Контроль питательных сред на холеру
Бесплатная горячая линия юридической помощи
- Главная
- "ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ХОЛЕРЫ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. МУК 4.2.2218-07" (утв. Роспотребнадзором 31.05.2007)
7.4. Порядок контроля качества питательных сред
Питательные среды, консерванты, ингибиторы посторонней микрофлоры, используемые в диагностике холеры, подлежат обязательной проверке в соответствии с действующими инструктивно-методическими документами.
Бактериологический контроль качества плотных и жидких питательных сред могут проводить лаборатории противочумных и других учреждений, имеющие разрешение на работу с возбудителем холеры, применяя для контроля тест-штаммы Vibrio cholerae Р-1 (145) и Vibrio cholerae eltor М-878, а также лаборатории особо опасных инфекций учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор, с использованием тест-штамма авирулентного холерного вибриона не О1 серогруппы Р-9741 в порядке, определяемом действующими методическими указаниями по контролю питательных сред.
Бактериологическому контролю подлежит каждая серия сухой среды производственного выпуска, имеющая номер государственной регистрации, лицензии на ее производство и соответствующий срок годности, а также среды лабораторного изготовления.
На контроль направляют часть общего объема среды, предназначенного для проведения исследований, в количестве 200 мл агара и 100 мл основного раствора пептона производственного выпуска и в двойном объеме для серий лабораторного изготовления. В направлении следует указать название среды, предприятие-изготовитель, номер серии и срок годности сухой среды, дату контролируемой варки. Транспортируемые образцы должны быть надежно упакованы, флаконы с жидкой средой закрыты резиновыми пробками.
Оптимальный срок проверки питательной среды 10 - 14 дней после приготовления.
При положительном результате контроля пробы соответствующая серия сухой среды считается пригодной к использованию. Последующий контроль этой серии среды осуществляется ежегодно, а также при изменении условий приготовления сухой среды, независимо от времени предыдущей проверки.
Если при первом контроле среда оказалась непригодной, необходим повторный бактериологический контроль этой же серии сухой среды, при этом на контроль необходимо направлять образец новой варки и навеску сухой среды этой же серии.
При получении отрицательного результата повторного контроля среды, приготовленной на месте, и положительного бактериологического контроля образца этой же серии сухой среды, сваренного в лаборатории контролирующего учреждения, следует считать пригодной данную серию сухой питательной среды и принять меры к выяснению и устранению ошибки в технологии местного изготовления.
При получении отрицательного результата на образец сухой среды данной серии направляют рекламацию в адрес учреждения-изготовителя и ГИСК им. Л.А. Тарасевича.
Сроки хранения щелочного агара и основного раствора пептона производственного выпуска (сухая среда и приготовленные из нее образцы) указаны в инструкции предприятия-изготовителя по применению среды.
Для сред лабораторного изготовления определены следующие сроки хранения:
- для щелочного агара - 6 месяцев с момента изготовления и первичного контроля, по истечении этого срока допускается переконтроль и продление срока годности еще на 3 месяца;
- для основного раствора пептона - 2 года с контролем качества среды после приготовления, затем спустя 1,0 - 1,5 года хранения.
Срок хранения 1%-й пептонной воды при герметичной упаковке (резиновые пробки и металлические колпачки) - 2 месяца, а после переконтроля возможно продление срока хранения на 1 месяц.
Питательные среды, готовые к употреблению, хранят в темном прохладном месте (6 - 20 °С), не допуская перепада температур больше чем на 5 °С. Подъем и снижение температур губительно действуют на биологические свойства сред.
Щелочной агар и основной пептон, контролируемые авирулентным тест-штаммом холерного вибриона, подлежат периодической перепроверке по согласованию с территориальными лабораториями и противочумными учреждениями на базе последних вирулентными тест-штаммами. Ежегодному контролю в территориальном противочумном учреждении подлежит также теллурит калия.
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 270778 (21) 2649889/28-13 (53) М. Кл. с присоединением заявки М (23) Приоритет—
Государственный комитет.СССР яо дедам изобретений н открытий
Дата опубликования описания 301180 (53) УДК 578.8.093. .1(088.8) (72) Авторы изобретения
В.Н.Милютин, Л.Г.Воронежская, Л.С.Подосинникова, Г.В.Гальцева и Т.А.Ханумьян
Ростовский-на-Дону государственный научно-исследовательский противочумный институт (71) Заявитель (54) СПОСОБ КОНТРОЛЯ РОСТОВЫХ СВОЙСТВ ПИТАТЕЛЬНЫХ
СРЕД ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ХОЛЕРЫ
Изобретение относится к области медицины, а именно к микробиологии.
Известен способ контроля ростовых свойств питательных сред для диагностики холеры путем посева тест- 5 культуры на питательную среду с последующим инкубированием и подсчетом выросших колоний 11 .
Однако известный способ является довольно сложным.
Целью изобретения является упрощение способа.
Эта пель достигается тем, что в качестве тест-культуры используют штамм V i br i o Nag P-9741. 15
Штамм Vibriî Nag Р-9741 выделен
B 1972 г1из притока Дона. Штамм . Vibrio Nag P-9741 хранится в музее живых культур Всесоюзного ордена
Трудового Красного Знамени научно- 20
Исследовательского института "Микроб" и характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиологобиохимическими свойствами.
Культурально-морфологические приз 25 наки.
Прямые и изогнутые палочки, размером 1,5-2,0х0,3-0,4 мкм, подвижные с одним жгутиком. Спор и капсул не образует. 1,5-2%-ный щелочный агар 30
Мартена и дрожжевые среды. Колонии округлые, нежные, полупрозрачные в проходящем и слегка голубоватые в отраженном свете. 1%-ная пептонная вода и бульон. Образует гомогенное помутнение и голубоватую пленку.
Оптимум роста при 37 С.Обладает индофенолоксидазной активностью. Расщепляет глюкозу, сахарозу, манноэу, маннит, фруктозу, мальтозу, крахмал.
Не ферментирует арабинозу, лактозу, инозит, сорбит. Образует индол.
Сероводород не образует. Декарбоксилирует лизин и орнитин. Не дигидролиэирует аргинин. Обладает протеолитической, диастатической, каталазной, лецитинаэной активностью.
Не агглютинирует в растворе трипафлавина. Не агглютинируется холерными сыворотками "0", Инаба, Огава, R0. Не адсорбирует специфические антитела иэ холерных сывороток, не светится при обработке холерными люминесцирующими антителами, нечувствителен к холерным диагностическим фагам, при внутрикишечном заражении кроликов-сосунков дозами П.10 не
7 обладает патогенным действием.
Редактор С. Хейфиц Техред A ..Щепанская Корректор М. Демчик
Заказ 9219/72 Тираж 522 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР па делам изобретений и открытий
113035, Москва, К-35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4
Способ иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Для испытания качества питательных сред используют
5- часовые агаровые культуры тестМикробов Ч!Ьг!о Nag P-9741 и V.СЬо1егае P-1/145 18-20 часовых агаровых культур 2-5 пассажа.Готовят взвеси вибрионов в физиологическом раст воре, содержащие по 2 млрд клеток в 1 ьк. Приготовленные взвеси разводят физиологическим раствором в
2 раза, а затем делают ряд последовательных десятикратных разведений с таким расчетом, чтобы в 1.мл содержалось 1000 м.т. Из приготовленной взвеси производят высев по 0,1 мл на 3 чашки с испытуемой агаровой средой. Для контроля посевной дозы параллельно делают высев на 3 агаровые пластинки заранее проверенного качественного щелочнОго агара 20 (рН 7,6-7,8). Посевной материал равномерно распределяют по поверхности агаровой пластинки путем покачивания чашки Петри. Посевы выращивают при
37 С в течение 12 ч.
Плотные питательные среды считают годными в том случае, если на пластинках агара через 12 ч вырастает не менее 30% колоний от общего по.севного числа в типичной форме размером не менее 1 мм.
Пример 2. Для испытания качества жидких питательных сред из рабочих вэвесей тест-штаммов, приготовленных способом, описанным в примере 1, производят высевы в объеме
0,1 мл (100 м.т.) в 3 флакона со
100 мл испытуемой 1Ъ пептонной водой и 3 флакона с заранее проверенной высококачественной 1% пептонной водой.
Для контроля посевной дозы необходимо сделать высев посевной культуры на три агаровые пластинки. Посевы инкубируют при 37 С в течение 6 ч, после чего из каждого флакона с поверхности высевают петлей на чашку Петри с проверенным высококачественным агаром. Выращивают при 37 С 12-18 ч.
Пептонную воду считают пригодной в том случае, если в результате б-часового выращивания в ней и последующего высева петлей на агаровых пластинках вырастает в среднем не менее 10 колоний вибрионов.
Использование изобретения позволит сократить сроки контроля качества питательных сред для диагностики холеры.
Способ контроля ростовых свойств питательных сред для диагностики холеры путем посева тест-культуры на питательную среду с последующим инкубированием и подсчетом выросших колоний, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, в качестве тест-культуры используют штамм V i Ь r i o Nag P-9741.
Источники информации, принятые во внимание при экпертизе
1. Инструкция по контролю ростовых свойств питательных сред для диагностики холеры. Саратов, 1975 °
Холера — особо опасное, карантинное инфекционное заболевание, вызываемое Vibrio cholerae биоваров cholerae и eltor, проявляющееся в виде острого гастроэнтерита с выраженной интоксикацией и обезвоживанием (эксикозом) в результате нарушения водно-электролитного обмена, cвязанного с выработкой вибрионами холерного энтеротоксина (холерогена).
Основной метод лабораторной диагностики холеры – бактериологический.
Исследования на холеру проводятся круглосуточно в специальной лаборатории медицинскими работниками, прошедшими подготовку по особо-опасным инфекциям. Методы, применяемые для микробиологической диагностики холеры, представлены в схеме 13.
Бактериологический метод состоит из нескольких этапов.
Первый этап. Исследуемый материал засевают на щелочные (элективные) плотные питательные среды (щелочной агар Монсура – МПА с триптиказой, хлоридом натрия, таурохолатом натрия, карбонатом натрия; TCBS - тиосульфат-цитрат-бромтимол-сахарозный агар;щелочной МПА) и жидкие среды обогащения (1% щелочная пептонная вода).
Третий этап выполняется через 12— 14 ч от начала анализа. Производится пересев из верхней части 2-й среды накопления на плотные элективные питательные среды. Изучают и отбирают для исследования типичные для холерного вибриона колонии на плотных средах, засеянных нативным материалом.
|
Четвертый этап. (через 18-24 ч от начала анализа). Изучают и отбирают с помощью стереомикроскопа типичные для холерного вибриона колонии на всех плотных средах. Холерный вибрион образует прозрачные, круглые, диаметром 1-2 мм, гладкие, плоские, гомогенные, с ровными краями колонии, имеющие голубоватый оттенок и маслянистую консистенцию. На агаре TCBSколонии холерного вибриона ярко-желтые на зеленом фоне среды, на среде Монсура — полупрозрачные бесцветные с темным центром. Колонии проверяют на наличие оксидазы (холерные вибрионы оксидазоположительны), ставят РА на стекле с холерными сыворотками О-1, О-139 и RO, а также специфическую иммунофлюоресценцию.
Положительная РА или ИФМ в сочетании с типичными морфологическими, тинкториальными и культуральными свойствами выделенной культуры позволяет выдать предварительный положительный ответ.
Пятый этап проводится через 24 —36 ч от начала исследования. На этом этапе изучают и отбирают характерные для холерного вибриона культуры на среде Ресселя, на которой холерный вибрион расщепляет сахарозу, что сопровождается покраснением среды в столбике без образования газа, но не ферментирует лактозу (отсутствие изменений скошенной части среды). Со среды Ресселя готовят мазки в окраске по Граму с целью обнаружения характерных по морфологическим свойствам вибрионов, проверяют наличие подвижности и оксидазы, ставят РА с холерными сыворотками (О-1, RO,Огава, Инаба, при отрицательном результате - с сывороткой О-139) и при наличии положительных результатов выдают ответ о выделении соответствующего холерного вибриона.
Окончательную идентификацию оксидазопопожительных культур проводят, используя сокращенную или полную схемы (табл. 15).
Таблица 15.Дифференциация холерных вибрионов
| Тесты | V.cholerae asiaticae | V.cholerae el-tor | НАГ |
| Агглютинация О-сывороткой | + | + | - |
| Агглютинация сыворотками Инаба и Огава | + | + | - |
| Лизис фагами: Холерный фаг С (фаг IV) Фаг Эль-Тор | + - | - + | + + |
| Агглютинация куриных эритроцитов | - | + | + |
| Гемолиз эритроцитов барана | - | + | + |
| Рост на среде с полимиксином | - | + | + |
| Гексаминовый тест | - | + | + |
| Реакция Фогес-Проскауэра (образование ацетилметилкарбинола) | - | + | + |
Сокращенная схема предполагает постановку развернутой РА с сыворотками Инаба и Огава, пробы с диагностическими холерными фагами, определение ферментативной группы по Хейбергу. Полная схема дополнительно включает тесты для дифференциации биоваров холерного вибриона (классического и Эль-Тор), в частности, определение гемагглютинирующих и гемолитических свойств, чувствительности к полимиксину, способности давать положительную реакцию Фогес-Проскауэра (образование ацетилметилкарбинола - ацетоина из глюкозы). Ацетоин определяют добавлением в культуру, выращенную на глюкозо-фосфатном бульоне Кларка, 5% α-нафтола и 40%-го гидроксида калия; при встряхивании пробирок среда окрашивается в розовый или рубиново-красный цвет.
Для ускоренной биохимической идентификации холерных вибрионов и их дифференциации от холероподобных и нехолероподобных вибрионов используют систему индикаторных бумажных дисков (СИБ), в состав которой входят тесты на оксидазу, индол, ферментацию лактозы, глюкозы, сахарозы, маннозы, арабинозы, маннита, инозита, аргинина, лизина и орнитина.
Шестой этап (выполняется через 36-48 ч от начала анализа) - окончательная идентификация выделенных культур, определение их чувствительности к антибиотикам, формулировка окончательного ответа о выделении холерного вибриона с указанием биовара, серогруппы (серовара) и эпидемической значимости по косвенным биологическим признакам (гемолитической активности, группе Хейберга и др.). Типичные культуры Vibrio cholerae представляют собой грамотрицательные изогнутые в виде запятой или прямые полиморфные активно подвижные палочки, обладающие оксидазой, разлагающие глюкозу с образованием кислоты без газа, декарбоксилирующие лизин и орнитин, но не ферментирующие аргинин, принадлежащие к 1-й (реже 2-й) группе Хейберга, агглютинирующиеся холерными сыворотками и лизирующиеся диагностическими фагами. Если выделенная культура не агглютинируется сыворотками к О1 и О139, ее относят к группе НАГ-вибрионов, а при наличии соответствующих сывороток определяют ее принадлежность к другой серогруппе. Токсигенные штаммы холерных вибрионов серогрупп Ои О139 обычно не лизируют бараньи эритроциты, относятся к 1-й группе Хейберга (ферментируют маннозу и сахарозу, но не арабинозу), лизируются определенными фагами в комплексном методе с применением ХДФ.
Вирулентность холерных вибрионов определяют в специализированных лабораториях путем внутрикишечного заражения кроликов-сосунков, а также методами генодиагностики (ПЦР или ДНК-ДНК-гибридизация с целью определения гена, ответственного за выработку токсина).
Серодиагностикаявляется дополнительным методом лабораторной диагностики холеры. Исследуют парные сыворотки крови больных, взятые с интервалом в 6-8 дней, с целью выявления агглютининов с помощью РА (диагностический титр 1:40 и выше), антитоксинов с помощью РНГА с эритроцитарным холерным энтеротоксическим диагностикумом (диагностический титр - 1: 160) и вибриоцидных антител с помощью реакции иммобилизации вибрионов (диагностический титр1:1000). Учитывается также нарастание титра антител (не менее чем в 4 раза) в процессе инфекции.
Самостоятельная работа студентов
1. Микроскопический метод. Промикроскопировать и зарисовать демонстрационный микропрепарат холерного вибриона V.cholerae, окрашенный по Граму. Холерный вибрион - грамотрицательная изогнутая палочка.
2. Бактериологический метод. Ознакомиться с основными биологическими свойствами классического биовара холерного вибриона и биовара Эль-Тор:
· фаголизабельность. Классический холерный вибрион лизируется фагом С и нечувствителен к действию фага Эль-Тор II. Вибрион Эль-Тор лизируется фагом Эль-Тop и нечувствителен к фагу С (демонстрация);
· чувствительность к полимиксину. Учесть рост классического холерного вибриона и вибриона Зль-Тор на среде с добавлением полимиксина. Вибрион Эль-Тор к полимиксину не чувствителен, классический холерный вибрион – чувствителен;
· гемолитические свойства. Вибрион Эль-Тор лизирует эритроциты; классический холерный вибрион, как правило, нет (демонстрация);
· определение серовара холерного вибриона. Учесть развернутую реакцию агглютинации c сыворотками Инаба и Огава (демонстрация).
3. Изучить биопрепараты, используемые для диагностики, лечения и профилактики бактериальной дизентерии и холеры:
· люминесцирующая холерная сыворотка для постановки реакции иммунофлюоресценции с целью выявления вибрионов;
· агглютинирующие холерные сыворотки Инаба и Огава (для постановки реакции агглютинации при идентификации холерного вибриона);
· холерные фаги: классический (фаг С) и Эль-Тор. Используются для фагодиагностики;
· поливалентный холерный бактериофагдля лечения и профилактики;
· холерная вакцина.Создано 3 вакцины против холеры (убитая Эль-Тор; холероген- анатоксин, обогащенный О-антигеном холерного вибриона для подкожных инъекций; холероген-анатоксин, обогащенный О-антигеном холерного вибриона таблетированный). Используются для специфической профилактики холеры.
Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:
Номер патента: 689313
Текст
ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советских Социапистических Республик(22) Заявлено 270778 (21) 2649889/28-13 (51) М. Кл. с присоединением заявки Мд,СССР яо дедам изобретений н открытий(54) СПОСОБ КОНТРОЛЯ РОСТОВЫХ СВОЙСТВ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ХОЛЕРЫ 10 Изобретение относится к области медицины, а именно к микробиологии,Известен способ контроля ростовых свойств питательных сред для диагностики холеры путем посева тест культуры на питательную среду с последующим инкубированием и подсчетом выросших колоний 11 .Однако известный способ является довольно сложным.Целью изобретения является упрощение способа.Эта пель достигается тем, что в качестве тест-культуры используют штамм ЧЬго Над Р. 15Штамм Ч Ьг о Мад Рвыделен в 1972 гиз притока Дона. Штамм УЬго Над Рхранится в музее живых культур Всесоюзного ордена Трудового Красного Знамени научно Исследовательского института фМикроб" и характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиолого. биохимическими свойствами.Культурально-морфологические приз 25 наки.Прямые и изогнутые палочки, размером 1,5-2,0 х 0,3-0,4 мкм, подвижные с одним жгутиком. Спор и капсул не образует. 1,5-2-ный щелочный агар Мартена и дрожжевые среды. Колонии округлые, нежные, полупрозрачные в проходящем и слегка голубоватые в отраженном свете. 1-ная пептонная вода и бульон. Образует гомогенное помутнение и голубоватую пленку.Физиолого-биохимические свойства. Оптимум роста при 37 С.Обладает индофенолоксидазной активностью. Расщепляет глюкозу, сахарозу, манноэу, маннит, фруктозу, мальтозу, крахмал. Не ферментирует арабинозу, лактозу, инозит, сорбит. Образует индол. Сероводород не образует. Декарбоксилирует лизин и орнитин. Не дигидролиэирует аргинин. Обладает протеолитической, диастатической, каталазной, лецитинаэной активностью.Серологические свойства.Не агглютинирует в растворе трипафлавина. Не агглютинируется холерными сыворотками "0", Инаба, Огава, 80. Не адсорбирует специфические антитела иэ холерных сывороток, не светится при обработке холерными люминесцирующими антителами, нечувствителен к холерным диагностическим фагам, при внутрикишечном заражении кроликов-сосунков дозами П.10 не7 обладает патогенным действием.689313 формула изобретения Составитель Е.ДубовицкаяРедактор С.Хейфиц Техред А .Щепанская Корректор М. Демчик Заказ 9219/72 Тираж 522 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, К, Раушская наб., д. 4/5филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 СпосОб иллюстрируется следующими примерами.П р и м е р 1. Для испытания качества питательных средиспользуют 5-часовые агаровые культуры тест- микробов Ч 1 Ьг 1 о Мая Ри Ч.СЬо 1 егае Р/145 18-20 часовых агаровых культур 2-5 пассажа.Готовят взвеси вибрионов в физиологическом растворе, содержащие по 2 млрд клеток в 1 мп, Приготовленные взвеси разводят физиологическим раствором в16 2 раза, а затем делают ряд последовательных десятикратных разведений с таким расчетом, чтобы в 1.мл содержалось 1000 м,т. Из приготовленной взвеси производят высев по 0,1 мл на 3 чашки с испытуемой агаровой средой. Для контроля посевной дозы параллельно делают высев на 3 агаровые пластинки заранее проверенного качественного щелочнОго агара 20 (рН 7,6-7,8). Посевной материал равномерно распределяют по поверхности агаровой пластинки путем покачивания чашки Петри. Посевы выращивают при 37 оС в течение 12 ч.25Плотные питательные среды считают годными в том случае., если на пластинках агара через 12 ч вырастает не менее 30 колоний от общего по.севного числа в типичной форме размером не менее 1 мм.П р и м е р 2. Для испытания качества жидких питательных сред из рабочих вэвесей тест-штаммов, приготовленных способом, описанным в примере 1, производят высевы в объеме З 5 0,1 мл (100 м.т.) в 3 флакона со 100 мл испытуемой 1 пептонной водой и 3 флакона с заранее проверенной высококачественной 1 пептонной водой. Для контроля посевной дозы необходимо сделать высев посевной культуры на три агаровые пластинки, Посевы инкубируют при 37 С в течение 6 ч, после чего из каждого флакона с поверхности высевают петлей на чашку Петри с проверенным высококачественным агаром. Выращивают при 37 ОС 12-18 ч.Пептонную воду считают пригодной в том случае, если в результате б-часового выращивания в ней и последующего высева петлей на агаровых пластинках вырастает в среднем не менее 10 колоний вибрионов.Использование изобретения позволит сократить сроки контроля качества питательных сред для диагностики холеры. Способ контроля ростовых свойствпитательных сред для диагностики холеры путем посева тест-культуры на питательную среду с последующим инкубированием и подсчетом выросших колоний, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью упрощения способа, вкачестве тест-культуры используютштамм Ч 1 Ьг 1 о Мац Р.Источники информации,принятые во внимание при экпертизе1. Инструкция по контролю ростовыхсвойств питательных сред для диагностики холеры. Саратов, 1975
Заявка
РОСТОВСКИЙ-НА-ДОНУ ГОСУДАРСТЕННЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ПРОТИВОЧУМНЫЙ ИНСТИТУТ
МИЛЮТИН В. Н, ВОРОНЕЖСКАЯ Л. Г, ПОДОСИННИКОВА Л. С, ГАЛЬЦЕВА Г. В, ХАНУМЬЯН Т. А
МПК / Метки
Код ссылки
Номер патента: 540913
. агар 50 - 60 г, глюкозу 1 О - 15 г, глицерин 20 - 30 мл, ривачол 100 - 200 мг, перемешивают до полного растворсния, после чего сред разливаот и стерилизуют в автоклавс. В процессе григотовления среды не допускается ее облучение прямыми солнечными и ультрафиолетовыми лучами, причем готовые среды хранят в темноте не более 5 суток.Выращивание первичных культур бруцелл, выделенных из зараженного материала от больных бруцеллезом животных, производят при температуре 3 - 38 С под ватными пробками без повышенного содержания С 02. Колонии бруцелл на средах с риванолом вырастают через 2 - 4 суток, тогда как на обычных средах обычно через 6 - 20 суток.Если посевной материал загрязнен аэробн банальной микрофлорой, то для задержки ста этой.
Номер патента: 485149
. паром с избыточным давлением 0,5 атм в течение 30 мин, Лабораторные испытания по культивированию энтомонатогенных бактерий на проди;а немой питательной среде,проводяишеся со плтал мами ВДС 1,ЙО.З ВиЧС Е П 318 К Э 20 и бас. 1 цчье 1 тзьз11 17. Интенсивность роста и развитияКристалло- и спорообразование Состав среды Ф ( род.ест. 1,5 0,8 0,4 Вода водпровод(ая ост,1,8 0,90,45 Вода водопроводня ост,Белково-сусповыйосадок 2,0 Мальтоза 1,0 0,5 В ода водопроводная ост,Белково - сусловыйосадок М альтоза 1 ю 1 0,6 Вода водопроводная ост,ку,ур онредынется с помощью микроскопии лазков культурааьой жидкостила 48 час роста окрашенных (РуксипомОои 1;10, Иолученные результаты приведены в табл. 1, Лабораторно-полевыеи(.следования.
Номер патента: 732383
. 2,воду до 100 мл. Среду прогреваютв водяной бане до расплавления агара,разливают в микробиологические пробирки по 10 мл и стерилизуют в вертикальном положении при 1 атм 1 ч. Послеэтого охаждают в наклонном положенииоугол наклона 15 .30 После охлаждения среду выдерживаютв термостате при 30 С 3 сут для прооверки на стерильность, а затем засеваюткультурой продуцента. прЬ апМй 7,2 Роулен-ТомаИзвестнаяЧапека-Докса,0 3 6,8010,52 6,93 сло-агар ов 96 гаемая В течениомой сред 3 7 мывают от почвы и измельчают до величины частиц 0,5-.1,0 мм. К картофельной пульпе добавляют углекислый кальций и ферментный препарат амилазы с активностью 150 ед/г АС. Ферментоолиз проводят при 7,0 С до неокрашиваемых иодом декстрйнов.Далее готовят питательную среду.
Номер патента: 1616138
Питательная среда для культивирования лиофилизированной культуры возбудителя мелиоидоза, содержащая глицерин, мясопептонный бульон и агар-агар, отличающаяся тем, что, с целью повышения выхода жизнеспособных микробных клеток, она дополнительно содержит пируват натрия при следующем соотношении компонентов, об.%:Пируват натрия - 0,3 - 1,2Глицерин - 4,0 - 6,0Агар-агар - 1,5 - 2,0Мясопептонный бульон - До 100
Номер патента: 770189
. следующим образом. Дрожжи и муку смешиваютс водопроводной водой, используютдля приготовления суспенэии, содержащей 607 воды, необходимой для приготовления соответствующего количества среды. Суспензию тщательно перемешивают и кипятят при помешиваниив течение 3-5 мин, после чего охлаждают до температуры 30-40 ОС.Готовятферментативный гидроливат шрота следующим образом. Одну часть шротаПитательную среду, указанного состава готовят следующим образом. В зависимости от количестве получаемой среды рассчитывают необходимый весовой состав составляющих ее компонентов. Из всего количества дрожжей и муки готовят водную суспенэию,(по весу) смешивают с,7 вес.ч. воды, смесь кипятят в течение 15 мин,0охлаждают до 55 С, доводят рН до 8,0 207.-ным.
Материалами базы являются авторские свидетельства и патенты на изобретения, опубликованные во времена Союза Советских Социалистических Республик.
Здесь вы найдёте описания, модели и чертежи различных устройств, механизмов, приспособлений. А также множество способов и методов получения, изготовления и производства изделий, препаратов, материалов и многого другого.
Это музей, своего рода википедия советских патентов, созданный для памяти и жителей бывшего СССР.
Изображения и тексты патентов получены из файлов базы .
Ресурс является информационным, к патентным ведомствам отношения не имеет.
Утверждаю
Руководитель
Федеральной службы
по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
31 мая 2007 года
Дата введения:
1 августа 2007 года
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ХОЛЕРЫ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.2.2218-07
(с изм., внесенными МУК 4.2.2218-07,
утв. Роспотребнадзором 18.01.2008)
1. Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю.М. Федоров, Н.Я. Жилина); Федеральным государственным учреждением здравоохранения "Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт" (Ю.М. Ломов, Б.Н. Мишанькин, Л.С. Подосинникова, Л.Г. Воронежская, И.Я. Черепахина, Т.А. Кудрякова, Б.Л. Мазрухо, Л.М. Смоликова, И.В. Рыжко, Р.И. Цураева, Э.А. Москвитина, Б.П. Голубев, С.О. Водопьянов, Е.В. Монахова, В.Д. Кругликов, Н.Р. Телесманич, А.Б. Мазрухо, В.В. Агафонова); Федеральным государственным учреждением здравоохранения "Противочумный Центр" (А.А. Кюрегян, С.М. Иванова, Ю.С. Королев); Федеральным государственным учреждением здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" (А.К. Адамов, З.В. Малыхина, Т.В. Бугоркова, Н.И. Смирнова, Л.Ф. Ливанова; А.В. Топорков, С.И. Заднова, Н.А. Осина, Е.С. Казакова, Н.Б. Челдышева, А.В. Осин); Федеральным государственным учреждением здравоохранения "Иркутский научно-исследовательский противочумный институт" (А.С. Марамович, В.С. Ганин, Л.Я. Урбанович, В.И. Погорелов, Л.В. Миронова, Е.С. Куликалова); Федеральным государственным учреждением здравоохранения "Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт" (В.Н. Савельев); Федеральным государственным учреждением здравоохранения "Причерноморская противочумная станция" (Г.В. Гальцева); Государственным Центром по антибиотикам (С.В. Сидоренко); Российской медицинской академией последипломного образования (Е.А. Ведьмина); ГИСК им. Л.А. Тарасевича (Т.И. Анисимова, Л.В. Саяпина).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 31 мая 2007 г.
3. Введены взамен Методических указаний "Лабораторная диагностика холеры" МУ 4.2.1097-02.
1. Область применения
1.1. Методические указания "Лабораторная диагностика холеры" разработаны для внедрения и применения действующих нормативных документов, определяющих требования к эпидемиологическому надзору за холерой в части, касающейся организации и проведения лабораторной диагностики холеры.
1.2. Настоящие методические указания предназначены для специалистов бактериологических лабораторий учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор, лечебно-профилактических и противочумных учреждений.
2. Нормативные ссылки
2.1. Санитарно-эпидемиологические правила "Порядок выдачи санитарно-эпидемиологического заключения о возможности проведения работ с возбудителями инфекционной заболеваемости человека I - IV групп патогенности (опасности), генно-инженерно-модифицированными микроорганизмами, ядами биологического происхождения и гельминтами. СП 1.3.1318-03".
2.2. Санитарно-эпидемиологические правила "Безопасность работы с микроорганизмами I - II групп патогенности. СП 1.3.1285-03".
2.3. Санитарные правила "Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I - IV групп патогенности. СП 1.2.036-95".
2.4. Санитарные правила "Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности и гельминтами. СП 1.2.731-99".
2.5. Санитарные правила "Условия транспортировки и хранения медицинских иммунобиологических препаратов. СП 3.3.2.028-95".
2.6. Методические указания "Организация работ при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного микроорганизмами I - II групп патогенности. МУ 1.3.1794-03".
2.7. Санитарные правила "Профилактика холеры. Общие требования к эпидемиологическому надзору. СП 3.1.1086-02".
3. Характеристика возбудителя холеры
Холера - острая инфекционная болезнь с диарейным синдромом, фекально-оральным механизмом заражения, пищевым, водным и контактно-бытовым путями распространения возбудителя. Относится к группе инфекций, борьба с которыми регламентируется Международными медико-санитарными правилами (2005).
Возбудителями холеры являются холерные вибрионы О1 (классического и эльтор биоваров) и О139 серогрупп.
+
Токсигенные (ctx ) холерные вибрионы обеих серогрупп вызывают
заболевание холерой, склонное к эпидемическому и пандемическому
распространению (эпидемически значимые штаммы), нетоксигенные
-
(ctx ) - единичные или групповые заболевания холерой при общем
источнике заражения.
-
У нетоксигенных (ctx ) штаммов холерных вибрионов возможно
присутствие отдельных генов патогенности, среди которых
определенную значимость имеет ген tcp, участвующий в реализации
процесса адгезии.
Характеристика генома выделенных холерных вибрионов биологическими методами широко используется для эпидемиологического анализа и оценки эпидемической значимости выделенных штаммов.
4. Организация лабораторных исследований
Диагностические исследования на холеру в регламентированном объеме могут проводить:
- бактериологические лаборатории учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор, лечебно-профилактических и противочумных учреждений, имеющие разрешение на работу с микроорганизмами III группы патогенности;
- лаборатории особо опасных инфекций центров гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора и ведомств, имеющие разрешение на проведение диагностических исследований на холеру;
- лаборатории противочумных учреждений, имеющие разрешение на проведение диагностических исследований на холеру и на работу с возбудителем холеры.
Организация и выполнение диагностических исследований на холеру в лабораториях должны осуществляться в соответствии с требованиями, регламентирующими:
- безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности - для бактериологических лабораторий учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор, и лечебно-профилактических учреждений;
- безопасность работы с микроорганизмами I - II групп патогенности - для лабораторий (отделов) особо опасных инфекций центров гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, ведомств и противочумных учреждений;
- порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов IV группы патогенности.
Порядок получения лабораториями разрешения на диагностические исследования на холеру определяется действующими нормативными документами о порядке выдачи разрешений на эти виды работ.
В условиях осложнения эпидемиологической обстановки временное разрешение на проведение диагностических исследований на холеру бактериологическим лабораториям учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор, и другим, функционирующим в составе лабораторной службы очага, в случае расширения их функциональных обязанностей представляется решением медицинского штаба очага.
4.1. При осуществлении эпидемиологического надзора
4.1.1. Бактериологические лаборатории учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор, и лечебно-профилактические учреждения проводят плановые диагностические исследования на холеру материала от больных острыми кишечными инфекциями, определенного контингента здоровых лиц и проб из объектов окружающей среды в объеме, предусмотренном действующими нормативными документами по эпидемиологическому надзору за холерой.
Исследования ведут до установления отрицательного результата анализа или до выделения культуры с характерным для вибрионов ростом на агаровой и полиуглеводной средах и положительной реакцией на оксидазу. Культуры проверяют на чистоту в мазке, окрашенном по Граму, на подвижность и в реакции агглютинации на стекле (далее - слайд-агглютинации) с холерными сыворотками О1, Огава, Инаба, РО и О139.
При положительном результате слайд-агглютинации немедленно сообщают в органы Роспотребнадзора в субъекте Российской Федерации, культуру для окончательной идентификации немедленно доставляют в специализированную лабораторию в установленном порядке.
При отрицательном результате слайд-агглютинации:
- не агглютинирующиеся холерными сыворотками О1 и О139 культуры, выделенные от людей, направляют для дальнейшей идентификации в специализированную лабораторию;
- не агглютинирующиеся холерными сыворотками О1 и О139 культуры, выделенные из объектов окружающей среды, идентифицируют на месте или по согласованию передают в учреждение Роспотребнадзора.
4.1.2. Лаборатории особо опасных инфекций центров гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора и ведомств:
- выполняют диагностическое исследование материала от больных и умерших с подозрением на холеру и проб из объектов окружающей среды;
- идентифицируют культуры вибрионов, выделенных в территориальных и ведомственных лабораториях, определяя их таксономическую принадлежность, а также определяют эпидемическую значимость (токсигенность) и антибиотикочувствительность холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп по регламентированным для этих лабораторий тестам;
- осуществляют (или организуют) бактериологический контроль качества питательных сред и других диагностических препаратов, используемых в территориальных лабораториях;
- представляют оперативную информацию о выделении культур холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп;
- в установленном порядке немедленно передают в территориальное противочумное учреждение культуры холерных вибрионов, таксономическая принадлежность или токсигенность которых имеющимися средствами диагностики не определяется;
- в течение 5 дней после окончания идентификации передают в территориальное противочумное учреждение или в головной по проблеме "Холера" Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт все культуры холерных вибрионов О1, О139, независимо от объекта обследования, и других серогрупп при выделении от больных;
- контролируют деятельность территориальных лабораторий, оказывают им методическую помощь по всем вопросам лабораторного обеспечения эпидемиологического надзора за холерой.
4.1.3. Лаборатории противочумных учреждений:
- проводят исследования материала от больных и умерших с подозрением на заболевание холерой, а также проб из объектов окружающей среды;
- подтверждают таксономическую принадлежность культур холерных вибрионов, выделенных на курируемой территории;
- идентифицируют все атипичные культуры холерных вибрионов с использованием дополнительных методов серологической, биохимической и других видов идентификации с целью уточнения таксономической принадлежности;
- определяют эпидемическую значимость (токсигенность) и антибиотикочувствительность культур;
- осуществляют методическое руководство по всем вопросам лабораторного обеспечения эпидемиологического надзора за холерой на курируемой территории;
- в установленном порядке выделенные культуры холерных вибрионов с паспортами передают в территориальный противочумный институт, головной по проблеме "Холера" Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт, одновременно паспорта на эти же культуры направляют в противочумный центр Роспотребнадзора.
Лабораторное обеспечение эпидемиологического надзора за холерой осуществляют в соответствии с действующими нормативными и методическими документами. Профилактические исследования на холеру проводят в течение рабочего дня с использованием соответствующих питательных сред, диагностические исследования материала от подозрительных на холеру больных (трупов) - в условиях круглосуточного режима работы лаборатории.
4.2. При проведении противоэпидемических мероприятий
Организация и регламентирование деятельности лабораторий, а также формирование лабораторной службы в очаге холеры осуществляются в соответствии с действующими нормативными документами по организации и проведению противохолерных мероприятий.
5. Бактериологическое исследование
В системе противохолерных мероприятий значительное место занимает бактериологический анализ, от правильности и своевременности проведения которого зависит характер и объем профилактических и противоэпидемических мероприятий.
Исследования проводят с целью:
- выявления больных холерой и вибриононосителей;
- установления окончательного диагноза при вскрытии трупов лиц, умерших от подозрительного на холеру заболевания;
- обоснования выбора средств этиотропной терапии холеры;
- бактериологического контроля эффективности лечения больных холерой и вибриононосителей;
- бактериологического контроля объектов окружающей среды, в том числе поверхностных водоемов;
- бактериологического контроля эффективности обеззараживания в очаге инфекции.
5.1. Отбор и доставка материала на исследование
Материалом для бактериологического анализа могут служить испражнения, рвотные массы, желчь, трупный материал (отрезки тонкого кишечника и желчный пузырь); предметы, загрязненные испражнениями (постельное и нательное белье и др.); вода, ил, гидробионты, сточные воды, содержимое выгребных туалетов; смывы с объектов окружающей среды, пищевые продукты, мухи и др.
Материал от больного забирает медицинский персонал лечебного учреждения немедленно после выявления больного и до начала лечения антибиотиками. Руководитель является ответственным за правильность отбора, хранения и своевременность доставки проб в лабораторию.
Необходимо учитывать высокую чувствительность холерных
вибрионов к дезинфицирующим средствам и кислотам, возможность
антагонистического действия сопутствующей микрофлоры и
предполагаемую концентрацию возбудителя в исследуемом материале.
Если в материале от больных алгидной формой холеры концентрация
6 9
возбудителя достигает 10 - 10 м.к./мл, то в испражнениях больных
легкой формой и леченных антибиотиками, реконвалесцентов и
носителей количество холерных вибрионов обычно не превышает
2 4
10 - 10 м.к./г.
Для отбора проб используют чистую стерильную посуду, не содержащую следов дезинфицирующих растворов. Стерилизацию посуды и других средств забора материала проводят автоклавированием, сухим жаром или кипячением в 2%-м растворе пищевой соды.
Материал для исследования
Читайте также:
