200–300 рублей за забор крови и 300–400 рублей за забор мазка.

Традиционный список анализов при герпесе включает в себя ПЦР, ИФА и РИФ. Дополнительные исследования назначаются в том случае, если даже эти три метода в совокупности дали неоднозначный результат, что бывает достаточно редко.

Что­бы ре­зуль­та­ты ана­ли­зов бы­ли точ­ны­ми, об­ра­щай­тесь в круп­ные ла­бо­ра­то­рии, где стро­го кон­тро­ли­ру­ет­ся весь про­цесс — от за­бо­ра био­ма­те­ри­а­ла до про­ве­де­ния ис­сле­до­ва­ния. Кро­ме то­го, са­мим па­ци­ен­там важ­но со­блю­дать пра­ви­ла под­го­тов­ки к ана­ли­зам. Они до­ста­точ­но про­с­ты — за 8 ча­сов до за­бо­ра био­ма­те­ри­а­ла не­льзя есть и пить (ис­клю­че­ние — обыч­ная во­да), упо­треб­лять ал­ко­голь, за­ни­мать­ся спор­том, же­ла­тель­но огра­дить се­бя от стрес­со­вых си­ту­а­ций.

[youtube.player]

Герпетическая инфекция — хроническая, часто рецидивирующая патология, характеризующаяся поражением кожи, нервной системы, урогенитального тракта, зрительного анализатора и внутренних органов. Причиной болезни является вирус, который длительно персистирует в нервных ганглиях и клинически не проявляется. Герпес 1 типа циркулирует в шейных узлах, а 2 типа – в поясничных. При снижении иммунной защиты микроб проникает в кровь и вызывает обострение инфекционного процесса. Вирусом простого герпеса заражено 80% населения планеты. Клинические проявления возникают только в 20% случаев.

В семейство Herpesviridae входит большое количество микроорганизмов, способных вызывать развитие инфекционного процесса у человека. Эти микробы широко распространены в природе. Современной науке известно более 80 видов герпес-вирусов: 7 из них были выделены от человека, а остальные от животных. Микроорганизмы, относящиеся к семейству Herpesviridae, имеют двухцепочечную ДНК, капсид из 162 капсомеров и ядерную мембрану. Отличаются они структурой генома, особенностями репродуктивного цикла и действием на клетки.

Этиология

Возбудитель герпетической инфекции известен с давних времен. Впервые его выделили и описали более ста лет назад. Микроорганизм содержит ДНК и при попадании в благоприятную среду активно делится. Это классический внутриклеточный паразит: его репродукция и образование полноценного вириона происходят только в клетках определенного типа. Чаще всего микробы размножаются в эпителиоцитах и лейкоцитах.

В настоящее время существует большое количество представителей семейства Herpesviridae, но наиболее значимыми для медицины и опасными для человека являются следующие:

• 
  Лабиальный герпес отличается высокой контагиозностью и проявляется характерной сыпью на губах и крыльях носа. Это самый распространенный вид инфекции, вызывающий развитие стоматита, панариция, энцефалита, экземы, эзофагита, кератоконъюнктивита, ангины.
• Генитальный герпес распространяется половым путем и поражает органы репродуктивной системы. У детей он протекает в виде неонатальной или диссеминированной инфекции.
• Опоясывающий герпес вызывает ветряную оспу, а при рецидиве провоцирует опоясывающий лишай.
• Вирус Эпштейна-Барр — возбудитель инфекционного мононуклеоза, который поражает циркулирующие В-лимфоциты, нарушая клеточный и гуморальный иммунитет.
• Цитомегаловирус — микроорганизм, максимально опасный для беременных женщин. Он способен вызывать пороки развития плода.
• Розеоловирус провоцирует внезапную экзантему или детскую розеолу.

Остальные типы герпеса не до конца изучены и менее распространены. Предполагают, что они способствуют развитию рассеянного склероза, синдрома хронической усталости, саркомы Капоши, карциномы шейки матки. Организм человека чаще поражается герпесом 1 и 2 типа. Лабиальный герпес тропен к клеткам кожи и слизистой оболочки рта, носа, глаз. Генитальный герпес поражает различные структуры половой системы. Обе разновидности инфекции называют простым герпесом – herpes simplex. Возбудитель ветряной оспы вызывает патологию преимущественно у детей.

Микроорганизмы чувствительны к нагреванию, ультрафиолету, рентгеновским лучам и дезинфектантам. Они сохраняют свою жизнеспособность при охлаждении, замораживании и оттаивании, высушивании. Резистентны к ультразвуковому воздействию.

Эпидемиология

Пути распространения герпетической инфекции:

1. Воздушно-капельный — реализуется при общении с человеком, который чихает и кашляет;
2. Контактно-бытовой — при обработке везикул больному;
3. Половой — во время полового акта от инфицированного партнера;
4. Трансплацентарный — внутриутробно от больной матери;
5. Вертикальный — при прохождении ребенка через родовые пути;
6. Трансфузионный — при переливании крови.

Самозаражение играет не последнюю роль в развитии патологии. Вирус способен перемещаться внутри макроорганизма из инфицированных тканей в здоровые. Происходит это, когда больной расчесывает везикулы и переносит своими же руками вирус в другие части тела.

Люди обладают высокой восприимчивостью к патогенам. Обычно наблюдается бессимптомное вирусоносительство. Клинические признаки появляются при угнетении иммунитета. Общая резистентность организма снижается под воздействием негативных факторов – переохлаждения, простуды, авитаминоза, стресса, лечения иммунодепрессантами, излучения. Спровоцировать рецидив инфекции могут гормональные изменения в организме, локальные повреждения губ или глаз, заболевания, проявляющиеся лихорадкой.

Для герпетической инфекции характерна спорадическая заболеваемость. Единичные вспышки крайне редко регистрируются в детских коллективах в осенне-зимний период.

Патогенез

проявления герпетической инфекции на коже

Проникнув в организм человека, вирус быстро размножается в эпителиоцитах и разрушает их. На месте погибших клеток формируются некротические очаги с признаками локального воспаления. В месте внедрения микроба при расслоении и баллонирующей дегенерации эпителиоцитов образуются везикулы, которые со временем лопаются. На коже и слизистой появляются эрозии и корки. Жидкость внутри пузырьков содержит фибрин, слущенные клетки и множество вирусных частиц. Этот период заболевания считается максимально опасным в эпидотношении.

Реактивация микробов связана с воздействием негативных факторов. Патогены проникают в эндотелиоциты капилляров и эпителиоциты кожи. После репродукции вирусов образуются везикулы. У лиц с адекватной работой иммунной системы патология протекает легко и без осложнений. Больных беспокоят только местные проявления болезни. Макрофаги захватывают и переваривают вирусы, а интерферон защищает клетки от внедрения микробов.

При наличии иммунодефицита рецидивы повторяются часто, а очаги поражения становятся более обширными. Исходом патологии становится генерализация процесса с развитием полиорганной недостаточности. Врожденная форма инфекции у детей, появившихся на свет с недостатком веса или сопутствующими патологиями, часто имеет неблагоприятный прогноз на выздоровление.

Симптоматика

Клинические признаки инфекции появляются при обострении процесса. Симптоматика полиморфна. Она зависит от локализации очага поражения.

• Герпетический стоматит обычно развивается у детей. Он начинается остро с подъема температуры, озноба, головной боли и прочих признаков интоксикационного синдрома. На слизистой оболочке ротовой полости появляются группы пузырьков с серозным содержимым и зоной гиперемии вокруг. После вскрытия везикул образуются эрозии. Они настолько болезненны, что дети отказываются от еды. У малышей усиливается слюноотделение, появляется неприятный запах изо рта, увеличиваются подчелюстные лимфоузлы.
• При поражении кожи везикулы образуются вдоль красной каймы губ, на крыльях носа и ушных раковинах. Они зудят и болят. Болевой синдром нередко предшествует высыпаниям, которые сосредоточены на одной стороне лица и плотно группированы. Прозрачное содержимое пузырьков вскоре мутнеет, они лопаются, подсыхают и покрываются корками. На месте очага поражения образуется пигментное пятно, которое со временем исчезает. Общее состояние при данной форме инфекции не страдает, интоксикация отсутствует.

герпетические высыпания на губах

Диагностика

Диагностика герпетической инфекции не вызывает трудностей у специалистов. Заболевание проявляется характерными общими и местными симптомами. Для подтверждения диагноза проводят лабораторные испытания. Материалом для исследования является: содержимое везикул, кровь, моча, слюна, сперма, отделяемое зева, ликвор. Его выбор зависит от места локализации патологического очага.

Методы диагностирования герпетической инфекции:

1. Серологические исследования — постановка реакции связывания комплемента или реакции нейтрализации.
2. Метод флюоресцирующих антител — экспресс-диагностика, позволяющая обнаружить специфическое свечение в соскобах кожи и слизистых оболочек.
3. Иммунограмма – иммуноглобулины М являются признаком острого воспаления, а иммуноглобулины G – хронического.
4. ПЦР — обнаружение в испытуемом образце генетического материала вирусов.
5. Вирусологическое исследование — выращивание вируса в куриных эмбрионах или в культуре клеток. Культуральная диагностика и электронная микроскопия позволяют полностью идентифицировать микроб.
6. Цитологический анализ – выявление в соскобах кожи многоядерных гигантских клеток с характерными внутриклеточными включениями.

Иммуноферментный анализ и иммуноблоттинг на сегодняшний день отличаются наибольшей информативностью. Эти методы позволяют определить в крови больного антитела к вирусу герпеса.

Лечебный процесс

Лечение герпетической инфекции комплексное, включающее этиотропное, патогенетическое и симптоматическое воздействие. Терапевтические мероприятия назначаются лечащим врачом на основе результатов диагностического обследования. Лечение проводят в домашних условиях при отсутствии осложнений и общем удовлетворительном состоянии больного. Госпитализируют в стационар пациентов с тяжелым течением патологии, сопровождающейся зрительной и нервной дисфункцией, нарушением работы внутренних органов.

Полностью вылечить герпетическую инфекцию и избавиться от вируса невозможно. Существуют лекарственные средства, эффективно устраняющие симптомы болезни, препятствующие размножению микроба, повышающие качество жизни пациента:

Лицам с локализованными формами инфекции достаточно местного воздействия:

1. Язвы обрабатывают антисептиками и накладывают повязки с протеолитическими ферментами.
2. Ставят холодные компрессы с антивирусными мазями и кремами.
3. Применяют местные противомикробные средствами при вторичном бактериальном инфицировании.

Все лекарственные средства должны быть назначены лечащим врачом в соответствии с показаниями и индивидуальными особенностями организма. Детям при подборе дозировки необходимо учитывать массу тела, возраст и общее состояние. Пациентам рекомендуют во время лечения соблюдать щадящую диету и оптимальный питьевой режим.

Курс лечения длится 10 дней, а в тяжелых случаях он затягивается до года. При распространении инфекции гематогенным путем в головной мозг, печень, почки, ЖКТ противовирусные препараты вводят внутривенно. Во время ремиссии для стимуляции иммунитета проводят лазерное облучение крови и физиотерапевтические процедуры — УФО, инфракрасное облучение, магнитотерапию, КВЧ.

Вакцинотерапию назначают после достижения стойкой ремиссии. Она дает положительный эффект у 70 % пациентов. Препарат вводят дважды с перерывом в 10 дней. Первый курс составляет пять инъекций, которые делают больному через 3-4 дня. Вакцину вводят внутрикожно в сгибательную поверхность предплечья. Второй курс также включает пять инъекций, но их ставят через каждые 7 дней. Ревакцинация проводится спустя полгода.

Профилактика и прогноз

Вакцины против герпеса применяются ограниченно в связи с их низкой специфичностью. Ведущее значение в предупреждении развития и распространения герпетической инфекции имеют общие профилактические мероприятия:

• Укрепление иммунитета,
• Посещение дерматолога при первых симптомах поражения кожи,
• Исключение контактов с больными герпетической инфекцией,
• Использование презерватива при половом акте,
• Борьба с пагубными привычками,
• Соблюдение санитарно-гигиенических норм и правил.

Беременные женщины для предупреждения врожденного герпеса у ребенка должны:

1. Избегать тесного общения с больными людьми,
2. Вовремя становиться на учет в женской консультации,
3. Питаться сбалансировано и рационально,
4. Не напрягаться физически,
5. Защищать организм от стрессов и нервных потрясений,
6. Как можно реже посещать общественные места,
7. Проходить обследования на вирусы герпеса.

Герпетическая инфекция — вирусная патология с характерным высыпанием сгруппированных пузырьков на коже и слизистых. Ее возбудитель присутствует в организме практически каждого человека. У одних заболевание часто обостряется, а у других рецидивов практически не бывает. Крепкий иммунитет ослабляет вирус и делает его неактивным.

Видео: телепрограмма о герпетической инфекции

Видео: доктор Комаровский о герпетической инфекции

[youtube.player]

Проблеме диагностики герпесвирусных инфекций посвящено множество научных публикаций, однако в последнее время все более возрастает интерес к этому вопросу со стороны клиницистов разных специальностей. По данным литературы, вирусом простого герпеса инфицировано 65-90 % взрослого и детского населения планеты. Местом локализации первичной герпесвирусной инфекции чаще всего является слизистая оболочка полости рта.

Несмотря на широкое и разностороннее изучение данной патологии, отмечается тенденция к росту распространенности герпетических стоматитов, особенно среди детского населения. Наделю герпетической инфекции среди всех поражений слизистой полости рта у детей приходится около 80 %, у 8-20% пациентов заболевание принимает рецидивирующий характер. При этом вирус может поражать практически все органы и ткани человеческого организма. У детей грудного и раннего возраста, после исчезновения антител, полученных интерплацентарно от матери, герпетическая инфекция, как правило,протекает в виде острого герпетического стоматита. Хроническая герпетическая инфекция в полости рта проявляется в виде рецидивирующего герпетического стоматитаили герпеса губ.

Современные наблюдения специалистов позволяют говорить о изменении клинической картины герпетического стоматита и выделении атипичных форм заболевания, а именно геморрагической, геморагически-некротической, язвенной, отечной, элефанзиазоподобной, рупеоидной, зудящей, эритематозной и папулезной, герпетиформной экземы Капоши, генерализованного герпеса. В литературе упоминается импетигоподобная форма герпеса, при которой высыпания на слизистой оболочке полости рта сочетаются со стрептококковым импетиго в периоральной зоне. Атипичные формы заболевания затрудняют диагностику. Таким образом, высокая инфицированность населения и распространенность заболевания, наличие атипичных форм и отсутствие четких диагностических алгоритмов свидетельствуют об актуальности этой проблемы.

Материалом для исследования при герпетической инфекции полости рта являются:

Соскоб и мазок-отпечаток с элементов поражения, слюна, кровь.

На сегодняшний день существует большое количество лабораторных методов диагностики герпесвирусных инфекций.

Выделяют три основных диагностических подхода:

1). изоляция и идентификация вирусаиз клинического материала;

2). непосредственное исследование материала на наличие вируса, вирусного антигена или нуклеиновых кислот

3). серологическая диагностика, основанная на установлении значительного прироста вирусных антител в течение болезни.

В настоящее время применяется ускоренный вирусологический метод выявления вирусов. При этом методе материал, полученный от больных, культивируется совместно с культурой клеток Vero в течение 24-х часов. После предварительной обработки применяется реакция непрямой иммунофлюорисценциии результаты оценивают под люминисцентным микроскопом.Этот метод позволяет выбрать антивирусный препарат для лечения герпетической инфекции и оценить эффективность противовирусной терапии через 1,5-2 месяца после окончания лечения. Результаты обследования готовы через 2-е суток.

Биологическая проба состоит в заражении чувствительных лабораторных животных (белых мышей или кроликов) биоматериалом, полученным от больного. Метод рекомендуют использовать в спорных случаях герпесвирусной инфекции и для диагностики атипичных форм.

Микроскопические методы исследования герпеса:

включают цитологическую диагностику и электронную микроскопию. Исследуемый материал для микроскопических методов получают путем соскоба или мазка-отпечатка с пораженных участков слизистой и кожи.

Цитологический метод простой, доступный, рассматривается как экспресс-метод, так как результаты исследования получают через 2-3 часа. Его чувствительность и специфичность не превышают 70-75 %. Метод нашел широкое применение в стоматологической практикедля проведения дифференциальной диагностики в сложных случаях и оценки эффективности лечебных мероприятий.

К методам экспресс-диагностики герпеса относится:

Электронная микроскопия. Метод позволяет выявить вирусные частицы в исследуемом образце. Для успешного определения вируса его концентрация в пробе должна быть примерно 1ˑ10 6 частиц в 1 мл. Но поскольку концентрация возбудителя в материале обычно незначительна, то требуется предварительное центрифугирование. Однако метод электронной микроскопии не позволяет дифференцировать вирусы простого герпеса и ветряной оспы, цитомегалии, поскольку они морфологически практически одинаковы. Использование метода ограничивается его трудоемкостью, малодоступностью, дороговизной, поэтому он применяется в основном в научных целях. Для получения результатов метода электронной микроскопии необходимо около 3-х часов, чувствительность метода составляет 70 %, специфичность около 100 %.

В настоящее время главенствующую роль в верификации герпесвирусных инфекций играют методы ДНК-диагностики, в частности полимеразная цепная реакция (ПЦР) и ДНК-гибридизация.

Гибридизация ДНК – высокоспецифичный метод, позволяющий идентифицировать геном вируса после его специфического связывания (гибридизации) с меченой комплементарной молекулой ДНК-диагностикума. В качестве маркера применяют ферменты (пероксидазу, щелочную фосфатазу) и изотопы. Недостатком метода является его длительное время выполнения- в среднем 5-7 суток, а также высокая частота ложноотрицательных результатов при низком количестве вирусной ДНК в исследуемой пробе.

Наиболее широко используемым методом диагностики герпетической инфекции является полимеразная цепная реакция (ПЦР), предложенная Мюллисом в 1983 году. В основе метода лежит катализируемая ферментом ДНК-полимеразой многократное образование копий (ампликация) определенного участка ДНК, представляющего диагностический интерес. Для ампликации отбирают уникальный ген, который наиболее четко отличает определяемый патоген от прочих.

Различают качественный, полуколичественный и количественный варианты метода. При проведении качественной ПЦР определяют лишь факт присутствия вируса, однако не возможным является оценка его репродуктивной активности, что не позволяет провести дифференциальную диагностику между латентными, персистирующими и реактивными формами инфекции. Полуколичественная ПЦР дает информацию о содержании копий вирусных ДНК в виде условных обозначений (+, ++, +++, ++++). Методом, позволяющим получить числовые значения, отражающие репродуктивную активность вируса является количественная ПЦР. Полученный количественный результат не соответствует истинному содержанию ДНК возбудителя в исследуемой пробе. При этом существует определенная пропорциональность между исходным количеством ДНК вируса и конечным результатом исследования. Такая пропорциональность соблюдается лишь при проведениидиагностики в стандартных условиях с использованием одних и тех же реактивов, поэтому сравнительный анализ полученных результатов в динамике проводят при обследовании пациента в одной лаборатории.

Ложноотрицательные результаты возможны при несоблюдении технологий и использовании некачественных реактивов. Ложноположительные данные возможны при подсчете результатов методом электрофореза, что обусловлено контаминацией воздушной среды рабочего пространства ампликонами при предварительных постановках, поэтому используют открытые методики подсчета результатов с надлежащей вентиляцией помещений и закрытые, которые являются более предпочтительными, так как предполагают отсутствие прямогоконтактамежду продуктами реакции и воздушной средой.

Наиболее точной является методика ПЦР в реальном времени (real time ПЦР). Ее особенностью является подсчет количества амплифицированных ДНК по мере их накопления после каждого цикла, а не в конце постановки ПЦР.

Даже количественная ПЦР не всегда позволяет отдифференцировать латентную и реактивированную инфекции. В этом случае рекомендуют использовать ПЦР обратной транскрипции, с помощью которой подсчитывают количество вирусной м-РНК, которое свидетельствует об интенсивности экспрессии вирусных генов. ПЦР является точным методом, так как для получения результата достаточно иметь в пробе всего одну молекулу ДНК возбудителя. Чувствительность ПЦР составляет 98%, а специфичность – 94 %. РезультатыПЦР можно получить уже через 3-6 часов после начала проведения.В стоматологической практике ПЦР широко применяется в диагностических целях. Установлена зависимость уровня вирусной активности в ротовой жидкости от степени тяжести герпетической инфекции.

Определения вирусных антигенов возможно при помощи реакции иммунофлюорисценции.

Этот метод основан на использовании иммуноглобулинов, меченных красителями и дающих зеленовато-желтую или красную флюорисценцию. Результаты метода учитывают при люминисцентой микроскопии препаратов обработанных меченными антителами. Метод иммунофлюорисценции используют в двух вариантах: прямой (ПИФ) и непрямой (НИФ). При прямом методе красителями метят антитела, непосредственно взаимодействующие с антигеном. При непрямом методе с исследуемым антигеном взаимодействуют специфические антитела, а уже с ними антивидовые антитела, меченые флюорохромом. Эти методы в какой то мере дублируют результаты ПЦР и могут быть полезны для исключения ложноположительных или ложноотрицательных результатов ДНК-диагностики. Чувствительность метода – 55-75 %, специфичность – 90 %. Метод нашел широкое применение в стоматологической практике для уточнения диагноза.

Серологические методы диагностики герпеса:

(реакции нейтрализации, связывания комплемента, гемагглютинации, иммунофлюорисценции и др.) позволяют оценить характер и напряженность специфического гуморального иммунитета. Все эти методы позволяют с разной степенью достоверности установить факт инфицирования пациента с вирусом. Диагностика основывается на наличии противогерпетическихIg M и Ig G. Наличие специфического Ig M свидетельствует об остроте процесса (первичная инфекция, реинфекция, реактивация). При первичной герпесвирусной инфекции противогерпетический Ig M появляется на 7-14 сутки после инфицирования и циркулирует 1-3 месяца. У отдельных лиц может сохраняться на протяжении длительного времени, давая ложную информацию об остроте процесса. Противогрепетические Ig G являются антителами вторичного иммунного ответа. При первичной инфекции выявляются во второй половине инфекционного процесса, а также при латентной, персистирующей инфекции и реактивации вируса. Рекомендуют применять метод парных сывороток, оценивая титр специфических антител с промежутком в 2-3 недели. Однако четырехкратное повышение титра специфическогоIg G является диагностическим критерием лишь при первичном инфицировании. Проведение серологических исследований позволяет оценить иммунный статус организма. Так, расхождение между показателями ПЦР, свидетельствующими о высокой репродуктивнойактивности вируса, и данными серологических исследований, показывающими низкий титр специфических антител, свидетельствует о недостаточности специфического гуморального иммунного ответа и является показанием к назначению заместительной терапии (препаратов специфических иммуноглобулинов) или средств, повышающих антителогенез (полиоксидоний, спленин и др.).

Иммунологические исследования являются обязательными при манифестных формах инфекции, так как вирус способен оказывать иммуносупрессивное действие на зараженный организм. Результаты таких исследований позволяют выявить иммунный дефект и назначить рациональную терапию. Метод применяется для выбора средств иммунотерапии и оценки их эффективности при лечении герпетических стоматитов.

Таким образом, диагностическими критериями герпетической инфекции полости рта являются:

-выявление вирусных агентов в крови, слюне, соскобах и мазках-отпечатках с элементов поражения достоверными методами: ПЦР, методом иммунофлюорисценции;

- в спорных случаях для экспресс-диагностики необходимо проводить цитологическое исследование с целью выявления клеток Тцанка;

- для диагностики первичной герпетической инфекции важным является выявление вирус-специфических иммуноглобулинов M и G.

При постановке диагноза обязательно учитывают наличие клинических признаков герпетической инфекции (типичных элементов поражения).

Для назначения рациональной противовирусной и иммунотерапии рекомендуется проведение следующих исследований:

- определение противогерпетических антител классаM, G и А для оценки напряженности специфического гуморального иммунитета;

- иммунологическое исследование проводят при тяжелом или атипичном течении и частых рецидивах герпетической инфекции, при низкой чувствительности к лечению ацикловиром и его аналогами.

[youtube.player]