Возбудитель холеры биологические свойства

История открытия возбудителя холеры.

I период (до 1817 г.) – заболеваемость холерой не выходила за пределы Индии с эпицентром в дельте рек Ганг и Брахмапутра.

II период (1817-1926 гг.) – с развитием торговли по караванным путям купцов холера проникает за пределы Индии на другие страны и континенты, вызывая 6 пандемий. В России с 1823 по 1926 годы переболело 5,6 млн. человек, из них погибли более 2 млн. (около 40%).

III период (1926-1961 гг.) – отмечается снижение заболеваемости холерой во всем мире (спородические случаи в Индии и Африке).

IV период (1961 г. – настоящее время) – 7 пандемия холеры.

Особенности 7 пандемии холеры:

v берет свое начало не из Индии, а из Индонезии (остров Сулавеси);

v распространяется в две волны: 1 – до 1991 года (Индонезия); 2 – с 1991 года (охватывает страны Южной и Северной Америки);

v более продолжительна;

v смена биовара V. cholerae asiaticae на V. eltor;

v высокий процент формирования вибрионосительства;

v течение болезни в виде стертых, атипичных форм.

Биовары : V. cholerae cholerae (asiaticae, classicae)

V. cholerae eltor

V. cholerae bengalii ( О 139)

Всего род Vibrio включает 36 видов (V. parahaemolyticus, V. vulnificus, V. metschnigovii, V. proteus, V. albensis, V. alginoluticus, V. mimicus, V. damsela… – возбудители холероподобных заболеваний )

Морфология и тинкториальные свойства.

Строгий аэроб (факультативный анаэроб, но лучше растет в аэробных условиях), хемоорганогетеротрофы, оптимальная температура роста 37 0 С, время культивирования – 6-24 часа, хорошо растет на обычных питательных средах, но требователен к pH (галофил), оптимальная pH 8,0-9,0. В 1% щелочной пептонной воде через 6-8 часов отмечается рост в виде нежной, тонкой, голубоватой пленки (при встряхивании разрушается). На плотной среде (щелочной агар) через 10-12 часов вырастают мелкие (1,5-2 мм), маслянистые, гладкие, прозрачные, голубоватые колонии с ровным краем (S-формы). При длительном культивировании колонии увеличиваются в размерах, становятся мутными, с плотным центром, пигментированные (коричневого или желтого цвета), шероховатые (R-формы), бактерии из них не чувствительны к бактериофагам, антибиотикам и не агглютинируются О-сывороткой. На щелочно-кровяном агаре V. eltor дает зону гемолиза. На ТСBS-агаре (с тиосульфатом, цитратом, солями желчных кислот и сахарозой) образуют желтые колонии.

Активны, оксидазоположительны, V. cholerae eltor и V. cholerae bengalii могут давать положительную реакцию Фогеса-Проскауэра, расщепляют многие сахара (глюкозу, лактозу, мальтозу, маннит, гликоген, крахмал…) с образованием кислоты без газа. По способности ферментировать сахарозу, арабинозу и маннозу все вибрионы по классификации Хейберга разделены на 6 групп. Холерные вибрионы принадлежат к 1 группе – расщепляют сахарозу, маннозу и не расщепляют арабинозу. Также не сбраживают рамнозу, дульцит, инулин, инозит. Разжижают желатин в виде воронки, образуют индол, разлагают мочевину до аммиака, восстанавливают нитраты в нитриты, свертывают кроличью плазму, разжижают свернутую сыворотку, молоко. Н 2 S не образуют.

v О-антиген – группо- и типоспецифический, термостабильный ЛПС КС. В роду Vibrio по О-антигену выделяют более 200 серогрупп. Холерный вибрион относится к О1 и О139 группам. Внутри О1 группы О-антиген неоднороден и включает три компонента – А, В и С, по сочетанию которых выделяют три серотипа: АВ – Огава (Ogava), АС – Инаба (Inaba), АВС – Гикошима (Hicoshima). Вибрионы, не агглютинирующиеся сыворотками групп О1 и О139, называются неагглютинируемыми – НАГ вибрионами, вызывают холероподобные заболевания.

v Н-антиген – термолабильный, общий, белковой природы.

v Эндотоксин – стимулирует выработку вибриоцидных антител.

v Холероген – запускает синтез антитоксических антител.

v Эндотоксин – ЛПС клеточной стенки, термостабильный, вызывает местное воспаление в тонком кишечнике, его сокращение (запускает каскад арахидоновой кислоты, что приводит к синтезу простагландинов E, F) и индуцирует синтез антител.

v Экзотоксин=энтеротоксин=холероген (основная роль в патогенезе) – термолабильный белок, состоит из двух компонентов: А и В. Компонент В – нетоксичный, обладает способностью соединяться с рецепторами эпителиальных клеток тонкого кишечника, облегчая проникновение в клетку компонента А. Компонент А составляют субъединица А 1 (активный центр) и субъединица А 2 , связывающая А и В. Субъединица А 1 активирует внутриклеточную аденилатциклазу, приводя к увеличению внутриклеточного содержания цАМФ и выходу жидкости и электролитов из клеток либеркюновых желез в просвет кишечника.

v Гемолизин V. eltor.

Структурные и химические компоненты клетки:

v Жгутик, обусловливающий движение, а также преодоление слизистого слоя и взаимодействие с эпителиальными клетками;

v Фактор G – фактор проницаемости.

Выживаемость во внешней среде зависит от pH среды, вибрионы чувствительны к действию прямых солнечных лучей, высокой температуре (при 50 0 С погибают за 30 минут, 100 0 С – через несколько секунд), высушиванию. В открытых водоемах сохраняются от нескольких дней до 3 месяцев, в почве от 8 дней до 3 месяцев, в выгребных ямах – до 3-4 месяцев, в морской воде до 47 суток, в сточных водах – 1-2 суток. Сохраняются в молоке и молочных продуктах от 5 дней до 4 недель, на фруктах 1-2 дня, на сырых овощах – 2-4 дня. Устойчивы к действию низких температур (во льду могут сохраняться до 1-4 месяцев). Высокочувствительны к кислотам (KMnO 4 – 15 минут), хлорсодержащим дезсредствам (10 минут), антибиотикам тетрациклинового ряда, V. eltor устойчив к полимиксину в отличие от V. cholerae asiaticae.
Роль в патологии.

Холера – острое инфекционное особо-опасное заболевание с тенденцией к эпидемическому и пандемическому распространению, протекающее по типу острого гастроэнтерита с резким нарушением водно-солевого обмена, сопровождающееся обезвоживанием и тяжелой интоксикацией.

Источник инфекции – больной человек или вибриононоситель.

Механизм заражения: фекально-оральный (пути – водный, алиментарный, контактно-бытовой). Определенную роль в распространении холеры играют мухи.

Патогенез и клинические особенности.

Входные ворота – тонкий кишечник, основная роль принадлежит холерогену, вызывающему дегидратацию и обессоливание организма. Вибрион находится только в тонком кишечнике, размножается, не распространяясь по организму, вибрионемия отсутствует.

Инкубационный период – от нескольких часов до 2-3 дней.

Клинические периоды холеры:

1. Холерный энтерит: на фоне нормальной температуры редкий жидкий стул, боли в животе, тенезмы, через 1-2 дня присоединяется рвота.

3. Холерный алгид – t 35C, кожные покровы серые, синюшные, морщинистые, лицо Гиппократа (facies hippocratica): нос заострен, глаза запавшие, выступающие скулы, афония, гипотония. Смерть наступает от сердечно-сосудистой и почечной недостаточности в результате обезвоживания и интоксикации.

Постинфекционный иммунитет – напряженный, непродолжительный, антимикробный и антитоксический.

Микробиологическая диагностика.

Исследуемый материал – фекалии, рвотные массы, желчь, секционный материал, мухи, пищевые продукты, вода, ил, гидробионты, сточные воды.

1. Бактериоскопический метод.

2. Бактериологичекий метод (основной).

3. Экспресс-методы – РИФ, реакция иммобилизации вибрионов О1-сывороткой и бактериофагом, ПЦР.

4. Серологический метод – РА, РПГА, РИФ, ИФА.

Предварительный положительный ответ при диагностике холеры выдается через 5-6 часов на основании обнаружения в посевах культур, агглютинирующихся на стекле холерной О1-сывороткой (в разведении не менее 1:100) и положительном результате ускоренных методов исследования.

Окончательный положительный ответ выдается через 18-48 часов на основании выделенных культур, имеющих типичные морфологические признаки с учетом данных развернутой реакции агглютинации с холерными сыворотками О1, Огава, Инаба, пробы с холерными диагностическими фагами, принадлежности к 1 группе Хейберга.

Неспецифическая: раннее выявление больных и носителей, усиление санитарно-гигиенического надзора, санитарно-просветительская работа, введение карантинных мероприятий.

Специфическая – вакцинация по эпидемиологическим показаниям одной из вакцин:

v холероген-анатоксин в сочетании с О-антигеном холерного вибриона Инаба и Огава;

v химическая вакцина из штаммов классического вибриона и V. eltor (химическая бивалентная таблетированная вакцина);

v убитая вакцина из штаммов Огава и Инаба или штаммов вибриона Эль-Тор.

Неспецифическое: восстановление водно-электролитного баланса, антибактериальные препараты (тетрациклин, левомицетин, ко-тримоксазал, фуразолидон и т.д.).

Специфическая – бактериофаги (в практике не применяются).

В статье речь пойдет о холере, возбудитель которой довольно стоек в окружающей среде. Это болезнь, известная человечеству достаточно давно. Причины ее появления были выявлены лишь недавно, чего не скажешь о существовании самого возбудителя. Чума, сибирская язва и холера относятся к особо опасным заболеваниям, которые отличаются высокой контагиозностью, тяжелым течением и высокой смертностью. Сегодня именно они являются основой для создания биологического оружия. И хотя современная статистика не дает оснований для беспокойства, минимальные знания об опасных болезнях и их возбудителях могут быть полезны.

Исторический очерк

Именно с середины 19-го века начались масштабные исследования по определению возбудителя холеры. В Европу инфекция прорвалась с войнами и по торговым путям из Азии и Египта. Именно в Египет отправилась в 1881 году исследовательская экспедиция, в которую входил известный бактериолог Роберт Кох (1843-1910). Именно им были открыты возбудители холеры и туберкулеза (вибрионы и палочки Коха). Робертом Кохом были разработаны и первые профилактические рекомендации в отношении данного заболевания.

В соответствии с перечнем Всемирной организации здравоохранения, бактерии-возбудители чумы и холеры, а также сибирской язвы, отнесены к патогенам, вызывающим особо опасные заболевания.

Пандемии холеры

Последняя пандемия была объявлена в 1962 году. Именно тогда на сцене появился вибрион Эль-Тор. К 1970 году пандемия охватила 39 стран. Она унесла жизни более 40 тысяч человек.

Мировая эпидемиологическая ситуация оставляет определенную настороженность. Так, эпидемия холеры в Японии в июне 1977 года распространилась уже к августу на Ближнем Востоке. Она стала самой большой эпидемией в данном регионе за предыдущие 20 лет. За один месяц холера охватила Сирию, Иорданию, Иран и еще 10 ближневосточных государств.

Рыцари борьбы с холерой

Как уже говорилось, Роберт Кох в 1883 году подробно описал холерный вибрион и симптомы болезни. В том же году будущий лауреат Нобелевской премии по исследованию иммунитета Илья Ильич Мечников (1845-1916) добровольно принял культуру холерного вибриона, чтобы на собственном опыте изучить течение болезни. Удивительно, но он не только выздоровел, но и после болезни у него улучшилось зрение и характер.

Бактерии или вирусы?

Возбудителями холеры являются холерные вибрионы (Vibrio cholerae) – грамотрицательные анаэробные бактерии. Вибрион имеет форму изогнутой палочки и снабжен жгутиком. Возбудитель холеры, микробиология которого изучена довольно хорошо, обладает геномом из двух хромосом и размножается в планктоне пресных и соленых водоемов. Известно более 150 серотипов холерного вибриона. Каждый серотип возбудителя холеры относится к условно-патогенным организмам и отличается по соматическому антигену. В зависимости от серотипа и пути попадания инфекции в организм, отличается и течение ее болезни. Но только два серотипа вызывают симптомы недуга.

Бактерия-возбудитель холеры устойчива при температурах от 16 до 40 градусов, не гибнет при заморозке. Долгое время вибрион проявляет жизнестойкость в водоемах, личных вещах и фекалиях больного. Погибают вибрионы при кипячении, под действием дезинфицирующих средств, содержащих хлор.

Как вибрионы попадают в организм

Что происходит в организме

Бактерии-возбудители холеры являются тропными к тонкому кишечнику человека. Проникнув в организм, холерные вибрионы активно размножаются в тонком кишечнике, повреждают его слизистые оболочки и вырабатывают огромное количество токсинов. Именно токсины (экзотоксины и эндотоксины) вибрионов-возбудителей холеры вызывают нарушения водно-солевого баланса, обезвоживание, нарушение работы нервной системы. Все эти воздействия приводят к судорогам и смерти больного в результате дегидрационного шока. Токсины возбудителя холеры через поврежденные слизистые кишечника быстро попадают в кровоток и вызывают острую интоксикацию и ослабление организма, что повышает риск присоединения вторичных инфекций.

Диагностика холеры

Методы простой микроскопии способны установить наличие возбудителя холеры уже в первые часы заражения. Как это делается?

Классическим методом для определения возбудителя холеры является методика посева на питательные среды. Для анализа берут рвотные массы или фекалии больного. Анализ готов в течении 36-48 часов.

Ускоренные методики не являются достаточно достоверными, а служат лишь подтверждением основной диагностики.

Симптоматика и клиническая картина

Инкубационный период болезни составляет от нескольких часов до 6 дней с момента попадания возбудителя холеры в организм. Начало болезни всегда острое и сопровождается следующими симптомами:

Частый (до 15 раз в сутки) и жидкий стул. Особенность – это отсутствие зловонного запаха и урчание в животе.
Тошнота и рвота.
Острые боли в брюшной полости.
Повышение температуры до 40 градусов, а затем ее постепенное уменьшение до ощущения постоянного озноба.
Обезвоживание и чувство жажды.
Головокружения, слабость.

Лечение болезни

При первых симптомах необходимо срочное оказание медицинской помощи. Больной госпитализируется в инфекционное отделение в отдельный бокс. Лечение направлено на устранение патогена и восстановление водно-солевого баланса в организме. Кроме антибактериальной терапии, назначаются препараты для нормализации работы пищеварительного тракта и восстановление слизистых кишечника. В острой форме предписана строгая диета, в которой преобладают продукты с большим содержанием солей калия. Общий курс лечения длится до 14 дней.

Прогноз может быть положительным только при своевременном стационарном лечении. После выздоровления формируется иммунитет, но только к данному серотипу холеры. Инфицирование другими серотипами вполне возможно.

Профилактика заболевания

Профилактические санитарно-гигиенические мероприятия состоят из государственных и индивидуальных, а также включают в себя вакцинацию.

Среди мероприятий можно выделить следующие:

Предупреждения занесения холерного вибриона из очагов инфекции.
Раннее выявление и своевременная изоляция больных.
Меры по обеззараживанию водоемов общего пользования.
Обеззараживание питьевой воды.
Личная гигиена и термическая обработка пищи.
Применение пероральных вакцин.

Противохолерные вакцины

Первые вакцины появились в 1800-х годах, а пероральные вакцины в 1990-х годах. Вакцина против холеры является базовой в системе здравоохранения и входит в перечень основных лекарственных средств Всемирной организации здравоохранения. Сегодня существует три сертифицированных более чем в 60 странах пероральных вакцины – обычная и модифицированная WC/rBS, и CVD 103-HgR. Все они безопасны, побочными эффектами могут быть понос и умеренные боли в животе. В 85 % их защитное действие длится полгода, в 60 % - до года. Рекомендуется проведение вакцинации лицам с повышенным риском заражения, но они безопасны и эффективны для беременных и лиц с низким иммунным статусом.

Современная ситуация

Статистика Всемирной организации здравоохранения говорит о том, что в мире ежегодно заболевает холерой до 5 миллионов человек, из которых 100 тысяч умирает. Заболевание холерой коррелирует с уровнем жизни и распространено в пятидесяти странах мира. Чем ниже социально-экономический уровень жизни, тем выше риск встретиться с возбудителями холеры и чумы. Высокозаразный холерный вибрион и сегодня активен в Африке, Азии и Индии. Только в 2010 году во время эпидемии холеры в Эфиопии умерло около 8 тысяч человек.

А что у нас?

Вспышка чумы вполне возможна на Алтае. В 2016 году тут заболел десятилетний мальчик, который вместе с семьей разделывал тушки сурков.

А вот на Ямале в 2016 году у 36 человек диагностировали сибирскую язву. Переносчиками стали невакцинированные северные олени.

И вновь продолжается бой

Несмотря на то что в арсенале современной медицины есть эффективные вакцины, действенные антибиотики и сильные средства дегидратации, холера продолжает удивлять своими вспышками. 53 страны мира регулярно посылают отчеты во Всемирную организацию здравоохранения в соответствии с положением о международном надзоре за особо опасными инфекциями. Дает эти отчеты и Российская Федерация.

Таксономия. Возбудитель холеры – холерный вибрион Vibrio cholerae относится к отделу Gracilicutes, семейству Vibrionaceae, роду Vibrio. Внутри вида Vibrio cholerae различают два биовара: biovar cholerae classic (выделенный Р. Кохом) и biovar eltor (открытый супругами Готшлих).

Морфологические и тинкториальные свойства. Это небольшие (2-4 х 0,5 мкм) изогнутые в виде запятой грамотрицательные палочки, очень полиморфные, не образуют спор, капсул. Монотрихи, обладают высокой подвижностью, что является важным диагностическим признаком.

Культуральные свойства. Холерный вибрион – факультативный анаэроб, предпочитающий аэробные условия и быстро погибающий в анаэробных. К питательным средам неприхотлив. Щелочелюбив. Элективными для холерного вибриона являются 1% щелочная пептонная вода (ПВ), щелочной агар. Оптимальная температура для роста 37°.

На 1% ПВ (рН=8,5-9,0) холерный вибрион опережает в росте бактерии кишечной группы и образует через 6-8 часов нежную голубоватую пленку. На плотной среде через 12-14 часов образует мелкие голубоватые колонии.

Биохимические свойства хорошо выражены.

Сахаролитические свойства. Холерный вибрион сбраживает с образованием кислоты многие углеводы (глюкозу, сахарозу, мальтозу, маннит, лактозу, гликоген, крахмал и др.).

При идентификации возбудителя наиболее важным является определение ферментации маннозы, арабинозы и сахарозы. По способности разлагать эти 3 углевода Хейберг все вибрионы семейства Vibrionaceae разделил на 8 групп.

Холерные вибрионы разлагают только маннозу и сахарозу и принадлежат к I группе Хейберга.

Протеолитические свойства. Холерные вибрионы разжижают желатин, свертывают молоко, расщепляют белки до NH₃ и индола. H₂S не образуют. Восстанавливают нитраты в нитриты образуют оксидазу.

Антигенная структура. Холерные вибрионы имеют термостабильные О- и термолабильные Н-антигены.

По структуре О-антигенов выделяют более 150 серогрупп. Возбудителя холеры относят к 01 и 0-139 серогруппам, все другие представители вида V. сholerae не являются возбудителями холеры, но могут вызывать другие заболевания (например, гастроэнтериты).

О-антиген 01 группы холерных вибрионов не однороден и состоит из А, В, С компонентов. В зависимости от их сочетания различают 3 серовара возбудителя холеры: Огава (А, В), Инаба (А, С), Гикошима (А, В, С).

Н-антиген неспецифичен для V. сholerae, является общим для вего рода Vibrio.

Факторы патогенности. Основной фактор патогенности – способность к токсинообразованию. Холерные вибрионы образуют эндо- и экзотоксин.

Эндотоксин – термостабильный липополисахарид с иммуногенными свойствами (индуцирует синтез вибриоцидных антител), но в патогенезе существенной роли не играет.

Экзотоксин – термолабильный белок, состоящий из нескольких фракций, наиболее важной из которых является холероген. Молекула холерогена включает 2 компонента: А и Б. Компонент Б взаимодействует с рецепторами эпителия тонкой кишки, облегчая проникновение в клетку компонента А. Компонент А активирует фермент аденилатциклазу и усиливает синтез циклических аденозинмонофосфатов (цАМФ), что приводит к гиперсекреции энтероцитами воды и солей в просвет кишечника и к диарее.

Холерные вибрионы секретируют также экзотоксины, аналогичные токсинам токсигенных эшерихий, шигелл, сальмонелл, в частности, экзотоксины с цитотоксическим действием, вызывающим гибель клеток эпителия тонкой кишки.

Возбудители холеры продуцируют ферменты агрессии – фибринолизин, плазмокоагулазу, лецитиназу, нейраминидазу, коллагеназу, гиалуронидазу

Патогенность связана так же с подвижностью вибриона, ферментом муциназой (разжижающей слизь и обеспечивающей проникновение возбудителя к поверхности эпителия) и с адгезивными свойствами: белки наружной мембраны способствуют прикреплению вибрионов к эпителиоцитам, обеспечивая им возможность размножаться и не быть выведенными из организма человека.

Резистентность относительно невысока. При 60° погибают в течение 5 минут, при кипячении – мгновенно. Общепринятые концентрации дезинфицирующих веществ убивают их быстро. Очень чувствительны к кислотам, высаливанию, солнечному свету

Однако низкие температуры переносят хорошо: во льду сохраняются несколько месяцев, в испражнениях, почве, воде – от нескольких недель до 2-3 месяцев.

Более устойчив во внешней среде холерный вибрион Эль-Тор.

Патогенность для животных. В естественных условиях животные не болеют холерой.

Эпидемиология. Источник инфекции – больной или вибрионоситель. Механизм передачи- фекально-оральный. Пути передачи - водный(основной), пищевой, контактно-бытовой.

Факторы передачи – загрязненные выделениями больного руки, предметы обихода, вода, пищевые продукты, мухи. Установлено, что возбудитель холеры Эль-Тор способен размножаться в организме рыб, ракообразных, простейших, в сине-зеленых водорослях и других обитателях водоемов. На этом основании сделано заключение о сапронозном характере инфекции, и возможности инфицирования при употреблении в пищу сырых или термически недостаточно обработанных морских и речных продуктов.

В настоящее время наиболее распространена холера, вызываемая возбудителем Эль-Тор.

Заболевание чаще отмечается в теплое время года. Восприимчивость к инфекции высокая, однако важное значение имеет состояние кислотности желудка и другие факторы неспецифической резистентности.

С 1817г зарегистрировано 7 пандемий холеры.

Патогенез. Заражение происходит перорально. Большинство вибрионов гибнет в кислой среде желудка. Однако при снижении желудочной секреции (как функциональном разбавление желудочного содержимого водой, пищей так и патологическом например, гастрит со сниженной кислотностью) вибрионы проходят через желудок, попадают в тонкую кишку, где прикрепляются к энтероцитам, размножаются и поражают их ферментные системы без развития воспалительного процесса.

Ведущую роль в патогенезе играет холероген, который нарушает водно-солевой обмен, приводит к резкому обезвоживанию организма и ацидозу.

Клиника. Инкубационный период от нескольких часов до 5 суток. Заболевание начинается остро, часто внезапно, в ночные или утренние часы с безболезненного поноса и редко (в 10-20% случаев) – повышения температуры.

Частота дефекации быстро нарастает до 10 и более раз в сутки. Испражнения не имеют зловонного запаха и в 20-40% случаев приобретают вид рисового отвара. При холере боли в животе не характерны.

Первая стадия – холерный энтерит, характеризуется диареей с частотой дефекациине более 10раз в сутки, продолжается 1-3 дня. На этой начальной стадии заболевание может закончиться (легкая форма холеры) или перейти в следующую стадию – стадию гастроэнтерита (форма средней тяжести). На этой стадии к поносу присоединяется повторная рвота без чувства тошноты. Больной теряет до 30 литров жидкости в сутки.

Появляется тахикардия, кровяное давление падает, уменьшается количество мочи (олигурия) вплоть до анурии.

В алгидной стадии при отсутствии лечения летальность достигает 60%.

Иммунитет непрочный и непродолжительный. Нередко отмечают случаи повторного заражения.

Лабораторная диагностика. Материалом для исследования являются испражнения рвотные массы, желчь, пищевые продукты, вода, секционный материал, смывы с объектов внешней среды, гидробионты, мухи и др.

Основным в лабораторной диагностике холеры является бактериологический метод.

Материал засевают на элективные среды – щелочную пептонную воду и щелочной питательный агар. Чистую культуру идентифицируют по морфологическим культуральным, биохимическим свойствам, чувствительности к холерному фагу, агглютинабельности противохолерной О-сывороткой и типовыми агглютинирующими сыворотками Инаба и Огава.

При идентификации чистой культуры определяют ее гемолитические свойства (классический холерный вибрион не вызывает гемолиза бараньих эритроцитов, а биовар Эль-Тор может их гемолизировать); способность агглютинировать куриные эритроциты (классический холерный вибрион не агглютинирует их в отличие от биовара Эль-Тор); чувствительность к полимиксину (классической холерный вибрион чувствителен к полимиксину, биовар Эль-Тор – нет).

Серологическое исследование является вспомогательным и применяется для ретроспективной диагностики холеры, выявления вибрионосителей и оценки иммунитета. Определяют агглютинины (в реакции агглютинации и РНГА); вибриоцидные антитела (в реакции лизиса) и антитоксины.

К экспресс-методам диагностики холеры относятся:

1. Иммобилизация вибрионов противохолерными сыворотками и типовыми холерными фагами.

2. Иммунофлюоресцентный метод.

Препараты из исследуемого материала обрабатывают флюоресцирующей противохолерной сывороткой и исследуют в люминесцентном микроскопе. В положительном случае в препарате наблюдается яркое желто-зеленое свечение в виде блестящего ободка по периферии клетки.

3. Метод микроагглютинации нативного материала.

Реакция ставится на стекле с использованием холерной О-сыворотки. При наличии в нативном материале вибрионов через 5-10 минут в капле с сывороткой выпадают хлопья.

4.Определение антигена возбудителя в исследуемом материале с помощью ДНК-зондов.

Препараты для лечения и профилактики. Терапия предусматривает восполнение жидкости и электролитов плазмозамещающими жидкостями (глюкозосолевыми растворами). Проводят антибактериальную терапию препаратами тетрациклинового ряда, левомицетином, фторхинолонами.

Главные профилактические мероприятия – неспецифические санитарно-гигиенические и карантинные.

Для специфической иммунопрофилактики имеются:

1) убитая вакцина из штаммов Огава и Инаба;

2) холероген – анатоксин;

3) бивалентная вакцина из анатоксина и О-антигена Огава и Инаба.

Эффективность вакцинации не превышает 60-70%. Невосприимчивость после их применения сохраняется в течение 3-6 месяцев, поэтому вакцинопрофилактика имеет вспомогательное значение и применяют ее по эпидемическим показаниям.

В очагах холеры хороший профилактический эффект дает прием тетрациклина.

Для лечебно-профилактических целей используется поливалентный холерный бактериофаг.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Холера – особо опасная инфекционная болезнь, с диарейным синдромом, фекально-оральным механизмом передачи возбудителя, водным, пищевым и контактно-бытовым путями распространения инфекции.

Холерные вибрионы относятся к сем. Vibrionaceae, роду Vibrio, виду Vibrio cholerae, который включает как патогенные, способные вызывать заболевания, склонные к эпидемическому и пандемическому распространению, так и свободноживущие в воде вибрионы, безопасные для человека или обусловливающие спорадические случаи диарей и инфекций с внекишечной локализацией возбудителя.

Холерные вибрионы грамотрицательные, аспорогенные полиморфные прямые или слегка изогнутые палочки, варьирующие в размерах (0,2-0,6 мкм в ширину и 1,5-3,0 мкм в длину), с одним полярно расположенным жгутиком, благодаря которому очень подвижны.

Холерные вибрионы хорошо растут на щелочных питательных средах pH 7,6-8,6, содержащих до 2% NaCl. Оптимальная температура выращивания - 35-38 ºC. На щелочных жидких питательных средах - мясо-пептонном бульоне (МПБ) и 1% пептонной воде (ПВ) - через 6-8 ч инкубирования при 37 ºC наблюдается образование нежной пленки на поверхности и легкое помутнение среды. На пластинках щелочного мясо-петонного агара (МПА) холерные вибрионы в типичной S-форме через 18-24 ч выращивания образуют гладкие, прозрачные, влажные с ровным краем колонии, диаметром 2-3 мм. Могут встречаться атипичные колонии – шероховатые, мутные, пигментированные (коричневые или желтые), коккоподобные. На элективной среде TCBS на зеленом фоне среды колонии вибрионов круглые, гладкие с ровным краем, плоские, желтого цвета. При более длительной инкубации желтый цвет колоний часто переходит в зеленый цвет.

Холерные вибрионы, как и другие представители рода Vibrio, продуцируют индофенолоксидазу, ферментируют до кислоты без газа глюкозу в аэробных и анаэробных условиях, декарбоксилируют лизин и орнитин, не обладают дигидролазой аргинина. Холерные вибрионы относятся к 1 ферментативной группе по Хейбергу: расщепляют до кислоты сахарозу и маннозу и не разлагают арабинозу. Отношение к лактозе непостоянное. Вибрионы разжижают желатину, казеин, фибрин; вырабатывают лецитиназу, липазу, нейраминидазу, хитиназу, пенициллиназу.

V.cholerae по наличию специфического O-антигена распределяются на серологические группы, их более 200. Возбудителями холеры являются холерные вибрионы O1 и O139 серологических групп. Холерные вибрионы других не O1/не O139 серологических групп могут вызывать спорадические или групповые случаи диарей, не склонные к эпидемическому распространению.

Холерные вибрионы, относящиеся к О1 серогруппе делятся на три серовара - Огава, Инаба, Гикошима. Принадлежность культур к V. cholerae О1 серогруппе устанавливают по результам агглютинации видоспецифической холерной сывороткой О1. Вариантоспецифические холерные сыворотки Огава и Инаба позволяют определить соответственно серовар культуры. Холерные вибрионы, реагирующие в одинаковых титрах с сыворотками обоих вариантов – Инаба и Огава, относятся к серовару Гикошима. Типичные штаммы холерных вибрионов в S-форме агглютинируются видо- и вариантоспецифической сывороткой не меньше, чем до 1/2 титра. Культуры в R-форме взаимодействуют с холерной RO-сывороткой, при этом агглютинация с видоспецифической холерной сывороткой О1 серогруппы снижена или отсутствует совсем.

Холерные вибрионы в пределах O1 серогруппы делятся на два биовара: классический и эльтор, имеющие существенные фенотипические и генетические отличия.

При выделении атипичных культур проводят дополнительные исследования. Штаммы, агглютинирующиеся диагностическими сыворотками О1, RО, Инаба (Огава) ниже 1/2 титра или агглютинирующиеся только RО сывороткой, с полной или частичной утратой способности лизироваться диагностическими холерными бактериофагами, изучают в тестах, определяющих их принадлежность к роду Vibrio (табл. 14). Слабоагглютинирующиеся холерной О1 сывороткой и фагорезистентные культуры исследуют также в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА), флюоресцентно-серологическим методом (МФА), реакцией иммобилизации вибрионов (РИВ) или адсорбцией по Кастеллани. Культуру, агглютинирующуюся сывороткой О139, относят к холерным вибрионам О139 серогруппы.

Если культура не агглютинируется холерными сыворотками О1, О139, но по совокупности признаков относится к виду холерных вибрионов, ее изучают в реакции агглютинации с набором диагностических холерных сывороток О2-О83 серогрупп по отечественной классификации. Кроме того, штаммы V. cholerae не О1/О139 серогрупп типируют бактериофагами диагностическими холерными ТЭПВ 1-7. Энтеропатогенные холерные вибрионы не О1 группы относятся преимущественно к О2, О5, О6, О8, О9, О14, О17, О22, О24, О28, О34, О36, О41, О42, О47, О5О серогруппам и, как правило, лизируются фагами ТЭПВ 1, 4, 7.

Основные дифференциальные признаки рода Vibrio

и некоторых других микроорганизмов

Признаки	Роды сем. Vibrionaceae	Enterobacteriaceae	Pseudomonadaceae
Vibrio	Aero-monas	Enhydrobacter	Plesiomonas	Photobacterium
V.cholerae	другие виды
Окраска по Граму, морфология	Грамотрицательные полиморфные прямые или слегка изогнутые палочки
Подвижность	+	+(–)	+(–)	–	+	+	+(–)	+
Оксидаза	+	+(–)	+	+	+	+(–)	–	+(–)
Рост на средах без NaCl	+	– (+)	+	+	+	–	–	–
Чувствительность к 0- 129 1)	+	+(–)	–	–	+	+	–	–
О/Ф глюкозы в среде Хью-Лейфсона	+/+	+/+	+/+	+/+	+/+	+/+	+/+	+/–
Газ из глюкозы	–	– (+)	+(–)	–	–	+	+/–	–
Лизиндекарбоксилаза	+	+(–)	– (+)	+	+	+	+/–	– (+)
Орнитиндекарбокси лаза	+	+/–	– (+)	+	+	+	+/–	– (+)
Аргининдигидролаза	–	– (+)	+	+	+	+	–/+	+/–
Ферментация: лактозы	–	– (+)	– (+)	–	+	Х	+/–	– (+)
маннита	+	+(–)	+(–)	Х	–	–	+(–)	+(–)
арабинозы	–	– (+)	+(–)	Х	–	–	+(–)	– (+)
сахарозы	+	+(–)	+	Х	–	– (+)	+/–	–
инозита	–	– (+)	–	Х	+	–	– (+)	Х
Образование: ацетилметилкарбинола	+(–)	– (+)	+(–)	–	–	+	– (+)	Х
индола	+	+(–)	+(–)	–	–	–	+(–)	+/–
нитратредуктазы	+	+(–)	+	+	+	+(–)	+	+/–
b-галактозидазы	+	+(–)	+	Х	+	+	– (+)	Х
желатиназы	+	+(–)	+	Х	–	+	– (+)	+/–
Биолюминесценция	– (+)	– (+)	–	Х	–	+	–	–
Мол. % G+C в ДНК	57-63	40-44	39-59	58-70

Примечания: 1) – бактериостатический агент 2,4-диамино-6,7-диизопропилптериоидин;

+ – положительный результат в 90 %;

- – отрицательный результат в 90 %;

+/– – положительный и отрицательный результаты встречаются в равной степени;

+(–) или –(+) – в скобках редко наблюдается результат.

Основными признаками дифференциации биоваров холерных вибрионов являются проба с холерными диагностическими фагами классическим и эльтор, реакция агглютинации с эритроцитами цыпленка или морской свинки, тест на чувствительность к 50 ед/мл полимиксина и образование ацетилметилкарбинола в реакции Фогес-Проскауэра (табл. 15).

Дифференциальные признаки биоваров V. cholerae О1

Признаки	Биовары
V. cholerae cholerae	V. cholerae eltor
Лизабельность холерными фагами: классический	+	–
эльтор	–(+)	+/–
Агглютинация эритроцитов	–	+(–)
Чувствительность к 50 ед полимиксина	+	–(+)
Образование ацетилметилкарбинола	–	+(–)

Условные обозначения см. в таблице 14.

Холерные вибрионы являются носителями умеренных фагов с низкой литической активностью. Известны фаги, активные в отношении холерных вибрионов O1 и не O1, включая O139 серологическую группу, а также с более узким спектром литического действия, в пределах отдельных групп штаммов, например ctx + и ctx¯ холерных вибрионов.

Одним из основных факторов вирулентности (и эпидемической значимости) холерных вибрионов, определяющих тяжесть клинической картины при холере, является холерный энтеротоксин, синтез которого контролируется кластером генов ctxAB.

Понятие эпидемической значимости базируется на определении комплекса показателей:

- прямые - выявление гена холерного токсина в ПЦР и определение активности его продукции на кроликах-сосунках;

- косвенные - отсутствие гемолитической, липазной активности, поздняя ферментация маннита, высокая адгезивная активность in vitro (на модели эритроцитов).

Холерные вибрионы имеют две хромосомы: большую размером 2 960 т.п.н. и малую размером 1 070 т.п.н.. На большой хромосоме V. cholerae расположены гены патогенности: ctxAB, кодирующий биосинтез CT, гены, определяющие продукцию дополнительных холерных токсинов, гены tcpA-F, кодирующие продукцию TCP, а также гены, необходимые для репликации, транскрипции, репарации ДНК, биосинтеза клеточной стенки и O-антигена. Биосинтез O1 антигена определяет кластер генов, обозначенный как wbe. Продукция O139 антигена кодируется кластером генов, также локализованном на большой хромосоме и имеющим обозначение wbf. Выявление с помощью ПЦР генов wbe и wbf, специфичных для холерных вибрионов O1 и O139 серологических групп, позволяет определить серогруппу возбудителя холеры. На малой хромосоме, помимо генов с неустановленной функцией, локализованы структурные гены hlyA, отвечающие за синтез термолабильного гемолизина, а также остров интегронов, содержащий гены, кодирующие антибиотикоустойчивость, и участвующий в приобретении новых генов. Следует отметить, что ген hlyA присутствует в хромосоме всех штаммов V. cholerae, как способных к биосинтезу термолабильного гемолизина, так и не продуцирующих этот белок. Однако в гене hlyA холерных вибрионов классического биовара, в отличие от такового V. cholerae эльтор, имеется делеция протяженностью 11 п.н., вследствие чего продукция гемолизина вибрионами этого биовара невозможна.

Штаммы холерных вибрионов O1 и O139 серогрупп, содержащие гены ctxAB и tcpA-F, вызывают холеру и являются эпидзначимыми. Эти штаммы не лизируют эритроциты барана в пробе Грейга. Эпидемически не значимые штаммы холерных вибрионов, не содержащие генов ctxAB и tcpA-F, лизируют эритроциты барана в пробе Грейга. Нетоксигенные (не содержащие гена холерного токсина) ctxAB варианты холерных вибрионов O1, также как и других серогрупп могут вызывать спорадические (единичные) или групповые (при общем источнике инфицирования) заболевания, не склонные к эпидемическому распространению.

Чувствительным и специфичным методом детекции ctxAB-оперона является генодиагностика на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР). Этот метод применяют при исследовании выделенной культуры, проб воды, испражнений больных холерой людей или сред накопления.

Наличие гена холерного токсина (ctxAB), независимо от его экспрессии, отличает токсигенные (эпидемические) от свободноживущих холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп; кроме того, в геноме токсигенных эпидемически значимых вариантов присутствует ряд генов, кодирующих синтез белка TOX T, передающего сигналы запуска синтеза холерного токсина (CT), токсинкорегулируемых пилей адгезии (TCP) и фактора колонизации (ACF). Известно, что свободноживущие атоксигенные холерные вибрионы О1 черезвычайно редко имеют tcp ген в своей хромосоме.

Обязательной проверке на модели кроликов-сосунков в отсутствии возможности определения гена холерного токсина подлежат следующие штаммы V. cholerae О1 и О139 серогрупп:

а) выделенные от людей:

- гемолизнегативные штаммы холерных вибрионов О139 серогруппы;

- гемолизпозитивные штаммы холерных вибрионов обеих серогрупп;

- гемолизотрицательные штаммы холерных вибрионов О1 серогруппы, атипичные по серологическим свойствам и устойчивые к фагу эльтор и ctx + ;

б) выделенные из объектов окружающей среды:

- гемолизотрицательные штаммы холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп, выделенные при отсутствии эпидемических осложнений по холере.

Для полной характеристики штаммов изучают чувствительность к антибиотикам (табл. 16).

Пограничные значения диаметров зон ингибиции роста (мм) и величин МПК (мкг/мл) антибиотиков в отношении Enterobacteriaceae

Последнее изменение этой страницы: 2016-12-30; Нарушение авторского права страницы

Читайте также:

Пожалуйста, не занимайтесь самолечением!
При симпотмах заболевания - обратитесь к врачу.

Антибактериальные препараты

Содержание в диске (мкг)

Диаметры зон ингибиции (мм)

МПК (мкг/мл)

Устойчивые

Промежуточные

Чувствительные

Устойчивые

Промежуточные

Чувствительные

Беталактамы

Ампициллин*

=17

>=32

=23

>=64

16-32

=21

>=64

16-32

=21

>=32

=18

>=64

=15

>=16

=15

>=16

=17

>=64

=15

>=16

=19

>=32

=17

>=16

=16

>=8

=16

>=8

=21

>=4

=22

>=8

=19

>=16

=16

>=16

=18

>=32

=16

>=4/76

=17

>=128