Среда питательная для выделения трихомонад жидкая

Поделиться

Закон закупки 44-ФЗ

Закон, регулирующий правовые отношения в области государственных закупок.

  • Оплата по контракту по 44-ФЗ: как получить вовремя
  • Переторжка по 44-ФЗ и 223-ФЗ: особенности, процедура проведения
  • Что изменилось в закупках в конце мая: обзор Постановлений Правительства
  • Сравниваем 44-ФЗ и 223-ФЗ: таблица для чайников
  • Независимый регистратор по 44-ФЗ: обзор, функции, цели, плюсы и минусы использования
  • Банковское сопровождение контракта по 44-ФЗ: виды, случаи и порядок осуществления
  • Что не так с 44-ФЗ, или Почему злится Артемий Лебедев
  • Национальный режим при осуществлении закупок по 44-ФЗ и 223-ФЗ: запреты, ограничения, условия допуска
  • В каких случаях указывать и подтверждать страну происхождения товара по 44-ФЗ?
  • Существенные условия контракта по 44-ФЗ: что к ним относится и можно ли их изменять?
  • Вопрос: Я продаю компьютеры. Могу ли я участвовать в закупках по 44фз, если у меня нет документов о том, что эта техника - российского происхождения?
  • Что такое госзакупки: полное определение понятия, виды закупок по 44-ФЗ
  • Чем обычный договор отличается от контракта по 44-ФЗ
  • Способы закупок по 44-ФЗ и 223-ФЗ
  • Идентификационный код закупки (ИКЗ) по 44-ФЗ: определение, формирование, расшифровка и поиск закупок по ИКЗ
  • Исключения из правил: что нельзя закупить по 44-ФЗ или 223-ФЗ
  • Как проходят закупки у СМП по 223-ФЗ и 44-ФЗ
  • Как оплатить неустойку по 44-ФЗ
  • Предметы роскоши по 44-ФЗ: как их опознать
  • Неустойка по 44-ФЗ: разбираемся с особенностями начисления
  • Расширили список запрещенных иностранных товаров по 44 ФЗ

Заказчик

ИНН: 3610002822 / КПП: 361001001

  • Топ-5 ловушек заказчика в техзадании
  • Как заказчики злоупотребляли своими правами
  • Об исчезновении строительства детского сада.
  • Положение о закупках по 223-ФЗ: содержание, структура, примеры
  • Заказчик не платит
  • Права поставщика, о которых молчат заказчики
  • Как отличить убытки от неустойки
  • Может ли заказчик поменять техзадание после публикации закупки?
  • Кто такие государственные заказчики
  • Топ-5 ловушек заказчика в документации
  • Ошибки заказчика и обжалование действий заказчика
  • Общение с заказчиками
  • Любовь заказчика к ПДФ (pdf)
  • Заказчик разместил аукцион на ремонтные работы. Сроки выполнения работ - нереальные. Стоит ли участвовать?
  • "Зачем потеть и страдать, затачивая техзадание под своего подрядчика?" - подумал как-то заказчик и обратился к компьютерщикам.
  • ФАС в шоке: новое нарушение госзаказчиков
  • Контракт исполнен, а оплаты нет - знакомая ситуация?
  • Может ли поставщик увидеть заявки конкурентов?

Информационная лента

При прокрутке вниз Вы можете получить очень полезную информацию, подобранную специально для Вас нашей программой. А также самые интересные и актуальные статьи о тендерах и закупках, которые мы подобрали для Вас на просторах интернета.

  • 0
  • 1
  • 2
  • 3
  • 4
  • 5
  • 6
  • 7
  • 8
  • 9
  • 10
  • 11
  • 12
  • 13
  • 14
  • 15
  • 16
  • 17
  • 18
  • 19
  • 20
  • 21
  • 22
  • 23
  • 24
  • 25
  • 26
  • 27
  • 28
  • 29
  • 30
  • 31
  • 32
  • 33
  • 34
  • 35
  • 36
  • 37
  • 38
  • 39
  • 40
  • 41
  • 42
  • 43
  • 44
  • 45
  • 46
  • 47
  • 48
  • 49
  • 50
  • 51
  • 52
  • 53
  • 54
  • 55
  • 56
  • 57
  • 58
  • 59
  • 60
  • 61
  • 62
  • 63
  • 64
  • 65
  • 66
  • 67
  • 68
  • 69
  • 70
  • 71
  • 72
  • 73
  • 74
  • 75
  • 76
  • 77
  • 78
  • 79
  • 80
  • 81
  • 82
  • 83
  • 84
  • 85
  • 86
  • 87
  • 88
  • 89
  • 90
  • 91
  • 92
  • 93
  • 94
  • 95
  • 96
  • 97
  • 98
  • 99
  • 100
  • 101
  • 102
  • 103
  • 104
  • 105
  • 106
  • 107
  • 108
  • 109
  • 110
  • 111
  • 112
  • 113
  • 114
  • 115
  • 116
  • 117
  • 118
  • 119
  • 120
  • 121
  • 122
  • 123
  • 124
  • 125
  • 126
  • 127
  • 128
  • 129
  • 130
  • 131
  • 132
  • 133
  • 134
  • 135
  • 136
  • 137
  • 138
  • 139
  • 140
  • 141
  • 142
  • 143

Портал отображает информацию о закупках, публикуемых в сети интернет
и находящихся в открытом доступе, и предназначен для юрлиц и индивидуальных предпринимателей,
являющихся участниками размещения государственного и коммерческого заказа.
Сайт использует Cookie, которые нужны для авторизации пользователя.
На сайте стоят счетчики Яндекс.Метрика, Google Analytics и LiveInternet,
которые нужны для статистики посещения ресурса.

Назначение набора для визуального выявления Trichomonas vaginalis

Набор СВТ предназначен для выявления Trichomonas vaginalis в отделяемом из цервикального канала и влагалища, в семенной жидкости, в секрете предстательной железы, в отделяемом уретры и в центрифугате мочи.

Набор рассчитан на проведение 100 определений наличия Trichomonas vaginalis в исследуемом материале.

Принцип метода

Метод определения основан на использовании питательной среды, компоненты которой обеспечивают оптимальные условия для роста Trichomonas vaginalis до количеств, необходимых для их визуальной оценки с помощью микроскопа, а селективный компонент подавляет рост простейших грибов и большинства представителей бактериальной флоры, потенциально содержащихся в образце.


Состав набора для визуального выявления Trichomonas vaginalis

  • Питательная среда для обнаружения Trichomonas vaginalis, лиофилизированная – 1 фл.


Потенциальный риск применения набора - класс 2а.

Набор СВТ предназначен только для in vitro диагностики. Компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными.

При работе с набором следует соблюдать "Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР" (Москва, 1981 г.).

  • термостат, поддерживающий температуру 37 ± 1 °С;
  • дозаторы пипеточные или пипетки стеклянные.
  • Приготовление жидкой питательной среды

Во флакон с лиофилизированной питательной средой для выделения Trichmonas vaginalis добавить 100 мл дистиллированной воды. Содержимое флакона перемешать до полного растворения (в течение 1 мин.). Полученный прозрачный раствор от светло-соломенного до янтарного цвета разлить по 1 мл в пробирки для микропроб, закрыть и хранить до применения при температуре 2 - 8 °С не более 1 недели или при температуре минус 7 °С и ниже не более 3 месяцев.

Помутневшие в процессе хранения среды использовать для определения нельзя!

Приготовление проб для исследования 1

Перед взятием материала для посева обследуемому пациенту необходимо, по крайней мере, на 1 - 2 дня исключить применение местного лечения; в противном случае это может повлиять на результаты культивирования.

У мужчин материал отбирать после длительного воздержания от мочеиспускания в течение времени не менее 3 - 4 часов. Отделяемое слизистой оболочки брать петлей из глубины уретры, предварительно очистив ее отверстие тампоном, смоченным изотоническим раствором хлорида натрия. При малом количестве выделений до взятия материала необходимо провести массаж уретры в дистальном направлении.

У женщин образец из уретры и цервикального канала отбирать в зеркалах ватным тампоном, специальной щеточкой или ложечкой. Необходимо тщательно очистить наружное отверстие цервикального канала (при помощи большого марлевого тампона) от вагинальных выделений для предотвращения возможной контаминации.

Для более успешной диагностики забор материала необходимо производить из разных очагов поражения (уретра, предстательная железа и семенные пузырьки – у мужчин, влагалище, уретра, цервикальный канал - у женщин) в сочетании с анализами центрифугата свежесобранной мочи.

1 Методические указания № 2003/34 "Обеспечение качества подготовки образцов биологических материалов для цитологических исследований", МЗ РФ, Москва, 2003 г.

Посев и учет результатов

Посев материала в маркированные пробирки с предварительно прогретой до 37 °С питательной средой осуществлять щеточкой или тампоном однократного применения.

Пробирки со средой сразу после посева поместить в термостат при температуре 37 °С. Рекомендуется проводить просмотр сред на наличие Trichomonas vaginalis через 48 - 96 часов после посева, при отрицательном результате - еще через 7 - 10 дней.

При обильном росте Trichmonas vaginalis можно обнаружить методом микроскопии уже через 48 часов после посева. Наиболее интенсивно трихомонады размножаются в придонном слое среды, поэтому при контроле посевов материал надо брать с помощью пастеровской пипетки со дна пробирки, после чего на предметном стекле приготовить препарат "раздавленная капля" и просматривать в затемненном поле микроскопа при увеличении в 400 - 600 раз. При обильном росте в поле зрения можно видеть 5 - 50 и более трихомонад. При микроскопии среди клеточных элементов (эпителий, лейкоциты) трихомонады различают по их форме (грушевидная, овальная), характерны толчкообразные, поступательные и вращательные движения за счет жгутиков и ундулирующей мембраны.

Похожие темы научных работ по клинической медицине , автор научной работы — Г. Р. Мустафина, З. Р. Хисматуллина, А. Р. Мавзютов, Г. Р. Шакирова

METHOD OF TRICHOMONAS VAGINALIS ISOLATION

Method of identification of Trichomonas vaginalis using nutrient medium with ferric (III) — hydroxide polyisomaltose complex has been elaborated. The method shortens the time of trichomonas vaginalis isolation from patient’s material.

СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ TRICHOMONAS VAGINALIS

Г. Р. Мустафина, З. Р. Хисматуллина, А. Р. Мавзютов, Г. Р. Шакирова

Согласно методическим рекомендациям по приготовлению новых питательных сред для культуральной диагностики уроге-нитального трихомоноза, утвержденным Министерством здравоохранения СССР № 10-8/23 от 18.04.77 г., в состав применяемых сред входят мясопептонный бульон (МПБ), препараты печени, минеральные соли, сахара, сыворотка крови человека или животных, солянокислый цистеин и другие ингредиенты.

Известны питательные среды для диагностики урогенитального трихомониаза — среда Джонсона — Трасселя (CPLM), среда СКДС. Данные среды обладают высокими ростовыми качествами, но имеют ряд недостатков [2]. Общими недостатками таких сред являются нестандартность их основы (готовятся в лабораторных условиях), трудоемкость приготовления, ограниченные сроки хранения [2]. Для диагностики необхо-

дим инкубационный период от 5 до 7 дней, являющийся слишком длительным ввиду инфицирования контактов пациента и распространения инфекции [4].

Trichomonas vaginalis — это облигатный паразит, не способный самостоятельно синтезировать макромолекулы (пурины, пири-мидины, липиды, витамины, минералы, аминокислоты и следы металлов), а важнейшие питательные компоненты получает из вагинального, уретрального секрета (путем осмоса и фагоцитоза эпителия и бактериальных клеток мочеполовых путей) [4, 7]. Кластеры с содержанием железа и серы локализуются преимущественно в гидрогеносомах Trichomonas vaginalis, способствуя реализации метаболических процессов клетки [6].

Нами была поставлена цель: повысить чувствительность среды для выделения Trichomonas vaginalis.

Материалы и методы

В питательную среду для выделения Trichomonas vaginalis, содержащую дрожжевой аутолизат, сыворотку крупного рогатого скота, концентрат среды 199 для культур тканей, глюкозу, мальтозу, пептон, L-цистеин, антибиотики (бензилпеницил-лин, ампициллин, стрептомицин, нистатин, амфотерицин-В), добавлено железо [III] гидроксид полиизомальтозат в виде раствора для внутримышечной инъекции в дозе 0,6 мл на 5 мл среды.

сид полиизомальтозат), затем среду заливают слоем стерильного вазелинового масла толщиной 5 мм.

Результаты исследования испытуемой питательной среды представлены в таблицах 1—3.

Технический результат при использо-

Вид Срок идентификации Trichomonas vaginalis после высева (дни)

0,1 мл 0,2 мл 0,3 мл 0,4 мл 0,5 мл 0,6 мл 0,7 мл 0,8 мл 0,9 мл

Trichomonas vaginalis 3-4 3-4 3-4 3-4 3-4 2-3 2-3 2-3 2-3

Динамика проявления роста и идентификация Trichomonas vaginalis из материала от больного

Вид Появление Trichomonas vaginalis (дни) Идентификация Trichomonas vaginalis (дни)

Среда 1 * Среда 2 ** Среда 1 * Среда 2 **

Trichomonas vaginalis 1-2 2-3 2-3 3-4

Динамика проявления роста и подвижности Trichomonas vaginalis

Дни Накопление культуры (кл/мл) Подвижность (%)

Среда 1 * Среда 2 ** Среда 1 * Среда 2 **

3 12,3*103 9,6*103 47,7 26,7

5 8,7*103 4,1*103 19,3 10,3

6 5,1*103 2,6*103 17,4 8,1

вании изобретения — идентификация Trichomonas vaginalis на 2-й день и выявление наибольшего процента подвижных клеток на 3-й день после высева.

Динамика накопления культуры Trichomonas и дальнейшей идентификации Trichomonas vaginalis представлена в таблице 2.

Динамика накопления культуры и подвижности Trichomonas vaginalis представлена в таблице 3.

При оценке подвижности клеток показано, что на 3-й день выявляется наибольший

процент подвижных клеток Trichomonas vaginalis (47,7%), а при увеличении срока культивирования (до 6 дней) отмечена тенденция к снижению количества подвижных форм до 17,4%.

На контрольной среде накопление культуры Trichomonas vaginalis отмечается на 3-й день в среднем до 9,6 *103 кл/мл, снижение количества клеток — на 5-й день до 4,1 * 103 кл/мл и 6-й день культивирования, в среднем до 2,6* 103 кл/мл.

Таким образом, применение новой питательной среды ведет к сокращению сроков выделения Trichomonas vaginalis, что позволяет своевременно установить диагноз и скорректировать назначенную терапию.

1. Беднова В. Н. Методы получения чистой культуры влагалищных трихомонад/ В. Н. Беднова, М. М. Васильев//Вестн. дерматологии и венерологии.— 1985.— № 12.— С. 22—25.

2. Дмитриев Г. А. Лабораторная диагностика бактериальных урогенитальных инфекций.— М.: Медицинская книга, Н. Новгород: изд-во НГМА, 2003.— 336 с.

3. Теличко И. Н. Диагностика и лечение трихомоноза: микробиологические и иммунологические аспекты: Автореф. дис. . д-ра мед. наук.— СПб., 2007.— 47 с.

4. Урогенитальный трихомониаз: актуальные вопросы диагностики и лечения (пособие для врачей)/В. М. Копылов, Е. Г. Боч-карев, В. М. Говорун и др.— М., 2001.— 40 с.

5. Abonyi A. Examination of nonflagellate and flagellate round forms of Trichomonas vaginalis by transmission electron microscopy/ A. Abonyi//Appl. Parasitol.— 1995.— Vol. 36.— P. 303—310.

6. Schwarts D. E. Comparative pharmacokinetic studies of tinidazole and metronidazole in

man/D. E. Schwarts, F. Jeunet//J. Chemotherapy.— 1976.— Vol. 22.— P. 19—29. 7. Schwebke J. R. Trichomoniasis/J. R Schwebke, D. Burgess//Clin. Microbiol. Rev.— 2004.— Vol. 17.— № 4.— P. 794—803.

G. R. Mustafina, Z. R. Khismatullina, A. R. Mavzyutov, G. R. Shakirova

METHOD OF TRICHOMONAS VAGINALIS ISOLATION

Method of identification of Trichomonas vaginalis using nutrient medium with ferric (III) — hydroxide polyisomaltose complex has been elaborated. The method shortens the time of trichomonas vaginalis isolation from patient's material.

Keywords: trichomonas vaginalis, ferric (III) hydroxide polyisomaltose complex, time of isolation.

Республиканский кожно-венерологический диспансер, г. Уфа,

Башкирский государственный медицинский университет, г. Уфа

Лабораторная диагностика

Принципы лабораторной диагностики мочеполового трихомониаза

1. Лабораторные методы исследований

Материалом для паразитологических исследований у женщин служит отделяемое из цервикального канала, смыв из влагалища и осадок мочи; у мужчин — отделяемое из уретры, центрифугат свежевыпущенной мочи, секрет предстательной железы и эякулят.

Накануне обследования женщинам в течение суток не рекомендуется делать спринцеваний. Материал для анализа берется у них со слизистой заднего свода влагалища. В некоторых случаях исследуется отделяемое из цервикального канала.

Мужчинам перед обследованием предлагается в течение 3-4 ч воздерживаться от мочеиспусканий. Материал из уретры у них забирается с глубины 5-7 см специальным зондом или ложкой Фолькмана. Исследуется также секрет предстательной железы и эякулят. Если речь идет о хронической трихомонадной инвазии, накануне исследования рекомендуется сделать провокацию гоновакциной, пирогеналом или неспецифическую (алкогольную).

1.1. Диагностика мочеполового трихомониаза

Диагностика мочеполового трихомониаза проводится путем микроскопии нативных препаратов, а также мазков, окрашенных метиленовым синим, по Романовскому-Гимзе и по модифицированному способу Грама. Для обнаружения трихомонад в нативных препаратах исследуется эякулят, секрет предстательной железы и осадок мочи у мужчин и смыв из влагалища у женщин.

Исследование нативных препаратов

Нативные препараты готовятся и исследуются сразу же после взятия материала. Если это невозможно, материал помещается в питательную среду, обеспечивающую кратковременное сохранение трихомонад, из расчета 1 мл исследуемого материала на 5 мл среды. Материал должен быть доставлен в лабораторию в теплом виде, сроки доставки материала не должны превышать 2 часов.

Для приготовления препарата на предметное стекло наносится капля теплого изотонического раствора хлорида натрия или раствора Рингера-Локка, с которой смешивается исследуемый материал. Взвесь накрывается покровным стеклом и микроскопируется при увеличении объектива 40 и окуляра 7 или 10.

При изучении нативного препарата особое внимание обращается на размеры и форму трихомонад, характер их движения, внутреннее содержимое клеток. В типичных случаях трихомонады обнаруживаются в виде подвижных образований грушевидной, реже овальной формы, размером в среднем от 13 до 17 мкм. Характер их движений толчкообразный. Иногда удается заметить движение свободных жгутиков. Ядра трихомонад чаще не обнаруживаются или плохо различимы. Цитоплазма трихомонад обычно зернистая, чаще вакуолизирована.

Размеры лейкоцитов, имеющих округлую, реже овальную форму, как правило, не превышают 10 мкм. Цитоплазма лейкоцитов прозрачна, зернистость обычно не отмечается или слабо выражена. Сегментоядерные нейтрофилы обычно содержат хорошо различимое сегментированное ядро.

Голые ядра эпителиоцитов отличаются от трихомонад относительно толстой оболочкой (кариолеммой) и иным характером зернистости (отдельные глыбки хроматина). В клетках молодого эпителия, даже если они по размерам соответствуют трихомонадам и обладают зернистостью, всегда прослеживается четко различимое округлое или овальное ядро.

В некоторых случаях обнаруживаются амебоидные формы Т. vaginalis, длина тела которых достигала 30 мкм, а также атипично делящиеся (почкующиеся) клетки. Основными дифференциально-диагностическими критериями, отличающими атипичных трихомонад от клеток эпителия и лейкоцитов, служат наличие в цитоплазме этих простейших выраженной зернистости и вакуолей, а также отсутствие хорошо различимого ядра. Кроме того, они значительно крупнее, чем наиболее часто встречающиеся форменные элементы — сегментоядерные нейтрофилы. По размеру такие трихомонады могут быть сопоставимы с моноцитами, которые, в отличие от них, имеют четко выраженное ядро и никогда не встречаются в значительных концентрациях (несколько клеток в каждом поле зрения). При отсутствии типичных форм клеток трихомонад диагноз трихомониаза может считаться лишь предположительным и должен подтверждаться другими методами.

Окраска метиленовым синим

Готовится 1% водный раствор метиленового синего. Высушенный на воздухе мазок фиксируется в течение 3 мин 96% этиловым спиртом, высушивается, после чего на него наносили на 1 мин раствор метиленового синего. Оставшийся краситель осторожно смывается слабой струей холодной воды и мазок высушивается.

Трихомонады в препарате имеют округлую или овальную форму, с интенсивно окрашенными в синий цвет ядрами; цитоплазма клеток светло-синяя, с нежной сетчатой структурой, вакуоли — бесцветны.

Окраска по Романовскому-Гимзе

Высушенный на воздухе мазок фиксируется смесью Никифорова (абсолютный этиловый спирт и эфир в соотношении 1 : 1). Раствор краски Романовского (азур-эозин) перед употреблением разводится дистиллированной водой в соотношении 0,3 мл на 10 мл воды и пипеткой наносится на горизонтально расположенные препараты на 30-40 минут. Затем они быстро промываются водой и высушиваются.

В окрашенных препаратах трихомонады имеют эксцентрично расположенное овальное пурпурно-фиолетовое ядро. Цитоплазма клеток окрашивается в светло-синий цвет, вакуоли остаются бесцветными, оболочка клеток четко заметна.

Окраска по модифицированному способу Грама

Для окраски используются следующие реактивы:

1. 1% раствор генцианвиолета (1 г генцианвиолета растворяется в 100 мл кипящей дистиллированной воды, полученный раствор пропускается в горячем виде через бумажный фильтр).

2. Водный раствор Люголя (2 г калия йодида растворяется в 300 мл дистиллированной воды, к полученному раствору добавляется 1 г чистого йода, после чего раствор фильтруется через бумаж ный фильтр).

3. 3,96% этиловый спирт.

4. 1% водный раствор нейтрального красного (1 г нейтрального красного растворяется в 100 мл дистиллированной воды и пропускается через бумажный фильтр).

Препарат накрывается полоской фильтровальной бумаги и заливается раствором генцианвиолета на 1-2 мин, после чего бумага снимается, препарат осторожно промывается водопроводной водой и на несколько секунд заливается раствором Люголя (до почернения мазка). Остаток раствора смывается, препарат обесцвечивается в 96% этиловом спирте до тех пор, пока с тонких участков препарата перестают стекать фиолетовые струйки. После смывания спирта водой препарат сразу же докрашивается в течение 3 мин раствором нейтрального красного, затем тщательно промывается и высушивается.

При микроскопии окрашенных мазков ядра клеток T. vaginalis окрашиваются в фиолетовый цвет, цитоплазма — в красно-оранжевый цвет разной интенсивности. Метод окраски по Граму позволяет также диагностировать гонорею. В некоторых случаях для подтверждения диагноза трихомониаза используется ПЦР и культуральный метод.

Нами Т. vaginalis выращивается на питательной среде СДС-199 М (Захаркив Ю. Ф. и др., 1998), которая имеет следующий состав:

1) 100 мл солевого раствора (натрия хлорида 6,5 г, калия хлорида 0,14 г, кальция хлорида 0,12 г, натрия бикарбоната 0,2 г, 0,5 мл 0,2% раствора метиленового синего, дистиллированной воды до 1 л);

2) 20 мл среды 199;

3) 450 мг солянокислого цистеина;

4) 30 мл сыворотки крови эмбрионов телят (без консерванта);

5) 10 мл 20% раствора мальтозы;

6) тиамина хлорида 5% и пиридоксина гидрохлорида 5% по 0,25 мл и аскорбиновой кислоты 5% — 0,5 мл на 100 мл среды;

7) ампициллина натриевой соли 125 000 ЕД и гентамицина 40 000 ЕД на 100 мл среды.

Солевой раствор автоклавируется при 120°С в течение 30 минут, остальные ингредиенты добавляются стерильно после охлаждения среды. Антибиотики и витамины добавляются в питательную среду непосредственно перед использованием. Среда должна быть светло-зеленого цвета, прозрачной; показатель рН среды должен составлять 5,5-6,0.

Питательная среда объемом 4,5 мл помещается в стерильные пробирки и заливается слоем стерильного вазелинового масла толщиной 5 мм для создания анаэробных условий культивирования трихомонад. Посев производится пастеровской пипеткой путем помещения 0,5-1,0 мл исследуемого материала на дно пробирок.

Микроскопическое исследование производится через 48 и 96 часов после посева. При положительных результатах трихомонады дают придонный рост в виде плотного беловатого осадка, из которого пастеровской пипеткой берется материал для микроскопического исследования.

2. Определение чувствительности Тrichomonas vaginalis к метронидазолу

В 1962 году S. Squires and J. A. Fadzean для определения чувствительности Т. vaginalis предложили метод серийных разведений метронидазола в жидкой питательной среде в анаэробных условиях. В качестве критерия оценки чувствительности они использовали минимальную ингибирующую концентрацию (MIC), под которой понимали наименьшую концентрацию препарата, вызывающую иммобилизацию у 100% клеток трихомонад. С помощью указанной методики авторам удалось показать, что все изученные ими штаммы Т. vaginalis, выделенные от больных трихомониазом, были чувствительны к метронидазолу в диапазоне концентраций препарата от 0,25 до 1 мкг/мл.

В 90-х гг. появились работы, свидетельствующие о возникновении и распространении штаммов Т. vaginalis, устойчивых к значительно более высоким концентрациям метронидазола: 50 мкг/мл (Вorchardt K. A. et al., 1995), 32 мкг/мл (Debbia E. A. et al., 1996) и даже 250 мкг/мл (Тaru Meri I. T. et al., 1999). Тогда же было обосновано положение о том, что чувствительными к действию метронидазола в анаэробных условиях штаммами Т. vaginalis следует считать лишь те, для которых паразитоцидный эффект препарата наблюдается в концентрации более чем 15 мкг/мл (Muller М. et al., 1986, 1988; Тaru Meri I. T. et al., 1999). Процент резистентных к метронидазолу штаммов Т. vaginalis, выделенных в эти годы от больных трихомониаз ом, колебался от 5% (Narcisi E. M., Secor W. E., 1996) до 20% (Du Bouchet L. et al., 1997).

2.1. Определение чувствительности Тrichomonas vaginalis к антипротозойным препаратам in vitro при использовании критерия иммобилизации трихомонад

Чувствительность штаммов Т. vaginalis к метронидазолу определяется с помощью метода серийных разведений препарата в питательной среде СДС-199 М. При использовании критерия оценки чувствительности штаммы Т. vaginalis, используемые для исследования, должны содержать не менее 90% подвижных клеток.

Среда заливается по 4,0 мл в стерильные пробирки, затем в них вносится 0,5 мл раствора, содержащего разные концентрации метронидазола (или другого антипротозойного препарата): от 0,25 до 1000 мкг/мл (1 мг/мл).

После этого в пробирки вносится 0,5 мл культуры возбудителя с заранее определенной концентрацией клеток (кл./мл). Контролем служит среда без препарата. Затем для создания анаэробных условий, необходимых для культивирования Т. vaginalis, в пробирки со средой вносится вазелиновое масло (толщина слоя — 0,5 мм). Пробирки с исследуемым материалом инкубируются в термостате при t = 37°С. Учет результатов производится через 48 и 96 часов после посева.

Чувствительность трихомонад к метронидазолу оценивается путем определения минимальной ингибирующей концентрации (MIC), вызывающей иммобилизацию всех клеток Т. vaginalis. К лекарственно-устойчивым относятся штаммы, у которых иммобилизация обнаруживается при концентрациях метронидазола (или другого антипротозойного препарата), превышающих 15 мкг/мл.

2.2. Определение чувствительности Тrichomonas vaginalis к антипротозойным средствам in vitro при использовании критерия лизиса трихомонад при терапевтически эффективных концентрациях препаратов

В связи с широким распространением штаммов Т. vaginalis, устойчивых к метронидазолу, особенно среди больных хроническим мочеполовым трихомониазом, а также высокой частотой встречаемости амастиготных клеток, мы предлагаем оценивать чувствительность трихомонад к широкому спектру антипротозойных препаратов (производным 5-нитроимидазола пролонгированного типа действия (тинидазол, ниморазол, орнидазол и секнидазол), 4-аминохинолина (хлорохин, син. делагил) и нитрофурана (нифуратель, син. макмирор)) на основе оценки лизиса клеток трихомонад.

К высокоустойчивым (RIII) относятся штаммы, концентрация клеток которых в опытных пробирках с антипротозойным препаратом составляла не менее 50% по сравнению с контролем; к умеренно устойчивым (RII) — от 25 до 50%, к низкоустойчивым (RI) — менее 25%. Воздействие препарата считается оптимальным при лизисе всех клеток трихомонад; в этом случае штамм относится к чувствительным (S). По нашему мнению, именно такой подход позволяет подобрать препарат или комбинацию препаратов для назначения рациональной схемы этиотропной терапии.

2.3. Определение чувствительности Тrichomonas vaginalis к метронидазолу in vivo и текущий контроль эффективности этиотропной терапии

Определение чувствительности Т. vaginalis к метронидазолу in vivo проводится с помощью метода, основанного на установлении сроков исчезновения паразитов из исследуемого материала у больных трихомониазом на фоне этиотропной терапии. Паразитологические исследования материала проводят на 1,3, 5 и 7-й дни с момента начала лечения. Лекарственно-чувствительными считаются штаммы, которые перестают выделяться от больных на 2-5-е сутки с момента начала этиотропной терапии.

Читайте также:

Пожалуйста, не занимайтесь самолечением!
При симпотмах заболевания - обратитесь к врачу.