Исследование на холеру инвитро

Холера – это острое инфекционное заболевание, которое проявляется обильной диареей с последующим обезвоживанием организма.

Заражение происходит через воду, морепродукты и другую пищу, инфицированную фекалиями больных холерой. Возбудителем заболевания является вибрион холеры.

Современная система очистки воды позволяет предотвратить заражение, поэтому холера обычно встречается в развивающихся странах, где есть проблемы с водопроводными сетями.

Чаще всего холерой заболевают дети.

Болезнь легко устраняется с помощью вакцины, однако без лечения она может приводить к летальному исходу в течение нескольких часов.

У большинства людей, зараженных холерным вибрионом, не возникает выраженных симптомов. При этом в течение 7-14 дней вместе со стулом инфицированные люди выделяют вибрион холеры, который может заразить воду. Чаще всего после заражения бактерией возникает умеренная, быстро проходящая диарея. Лишь у 10 % больных симптомы заболевания, проявляясь через 2-3 дня после заражения, являются достаточно выраженными:

  • обильная водянистая диарея с выделением белой непрозрачной жидкости без запаха,
  • рвота,
  • сильная жажда, сухость во рту, мышечные судороги, уменьшение количества мочи, слабость, вялость кожи, западение глазных яблок, сморщивание кожи пальцев – признаки, связанные с обезвоживанием организма и с потерей электролитов.

При отсутствии лечения могут возникать:

  • шок – угрожающее жизни состояние, характеризующееся малым объемом циркулирующей в организме крови (гиповолемией), снижением количества кислорода и крайне низким кровяным давлением,
  • тяжелое поражение почек (вследствие гиповолемии).

Для детей, кроме перечисленных симптомов, при холере характерны:

  • сильная сонливость или кома,
  • лихорадка,
  • судороги.

Общая информация о заболевании

Холера – это острое инфекционное заболевание тонкого кишечника, которое проявляется диареей и последующим обезвоживанием. Оно вызывается холерным вибрионом. Заражение происходит через употребление содержащей бактерии воды, реже – через морепродукты, фрукты, овощи, зерна и другую пищу, инфицированную фекалиями больных людей.

Инфицированный человек, даже при отсутствии симптомов, выделяет бактерии со стулом в течение 7-14 дней. Бактерии, вызывающие холеру, могут сохраняться в стоячей воде (в колодце, озере) в течение длительного времени. Кроме того, попадая в открытые воды, вибрион холеры прикрепляется к крошечным ракообразным (копеподам), с которыми путешествует, распространяясь по всему миру, так как ракообразные следуют за своим источником питания – водорослями, растущими в различных местах.

Заболевание чаще всего встречается в районах с плохими санитарными условиями, где вода не проходит должной очистки. В развитых странах случаи холеры очень редки.

Чувствительность к бактерии может быть различной, она выше у людей с первой группой крови. Больше всего холере подвержены дети.

Вибрион холеры, попадая в организм, движется по пищеварительному тракту. Часть бактерий погибает под воздействием желудочного сока, часть проникает в тонкий кишечник, начинает размножаться и выделять холерный токсин, который при массивном заражении вызывает выделение жидкости и электролитов (натрия, калия, хлора и др.) в просвет тонкой кишки. Это приводит к диарее с последующим обезвоживанием и потерей электролитов.

Холера может вызывать следующие осложнения.

  • Гипогликемия – низкий уровень сахара в крови. Глюкоза является основным источником энергии в организме, поэтому гипогликемия опасна для жизни.
  • Гипокалиемия – низкий уровень калия в крови. При холере происходит потеря калия со стулом. Крайне низкий уровень калия ведет к нарушению работы сердца и нервной системы и представляет угрозу для жизни.
  • Почечная недостаточность, которая может приводить к накоплению в организме азотистых шлаков и, как следствие, к шоку – угрожающему жизни состоянию.
  • Смерть. Не получая лечения, больной может умереть от обезвоживания и шока в течение пары дней, а в наиболее тяжелых случаях – через несколько часов.

Кто в группе риска?

  • Жители регионов с плохими санитарными условиями, где вода не проходит должных степеней очистки.
  • Лица со сниженным уровнем выработки желудочного сока: вибрион холеры не является кислотоустойчивым, и бактерии, попадая в желудок, частично уничтожаются желудочным скоком.
  • Люди, проживающие с больным холерой.
  • Лица с первой группой крови. Риск развития холеры в данном случае будет выше в два раза.
  • Те, кто употребляет сырых моллюсков и морепродукты.

Для постановки диагноза проводится анализ кала или рвотных масс, направленный на выявление в нем вибриона холеры (он имеет вид запятой). Также необходимо измерять уровни электролитов, остаточного азота и мочевины.

  • Исследование под микроскопом испражнений или рвотных масс.
  • Посев рвотных масс или отделяемого из кишечника. Анализ предполагает помещение кала или рвотных масс в питательную среду, где бактерии начинают быстро размножаться и становятся доступными визуальной оценке.
  • Исследование мазка методом иммунофлюоресценции. В полученный материал добавляются меченые антитела (молекулы, специфически связывающиеся с вибрионом холеры). Под воздействием ультрафиолетового излучения комплекс из бактерий, "склеенных" с антителами, дает характерное зеленоватое свечение, что говорит о присутствии вибриона холеры во взятом материале.

В целях оценки степени обезвоживания организма и функции почек проводятся следующие анализы.

  • Общий анализ крови (без лейкоцитарной формулы и СОЭ).
    • Гемоглобин – содержащийся в эритроцитах белок, который переносит кислород от легких к органам и тканям. При холере за счет уменьшения жидкой части крови в результате обезвоживания относительный уровень гемоглобина может быть повышен.
    • Гематокрит – показатель вязкости крови. При холере он будет повышенным, отражая сгущение крови.
  • Калий, натрий, хлор в сыворотке. Необходимо контролировать уровень электролитов в крови, так как их выраженное снижение может приводить к тяжелым осложнениям.
  • Креатинин и мочевина в сыворотке. Снижение уровня креатинина и мочевины указывает на развитие почечной недостаточности.

Холера требует незамедлительного лечения, являясь опасным для жизни заболеванием.

Лечение включает в себя регидратацию – восполнение потерянной жидкости и электролитов. Регидратация может проводиться орально или внутривенно в виде капельниц. После восполнения воды ее нормальный уровень продолжает поддерживаться специальными растворами.

Также проводится терапия антибиотиками, снижающими длительность заболевания и диареи (тетрациклином, доксициклином, фуразолидоном).

  • Необходимо мыть руки с мылом после посещения туалета, перед едой, вернувшись с улицы.
  • Употребление только очищенной воды, кипяченой или фильтрованной, позволит избежать заражения. Молоко следует употреблять пастеризованное.
  • Не следует употреблять сырые фрукты и овощи из областей, где бывают вспышки холеры.
  • Целесообразно избегать употребления суши, сырых или недостаточно обработанных морепродуктов.
  • Для предотвращения инфицирования перед путешествием в зараженную область используют вакцину против холеры.

Рекомендуемые анализы

  • Натрий в сыворотке
  • Хлор в сыворотке
  • Калий в сыворотке
  • Мочевина в сыворотке

Литература

  • Dan L. Longo, Dennis L. Kasper, J. Larry Jameson, Anthony S. Fauci, Harrison's principles of internal medicine (18th ed.). New York: McGraw-Hill Medical Publishing Division, 2011.

Холера – это острое инфекционное заболевание, которое проявляется обильной диареей с последующим обезвоживанием организма.

Заражение происходит через воду, морепродукты и другую пищу, инфицированную фекалиями больных холерой. Возбудителем заболевания является вибрион холеры.

Современная система очистки воды позволяет предотвратить заражение, поэтому холера обычно встречается в развивающихся странах, где есть проблемы с водопроводными сетями.

Чаще всего холерой заболевают дети.

Болезнь легко устраняется с помощью вакцины, однако без лечения она может приводить к летальному исходу в течение нескольких часов.

У большинства людей, зараженных холерным вибрионом, не возникает выраженных симптомов. При этом в течение 7-14 дней вместе со стулом инфицированные люди выделяют вибрион холеры, который может заразить воду. Чаще всего после заражения бактерией возникает умеренная, быстро проходящая диарея. Лишь у 10 % больных симптомы заболевания, проявляясь через 2-3 дня после заражения, являются достаточно выраженными:

  • обильная водянистая диарея с выделением белой непрозрачной жидкости без запаха,
  • рвота,
  • сильная жажда, сухость во рту, мышечные судороги, уменьшение количества мочи, слабость, вялость кожи, западение глазных яблок, сморщивание кожи пальцев – признаки, связанные с обезвоживанием организма и с потерей электролитов.

При отсутствии лечения могут возникать:

  • шок – угрожающее жизни состояние, характеризующееся малым объемом циркулирующей в организме крови (гиповолемией), снижением количества кислорода и крайне низким кровяным давлением,
  • тяжелое поражение почек (вследствие гиповолемии).

Для детей, кроме перечисленных симптомов, при холере характерны:

  • сильная сонливость или кома,
  • лихорадка,
  • судороги.

Общая информация о заболевании

Холера – это острое инфекционное заболевание тонкого кишечника, которое проявляется диареей и последующим обезвоживанием. Оно вызывается холерным вибрионом. Заражение происходит через употребление содержащей бактерии воды, реже – через морепродукты, фрукты, овощи, зерна и другую пищу, инфицированную фекалиями больных людей.

Инфицированный человек, даже при отсутствии симптомов, выделяет бактерии со стулом в течение 7-14 дней. Бактерии, вызывающие холеру, могут сохраняться в стоячей воде (в колодце, озере) в течение длительного времени. Кроме того, попадая в открытые воды, вибрион холеры прикрепляется к крошечным ракообразным (копеподам), с которыми путешествует, распространяясь по всему миру, так как ракообразные следуют за своим источником питания – водорослями, растущими в различных местах.

Заболевание чаще всего встречается в районах с плохими санитарными условиями, где вода не проходит должной очистки. В развитых странах случаи холеры очень редки.

Чувствительность к бактерии может быть различной, она выше у людей с первой группой крови. Больше всего холере подвержены дети.

Вибрион холеры, попадая в организм, движется по пищеварительному тракту. Часть бактерий погибает под воздействием желудочного сока, часть проникает в тонкий кишечник, начинает размножаться и выделять холерный токсин, который при массивном заражении вызывает выделение жидкости и электролитов (натрия, калия, хлора и др.) в просвет тонкой кишки. Это приводит к диарее с последующим обезвоживанием и потерей электролитов.

Холера может вызывать следующие осложнения.

  • Гипогликемия – низкий уровень сахара в крови. Глюкоза является основным источником энергии в организме, поэтому гипогликемия опасна для жизни.
  • Гипокалиемия – низкий уровень калия в крови. При холере происходит потеря калия со стулом. Крайне низкий уровень калия ведет к нарушению работы сердца и нервной системы и представляет угрозу для жизни.
  • Почечная недостаточность, которая может приводить к накоплению в организме азотистых шлаков и, как следствие, к шоку – угрожающему жизни состоянию.
  • Смерть. Не получая лечения, больной может умереть от обезвоживания и шока в течение пары дней, а в наиболее тяжелых случаях – через несколько часов.

Кто в группе риска?

  • Жители регионов с плохими санитарными условиями, где вода не проходит должных степеней очистки.
  • Лица со сниженным уровнем выработки желудочного сока: вибрион холеры не является кислотоустойчивым, и бактерии, попадая в желудок, частично уничтожаются желудочным скоком.
  • Люди, проживающие с больным холерой.
  • Лица с первой группой крови. Риск развития холеры в данном случае будет выше в два раза.
  • Те, кто употребляет сырых моллюсков и морепродукты.

Для постановки диагноза проводится анализ кала или рвотных масс, направленный на выявление в нем вибриона холеры (он имеет вид запятой). Также необходимо измерять уровни электролитов, остаточного азота и мочевины.

В целях оценки степени обезвоживания организма и функции почек проводятся следующие анализы.

  • Общий анализ крови (без лейкоцитарной формулы и СОЭ).
    • Гемоглобин – содержащийся в эритроцитах белок, который переносит кислород от легких к органам и тканям. При холере за счет уменьшения жидкой части крови в результате обезвоживания относительный уровень гемоглобина может быть повышен.
    • Гематокрит – показатель вязкости крови. При холере он будет повышенным, отражая сгущение крови.
  • Калий, натрий, хлор в сыворотке. Необходимо контролировать уровень электролитов в крови, так как их выраженное снижение может приводить к тяжелым осложнениям.

    Оставьте ваш E-mail и получайте новости, а также эксклюзивные предложения от лаборатории KDLmed

    Дополнительный материал к занятию

    Взятие материала для диагностического исследования необходимо производить до начала лечения антибиотиками. Предпочтительнее забор нативного материала, однако при отсутствии такой возможности следует пользоваться средами-консервантами.

    1. Пробы нативного материала (испражнения и рвотные массы) собирают в индивидуальное отмытое от дезинфицирующего раствора судно, на дно которого помещают меньший по размерам сосуд, удобный для обеззараживания, кипячения, или листы пергаментной бумаги, целлофана и др. Выделения в объёме 10-20 мл при помощи стерильных металлических картонных или деревянных ложек переносят в стерильную широкогорлую банку, плотно закрывают её стеклянной пробкой или корковой пробкой с пергаментной бумагой. При отсутствии банки образцы можно помещать в стерильные пробирки. В этом случае для переноса материала используют стерильные трубочки. Трубочку захватывают корнцангом, зачерпывают ею выделения, помещают в пробирку, которую затем закрывают непромокаемой пробкой.

    2. В ряде случаев (у реконвалесцентов) исследуют желчь, полученную при дуоденальном зондировании.

    3. От трупов лиц, умерших от заболевания, похожего на холеру, берут фрагменты верхней, нижней и средней частей тонкого кишечника длиной около 10 см. Фрагменты выделяют между двумя лигатурами, наложенными на оба конца изымаемого участка кишечника. Желчный пузырь извлекают целиком после перевязки протока.

    При исследовании реконвалесцентов и здоровых лиц им предварительно дают слабительное (25-30 г сернокислой магнезии), чтобы собрать жидкие испражнения из верхней части кишечника. Пробы помещают в 1% пептонную воду. При массовом исследовании на носительство вибриона можно использовать метод группового посева, когда в один посев объединяют пробы от 5-10 человек. При положительном результате пробу проводят с каждым из обследованных.

    Консерванты: 1% щелочная пептонная вода с рН 9,1, пептонная вода с теллуритом калия и др.

    Исследованию подвергаются также пищевые продукты, почва, вода, смывы с различных объектов, мухи, бельё, загрязнённое выделениями больного, обитатели рек (рыбы, земноводные, раки и т.д.). Материал помещают в ведро и упаковывают в деревянный ящик. Ящик обвязывают, пломбируют и пересылают с нарочным.

    Контрольные вопросы

    Задания для выполнения в процессе самоподготовки

    Напишите по-латыни названия возбудителей холеры, названия галофильных вибрионов, кампилобактеров (основные виды) и хеликобактеров.

    Работа студента на практическом занятии

    1. Окончание исследования на гемокультуру (4-й день, демонстрация). Учтите результаты на среде Олькеницкого. Поставьте реакцию агглютинации на стекле с монорецепторными сальмонеллёзными сыворотками, сформулируйте ответ. Устно перечислите признаки, по которым вы даете ответ. Запишите проделанную работу и результат в журнал.

    2. Окончание исследования на коли-инфекцию (3-й день). Повторите устно ход исследования, поставьте реакцию агглютинации на стекле выделенной культуры с типоспецифическими ОВ-коли сыворотками. Учтите результат демонстрационной реакции агглютинации с живой и убитой кипячением культурой. Сформулируйте результат исследования, сделайте записи в журнале.

    3. Изучение морфологии и ферментативных свойств холерного вибриона. Промикроскопируйте и зарисуйте окрашенный по Граму мазок из чистой культуры холерного вибриона. Изучите ферментативные свойства холерного вибриона по демонстрационным посевам, запишите в дневник.

    4. Начало исследования испражнений на холерный вибрион. Ознакомьтесь с сопроводительной запиской, внесите данные в журнал. Изготовьте мазок из испражнений, окрасьте водным фуксином, промикроскопируйте. Посейте испражнения в пробирку с 1% пептонной водой и на чашку Петри со щелочным агаром. Запишите в журнал проделанную работу.

    5. Начало исследования воды на холерный вибрион. Ознакомьтесь с сопроводительной запиской, внесите данные в журнал. Произведите посев воды: к 450 мл исследуемой воды стерильно добавьте 50 мл 10% щелочного раствора пептона; запишите проделанную работу в журнал.

    6. Промикроскопируйте и зарисуйте мазок кампилобактера.

    7. Разбор схемы микробиологической диагностики разных форм кампилобактериоза и хеликобактерной инфекции.

    8. Изучение препаратов для диагностики, специфической профилактики и терапии кишечных инфекций. Просмотрите препараты, прочитайте этикетки, охарактеризуйте препарат: что представляет собой (сыворотка диагностическая или лечебная, диагностикум, аллерген, вакцина), как приготовлен, что содержит (антиген, антитела), для чего применяется; если препарат диагностический – что выявляется с его помощью, если препарат лечебно-профилактический – какое действие оказывает на организм; дозируется ли препарат и в каких единицах.

    Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет

    Информация об организации подтверждена: 14.01.2017

    Общие анализы крови


    Цена за микроскопию по методу Фонио


    Цена за активированное частичное тромбопластиновое время



    Цена за общий анализ крови без лейкоцитарной формулы и СОЭ



    Цена за исследование скорости и оседание эритроцитов

    Биохимические анализы крови

    Цена за аланинаминотрансферазу

    Цена за ангиотензин-превращающий фермент

    Цена за аспартатаминотрансферазу

    Цена за гамма-глутамилтранспептидазу, гамма-ГТ

    Цена за лактатдегидрогеназа

    Цена за исследование

    Анализы на гормоны

    Цена за адренокортикотропный гормон

    Цена за анализ на соматотропный гормон

    Цена за прямое определение

    Цена за трийодтиронин свободный

    Цена за тироксин свободный

    Цена за тиреотропный гормон

    Цена за ФСГ гормон

    Цена за хорионический гонадотропин человека

    Иммунология





    Цена за исследование фактора некроза опухоли


    Цена за иммунный статус


    Общие, биохимические анализы мочи, кала

    Цена за копрограмму

    Бактериологические исследования

    Цена за выявление возбудителей ИППП

    Цена за анализ на лактобактерии, определение ДНК в соскобе эпителиальных клеток урогенитального тракта

    Инфекционная диагностика, ПЦР диагностика, серологическая диагностика







    Цена за анализ на ВПЧ


    Цена за антигенный тест


    Цена за антитела и антигены





    Цена за анализ крови


    Цена за цитологическое исследование

    ДНК, генетические анализы

    Цена за 2-х человек, предполагаемая мать, ребенок

    Цена за 3-х человек, дедушка и бабушка с материнской стороны, ребенок

    Цена за 2-х человек, предполагаемый отец, ребенок

    Цена за 3-х человек, дедушка и бабушка с отцовской стороны, ребенок

    Онкомаркеры

    Цена за исследование на рак легких

    Цена за исследование плоскоклеточного рака

    Цена за исследование злокачественной меланомы

    Цена за исследование опухолевых заболеваний крови

    Цена за исследование рака яичников

    Цена за ПСА общий

    Цена за исследование на рак яичников

    Цена за исследование на рак молочной железы

    Цена за исследование на рак поджелудочной железы

    Аллергология


    Цена за анализ на панель аллергенов на бытовую пыль, плесневые и дрожжевые грибки


    Цена за тест на панель аллергенов на шерсть, пух, перо, перхоть, экскременты, слюну домашних животных


    Цена за панель аллергенов на лекарственные препараты, противоаллергические средства, анестетики

    Холера — особо опасное, карантинное инфекционное заболевание, вызываемое Vibrio cholerae биоваров cholerae и eltor, проявляющееся в виде острого гастроэнтерита с выраженной интоксикацией и обезвоживанием (эксикозом) в результате нарушения водно-электро­литного обмена, cвязанного с выработкой вибрионами холерного энтеротоксина (холерогена).

    Основной метод лабораторной диагностики холеры – бактериологический.

    Исследования на холеру проводятся круглосуточно в специальной лаборатории медицинскими работниками, прошедшими подготовку по особо-опасным инфекциям. Методы, применяемые для микробиологической диагностики холеры, представлены в схеме 13.

    Бактериологический метод состоит из нескольких этапов.

    Первый этап. Исследуемый материал засевают на щелочные (элективные) плотные питательные среды (щелочной агар Монсура – МПА с триптиказой, хлоридом на­трия, таурохолатом натрия, карбонатом натрия; TCBS - тиосульфат-цитрат-бромтимол-сахарозный агар;ще­лочной МПА) и жидкие среды обогащения (1% щелочная пептонная вода).

    Третий этап выполняется через 12— 14 ч от начала анализа. Производится пересев из верхней части 2-й среды накопления на плотные элективные питательные среды. Изучают и отбирают для исследования типичные для холерного вибриона колонии на плотных средах, засеянных нативным материалом.

    Экспресс-методы: прямая и непрямая РИФ, РНГА с иммуноглобулиновыми эритроцитарными диагностикумами, реакция иммобилизации вибрионов с противохолерными сыворотками с целью обнаружения холерного вибриона в исследуемом материале.

    Четвертый этап. (через 18-24 ч от начала анализа). Изучают и отбирают с помощью стереомикроскопа типичные для холерного вибриона колонии на всех плотных средах. Хо­лерный вибрион образует прозрачные, круглые, диаметром 1-2 мм, гладкие, пло­ские, го­могенные, с ровными краями колонии, имеющие голубоватый оттенок и маслянистую кон­систенцию. На агаре TCBSколонии холерного вибриона ярко-желтые на зеленом фоне среды, на сре­де Монсура — полупрозрачные бесцветные с темным центром. Колонии проверяют на наличие оксидазы (холерные вибрионы оксидазоположительны), ставят РА на стекле с холерны­ми сыворотками О-1, О-139 и RO, а также специфическую иммунофлюоресценцию.

    Положительная РА или ИФМ в сочета­нии с типичными морфологическими, тинкториальными и культуральными свойствами выделенной культуры позволяет вы­дать предварительный положительный ответ.

    Пятый этап проводится через 24 —36 ч от начала исследования. На этом этапе изучают и отбирают характерные для холерного вибриона культуры на среде Ресселя, на которой холерный вибрион расщепляет сахарозу, что сопровождается покраснением среды в столбике без образования газа, но не ферментирует лактозу (отсутствие изменений скошенной части среды). Со среды Ресселя готовят мазки в окраске по Граму с целью обнаружения характерных по морфологическим свойствам вибрионов, проверяют наличие подвижности и оксидазы, ставят РА с холерными сыворотками (О-1, RO,Огава, Инаба, при отрицательном результате - с сывороткой О-139) и при наличии положительных результатов выдают ответ о выделении соответствующего холерного вибриона.

    Окончательную идентификацию оксидазопопожительных культур проводят, используя сокращенную или полную схемы (табл. 15).

    Таблица 15.Дифференциация холерных вибрионов

    Тесты V.cholerae asiaticae V.cholerae el-tor НАГ
    Агглютинация О-сывороткой + + -
    Агглютинация сыворотками Инаба и Огава + + -
    Лизис фагами: Холерный фаг С (фаг IV) Фаг Эль-Тор + - - + + +
    Агглютинация куриных эритроцитов - + +
    Гемолиз эритроцитов барана - + +
    Рост на среде с полимиксином - + +
    Гексаминовый тест - + +
    Реакция Фогес-Проскауэра (образование ацетилметилкарбинола) - + +

    Сокращенная схема предполагает постановку развернутой РА с сыворотками Инаба и Огава, пробы с диагностическими холерными фагами, определение ферментативной группы по Хейбергу. Полная схема дополнительно включает тесты для дифференциации биоваров холерного вибриона (классического и Эль-Тор), в частности, определение гемагглютинирующих и гемолитических свойств, чувствительности к полимиксину, способности давать положительную реакцию Фогес-Проскауэра (образование ацетилметилкарбинола - ацетоина из глюкозы). Ацетоин определяют добавлением в культуру, выращенную на глюкозо-фосфатном бульоне Кларка, 5% α-нафтола и 40%-го гидроксида калия; при встряхивании пробирок среда окрашивается в розовый или рубиново-красный цвет.

    Для ускоренной биохимической идентификации холерных вибрионов и их дифференциации от холероподобных и нехолероподобных вибрионов используют систему индикаторных бумажных дисков (СИБ), в состав которой входят тесты на оксидазу, индол, ферментацию лактозы, глюкозы, саха­розы, маннозы, арабинозы, маннита, инозита, аргинина, лизи­на и орнитина.

    Шестой этап (выполняется через 36-48 ч от начала анализа) - окончательная идентификация выделенных куль­тур, определение их чувствительности к антибиотикам, формулировка окончательного ответа о выделении холерного вибриона с указанием биовара, серогруппы (серовара) и эпидемической значимости по косвенным биологическим признакам (гемолитической активности, группе Хейберга и др.). Типичные куль­туры Vibrio cholerae представляют собой грамотрицательные изо­гнутые в виде запятой или прямые полиморфные активно подвижные палочки, обладающие оксидазой, разлагающие глюкозу с образованием кислоты без газа, декарбоксилирующие лизин и орнитин, но не ферментирующие аргинин, принадлежа­щие к 1-й (реже 2-й) группе Хейберга, агглютинирующиеся хо­лерными сыворотками и лизирующиеся диагностическими фагами. Если выделенная культура не агглютинируется сыворотками к О1 и О139, ее относят к группе НАГ-вибрионов, а при наличии соответствующих сывороток определяют ее принадлежность к другой серогруппе. Токсигенные штаммы холерных вибрионов серогрупп Ои О139 обычно не лизируют бараньи эритроциты, относятся к 1-й группе Хейберга (ферментируют маннозу и сахарозу, но не арабинозу), лизируются определенными фагами в комплексном методе с применением ХДФ.

    Вирулентность холерных вибрионов определяют в специализированных лабораториях путем внутрикишечного заражения кроликов-сосунков, а также методами генодиагностики (ПЦР или ДНК-ДНК-гибридизация с целью определения гена, ответственного за выработку токсина).

    Серодиагностикаявляет­ся дополнительным методом лабораторной диагностики холеры. Исследуют пар­ные сыворотки крови больных, взятые с интервалом в 6-8 дней, с целью выявления агг­лютининов с помощью РА (диагностический титр 1:40 и выше), антитоксинов с помощью РНГА с эритроцитарным холерным энтеротоксическим диагностикумом (диагностический титр - 1: 160) и вибриоцидных антител с помощью реакции иммобилизации вибрионов (диагностический титр1:1000). Учитывается также нарастание титра антител (не менее чем в 4 раза) в процессе инфекции.

    Самостоятельная работа студентов

    1. Микроскопический метод. Промикроскопировать и зарисовать демонстрационный микропрепарат холерного вибриона V.cholerae, окрашенный по Граму. Холерный вибрион - грамотрицательная изогнутая палочка.

    2. Бактериологический метод. Ознакомиться с ос­новными биологическими свойствами классического биовара холерного вибриона и биовара Эль-Тор:

    · фаголизабельность. Классический холерный вибрион лизируется фагом С и нечувствителен к действию фага Эль-Тор II. Вибрион Эль-Тор лизируется фагом Эль-Тop и нечувствителен к фагу С (демонстрация);

    · чувствительность к полимиксину. Учесть рост классического холерного вибриона и вибриона Зль-Тор на среде с добавле­нием полимиксина. Вибрион Эль-Тор к полимиксину не чувствителен, классический холерный вибрион – чувствителен;

    · гемолитические свойства. Вибрион Эль-Тор лизирует эритроциты; классический холерный вибрион, как правило, нет (демонстрация);

    · определение серовара холерного вибриона. Учесть разверну­тую реакцию агглютинации c сыворотками Инаба и Огава (демонстрация).

    3. Изучить биопрепараты, используемые для диагностики, лечения и профилактики бактериальной дизентерии и холеры:

    · люминесцирующая хо­лерная сыворотка для постановки реакции иммунофлюоресценции с целью выявления вибрионов;

    · агглютинирующие холерные сыворотки Инаба и Огава (для постановки реакции агглютинации при идентифика­ции холерного вибриона);

    · холерные фаги: классический (фаг С) и Эль-Тор. Использу­ются для фагодиагностики;

    · поливалентный холерный бактериофагдля лечения и профилактики;

    · холерная вакцина.Создано 3 вакцины против холеры (убитая Эль-Тор; холероген- анатоксин, обогащенный О-антигеном холерного вибриона для подкожных инъекций; холероген-анатоксин, обогащенный О-антигеном холерного вибриона таблетированный). Используются для специфи­ческой профилактики холеры.

    Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Читайте также:

Пожалуйста, не занимайтесь самолечением!
При симпотмах заболевания - обратитесь к врачу.