Сальмонеллез как определить по мясу

Бактерии рода Salmonella являются одной из наиболее распространенных причин пищевых отравлений в России. Согласно данным Росстата, в 2016 году было зафиксировано порядка 40,5 тысяч случаев заболеваемости сальмонеллезом. К ним также следует присовокупить случаи брюшного тифа и паратифов, которые также провоцирует сальмонелла. Впрочем, их уже не так много – не более 2-3 за весь год.

Как выглядит сальмонелла?

Род Salmonella объединяет несколько видов бактерий, некоторые из которых являются патогенными. Если смотреть на них под микроскопом, эти микроорганизмы имеют форму палочек длиной от 1 до 7 мкм.

В биологии классифицируют бактерии Salmonella как неспороносные факультативные анаэробы. Это означает, что бактерия живет как правило без воздействия кислорода (например, в кишечнике организма-носителя), однако, прекрасно себя чувствует и на открытом воздухе, не погибая от изменения внешней среды.

Где встречаются сальмонеллы?

Сальмонеллы наряду с кишечной палочкой (E. Coli) обильно представлены в продуктах питания - поэтому заражение ими обычно проходит в категории пищевых отравлений.

Бактерии обитают в кишечнике домашних животных – особенно свиней и домашней птицы (часто в куриных или перепелиных яйцах). Распространяются через их фекалии.

Довольно часто сальмонеллы попадают в проточную воду, используемую для орошения сельхозкультур. Ну а овощи, ягоды или фрукты в свою очередь попадают на рынок.

Так что бактерия довольно легко может распространиться по всей кухне, если не вымыть руки после контакта с сырым птичьим мясом или овощами, и не продезинфицировать разделочные доски, ножи и посуду.

В принципе любой сырой или плохо приготовленный продукт животного происхождения может содержать бактерии сальмонеллы. По статистике наиболее часто он встречается:

Куриные или перепелиные яйца (как правило, на скорлупе);

Мясо птицы (курица, утка, перепел, индейка);

Мясо диких животных;

Непастеризованное молоко и молочные продукты (домашний сыр, творог и т.д.);

Нужно быть осторожными и с продуктами на основе сырых яиц, например, тортами без выпечки, но с яйцами, йогуртами, взбитыми сливками на основе непастеризованного молока.

Среди растительных продуктов потенциальными носителями сальмонеллы могут быть:

Изменяет ли сальмонелла вкус пищевых продуктов?

Главная опасность сальмонеллеза в том, что вы не сможете почувствовать, отравлен продукт или нет. Бактерии Salmonella прекрасно живут и размножаются на поверхности и в глубине мяса, яиц, не изменяя их вкусовых качеств.

Как избежать сальмонеллеза

Лучшая профилактика сальмонеллеза – тщательное мытье продуктов и соблюдение гигиены. Роспотребнадзор РФ и врачи-инфекционисты советуют:

Мойте руки с мылом до начала готовки и после нее;

Тщательно промывайте кухонный инвентарь (ножи, разделочные доски, тарелки) с мылом или антибактериальным средством;

Мойте продукты и кухонную утварь только под проточной водой, а не в наполненной раковине. Рекомендуется промывать куриные или перепелиные яйца перед готовкой – особенно, если вы жарите яичницу;

Не допускайте соприкосновения сырых продуктов с уже приготовленными. Например, нельзя хранить приготовленное мясо в той же посуде, что недавно находилось сырое.

Этих простых правил уже будет достаточно, чтобы не допустить кишечных инфекций и пищевых отравлений.

При какой температуре погибает сальмонелла?

Чтобы надежно обезопасить пищу от сальмонеллы, потребуется тепловая обработка. Если с овощей и фруктов бактерии можно просто смыть проточной водой, то в курином мясе или свинине они прекрасно сохраняются.

Бактерии Salmonella могут длительное время жить и размножаться во внешней среде. При этом их способно убить прямое ультрафиолетовое излучение, а также нагревание продукта не менее чем до 55 °C. В этом случае все бактерии сальмонеллы погибают в течение часа. Медики рекомендуют готовить мясо и прочую пищу не менее 10 минут при 75 °C.

Непищевые источники сальмонеллеза

Вторая по степени опасности заражения сальмонеллами причина – это контакт с домашними животными. Они могут быть переносчиками инфекции, поскольку, как правило, бактерия Salmonella никак не влияет на их самочувствие.

Однозначно от сальмонеллеза могут пострадать собаки и кошки. Поэтому им не следует давать сырое мясо. А вот рептилии (змеи, черепахи, ящерицы) с большой долей вероятности являются носителями бактерий.

Если у вас в доме есть экзотические животные или птицы, тщательно мойте руки после контакта с ними или их экскрементами.

Можно ли заразиться сальмонеллезом от человека?

Да, это возможно. Если вы инфицированы сальмонеллой и не вымыли руки после похода в туалет, то скорее всего передадите инфекцию другому. При этом прямой контакт не обязателен – достаточно просто прикоснуться к какой-либо поверхности или предмету.

Сальмонеллез у кур

По статистике вспышки сальмонеллеза чаще случаются в сельской местности, нежели в городе. Особенно это актуально для домашних подворий, где выращивают кур и цыплят. При этом болезнь представляет опасность для птицы и может выкосить до 20-30% поголовья. Ни в коем случае не следует употреблять в пищу мясо птицы, умершей по неизвестным причинам!

Также следует полностью исключить контакт детей младше пяти лет с курами и утками. К примеру, в США вспышки сальмонеллеза случаются каждую весну, поскольку родители любят покупать цыплят своим детям в качестве пасхального подарка.

Симптомы сальмонеллеза у человека

Проявления сальмонеллеза начинаются спустя 12 – 72 часа после заращения. Классические симптомы включают в себя:

жар и повышение температуры;

сильные спазмы в животе.

Большинство людей выздоравливают в течение 4 – 7 дней и не нуждаются в специальном лечении. Всё, что нужно в это время, – это восполнять потерю жидкости.

Антибиотики при сальмонеллезе требуются, если инфекция распространилась за пределы кишечника.

Серьезные и потенциально смертельные случаи чаще всего встречаются среди маленьких детей (особенно до года), у пожилых людей и пациентов с ослабленной иммунной системой.

Эпидемиологический контроль в России возложен на Федеральную службу по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Роспотребнадзор). Именно эта структура занимается расследованием различных случаев массового заражения – в том числе кишечных инфекций и оповещает о них население.

Роспотребнадзор также имеет право проводить плановые и внеплановые проверки заведений общепита в случае вспышек сальмонеллеза и пищевых отравлений.

Лечение сальмонеллеза у взрослых

Как уже было сказано, сальмонеллез не нуждается в особом лечении или госпитализации. Избавиться от болезни можно в домашних условиях. Однако могут быть тревожные симптомы, которые однозначно требуют помощи врача:

диарея, боли в животе, температура длятся дольше 7 дней;

температура поднимается выше 38,6 по Цельсию и держится более суток.

В течение всего периода лечения в домашних условиях важно соблюдать диету. Не рекомендуется есть жирную пищу, овощи и фрукты в сыром виде, сладости, кисломолочные и соленые продукты (например, квашеную капусту или соленые огурцы).

котлеты, тефтели или рыбу, приготовленные на пару;

сухари из пшеничного хлеба;

Когда обращаться к врачу?

Консультация врача однозначно необходима людям старше 65 лет, либо если иммунная система пациента ослаблена сопутствующим заболеванием. Пищевые отравления крайне опасны для больных с онкологией, которые проходят курс химиотерапии, для ВИЧ-инфицированных, а также тех, кто совсем недавно перенес тяжелое заболевание или операцию.

Госпитализация и лечение в стационаре может потребоваться также, если наблюдается тифоидная форма сальмонеллеза (поражает печень и селезенку). Ещё одна опасная ситуация – сепсис с проникновением бактерий в кровь, лимфатическую систему и внутренние органы. Однако обе эти формы встречаются крайне редко.

Лечение сальмонеллеза у детей

Дети в возрасте до 5 лет так же, как и старики, находятся в группе риска. Для детей до 2 лет он представляет особую опасность из-за сильного обезвоживания. Обязательно вызывайте на дом педиатра. При подозрении на сальмонеллез у грудничков может потребоваться срочная госпитализация.

Можно ли умереть от сальмонеллеза?

Сальмонелла крайне редко приводит к летальному исходу, но если бактерии попадают в кровоток, это может спровоцировать тяжелый сепсис, особенно при ослабленном иммунитете.

Сильное обезвоживание также может спровоцировать летальный исход - потеря более 10 литров жидкости является смертельной. Если у человека наблюдается рвота и понос более 10 раз в сутки, следует немедленно направить пациента в больницу под наблюдение врачей.

При какой температуре погибает сальмонелла? Все зависит от уровня нагрева. Наиболее чаще всего этот паразит встречается в яйцах. Поэтому необходимо быть более осторожными и внимательными при приготовлении данного продукта. Этот паразит является очень мелким, длина его составляет несколько микрон. В данной статье вы сможете узнать о том, при какой температуре погибает сальмонелла. Также будут выложены сведения о жизнедеятельности данного паразита и обитании его в других продуктах.

Немного информации о сальмонелле

Данный возбудитель был в первый раз замечен при вспышке тифа. Сначала ее обнаружил ученый Эберт в селезенке у мертвого человека. Тиф входит в разновидность сальмонелл. Эти два вида очень похожи между собой, также не так сильно различаются этиологии болезней. По сравнению с тифозной палочкой, у сальмонеллы имеется большая устойчивость во внешней среде. Но последний паразит погибает при определенном уровне нагрева.

При какой температуре погибает сальмонелла?

А погибает ли сальмонелла при замораживании? Оказывается, нет. Данный паразит просто перестает размножаться и ложится в спячку. А после оттаивания снова начинает бороться за свою жизнедеятельность.

Так при какой температуре погибает сальмонелла и за какое количество времен это происходит?

При 56 градусах паразит погибнет через один час и тридцать минут. Если температуру повысить до 61 градуса, то сальмонелла можно будет уничтожена уже через 11 минут. А вот при 71 градусе она погибнет за 61 секунду.

На данном принципе основывается метод пастеризации. Продукт нагревают в течение тридцати минут до 62 градусов. В этом случае погибает вся патогенная микрофлора. Исключение составляют возбудители ботулизма. При данном методе в продуктах сохраняются все его полезные свойства, которые так необходимы человеку. Таким образом, пастеризованное молоко считается безопасным, и его не нужно кипятить.

О мясе

Но с данным продуктом такого сделать нельзя. Мясо необходимо подвергнуть термической обработке при температуре 76 градусов. Тогда в течение 12 минут паразит будет уничтожен. Исключение составляет сальмонелла Сенфтенберг. Она резистентна в несколько десятков раз. Также следует знать, что эффективность от термической обработки зависит от процента жира в продукте. Чем выше последний показатель, тем будет ниже действие первого.

О размножении сальмонелл

Данный процесс происходит при определенной температуре. Так, размножается этот паразит в среде от 11 до 39 градусов. Но если сальмонелла находится там, где температурный режим выше или нижеуказанных пределов, она не погибает и продолжает существовать. Кроме того, в том месте, где от 8 до 47 градусов, данный паразит еще и растет. Если температура гораздо ниже 10 градусов по Цельсию, то этот процесс заметно замедляется.

Но часть экспертов говорят о том, что существуют такие штаммы, рост которых происходит и при 5 градусах.

О pH-факторе

Можно говорить о температуре уничтожения сальмонелл на пищевых продуктах. Но наиболее эффективным способом уничтожения этого паразита является маринование в уксусе. В результате кислота способствует понижению pH-фактора, из-за чего и погибают бактерии. Также одним из достоинств этого метода является то, что в таком случае ликвидируется и ботулизм. Как говорилось выше, последний очень трудно уничтожить при помощи кипячения.

Сальмонелла устойчива в среде, pH которой колеблется в пределах от 3,8 до 9,4. Этот паразит чувствует себя гораздо лучше в щелочной среде. Не стоит его пытаться уничтожить при помощи едкого натра. Сделать это нужно кислотой. Как известно, именно ее используют хозяйки при консервировании овощей.

В желудке у человека кислотность соляной среды равна единице. Поэтому большинство паразитов погибает. Желудок является определенным барьером для размножения патогенной микрофлоры.

Чтобы уничтожить сальмонеллу в яйцах, добавьте при варке уксус. И тогда паразит не сможет размножаться и погибнет.

О влажности

Этот паразит не может развиваться в сухой среде. Ему необходима влага. Но сальмонелла не погибнет. Она останется существовать в этом пищевом продукте, например, в шоколаде в течение нескольких лет. Также срок хранения этого паразита способствует продлению повышенного содержания жира. Какие есть пути заражения недугом?

Имеется два способа, при которых человек может заболеть. Здесь речь идет о продуктах питания и воде из открытых водоемов. Как правило, сальмонелла в яйцах встречается чаще всего. Поэтому эту пищу обязательно нужно подвергать необходимой термической обработке.

А где обычно происходит цикл жизнедеятельности сальмонелл? Данный процесс проходит внутри организма человека или животного, а именно в тонком кишечнике. Здесь эти паразиты выделяют токсин, что приводит к поражению нервной системы. Кроме того, наблюдается обезвоживание организма и плохая работоспособность сосудов. Еще сальмонелла может жить и во внешней среде. Срок ее существования составляет несколько дней.

Какие есть признаки заболевания?

Рассмотрев, где обычно происходит цикл жизнедеятельности сальмонелл, обратимся к признакам недуга, которые они и вызывают.

Попав в организм человека, паразиты крепятся к желудочно-кишечному тракту при помощи специальных жгутиков. Инкубационный период заболевания составляет около недели. Но есть случаи, при которых сальмонеллез развивался в течение пяти часов. Этот процесс во многом зависит от защитных функций организма человека и количества паразитов. В течение этого времени у больного не наблюдаются ярко выраженные симптомы. Но несмотря на это, заболевание активно развивается.

Человек при сальмонеллезе испытывает сильную головную боль. У него повышается температура тела, наблюдается потеря массы тела и аппетита. Пациент жалуется на боли в области живота. Также у человека начинаются проблемы со стулом. Это проявляется в метеоризме и в диарее.

В совокупности эти симптомы приводят к обезвоживанию организма человека и нарушению электролитного баланса. Также у больного учащается пульс, а кровяное давление понижается.

Пациент все время хочет пить. Но, несмотря на большой объем употребляемой жидкости, количество выделяемой мочи почками уменьшается.

При проведении такого обследования, как УЗИ, обнаруживается увеличение в размерах селезенки и печени. Кожная поверхность, а также глазные яблоки приобретают желтоватый оттенок.

Как готовить пищу?

Сальмонеллу очень сложно уничтожить при жарке. Например, при приготовлении глазуньи нет гарантий того, что паразит отсутствует. Поэтому в некоторых странах посетителей предупреждают о том, что при подаче этого блюда, они не берут никакой ответственности.

Что же можно сказать про яичный порошок? Он безопасен, поскольку при его изготовлении происходит пастеризация белка и желтка. Также источниками инфекции являются моллюски. По этой причине не следует покупать их у розничных торговцев.

Относитесь внимательнее к покупке продуктов. Обязательно подвергайте их должной термической обработке. И тогда риск заболеть сальмонеллезом будет очень мал или вовсе равен нулю.

ГОСТ Р 50455-92
(ИСО 3565-75)

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ

Обнаружение сальмонелл (арбитражный метод)

Meat and meat product. Detection of salmonellae (Reference method)

Дата введения 1994-01-01

1 ПОДГОТОВЛЕН И ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 226 "Мясо и мясная продукция"

2 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 25 декабря 1992 г. N 1567

Настоящий стандарт подготовлен методом прямого применения международного стандарта ИСО 3565-75 Мясо и мясные продукты. Микробиологические исследования на сальмонеллу (арбитражный метод) и полностью ему соответствует

3 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

4 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Январь 2010 г.

1 Назначение

Настоящий стандарт устанавливает метод обнаружения сальмонелл в мясе и мясных продуктах.

2 Область применения

Метод распространяется на все виды мяса и мясные продукты.

3 Ссылка

4 Определения

4.1 Сальмонеллы - микроорганизмы, образующие типичные колонии на плотных селективных питательных средах и имеющие биологические и серологические характеристики, описанные в настоящем стандарте.

4.2 Обнаружение сальмонелл - определение присутствия или отсутствия этих микроорганизмов в определенном продукте по методу, установленному настоящим стандартом.

5 Сущность метода

Обнаружение сальмонелл проходит в четыре стадии (см. пп.5.1-5.4), так как они обычно присутствуют в небольших количествах, иногда в поврежденном состоянии, и часто в сопровождении большого количества других бактерий их группы.

5.1 Предварительное обогащение - выдерживание пробы в термостате в неселективной жидкой среде при температуре 37 °С.

5.2 Обогащение - посев предварительно обогащенной среды в две жидкие селективные среды с последующим выдерживанием в термостате при температуре соответственно 37 или 42-43 °С.

5.3 Посев на чашках - пересев двух обогащенных сред на плотные селективно-диагностические среды, которые, после выдерживания в термостате при температуре 37 °С, исследуют на наличие колоний, по своим характеристикам подозрительных на сальмонеллы.

5.4 Подтверждение - пересев подозрительных на сальмонеллы колоний и определение их биохимических и серологических характеристик.

6 Питательные среды и реактивы

6.1 Основные материалы

Для получения сопоставительных результатов рекомендуется использовать безводные компоненты питательных сред одинакового качества, химические препараты аналитического качества или сухие готовые среды. Используемая вода должна быть дистиллированной или, по крайней мере, эквивалентной чистоты.

Примечание. Требования к бриллиантовому зеленому даны в приложении. Если используются сухие готовые среды, их следует готовить и применять в соответствии с рекомендацией поставщика.

6.2 Питательные среды

6.2.1 Буферная пептонная вода

Состав:

6.2.2 Среда тетратионатная (Мюллера-Кауфмана)

Приготовление: безводные основные компоненты или сухую готовую основу добавляют к воде и кипятят. Устанавливают рН так, чтобы после стерилизации его значение составляло (7,0±0,1) при 20 °С.

Стерилизуют основу в течение 20 мин при температуре (121±1) °С.

6.2.2.2 Раствор тиосульфата натрия

Состав:

вода до общего объема

6.2.2.3 Йодный раствор

Состав:

вода до общего объема

6.2.2.4 Раствор бриллиантового зеленого

Состав:

Приготовление: добавляют бриллиантовый зеленый к воде. Оставляют раствор в темноте не менее чем на сутки, чтобы обеспечить самостерилизацию.

6.2.2.5 Раствор бычьей желчи

Состав:

бычья желчь сухая

Приготовление: сухую бычью желчь растворяют в кипящей воде.

Стерилизуют раствор в течение 20 мин при температуре (121±1) °С.

6.2.2.6 Готовая среда

Состав:

раствор тиосульфата натрия (п.6.2.2.2)

йодный раствор (п.6.2.2.3)

раствор бриллиантового зеленого (п.6.2.2.4)

раствор бычьей желчи (п.6.2.2.5)

6.2.3 Среда селенитовая с бриллиантовым зеленым (Стокса и Осборна)

Приготовление: растворяют первые четыре ингредиента (т.е. безводные основные компоненты или сухую готовую основу) в кипящей воде в течение 5 мин. После охлаждения добавляют гидроселенит натрия, доводят рН до (7,0±0,1) при 20 °С.

Хранят ее при температуре 4 °С в темноте не более недели.

6.2.3.2 Буферный раствор

Состав:

Растворяют дигидроортофосфат калия в воде.

Растворяют гидроортофосфат калия в воде.

Приготовление: смешивают два объема раствора А и три объема раствора Б, получая раствор с рН (7,0±0,1) при 20 °С.

6.2.3.3 Раствор бриллиантового зеленого

Состав и приготовление этого раствора - по п.6.2.2.4.

6.2.3.4 Готовая среда

Состав:

буферный раствор (п.6.2.3.2)

раствор бриллиантового зеленого (п.6.2.3.3)

6.2.4 Агар с бриллиантовым зеленым и феноловым красным (Эделя и Кампельмахера)

6.2.4.2 Сахарный раствор с феноловым красным

Состав:

вода до общего объема

Приготовление: растворяют ингредиенты в воде, нагревают на водяной бане в течение 20 мин при температуре 70 °С, охлаждают до 55 °С и сразу используют.

6.2.4.3 Раствор бриллиантового зеленого

Состав и приготовление раствора - по п.6.2.2.4.

6.2.4.4 Готовая среда

Состав:

сахарный раствор с феноловым красным (п.6.2.4.2)

раствор бриллиантового зеленого (п.6.2.4.3)

Приготовление: в асептических условиях к сахарному раствору с феноловым красным, охлажденному приблизительно до 55 °С, добавляют раствор бриллиантового зеленого. Перемешивают, добавляют к основе при температуре 50-55 °С и снова перемешивают.

6.2.4.5 Приготовление чашек с агаровой средой

В стерильные чашки Петри большого размера разливают примерно по 40 см свежеприготовленной среды (п.6.2.4.4), имеющей температуру приблизительно 45 °С (если в наличии нет больших чашек Петри, то расплавленную среду разливают в стерильные маленькие чашки Петри примерно по 15 см ), дают застыть.

Непосредственно перед использованием чашки осторожно подсушивают в сушильном шкафу или термостате при температуре (50±5) °С в течение 30 мин, сняв крышки и перевернув вверх дном (агаровой поверхностью вниз).

Если чашки приготовили заранее, то их хранят не более 4 ч при комнатной температуре или не более суток в холодильнике (без подсушивания).

6.2.5 Лактозный агар с кристаллическим фиолетовым, нейтральным красным и желчью

Состав:

Приготовление: растворяют безводные компоненты среды или сухую готовую среду в кипящей воде. Устанавливают рН так, чтобы после кипячения его значение составляло (7,4±0,1) при 40 °С. Разливают питательную среду в стерильные пробирки или колбы вместимостью не более 500 см . Стерилизация среды нежелательна.

Если среду приготовили заранее, ее хранят не более одной недели в холодильнике.

Приготовление чашек с агаровой средой.

В стерильные маленькие чашки Петри разливают примерно по 15 см расплавленной среды (п.6.2.5) и далее готовят, как указано в п.6.2.4.5.

6.2.6 Трехсахарный агар с железом (агар ТСЖ)

Состав:

цитрат железа (III)

Приготовление: безводные компоненты среды или сухую готовую среду растворяют в кипящей воде. Устанавливают рН так, чтобы после стерилизации его значение составляло (7,4±0,1) при 40 °С. Разливают среду по 10 см в пробирки диаметром 17-18 мм, стерилизуют в течение 10 мин при температуре (121±1) °С.

Допускается устанавливать пробирки в наклонном положении так, чтобы глубина вертикального столбика агара составляла не менее 2,5 см.

6.2.7 Агар с мочевиной (Кристенсена)

Приготовление: безводные компоненты основы или сухую готовую основу растворяют в кипящей воде. Стерилизуют основу в течение 20 мин при температуре (121±1) °С.

6.2.7.2 Раствор мочевины

Состав:

вода до общего объема

Приготовление: мочевину растворяют в воде, стерилизуют фильтрованием и проверяют стерильность. (Подробности способа стерилизации фильтрованием можно найти в соответствующем руководстве по микробиологии).

6.2.7.3 Готовая среда

Состав:

раствор мочевины (п.6.2.7.2)

6.2.8 Агар питательный полужидкий

Состав:

Приготовление: безводные основные компоненты растворяют в кипящей воде. Устанавливают рН так, чтобы после стерилизации его значение составляло (7,0±0,1) при 40 °С. Среду разливают в колбы вместимостью не более 500 см и стерилизуют в течение 20 мин при температуре (121±1) °С.

Приготовление чашек с агаровой средой

В стерильные маленькие чашки Петри разливают примерно по 15 см свежеприготовленной среды. Чашки с агаровой средой не подсушивают.

6.2.9 Солевой раствор

Состав:

6.2.10 Среда декарбоксилирования лизина

Состав:

6.2.11.1 Буферный раствор

Состав:

вода до общего объема

Приготовление: растворяют дигидроортофосфат натрия приблизительно в 45 см воды. Доводят рН до (7,0±0,1), приливая примерно 3 см раствора гидроксида натрия. Объем доводят водой до 50 см . Хранят в холодильнике.

6.2.11.2 Раствор ОНФГ

Состав:

Приготовление: растворяют ОНФГ в воде при температуре 50 °С, раствор охлаждают.

6.2.11.3 Готовый реактив

Состав:

буферный раствор (п.6.2.11.1)

раствор ОНФГ (п.6.2.11.2)

Приготовление: к раствору ОНФГ добавляют буферный раствор. Хранят готовый реактив при температуре 4 °С не более 1 мес.

6.2.12 Реакция Вогса-Проскаэра (ускоренный метод Барри и Финея)

6.2.12.1 Среда ВП

Состав:

Приготовление: компоненты растворяют в воде, доводят рН до 6,9 и фильтруют. Стерилизуют среду в течение 20 мин при температуре 115 °С.

6.2.12.2 Раствор креатина

Состав:

Приготовление: моногидрат креатина растворяют в воде.

6.2.12.3 Реактив -нафтола (спиртовый раствор -нафтола)

Состав:

Приготовление: -нафтол растворяют в этиловом спирте.

6.2.12.4 Реактив KOH

Состав:

Приготовление: гидроксид калия растворяют в воде.

6.2.13 Индольная реакция

6.2.13.1 Триптон-триптофановая среда (по Лютову)

Состав:

Приготовление: компоненты растворяют в воде при температуре 100 °С и фильтруют. Доводят рН до 7,5.

6.2.13.2 Реактив (Ковакса)

Состав:

Приготовление: смешивают все компоненты.

6.3 Сыворотки

Некоторые антисальмонеллезные сыворотки продаются в готовом виде, а именно: антисыворотки, содержащие одну или несколько " " - групп (так называемые моно- или поливалентные -антисыворотки). -антисыворотки и антисыворотки, содержащие одну или несколько " "-групп (так называемые моно- или поливалентные -антисыворотки). При использовании сывороток следует руководствоваться инструкциями, прилагаемыми к ним изготовителем.

7 Аппаратура и стеклянная посуда

7.1 Аппаратура

Мясорубка механическая лабораторного типа, стерильная, с решеткой, диаметр отверстий которой не более 4 мм.

Смеситель механический, работающий со скоростью от 8000 до 45000 об/мин со стеклянными или металлическими банками для смешивания, с крышками, разной вместимости, устойчивыми к условиям стерилизации.

Аппаратура для стерилизации стеклянной посуды, банок для смешивания, питательных сред и т.д., а также оборудование для стерилизации фильтрованием, например асбестовая прокладка, мембранный фильтр или фильтровальная свеча соответствующей пористости.

Шкаф сушильный или духовой или термостат для подсушивания поверхности агаровой среды в чашках предпочтительно при температуре (50±5) °С.

Термостат для выдерживания жидких сред, чашек и пробирок с посевами при температуре (37±1) °С.

Термостат или водяная баня для выдерживания жидких сред с посевом при температуре 42-43 °С.

Водяные бани для нагревания и охлаждения растворов и питательных сред до разных температур.

Чашка большого размера

Чашка:

Край чашки должен быть ровным, параллельным основанию. Дно чашки должно быть плоским и ровным.

Крышка:

Чашка малого размера

наружная высота, не менее

Край должен быть ровным, параллельным основанию. Дно чашки должно быть плоским и ровным.

Крышка:

наружный диаметр, не более

Вместо стеклянных можно использовать пластмассовые чашки Петри, размеры которых такие же или незначительно отличаются от указанных размеров.

7.3 Стерилизация стеклянной посуды

Стерилизуют стеклянную посуду одним из следующих способов:

влажная стерилизация при температуре не менее 121 °С в течение не менее 20 мин;

сухая стерилизация при температуре не менее 170 °С в течение не менее 1 ч.

8 Отбор проб

Пробу отбирают массой не менее 200 г (см. ГОСТ 9958).

Отобранную пробу можно хранить в лаборатории при температуре 0-5 °С не более 24 ч.

9 Проведение анализа

9.1 Предварительная обработка пробы

Пробу дважды пропускают через мясорубку, перемешивают и сразу приступают к анализу. При необходимости измельченную пробу можно хранить при температуре 0-5 °С не более 1 ч.

9.2 Навеска

Взвешивают 25 г измельченного мяса или мясного продукта (п.9.1) в стерильную банку смесителя.

9.3 Приготовление гомогената

В банку смесителя добавляют 225 см буферной пептонной воды и гомогенизируют. Число оборотов смесителя должно составлять 15000-20000, а время - не более 2,5 мин.

Примечание - При определении присутствия или отсутствия сальмонелл в небольших навесках мяса (например 1,0 или 0,1 г) соответствующую часть гомогената мяса (например 10 или 1 см ) добавляют к 100 см буферной пептонной воды и далее проводят анализ, как указано ниже, учитывая при обработке результатов действительное количество мяса, подвергавшееся анализу.

9.4 Предварительное обогащение

9.4.2 Колбу выдерживают в термостате при температуре (37±1) °С не менее 16 и не более 20 ч.

9.5.1 После инкубационного периода переносят по 10 см содержимого колбы к 100 см тетратионатной среды и к 100 см селенитовой среды.

9.5.2 Посевы выдерживают в термостате в течение 2 сут на тетратионатной среде при температуре 42-43 °С, на селенитовой среде - при температуре (37±1) °С.

9.6 Посев на чашках

9.6.1 После инкубационного периода в течение 18-24 ч из каждой колбы с помощью петли диаметром 2,5-3 мм делают посев штрихами на поверхность агаровой среды с бриллиантовым зеленым и феноловым красным. При необходимости подобным образом делают посев на поверхность одной из следующих плотных сред, приготовленных в лаборатории в качестве селективно-диагностических для выявления сальмонелл, таких как висмут-сульфитный агар, агар S.S., дезоксихолатцитратный агар и др., так, чтобы получить хорошо изолированные колонии (если в наличии нет больших чашек Петри, можно делать посев штрихами на две маленькие чашки, используя одну и ту же петлю).

9.6.2 Чашки с посевами выдерживают в термостате при температуре (37±1) °С, положив их вверх дном.

9.6.3 После инкубационного периода в течение 2 сут делают пересев на чашки двух обогащенных сред и помещают чашки в термостат при температуре (37±1) °С.

9.6.4 После выдерживания в термостате в течение 20-24 ч определяют присутствие сальмонелл на чашках. Типичные колонии сальмонелл на агаре с бриллиантовым зеленым имеют розовую окраску.

9.6.5 Если рост микроорганизмов выражен слабо и не наблюдается типичных колоний сальмонелл, культуру повторно выдерживают в термостате при температуре (37±1) °С в течение 20-24 ч. Затем снова определяют присутствие типичных колоний сальмонелл.

Примечание - Присутствие любых типичных или предполагаемых колоний должно быть подтверждено (см. п.9.7), так как распознавание колоний сальмонелл в значительной степени зависит от опытности лица, проводящего анализ, а внешний вид колоний изменяется не только в зависимости от разновидностей сальмонелл, но и от партий среды. В связи с этим рекомендуется для лучшего распознавания колоний агглютинировать их поливалентной антисывороткой.

9.7 Подтверждение присутствия предполагаемых колоний сальмонелл

9.7.1 Выбор колоний для подтверждения

9.7.1.1 Из каждой чашки с каждой селективной средой выбирают пять типичных или предполагаемых колоний для подтверждения.

9.7.1.2 Если на одной чашке имеется менее пяти типичных или предполагаемых колоний, то для подтверждения берут все имеющиеся колонии.

9.7.1.3 Отобранные колонии высевают штрихами на подсушенную поверхность агаровой среды с кристаллическим фиолетовым, нейтральным красным, желчью и лактозой таким образом, чтобы обеспечить развитие хорошо изолированных колоний.

9.7.1.4 Чашки с посевом выдерживают в термостате при температуре (37±1) °С в течение 20-24 ч.

9.7.1.5 Для биохимического и серологического подтверждения используют чистые бесцветные колонии (лактозо-отрицательные).

9.7.2 Биохимическое подтверждение

9.7.2.1 Посев изолированных лактозоотрицательных колоний и выдерживание в термостате

Посев проводят на следующие среды.

9.7.2.1.1 Трехсахарный агар с железом (агар ТСЖ)

Посевы делают сначала штрихами по поверхности, а затем вглубь столбика агара. Выдерживают в течение 1-2 сут при температуре (37±1) °С.

Интерпретируют изменения среды следующим образом: