Какая среда для стафилококков благоприятная
Роды: Staphylococcys (типовой),
Род Staphylococcys включает около 30 видов. Доминируют 3 вида:
Морфология и биологические свойства
Staphyle— виноградная гроздь. Шарообразной формы, диаметр 0,6-1 мкм, неподвижный, спор не имеет, капсула формируется лишь в условиях организма (индуцибельный фактор). Хорошо окрашиваются анилиновыми красителями, грамположительны.
Хемоорганотроф, по типу дыхания — факультативный анаэроб, не прихотлив к питательным средам и условиям культивирования. Растет на простых питательных средах: МПБ — диффузное помутнение, МПА — колонии диаметром 2-4 мм, пигментированные (золотистого, лимонно-желтого или белого цвета). Пигмент — каротиноид, не растворим в воде, растворим в спирту, бензине, хлороформе. Синтезируется лучше на свету, при комнатной температуре, дополнительной аэрации на плотных питательных средах с молоком, картофелем или глицерином.
Пигментообразование: у S. aureus пигмент золотистый, у S. saprophyticus — лимонно-желтый, S. epidermidis — лимонно-желтый или белый.
Температурный диапазон роста 6-46° С, оптимальная 35-37°С, рН 4,2-9,3, оптимум 7,2.
Галотолерантный(устойчив к высоким концентрациям солей), большинство штаммов растет в присутствии 15% NaCl, сахарозы — до 40%, желчных кислот — до 40%.
Питательные среды для культивирования стафилококков:
2. Кровяной МПА с 5% бараньих или кроличьих эритроцитов — альфа-гемолиз;
3. Солевой МПБ — накопительная среда ( МПБ+ 7-10 % NaCl);
4. Желточно-солевой агар (ЖСА) — дополнительно содержит суспензию желтка куриного яйца (для определения лецитовителазы).
Семейство Micrococcaceae оксидаза(-), каталаза(+) — признак дифференциации от семейства Streptococcaceae; последнее оксидаза(-), каталаза(-).
Сахаролитические гидролазы: лактоза, глюкоза, маннит, мальтоза, сахароза — ферментация до кислоты без газа.
Примечание: стафилококк глюкозу и маннит ферментирует как в аэробных, так и в анаэробных условиях (отличие от стрептококка); NH3+, H2S-, индол +, восстанавливает нитраты в нитриты, разжижает желатин воронкообразно.
Липолитические ферменты: фосфотаза, лецитовителаза.
Факторы вирулентности стафилококков
1. Структурные компоненты: микрокапсула, компоненты клеточной стенки — протеин А, тейхоевые кислоты, пептидогликан.
2. Ферменты агрессии: плазмокоагулаза, лецитиназа, гиалуронидаза, муромидаза, фибринолизин и др.
3. Токсины: гемолизины, лейкоцидин, эксфолиативный токсин, токсин синдрома токсического шока, энтеротоксин.
Возникновение пищевых отравлений стафилококковой природы связано с действием термостабильных энтеротоксинов (100°С — 30 мин.), продуцируемых золотистыми стафилококками.
Экология и распространение
Стафилококки являются представителями микрофлоры кожи, слизистых полости рта, носоглотки, кишечника. Они постоянно выделяются из организма человека и могут быть обнаружены на предметах обихода, в воде, воздухе, почве. Особую опасность представляет S. aureus как потенциально патогенный для человека микроорганизм.
Источник стафилококковой инфекции: больной человек, носитель.
Механизмы и пути передачи: воздушно-капельный, контактный, алиментарный, инъекционный.
Стафилококки способны поражать практически все ткани организма и вызывать гнойно-воспалительные процессы различной локализации, раневую инфекцию, пищевые интоксикации.
При генерализации местных процессов возникает сепсис, септицемия (септикопиемия).
S. aureus может быть возбудителем внутрибольничных инфекций.
Исследуемый материал: гной, слизь, мокрота, кровь, моча, ликвор и др.
I. Бактериоскопический метод.
Микроскопия мазков, окрашенных по Граму — грамположительные кокки, в виде виноградных гроздей.
II. Бактериологический метод.
1. Посев на солевой бульон (среда накопления).
2. Посев на кровяной МПА — золотистые колонии с зоной α-гемолиза; ЖСА — колонии с радужным ореолом (положительная проба на лецитовиттеллазу).
3. Откол подозрительных колоний на косячок МПА с целью выделения чистой культуры.
4. Проверка чистоты выделенной культуры — микроскопия мазков, окрашенных по Граму (однородная популяция грамположительных гроздевидных кокков).
5. Постановка диагностических тестов: оксидаза (-), каталаза (+) — семейство Micrococcaceae; аэробное и анаэробное сбраживание глюкозы — род Staphylococcus; реакция на плазмокоагулазу (+/-), лецитовиттеллазу (+) — только у S. aureus.
6. Дифференцировка видов
Дифференцировка видов стафилоккоков
| Признак | виды | ||
| S. aureus | S. epidermidis | S. saprophyticus | |
| Плазмокоагулаза | + | - | - |
| Анаэробное сбраживание маннита | + | - | - |
| Окисление маннита | + | - | + |
| Чувствительность к новобиоцину | чувств. | нет | нет |
7. Внутривидовая дифференцировка. Определение антибиотикограммы и фаготипирование.
Иммунитет.Антимикробный, антитоксический, ненапряженный, непродолжительный, связан как с клеточными, так и гуморальными факторами.
Специфическая профилактика и терапия.Профилактика стафилоккоковых инфекций направлена на выявление микробоносителей золотистых стафилоккоков, главным образом, среди персонала хирургических отделений больниц и родовспомогательных учреждений и их санации. Для профилактики стафилоккоковых осложнений проводят активную иммунизацию стафилоккоковым анатоксином больных, накануне плановых хирургических операций, или беременных в конце беременности.
Для специфической терапии септических инфекци используют донорский антистафилоккоковый иммуноглобулин или антистафилоккоковую плазму.
При хронических инфекциях применяют стафилоккоковый анатоксин и/или стафилоккоковую аутовакцину с целью создания антитоксического и антимикробного иммунета.
Антибиотикотерапия стафилоккоковых инфекций проводится под контролем антибиотикограммы.
| | | следующая лекция ==> | |
| ОСНОВНЫЕ ВОЗБУДИТЕЛИ ГСИ | | | СТРЕПТОКОККИ |
Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет
Для выделения культур стафилококков обычно используют 5%-ный кровяной агар (кровь овцы, кролика, крупного рогатого скота). При исследовании образцов, содержащих постороннюю микрофлору, целесообразно использовать селективные среды.
Таблица 9. Дифференциальные признаки стафилококков, имеющих основное медицинское значение
| Признак | S. aureus | S. epidermidis | S. saprophyticus | |
| Anaerobius | Aureus | |||
| Наличие каротиноидного сегмента | – | ± | – | + |
| Способность к росту в анаэробных условиях (тиогликолевая среда) | + | + | + | ± |
| Рост на средах с 10% NaCI | + | + | ± (слабо) | + |
| Рост при: | ||||
| 15°С | ? | + | – (слабо) | + |
| 45°С | – | + | + | ± |
| Образование кислоты при ферментации углеводов в аэробных условиях: | ||||
| ксилоза | – | – | – | – |
| арабиноза | – | – | – | – |
| раффиноза | – | – | – | – |
| сахароза | + | + | + | + |
| маннит | – | + | – | ± |
| манноза | – | + | ± | – |
| трегалоза | – | + | – | + |
| лактоза | – | + | ± | ± |
| галактоза | – | + | ± | – |
| фруктоза | + | + | + | + |
| ксилит | – | – | – | ± |
| Восстановление нитратов | – | + | + (слабо) | – |
| Щелочная фосфатаза | + | + | + | – |
| Гиалуронидаза | + | + | + | ? |
| Уреаза | ? | ± | + | + |
| Коагулаза (на сыворотке кролика) | + | + | – | – |
| Фибринолизин | ? | ± | ± | ? |
| Гемолитическая активность | + | + | – (слабо) | – |
| ДНКаза | + | + | – (слабо) | – |
| Чувствительность к новобиоцину (МИК >1,6 мкг/мл) | + | + | + | – |
С целью дифференциации патогенных стафилококков от сапрофитных, а также от микрококков, используют среды, позволяющие одновременно определить один из признаков, характеризующих патогенные стафилококки. Приводим рецепты некоторых питательных сред.
Молочно-солевой агар
В 100 мл МПБ растворяют 6,5 г хлорида натрия, 20 г агар-агара. Устанавливают рН 7,4, стерилизуют при 121°С 20 минут. Перед использованием агар расплавляют, охлаждают до 45°С, добавляют 10% стерильного обезжиренного молока и разливают по чашкам Петри. На этой среде определяют пигментообразование и способность к росту при наличии 6,5% хлорида натрия.
Лактозо-солевой бульон с фенолротом
В 1000 мл дистиллированной воды растворяют 10 г триптона, 5 г мясного экстракта, 1 г дрожжевого экстракта, 5 г хлористого лития, 20 г агара. Устанавливают рН 6,8, разливают по пробиркам и стерилизуют при 121°С 15 минут. При росте коагулазоположигельных стафилококков среда желтеет (тест на коагулазу положительный).
Теллурит-полимиксин-желточный агар Крисли
В 1000 мл дистиллированной воды растворяют 10 г триптона, 5 г дрожжевого экстракта, 5 г маннита, 20 г хлорида натрия, 2 г хлористого лития, 18 г агара. Устанавливают рН 7,3, стерилизуют 15 минут при 121°С. Перед использованием в среду добавляют 100 мл 30%-ной желточной эмульсии (на физиологическом растворе), 0,4 мл стерилизованного фильтрацией 1%-ного водного раствора полимиксина М, 10 мл стерилизованного автоклавированием (121°С 15 мин) 1%-ного водного раствора теллурита натрия.
Среда Джиолиотта и Кантони
В 1000 мл дистиллированной воды растворяют 10 г триптона, 5 г мясного экстракта, 5 г дрожжевого экстракта, 5 г хлористого лития, 20 г маннита, 5 г хлористого натрия, 1,2 г глицина, 3 г пирувата натрия. Устанавливают рН 6,9, стерилизуют при 115°С 20 мин. Перед употреблением к среде добавляют 0,1 мл 1%-ного водного раствора теллурита натрия, стерилизованного фильтрацией, При росте коагулазоположительных стафилококков наблюдается почернение среды или черный осадок.
Среда Бэрда-Паркера
К 90 мл основной среды с температурой 45°С добавляют 6,3 мл глицинового раствора, 1 мл раствора теллурита натрия, 5 мл эмульсии желтка, перемешивают и разливают в чашки Петри. Среда пригодна к использованию в течение 28 дней (хранение при 4°С). Перед посевом на поверхность среды наносят 0,5 мл 20%-ного водного раствора пирувата натрия, стерилизованного фильтрацией; распределяют по поверхности, подсушивают. Колонии коагулазоположительных стафилококков черные, блестящие, с узкой серо-белой полосой и окружены прозрачной зоной.
Желточная эмульсия. Свежее куриное яйцо выдерживают в 0,001%-ном растворе HgCl2. Соблюдая требования асептики, отделяют желток и эмульгируют его в 200 мл физиологического раствора.
Глициновый раствор. Глицин — 20 г, дистиллированная вода — 100 мл. Стерилизуют при 120°С 15 минут.
Раствор теллурита натрия. Теллурит натрия — 1 г, дистиллированная вода — 100 мл. Стерилизуют фильтрацией.
Желточно-солевой агар Чистовича
В расплавленный МПА с 10% хлорида натрия (рН 7,2), охлажденный до температуры 60°С, добавляют желточную эмульсию. После тщательного перемешивания питательную среду разливают в чашки Петри.
Среда Чаплина-Бернса
К 100 мл МПА добавляют 3,3 мл 0,1%-ного водного раствора кристаллического фиолетового и 5 г лактозы. Устанавливают рН 6,8. Стерилизуют автоклавированием (110°С 30 минут). Колонии патогенных стафилококков растут быстрее, чем непатогенных, и приобретают фиолетовый или оранжевый цвет.
Среда Чемпена (для выделения патогенных стафилококков)
Вариант 1: пептон — 1%, D-маннит — 1%, натрия хлорид — 7,5%, дрожжевой экстракт — 0,25%, двузамещенный фосфорнокислый калий — 0,5%, агар-агар — 1,5%. Среду стерилизуют 90 минут при 110°С, устанавливают рН 7,0 и добавляют 10% стерильного обезжиренного молока (молоко способствует лучшему образованию пигмента).
Вариант 2: пептон — 1%, дрожжевой экстракт — 0, 25%, желатин — 3%, лактоза — 0,2%, D-маннит — 1%, натрия хлорид — 7,5%, двузамещенный фосфорнокислый калий — 0,5%, агар-агар — 1,5%. Стерилизуют 90 минут при 110°С, устанавливают рН 7,0.
а) Желточно-солевой агар. Среда предназначена для выделения стафилококков и выявления пигмента.
Для приготовления используют мясопептонный агар (pH 7,3±0,1) с добавлением 10% натрия хлорида. После розлива во флаконы по 100,0-200,0 мл агар стерилизуют в автоклаве в течение 20 мин при температуре 121°С.
Перед употреблением среду расплавляют, охлаждают до 45-50°С и добавляют 20% (по объему) стерильной желточной взвеси (1 желток куриного яйца на 150,0-200,0 мл стерильного изотонического раствора натрия хлорида). Среду быстро перемешивают, разливают в чашки, которые продолжительное время могут оставаться в холодильнике в полиэтиленовых пакетах. Готовая среда полупрозрачна, имеет беловатый цвет с легким кремовым оттенком.
Учет результатов производят через 36-48 ч инкубации в термостате при 35-37°С. На этой среде хорошо выявляются пигментные свойства микроорганизма, обусловленные липохромным пигментом. Вокруг колоний можно видеть радужный венчик за счет образования лецитовителлазы. Добавление к среде 10% стерильного снятого молока усиливает пигментообразование.
б) Желточная среда по Г.Н.Чистовичу. Среда предназначена для определения лецитиназной активности стафилококков.
К мясопептонному питательному агару, приготовленному по общепринятой прописи, добавляют 20% желточной взвеси (1 желток куриного яйца на 150,0-200,0 мл стерильного изотонического раствора натрия хлорида).
При определении лецитиназной активности по методу Чистовича исследуемую культуру стафилококка засевают на среду отдельными штрихами или бляшками. Посевы помещают в термостат при 36-37°С. Вокруг колоний стафилококка, продуцирующих лецигиназу, образуются четко выраженные зоны помутнения с радужным венчиком по периферии.
в) Среда Casman E.R. в модификации Ф.С.Флуера для получения стафилококкового энтеротоксина.
Состав:
Ферментативный гидролизат казеина
Цитрат железа — 0,25 г
KH2PO4 - 1,0 г
К2HPO4*3H2O - 1,0 г
MgSO4*7H2O - 0,2 г
L-цистин — 0,025 г
L-триптофан — 0,075 г
Ацетат натрия — 7,0 г
Кальция пантетонат — 0,0005 г
Тиамин гидрохлорид — 0,00004 г
Никотиновая кислота — 0,0012 г
Дистиллированная вода — до 1000,0 мл
Навески ингредиентов (кроме четырех — см. ниже) вносят в колбу с ферментативным гидролизатом казеина; объем ферментативного гидролизата вносится из расчета конечного содержания аминного азота в среде — 2,0 г/л. Затем вносят L-триптофан, предварительно растворенный в 3 мл 1N раствора НО. Общий объем воды доводят до 1 л дистиллированной водой, тщательно перемешивают. Подогревают (при частом перемешивании) и кипятят 1 мин для полного растворения. Устанавливают pH среды 7,3. Стерилизуют автоклавированием при 121°С в течение 15 мин.
Кальций пантетонат, тиамин гидрохлорид и никотиновую кислоту стерилизуют отдельно через миллипоровские фильтры и добавляют асептически в среду перед посевом.
Подготовка раствора кальция пантегоната: берут навеску 500,0 мкг, растворяют в 10,0 мл дистиллированной воды, стерилизуют пропусканием через миллипоровский фильтр и 1,0 мл стерильного пангентоната кальция асептически перед посевом добавляют к 1,0 л питательной среды перед посевом.
Подготовка раствора тиамина гидрохлорида: берут навеску 40,0 мкг, растворяют в 10,0 мл дистиллированной воды, стерилизуют пропусканием через миллипоровский фильтр и 1,0 мл стерильного раствора тиамин гидрохлорида асептически добавляют к 1,0 л питательной среды перед посевом.
Подготовка раствора никотиновой кислоты: берут навеску 12,0 мкг никотиновой кислоты, растворяют в 10,0 мл дистиллированной воды, стерилизуют пропусканием через миллипоровский фильтр и 1,0 мл стерильной никотиновой кислоты асептически добавляют к 1,0 л питательной среды перед посевом.
г) Бульон для энтеротоксигенных стафилококков HiMedia, Casein Hydrolysate Broth. Бульон используют для культивирования стафилококков с целью получения энтеротоксина, используемого в пробе на котятах и в серологических исследованиях.
Состав, г/л:
Гидролизат казеина кислотный — 20,0
Железа цитрат — 0,025
Калия дигидроортофосфат — 2,0
Магния сульфат — 0,20
L-цистин — 0,025
Натрия ацетат — 7,0
L-триптофан — 0,075
Кальция пантотенат — 0,0005
Тиамин — 0,00004
Никотиновая кислота — 0,0012
pH 7,3±0,2
Навеску среды 29,33 г вносят в 1000,0 мл дистиллированной воды. Тщательно размешивают. Подогревают (при частом помешивании) и кипятят 1 мин для полного растворения. Устанавливают pH. Разливают в соответствующие емкости. Стерилизуют при 121°С в течение 15 мин.
Испытуемые на энтеротоксигенность стафилококки засевают на этот бульон, выращивают в течение 18-24 ч при 35°С в атмосфере, содержащей 30% углекислоты. Полученную культуру из каждой пробирки в количестве 3,0 мл засевают в два флакона со 100,0 мл той же среды и инкубируют в тех же условиях 3 дня. Бульонные культуры затем центрифугируют и надосадочную жидкость пропускают через мембранный фильтр для стерилизации.
Полученные фильтраты тестируют на присутствие α- и β-гемолизинов. В случае положительного результата токсин денатурируют прогреванием или нейтрализуют иммунной сывороткой. После денатурации фильтраты можно вводить котятам и наблюдать за появлением рвоты.
Этот бульон можно использовать для приготовления плотной среды, если добавить в его состав агар. Культуры, выращенные на таком агаре, можно применять и для заражения других животных, и для исследования в системе антиген-антитело методом диффузии.
Готовая среда янтарной окраски, прозрачна или опалесцирует.
д) Бульон для получения и очистки токсина синдрома токсического шока (ТСТШ).
Состав:
Бактопентон Difco — 6,0 г
Никотиновая кислота — 1,0 мг
Солянокислый тиамин — 5,0 мг
Бактопептон Difco растворяют в 100,0 мл дистиллированной воды, устанавливают pH6,5 и проводят стерилизацию в течение 15 мин при 121°С. Никотиновую кислоту и солянокислый тиамин добавляют асептически в среду перед посевом. Предварительно берут 10,0 мг никотиновой кислоты, растворяют в 10,0 мл дистиллированной воды, стерилизуют пропусканием через миллипоровский фильтр и 1,0 мл добавляют к 100,0 мл среды перед посевом.
Раствор солянокислого тиамина готовят следующим образом: берут 50,0 мг солянокислого тиамина, растворяют в 10,0 мл дистиллированной воды, затем стерилизуют пропусканием через миллипоровский фильтр и асептически добавляют 1,0 мл к 100,0 мл основной среды.
е) Солевой бульон для обогащения материала, исследуемого на энтеротоксигенные стафилококки. К 100,0 мл мясопептонного бульона (МПБ) с pH 7,3 добавляют 6,5 г хлористого натрия и разливают в пробирки по 10,0 мл, стерилизуют в автоклаве при 121°С в течение 20 мин.
ж) Среда Фогель-Джонсона, плотная среда для выделения энтеротоксигенных стафилококков.
Состав:
Триптиказа — 1,0 г
Дрожжевой экстракт — 0,5 г
Глицин — 1,0 г
Маннит — 1,0 г
Хлористый литий — 0,5 г
Двузамещенный фосфат катия K2HPO4*3H2O — 0,5 г
Теллурит калия (1% раствор) — 2,0 мл
Феноловый красный — 0,0025 г
Агар — 1,6 г
Дистиллированная вода — 100,0 мл
Навески триптиказы, дрожжевого экстракта, глицина, маннита, хлористого лития, двузамещенного фосфата калия, фенолового красного и агара растворяют в 100,0 мл дистиллированной воды.
Устанавливают pH 7,2 и стерилизуют в автоклаве при 121°С 20 мин. Теллурит калия добавляют асептически в остуженную среду до 45°С перед посевом. Среду разливают в чашки Петри.
з) Теллурит-полимиксин-желточный агар (г/100 мл) для выделения энтеротоксигенных стафилококков.
Состав:
Триптон — 1,1 г
Дрожжевой экстракт — 0,55 г
Маннит — 0,55 г
Хлорид натрия NaCl — 2,2 г
Теллурит калия (1%-ный раствор) — 1,0 мл
Желток яйца (в 50 мл физиологического раствора) — 10,0 мл
Полимиксинсульфат (1%-ный раствор) — 0,04 мл
Агар — 2,0 г
Навески триптона, дрожжевого экстракта, маннита, хлористого натрия и агар добавляют в колбу с 100,0 мл дистиллированной воды, доводят до кипения.
Устанавливают pH среды 7,2 и стерилизуют в автоклаве при 121°С в течение 15 мин. В остуженную до 45°С среду асептически вносят раствор теллурита калия, взвесь желтка куриного яйца и полимиксин, после чего среду разливают в чашки Петри по 25,0 мл. Выросшие колонии стафилококка имеют черный цвет.
з) Среда Baird-Parker (г/100,0 мл) для выделения энтеротоксигенных стафилококков.
Состав:
Триптон — 1,0 г
Мясной экстракт — 0,5 г
Дрожжевой экстракт — 0,1 г
Глицин — 1,2 г
Пируват натрия — 1,0 г
Хлористый литий — 0,5 г
Теллурит калия (2,0%-ный раствор) — 0,5 мл
Желток яйца — 5,0 мл
Агар — 2,0
Вода дистиллированная — 100,0 мл
Все навески (кроме раствора теллурита и желтка) размешивают в 100,0 мл дистиллированной воды. Смесь нагревают при перемешивании и кипятят в течение 1 мин до полного расплавления ингредиентов. Устанавливают pH 7,1 и стерилизуют при 121°С в течение 15 мин. Основа среды может храниться в холодильнике в течение 1 мес. Перед употреблением в расплавленную и охлажденную до 45°С основу, соблюдая правила асептики, прибавляют из расчета на 100,0 мл среды 0,5 мл 2%-ного раствора теллурита калия и 0,5 мл эмульсии яичного желтка.
Среду тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри в объеме не менее 20,0 мл на чашку. Чашки со средой могут быть использованы в течение 24-28 ч. Перед посевом чашки со средой подсушивают в термостате общепринятым способом.
Выросшие колонии S. aureus имеют черный цвет (за счет восстановления теллура) с зонами просветления и опалесценции (за счет лецитиназы).
и) Основа дифференцирующего агара (с плазмой) для стафилококков HiMedia, Coagulase Mannitol Agar Base. Среду с добавкой плазмы используют для выделения и дифференциации Staphylococcus spp. из патологического материала и для идентификации чистых культур S.aureus по способности коагулировать плазму и ферментировать маннит.
Состав, г/л:
Настой мозга и сердца — 5,0
Гидролизат казеина ферментативный — 10,5
Перевар соевой муки папаиновый — 3,5
Натрия хлорид — 3,5
Маннит — 10,0
Бромкрезоловый пурпурный — 0,02
Агар — 14,5
pH 7,4±0,2
Размешивают 47,0 г среды в 1000,0 мл дистиллированной воды. Кипятят до полного растворения частиц. Стерилизуют при 121°С в течение 15 мин. Охлаждают до 45-50°С и асептически добавляют до 7-15% (об.) стерильную предварительно проверенную плазму. Тщательно перемешивают и разливают в стерильные чашки Петри.
В случае ферментации маннита среда вокруг колонии закисляется, и индикатор бромкрезоловый пурпурный окрашивается в желтый цвет. Если микроорганизмы коагулируют плазму, вокруг их колоний образуется непрозрачная зона. Коагулазоотрицательными видами стафилококка маннит может ферментироваться с образованием желтой зоны, но она не будет мутной.
Готовая среда имеет лиловую окраску, слегка опалесцирует.
к) Среда для выявления термостабильной дезоксирибонуклеазы (ДНКазы) у энтеротоксигенных стафилококков. ДНКаза определяется по методу, основанному на метахроматических свойствах толуидина голубого.
К 1000,0 мл 0,05 М трис-буфера (оксиметиламинометан), pH 9,0, добавляют 0,3 г ДНК, затем 10,0 г агара Difco, 1 мл 0,01 М раствора CaCl2, 10,0 г хлористого натрия, 3,0 мл 0,1 М раствора толуидина голубого. Среду разливают в пробирки по 12-15 мл, закрывают резиновыми пробками и хранят в холодильнике до 3-5 мес.
Перед постановкой реакции среду растапливают и разливают в чашки Петри, подсушивают при 37°С в течение 1 ч, стерильно вырезают лунки диаметром 3 мм, отсасывают пипеткой агар и вносят в лунки пастеровской пипеткой взвеси испытуемых культур.
Для этого пробирки с суточным ростом испытуемых культур стафилококков на полужидком питательном агаре прогревают в кипящей водяной бане 15 мин и вносят в лунки в агаровой пластинке, содержащей ДНК и толлуидин голубой инкубируют при 37°С. В результате гидролиза ДНК, находящейся в среде, термостабильной ДНКазой стафилококков, образуются зоны просветления с розовым окрашиванием. Появление через 1-2 ч зон, окрашенных в розовый цвет, расценивается как положительная реакция на наличие термостабильной ДНКазы.
л) Молочно-солевой агар С.Л. Петрович (для определения каротиноидного пигмента стафилококков). К расплавленному мясопептонному агару с pH 7,2±0,2, содержащему 5-7,5% натрия хлорида, добавляют ex tempore 10% стерильного теплого молока, хорошо обезжиренного, тщательно перемешивают и разливают в стерильные чашки Петри.
Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 25.2.2020
Собственно, идея завести дневник началась с этой статьи о среде обитания бактерий и вирусов в человеческом организме. Именно после ее прочтения я поняла, что мне необходим органайзер для информации и, мне кажется электронный дневник - это то что нужно. Итак статью располагаются ниже
Среда обитания вирусов и бактерий и кислотно- щелочной баланс.
Вирусы внедряются в организм и при ацидозе, и при алкалозе. Они являются пусковым механизмом в развитии болезни, ослабляя клетку и давая возможность внедриться другим микроорганизмам. Вирусы чаще ведут к ощелачиванию организма.
Простейшие могут жить в любой среде, но активизируются они в щелочной рН. Это амебы, лямблии, токсоплазмы, трихомонады и др.
Самые тяжелые формы болезней и злокачественные опухоли обусловлены поражениям грибками Аспергиллус Нигер, Фумигатус и Микозис Фунгоидес . Они очень любят щелочную среду и относятся к плесневым (трихоптон, микроспорум, эпидермофитон, кладоспорум, аспергиллус, мукор и др.) и смешанным (бластомицес, кокцидес, риноспоридиум, микозис фунгоидес и др.). Дрожжеподобные грибки (кандида, криптококкус, трихоспориум и др.) предпочитают кислую среду.
Глисты хорошо себя чувствуют в кислой среде.
Но тогда как же им живется в щелочной среде тонкого кишечника?
Во-первых, они питаются через присоски тканевой жидкостью или свежей кровью, а некоторые – и тем, и другим.
Во-вторых, внедряются они, скорее всего при уже имеющемся дисбактериозе и сдвиге рН в тонком кишечнике из сильно щелочной в слабощелочную.
Поэтому глисты и имеют возможность без труда присосаться или внедриться в слизистую кишечника.
И далее они распространяются в те органы, где имеется сдвиг рН в кислую сторону.
Например, личинки трихинелл выбирают себе в качестве жилища мышцы, где имеется большое количество молочной кислоты.
Дисбактериоз в кишечнике развивается в результате частого поступления несбалансированной по рН пищи.
В связи с этим и меняется кислотно-щелочная среда в кишечнике, создавая условия для паразитов.
Паразиты, в свою очередь, усугубляют состояние кишечника, и развивается стойкий дисбактериоз .
При здоровом желудочно-кишечном тракте патогенные микроорганизмы в нем не задерживаются. Это доказал еще Луи Пастер на собственном опыте, выпив стакан воды с живыми холерными вибрионами и не заболев.
Из всего этого следует совершенно ясный вывод, что регулировать свое кислотно-щелочное состояние мы можем с помощью трех основных механизмов:
Известен хорошо тот факт, что при длительной и интенсивной физической нагрузке из мышц в кровь поступает в 10 раз больше молочной кислоты, чем в норме.
Здоровый организм вполне справляется с выведением избытка кислоты из организма, за действуя в частности, дыхательный механизм.
А вот если нагрузки чрезмерно интенсивны, что сейчас часто можно увидеть не только в школах олимпийского резерва, но и просто в фит нес-центрах!
Существует несколько простых с пособов для определения сдвига рН в ту или другую сторону:
можно применить специальные тест-полоски, продающиеся в аптеках;
бледно-розовая белесая конъюнктива глаз говорит о том, что основное состояние сдвинуто в сторону кислотности, а темно-красная – о преобладании щелочности. Это свойство конъюнктивы подмечено русским физиком и специалистом в области народной медицины – В.В. Караваевым
.
Он же предлагал еще один тест.
Как известно, в щелочной среде условия благоприятны для развития грибков . Грибки ближе к растительным клеткам, поэтому у них рН щелочной, а свойства – анаболические, т.е. способствующие быстрому росту , например, опухоли.
Итак, щелочная среда наиболее благоприятна для развития плесневых грибков, анаэробных бактерий, простейших и вирусов,
а кислая – для гельминтов, дрожжевых грибков и аэробных бактерий.
Аспергиллус Нигер, Фумигатус и Микозис Фунгоидес,стафилококки, стрептококки, , ,кандида, криптококкус, трихоспориум,рак,опухоль
Статью я взяла с блога st-valentines.blogspot.com, (ее автор некий Виктор Анасис), чтобы подробнее разобраться в информации.
После прочтения статьи вывод напрашивается сам собой: если кислотно-щелочной баланс в норме, то организму ни по чем разные вредители - это доказал Луи Мастер на собственном опыте. Остается только понять, принять и претворить в реальность механизмы поддержания хрупкого равновесия ph.
Читайте также:
