Гост 30519-97 продукты пищевые метод выявления бактерий рода salmonella гост

Тел.: +7 (727) 222-21-01, e-mail: info@prg.kz, Региональные представительства

Для покупки документа sms доступом необходимо ознакомиться с условиями обслуживания

ВНИМАНИЕ! Услуга для абонентов NEO, Tele2 временно недоступна

ВНИМАНИЕ! Услуга для абонентов Beeline, NEO, Tele2 временно недоступна

Стоимость услуги - тенге с учетом комиссии.

ГОСТ 30519-97
(ГОСТ Р 50480-93)

Продукты пищевые
Метод выявления бактерий рода Salmonella

Food products. Method for detection of Salmonella

Взамен введен с 1 июля 2014 года ГОСТ 31659-2012

Корреспонденты на фрагмент
Поставить закладку
Посмотреть закладки
Добавить комментарий

1 Сущность метода

Метод выявления бактерий рода Salmonella основан на высеве определенного количества продукта в жидкую неселективную среду, инкубировании посевов, последующем выявлении в этих посевах бактерий, способных развиваться в жидких селективных средах, образующих типичные колонии на агаризованных дифференциально-диагностических средах, имеющих типичные для бактерий рода Salmonella биохимические и серологические характеристики.

Корреспонденты на фрагмент
Поставить закладку
Посмотреть закладки
Добавить комментарий

2 Отбор и подготовка проб

Отбор и подготовка проб - по ГОСТ 26668, ГОСТ 26669 или по нормативно-технической документации на анализируемый продукт.

Корреспонденты на фрагмент
Поставить закладку
Посмотреть закладки
Добавить комментарий

3 Аппаратура, материалы, реактивы

Для проведения анализа применяют аппаратуру, материалы и реактивы по ГОСТ 10444.1, а также указанные ниже:

весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104* с наибольшим пределом взвешивания 200 г, 2-го класса точности (для взвешивания реактивов);

* С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001.

весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 1 кг, 4-го класса точности (для взвешивания продукта);

микроскоп световой биологический с увеличением 900-1000 ;

стекла предметные по ГОСТ 9284;

стекла покровные по ГОСТ 6672;

термостат с диапазоном рабочих температур 28-55 °С, позволяющий поддерживать заданную температуру с допустимой погрешностью ±1 °С.

спирт изобутиловый по ГОСТ 9536;

желчь сухую или натуральную;

контрольный штамп* бактерий рода Salmonella, не относящихся к тифозной группе;

* Текст соответствует оригиналу.

магний хлористый по ГОСТ 4209;

мочевину по ГОСТ 6691;

сухие агглютинирующие адсорбированные поливалентные сальмонеллезные сыворотки основных групп А, В, С, Д, Е и редких групп;

Корреспонденты на фрагмент
Поставить закладку
Посмотреть закладки
Добавить комментарий

4 Подготовка к анализу

Поставить закладку
Посмотреть закладки
Добавить комментарий

4.1 Приготовление растворов и реактивов

Поставить закладку
Посмотреть закладки
Добавить комментарий

4.1.1 Раствор бриллиантового зеленого концентрации 5 г/дм : 0,5 г бриллиантового зеленого переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см и доводят дистиллированной водой до метки. Раствор хранят в закрытом сосуде из темного стекла при комнатной температуре не более 3 мес.

Проведение контроля пищевых продуктов и продовольственного сырья традиционными методами микробиологического анализа на наличие патогенных микроорганизмов - малоизученных возбудителей новых и вновь возникших заболеваний (Listeria monocytogenes, антибиотикорезистентных сальмонелл, энтерогемморагических эшерихий) связано с такими проблемами, как трудоемкость, длительность и недостаточная специфичность используемых методик.

Последнее обусловлено тем, что в качестве тестов идентификации, входящих в стандартизованные методы анализа, в настоящее время используют в основном характеристики метаболических свойств возбудителей, зачастую не позволяющие провести четкую дифференциацию патогенных представителей искомых родов и видов от непатогенных, имеющих одинаковое с патогенами фенотипическое выражение. Это снижает достоверность результатов анализа, осложняет оценку распространенности патогенов в пищевых продуктах и сырье и не гарантирует от необоснованных браковок продукции.

Наиболее достоверными в последние годы признаются методы генотипического анализа культур, выделенных на селективных питательных средах, основанные на выявлении кодируемых признаков патогенности или анализе последовательностей рибосомальной ДНК (16S, 26s pPHK). В связи с этим внедрение высокоспецифичных методов анализа и экспрессных диагностических тест-систем в официальные схемы санитарно-микробиологического контроля пищевых продуктов становится насущной необходимостью, которая позволит повысить эффективность работы и рационализировать ресурсы контрольных органов.

2.1. Настоящие методические указания устанавливают метод ускоренного выявления бактерий рода Salmonella в пищевых продуктах и в смывах с поверхностей оборудования и инвентаря предприятий по производству пищевых продуктов, а также методы ускоренной (за 24 ч) идентификации культур, выделенных из указанных объектов и подозрительных на принадлежность к Listeria monocytogenes и бактериям рода Salmonella, на основе твердофазного гетерогенного гибридизационного ДНК-РНК анализа с хемилюминесцентным детектированием.

2.2. Методы могут применяться в качестве альтернативных классическим бактериологическим методам лабораторных исследований для целей экспрессного выявления бактерий рода Salmonella и/или подтверждения принадлежности выделенных микробиологическими методами культур к бактериям рода Salmonella и Listeria monocytogenes при контроле пищевых продуктов и состояния поверхностей предприятий по производству пищевых продуктов.

2.4. При исследовании пищевых продуктов и состояния оборудования и инвентаря предприятий по производству пищевых продуктов на наличие патогенных микроорганизмов Listeria monocytogenes методами классического микробиологического анализа, метод гетерогенной твердофазной ДНК-РНК гибридизации может применяться для идентификации культур листерий после этапа их выделения на селективных дифференциально-диагностических средах.

2.6. Методические указания рекомендованы для применения в лабораториях учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор за производством, хранением и оборотом пищевых продуктов, в т.ч. импортируемых в Российскую Федерацию, при проведении гигиенической оценки и выдаче санитарно-эпидемиологических заключений, а также при проведении санитарно-эпидемиологических расследований заболеваний, имеющих пищевой путь передачи; в лабораториях других организаций, аккредитованных в установленном порядке на право проведения контроля безопасности пищевой продукции и продовольственного сырья; в организациях, независимо от форм собственности, осуществляющих производственный контроль продовольственного сырья и пищевых продуктов в процессе промышленного производства и выпуска продукции.

3.1. Метод гетерогенного твердофазного гибридизационного анализа нуклеиновых кислот основан на принципе гибридизации участка бактериального генома с закрепленным на твердофазном носителе (стенке пробирки) комплементарным к определяемой последовательности ДНК олигонуклеотидным зондом, меченым флюоресцентным красителем, и последующей детекции гибридов по степени их хемилюминесценции в приборе-люминометре.

3.2. Метод может выполняться в формате коммерчески доступных тест-систем (наборов), прошедших регистрацию в РФ в установленном порядке, после процедуры их стандартизации относительно официально утвержденных методов анализа.

3.5. Мишенями в реакции ДНК-РНК гибридизации являются:

• для бактерий рода Salmonella - последовательность нуклеотидов в области ДНК, кодирующая продукцию рибосомальной РНК, строго специфичной для всех представителей рода Salmonella;

• для Listeria monocytogenes - последовательность ДНК, кодирующая продукцию токсического белка листериолизина-О - основного фактора патогенности возбудителя листериоза.

4.1. Аппаратура и инструментарий

Анализатор потенциометрический, погрешность измерений рН ± 0,01

Шкаф сушильный стерилизационный ШСС-80 П или других марок, позволяющий поддерживать температуру (160 ± 5) °С

Термостат, позволяющий поддерживать рабочую температуру (37 ± 1) °С

Термостат, позволяющий поддерживать рабочую температуру (41,5 ± 1,0) °С

Баня водяная с подогревом (37 ± 1) °С

Баня водяная с терморегулятором, позволяющая поддерживать температуру от 0 до 100 °С

Весы лабораторные общего назначения, 2 и 4 класса точности, с наибольшим пределом взвешивания 200 г

Микроскоп биологический МБИ-1, МБИ-2, МБИ-3, МБР-1, МБР-3, МБС

Стерилизаторы паровые медицинские или аналогичные

Дистиллятор, обеспечивающий качество дистиллированной воды

Мультистеппер, BIOHIT, Cat. № 730101

Диспенсер, BIOHIT, Cat. № 723046

Распределительная емкость - объем 1 - 2,5 л, BIOHIT

Облучатель бактерицидный настенный ОБН-150 или других видов

УТВЕРЖДАЮ
Главный врач ФГУЗ "Федеральный
центр гигиены и эпидемиологии",
Председатель Лабораторного совета
Федеральной службы по надзору
в сфере защиты прав потребителей
и благополучия человека
А.И.ВЕРЕЩАГИН
8 декабря 2006 г.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ БАКТЕРИЙ РОДА SALMONELLA
МЕТОДОМ ТВЕРДОФАЗНОГО ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА
МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
N 02.013-06
1. Разработаны: ФГУЗ ФЦГиЭ Роспотребнадзора при участии ООО "Стай-лаб".
2. Рекомендованы к утверждению Лабораторным советом Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (от 29 сентября 2006 г.).
3. Утверждены и введены в действие Председателем Лабораторного совета, Главным врачом ФГУЗ ФЦГиЭ Роспотребнадзора А.И. Верещагиным 08.12.2006.
4. Введены впервые.
1. Область применения
Методические рекомендации предназначены для применения в лабораториях организаций, независимо от форм собственности, осуществляющих производственный контроль, а также в лабораториях иных организаций, аккредитованных на право проведения испытаний, исследований.
Методические рекомендации могут быть использованы для целей определения бактерий рода Salmonella при скрининговых исследованиях пищевых продуктов и смывов.
2. Общие положения
Сальмонеллы принадлежат к семейству Enterobacteriaceae, их биологические характеристики во многом сходны с прочими энтеробактериями. Энтеробактерии обнаруживаются в почве, воде, на поверхности фруктов, овощей, в злаках и других объектах окружающей среды. Многие из этих микроорганизмов имеют эпидемиологическое значение в связи с их патогенностью для человека.
Определение сальмонелл традиционными методами бактериологии в пищевых продуктах занимает длительное время и сопряжено со значительными трудозатратами. Требуется несколько дней для культивирования, селективного выделения и идентификации сальмонелл с последующим подтверждением результатов серологическими и биохимическими методами.
При использовании иммунохимических технологий анализа, таких как твердофазный иммуноферментный анализ, процедуры определения сальмонелл могут быть существенно оптимизированы, а время исследования сокращено. Это актуально при поведении микробиологическими лабораториями производственного контроля пищевых продуктов, сырья и пр. при значительном объеме исследований.
3. Принцип метода твердофазного ИФА
Принципом иммунохимического определения бактерий рода Salmonella в пищевых продуктах, смывах является твердофазный иммуноферментный анализ на полистироловых планшетах, покрытых моноклональными антителами к термостабильному антигену бактерий. Результатом проведения ИФА служит образование комплекса антиген-антитело при исследовании тестируемых образцов в сравнении с негативными и позитивными контролями. Использование твердой фазы позволяет надежно разделять компоненты реакции за счет иммобилизации одного из компонентов, не участвующих в реакции.
Для осуществления реакции данного типа используется тест-система LOCATE(R) Salmonella с высокоспецифичными моноклональными антителами к термостабильным "О"-антигенам и соматическим антигенам клеточной стенки бактерий рода Salmonella. Этим обеспечивается эффективное определение как подвижных, так и неподвижных штаммов бактерий. Тест-система LOCATE(R) Salmonella спроектирована в формате стрипованного 96-луночного ИФА-планшета, что позволяет выполнять исследования от 1 до 94 образцов одновременно как при визуальной, так и при автоматической оценке результата (с помощью ридера).
4. Аппаратура, материалы, питательные среды и тест-системы
----------------------------------------------------------T---------------¬
¦Термостат электрический с диапазоном измерения от 15 до ¦ТУ 64-1-1382-83¦
¦65 град. С с допустимой погрешностью регулирования ¦ ¦
¦температуры +/- 1 град. С ¦ ¦
+---------------------------------------------------------+---------------+
¦Стерилизатор паровой медицинский ¦ГОСТ 19569 ¦
+---------------------------------------------------------+---------------+
¦Шкаф сушильно-стерилизационный, обеспечивающий ¦ ¦
¦поддержание заданного температурного режима в диапазоне ¦ ¦
¦от 50 до 200 град. С с погрешностью +/- 2 град. С ¦ ¦
+---------------------------------------------------------+---------------+
¦Гомогенизатор бактериологический перистальтического типа ¦ ¦
¦Masticator (или Stomacher) со стерильными ¦ ¦
¦полиэтиленовыми пакетами ¦ ¦
+---------------------------------------------------------+---------------+
¦Облучатель бактерицидный настенный ОБН-150 ¦ТУ 16-535-84 ¦
+---------------------------------------------------------+---------------+
¦Весы лабораторные с наибольшим пределом взвешивания ¦ГОСТ 24104 ¦
¦200 г и допустимой погрешностью +/- 2 мг ¦ ¦
+---------------------------------------------------------+---------------+
¦Холодильник бытовой электрический ¦ГОСТ 16317 ¦
+---------------------------------------------------------+---------------+
¦Пипетки градуированные исполнения 1, 2 классов точности ¦ГОСТ 29227 ¦
¦вместимостью 1 куб. см, 10 куб. см ¦ ¦
+---------------------------------------------------------+---------------+
¦Пробирки бактериологические вместимостью не менее ¦ГОСТ 25336 ¦
¦10 куб. см ¦ ¦
+---------------------------------------------------------+---------------+
¦Посуда широкогорлая ¦ГОСТ 25336 ¦
+---------------------------------------------------------+---------------+
¦Питательные среды: ¦
¦Забуференный бульон для обогащения сальмонелл ¦
¦Тетратионатный бульон ¦
¦Селенитовый бульон ¦
¦Висмут-сульфит агар ¦
¦XLD-агар ¦
+---------------------------------------------------------T---------------+
¦Компоненты набора тест-системы LOCATE(R) Salmonella: ¦ ¦
¦Микротитровальный стрипованный планшет на 96 лунок, ¦1 шт. ¦
¦покрытых моноклональными антителами на сальмонеллы ¦ ¦
¦Коньюгат, в рабочем разведении ¦1 шт. ¦
¦Положительный контроль (термически дезактивированные ¦1 шт. ¦
¦бактерии рода Salmonella), 2 мл ¦ ¦
¦Отрицательный контроль (термически дезактивированные ¦1 шт. ¦
¦бактерии), 2 мл ¦ ¦
¦Концентрирующий моющий буфер, 25-кратный, 20 мл ¦2 шт. ¦
¦Субстрат, ТМБ, 15 мл ¦1 шт. ¦
¦Стоп-реагент, содержит 2% раствор серной кислоты, 15 мл ¦1 шт. ¦
¦Схема планировки планшета ¦1 шт. ¦
L---------------------------------------------------------+----------------
5. Отбор и подготовка проб к анализу

5.1. Отбор и подготовку проб продукции производят в соответствии с ГОСТ 26668-85 "Методы отбора проб для микробиологических анализов", ГОСТ 26669-85 "Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов", МУК 4.2.577-96 "Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов", ГОСТ Р 51446-99 (ИСО 7218-96), а также в соответствии с действующими ГОСТ и НД на конкретные виды продуктов.
5.2. Масса или объем отбираемых проб должны быть достаточными для проведения исследования и превышать аналитический образец не менее чем в два раза.
5.3. От продукции в потребительской таре в мелкой фасовке пробы отбирают в количестве одной или нескольких единиц в зависимости от массы или объема потребительской тары так, чтобы количество было достаточным для проведения анализа.
5.4. От продукции в транспортной или потребительской таре больших размеров или без упаковки пробы отбирают из разных точек: с поверхности и с различной глубины.
5.5. Пробы для микробиологических анализов отбирают стерильным инструментом в стерильную посуду до взятия проб на физико-химические и органолептические исследования.
5.6. Замороженные продукты предварительно размораживают до температуры внутри продукта 0 - (-1) град. С (не менее 1 ч в термостате при температуре 37 град. С); продукты, содержащие жиры (сливочное масло, мороженое), нагревают до температуры 40-45 град. С и перемешивают.
5.7. Отобранные образцы перемешивают и измельчают или доводят до однородной консистенции по ГОСТ 26669-85; из измельченной суспензии составляют навеску необходимой массы (25 г).
5.8. При посевах высококислотных или щелочных (с рН 7,5) жидких и твердых продуктов для предотвращения изменения рН питательных сред на 0,5 и более рН продукта перед посевом доводят до 7,0 +/- 0,2 по ГОСТ 30519-97 "Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella".
5.9. Смывы отбирают с помощью стерильных увлажненных тампонов, сделанных из марли или ваты, с поверхности оборудования и инвентаря площадью 100 куб. см, используя трафарет. Трафарет фламбируют перед каждым употреблением.
6. Определение бактерий рода Salmonella в пищевых продуктах
методом твердофазного иммуноферментного анализа
6.1. Предобогащение: внести 25 г подготовленной пробы в 225 мл бульона предобогащения. Перемешать образец в стомахере, блендере или с помощью другой техники, обеспечивающей достаточно хорошее перемешивание. Инкубировать в течение 18-24 ч при 37 град. С.
6.2. Селективное обогащение: после инкубации перенести по 0,1 мл предобогащенной пробы в 10 мл тетратионатного бульона и в 10 мл бульона Раппапорта-Вассилиадиса. Инкубировать бульоны в течение 18-24 ч при 42 +/- 0,5 град. С.
Примечание 1:
Взамен одного из селективных бульонов на второй день допускается использовать селенитовый бульон с режимом инкубации 37 +/- 0,5 град. С 24 часа.
6.3. После инкубации перенести по 1 мл культуральной жидкости из каждого бульона селективного обогащения в две пробирки с 10 мл модифицированного GN-бульона , каждую пробирку с GN-бульоном подписать. Инкубировать в течение 4-6 ч при 42 +/- 0,5 град. С.
--------------------------------
Модифицированный GN-бульон содержит 10 мкг/мл новобиоцина.
6.4. После инкубации перенести по 1 мл из каждой пробирки с GN-бульоном в одну стеклянную пробирку на 10 мл и проавтоклавировать при 121 град. С (допускается использовать кипящую водяную баню в течение 20 мин. для инактивации живых бактерий). Оставшиеся бульоны (не термообработанные) поместить в холодильник до конца исследования.
6.5. Охладить пробу до комнатной температуры. Тщательно перемешать бульон после охлаждения и использовать для ИФА.
7. Подготовка реагентов для ИФА
7.1. Для анализа используется иммуноферментная тест-система LOCATE(R) Salmonella производства R-Biopharm Rhone Ltd.
7.2. Приготовление рабочих разведений растворов, входящих в комплект тест-системы:
7.2.1. Подготовить моющий буфер в рабочем разведении: разбавить концентрат моющего буфера в 25 раз дистиллированной водой (смешать 20 мл буфера и 480 мл дистиллированной воды). Отметить дату приготовления на флаконе с буфером. Хранить буфер в холодильнике.
7.2.2. Рабочий раствор конъюгата: добавить 7 мл буфера для разбавления конъюгата во флакон с сублимированным конъюгатом. Отметить дату приготовления на крышке флакона (срок хранения 28 дней с момента приготовления).
7.2.3. Субстрат (ТМБ) поставляется в рабочем разведении.
7.2.4. Стоп-реагент поставляется в рабочем разведении.
7.2.5. Положительные и отрицательные контроли поставляются в рабочем разведении.
8. Проведение ИФА
8.1. Извлечь из пакета необходимое количество стрипов, разделить на необходимое количество лунок (по одной лунке на каждую пробу) и 2 лунки для контрольных растворов. Поместить лунки в планшетную рамку и зафиксировать. Немедленно упаковать оставшиеся лунки в пакет вместе с силикагелем.
8.2. Внести по 100 мкл растворов положительного и отрицательного контроля в соответствующие лунки. Внести по 100 мкл исследуемых термообработанных бульонов в соответствующие лунки. Обозначить положение каждой лунки на прилагаемой диаграмме. Инкубировать планшет при температуре 37 град. С в темноте 30 мин.
8.3. После инкубации с помощью автоматического вошера или многоканальной автоматической пипетки с переменным объемом внести в каждую лунку по 250 мкл моющего буфера. Повторить процедуру промывания еще 3 раза, после чего промыть лунки 1 раз дистиллированной водой. Перевернуть рамку и тщательно выбить капли дистиллированной воды путем постукивания рамки по столу, накрытой фильтровальной бумагой.
8.4. Внести по 100 мкл конъюгата в каждую лунку (при необходимости использования большого количества лунок использовать 8-канальную автоматическую пипетку). Инкубировать планшет при температуре 37 град. С 30 мин.
8.5. По окончании инкубации промыть лунки планшета, как описано в п. 8.3.
8.6. Внести по 100 мкл субстрата в каждую лунку (при необходимости исследования большого количества образцов использовать ванночку для реагентов и 8-канальную пипетку). Чтобы снять излишки субстрата с верхнего края лунок, необходимо промокнуть лунки фильтровальной бумагой. Немедленно поставить планшет в темноту, инкубировать его при температуре 37 град. С 30 мин.
8.7. Учет результатов:
- При визуальной интерпретации результатов: считывание результатов проводится сразу после инкубации. Стоп-реагент не добавляется.
- При автоматизированном учете результатов: по окончании инкубации добавить в каждую лунку по 100 мкл стоп-реагента. В течение 5-ти минут (не более) после добавления стоп-реагента измерить оптическую плотность в каждой лунке, используя фотометр планшетный (ридер) с длиной волны 450 нм.
9. Интерпретация результатов
9.1. Интерпретация результатов, полученных с помощью ридера:
9.1.1. При значении оптической плотности 0,3 и менее результат расценивается как отрицательный - в исследованной пробе пищевого продукта бактерии рода Salmonella

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод выявления и определения бактерий
рода Salmonella и Listeria monocytogenes
на основе гибридизационного
ДНК-РНК анализа

Методические указания
МУК 4.2.1955-05

2. Утвержденыи введены в действие 22 февраля 2005 г. Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко.

2. Общие положения и область применения

3. Сущность метода

4. Аппаратура, материалы, лабораторная посуда, реактивы и питательные среды

4.1. Аппаратура и инструментарий

4.2. Лабораторная посуда и материалы

4.3. Реактивы и питательные среды

4.4. Наборы для проведения твердофазного гибридизационного ДНК-рРНК анализа

5. Подготовка к анализу

5.1. Приготовление растворов и реактивов

5.2. Приготовление питательных сред

5.3. Подготовка к проведению твердофазного гибридизационного ДНК-рРНК анализа

6. Отбор и подготовка проб к анализу

7. Проведение анализа по подтверждению принадлежности бактерий рода Listeria к виду L. monocytogenes

8. Проведение анализа по выявлению и определению бактерий рода Salmonella

8.1. Проведение экспрессного скринингового анализа по обнаружению бактерий рода Salmonella в пищевых продуктах и смывах с поверхности оборудования и инвентаря

8.2. Проведение анализа по подтверждению принадлежности выделенных культур к роду Salmonella

9. Требования безопасности

10. Нормативные ссылки

Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный врач
Российской Федерации

22 февраля 2005 г.

Дата введения: с момента утверждения

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод выявления и определения бактерий
рода Salmonella и Listeria monocytogenes
на основе гибридизационного
ДНК-РНК анализа

Методические указания
МУК 4.2.1955-05

2.1.Настоящие методические указания устанавливают метод ускоренного выявления бактерий рода Salmonella в пищевых продуктах и в смывах с поверхностей оборудования и инвентаря предприятий по производству пищевых продуктов, а также методы ускоренной (за 24 ч) идентификации культур, выделенных из указанных объектов и подозрительных на принадлежность к Listeria monocytogenes и бактериям рода Salmonella, на основе твердофазного гетерогенного гибридизационного ДНК-РНК анализа с хемилюминесцентным детектированием.

2.6.Методические указания рекомендованы для применения в лабораториях учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор за производством, хранением и оборотом пищевых продуктов, в т.ч. импортируемых в Российскую Федерацию, при проведении гигиенической оценки и выдаче санитарно-эпидемиологических заключений, а также при проведении санитарно-эпидемиологических расследований заболеваний, имеющих пищевой путь передачи; в лабораториях других организаций, аккредитованных в установленном порядке на право проведения контроля безопасности пищевой продукции и продовольственного сырья; в организациях, независимо от форм собственности, осуществляющих производственный контроль продовольственного сырья и пищевых продуктов в процессе промышленного производства и выпуска продукции.

3.5.Мишенями в реакции ДНК-РНК гибридизации являются:

4.1. Аппаратура и инструментарий

Анализатор потенциометрический, погрешность измерений рН ± 0,01

Шкаф сушильный стерилизационный ШСС-80 П или других марок, позволяющий поддерживать температуру (160 ± 5) °С

Термостат, позволяющий поддерживать рабочую температуру (37 ± 1) °С

Термостат, позволяющий поддерживать рабочую температуру (41,5 ± 1,0) °С

Баня водяная с подогревом (37 ± 1) °С

Баня водяная с терморегулятором, позволяющая поддерживать температуру от 0 до 100 °С

Весы лабораторные общего назначения, 2 и 4 класса точности, с наибольшим пределом взвешивания 200 г

Микроскоп биологический МБИ-1, МБИ-2, МБИ-3, МБР-1, МБР-3, МБС

Стерилизаторы паровые медицинские или аналогичные

Дистиллятор, обеспечивающий качество дистиллированной воды

Мультистеппер, BIOHIT, Cat. № 730101

Диспенсер, BIOHIT, Cat. № 723046

Распределительная емкость - объем 1 - 2,5 л, BIOHIT

Облучатель бактерицидный настенный ОБН-150 или других видов

Читайте также: