Диагностические агглютинирующие дизентерийные сыворотки

Препарат диагностический. Содержит антитела. Представляют собой сыворотки кроликов, иммунизированных формалинизированными и живыми взвесями типичных по всем признакам шигелл. При взаимодействии с соответствующими микроорганизмами сыворотки вызывают их агглютинацию. Предназначены для серологической идентефикации Shigella flexneri I-V. Диагностические шигеллёзные сыворотки представляют собой лиофилизированные адсорбированные сыворотки кроликов, содержащие монорецепторные антитела к 38 наименованиям антигенов. К восьми группам антигенов выпускаются поливалентные сыворотки.
Препараты предназначены для идентификации бактерий рода Shigella в реакции агглютинации.
Диагностические шигеллёзные сыворотки имеют титр антител в реакции агглютинации не менее 1:40.
С помощью данных сывороток можно определить любые бактерии рода Shigella согласно международной классификации.
Препарат разлит в ампулы по 2мл.
Выпускают в сухом виде.
Срок годности монорецепторных сухих сывороток - 5 лет, поливалентных сухих – 3 года при хранении в сухом тёмном месте при температуре 4-80 С.

Агглютинирующие неадсорбированные типовые ОВ-коли сыворотки.

Препарат диагностический. Содержит антитела. Получены путем иммунизации кроликов взвесью эшерихий соответствующей серогруппы. Применяются в реакции агллютинации для идентефикации энтеропатогенных эшерихий соответствующих серотипов. Агглютинирующую сыворотку получают иммунизацией кроликов (внутривенно, подкожно или внутрибрюшинно) взвесью убитых бактерий, начиная с дозы 200 млн., затем 500 млн., 1 млрд., 2 млрд., микробных тел в 1 мл, с интервалами 5 дней. Через 7—8 дней после последней иммунизации берут кровь и определяют титр антител. Титром агглютинирующей сыворотки называется то максимальное разведение сыворотки, при котором происходит агглютинация с соответствующим микроорганизмом.Агглютинирующие сыворотки применяются при идентификации микроба в развернутой реакции агглютинации. Если изучаемый микроорганизм агглютинируется сывороткой до титра или до половины значения титра, его можно считать принадлежащим к тому виду, название которого указано на этикетке ампулы.Неадсорбированные агглютинирующие сыворотки обладают высоким титром — до 1:12 800 — 1:25 600.Недостатком таких сывороток является то, что они способны давать групповые реакции агглютинации, так как они содержат антитела к бактериям, имеющим общие антигены в пределах семейства, группы и рода.Поэтому в настоящее время большинство агглютинирующих сывороток выпускаются адсорбированными, монорецепторными и адсорбированными поливалентными, содержащими только типовые или видовые антитела и соответствующими или определенному типу или виду микроорганизма. Эти сыворотки не подлежат разведению.Для получения таких сывороток применяют метод Кастелляни — метод адсорбции, который состоит в том, что при насыщении агглютинирующей сыворотки родственными гетерогенными бактериями происходит адсорбция групповых антител, а специфические антитела остаются в сыворотке. В зависимости от полноты истощения групповых агглютининов можно получить монорецепторные сыворотки — сыворотки, имеющие антитела только к одному рецептору-антигену или адсорбированные, поливалентные, дающие реакции агглютинации с двумя — тремя родственными бактериями, имеющими общий антиген, в отношении которого проводилась адсорбция.Адсорбированные сыворотки применяют при идентификации выделенных возбудителей в реакции агглютинации на стекле (пластинчатый метод).

Агглютинирующая неадсорбированная комплексная ОВ-коли сыворотка.

Препарат диагностический. Содержит антитела. Получены путем иммунизации кроликов взвесью эшерихий. Применяются в реакции агглютинации для идентефикации энтеропатогенных эшерихий.Агглютинирующие сыворотки применяются при идентификации микроба в развернутой реакции агглютинации. Если изучаемый микроорганизм агглютинируется сывороткой до титра или до половины значения титра, его можно считать принадлежащим к тому виду, название которого указано на этикетке ампулы.Неадсорбированные агглютинирующие сыворотки обладают высоким титром — до 1:12 800 — 1:25 600.Недостатком таких сывороток является то, что они способны давать групповые реакции агглютинации, так как они содержат антитела к бактериям, имеющим общие антигены в пределах семейства, группы и рода.Поэтому в настоящее время большинство агглютинирующих сывороток выпускаются адсорбированными, монорецепторными и адсорбированными поливалентными, содержащими только типовые или видовые антитела и соответствующими или определенному типу или виду микроорганизма. Эти сыворотки не подлежат разведению.Для получения таких сывороток применяют метод Кастелляни — метод адсорбции, который состоит в том, что при насыщении агглютинирующей сыворотки родственными гетерогенными бактериями происходит адсорбция групповых антител, а специфические антитела остаются в сыворотке. В зависимости от полноты истощения групповых агглютининов можно получить монорецепторные сыворотки — сыворотки, имеющие антитела только к одному рецептору-антигену или адсорбированные, поливалентные, дающие реакции агглютинации с двумя — тремя родственными бактериями, имеющими общий антиген, в отношении которого проводилась адсорбция.

Препарат диагностический. Содержит антитела. Препарат изготовляют из нативных противоботулиновых сывороток, получаемых от лошадей, гипериммунизированных анатоксинами или токсинами возбудителей ботулизма типа С. Применяется в реакции агглютинации для идентефикации ботулотоксина.

Преципитирующие сыворотки (сыворотка, преципитирующая белок человека, сыворотка, преципитирующая белок барана и т.д.)

Препарат диагностический. Содержит антитела. Преципитирующие сыворотки получаются путем искусственной иммунизации животного живыми или убитыми микробами, а также разнообразными лизатами и экстрактами микробных клеток. Путем искусственной иммунизации можно получить преципитирующие сыворотки к любому чужеродному белку растительного и животного происхождения, а также к гаптенам при иммунизации животного полноценным антигеном, содержащим данный гаптен. Применяется для постановки реакций преципитации.
_________________________________________________________________

Люминесцирующие сыворотки против глобулинов кролика, человека и др.

Препарат диагностический. Содержит антитела, меченные флюоресцирующими веществами. Готовят из специфических иммунных сывороток, которые в свою очередь получают подобно агглютинирующим и преципитирующим сывороткам. Из них извлекают глобулиновую фракцию методом высаливания сернокислым аммонием. Полученные глобулины обрабатывают флюорохромами, изоцианатом флюоресцеина или изотиоцианатом флюоресцеина в соотношении 3 мг красителя на 100 мг белка. Обработанные таким образом белки-антитела обладают способностью люминесцировать (светиться) в ультрафиолетовых или фиолетово-синих лучах. Такие люминесцирующие антитела используются для обнаружения соответствующего микроба (антигена). Наличие и локализация микробов (антигена) в микроскопическом препарате выявляются в результате реакции антиген - антитело. Продукт этой реакции ярко люминесцирует и может быть открыт даже в отдельных участках клеток и в единичных бактериях.
__________________________________________________________________

Кроличья сыворотка против глобулинов человека, меченая ФИТЦ, рабочее разведение 1:160.

Препарат диагностический. Содержит антитела, меченные флюоресцирующими веществами, к антигенам крови человека.

Диагностикумы (диагностикум сальмонелл тифа или сальмонелл паратифа А и В, шигелл Флекснера, Зонне и др., сальмонеллёзные О-диагностикумы, сальмонеллёзные Н-диагностикумы, Vi-брюшнотифозный диагностикум).

Препараты диагностические. Содержат антигены. В диагностических целях при обнаружении антител в сы­воротке крови больных, реконвалесцентов и бактерионосите­лей используются серологические реакции. Бактериальные диагностикумы могут содержать инактивированную микробную взвесь или отдельные антигенные компоненты бактерий: О, Н или Vi-антигены и используются в реакциях агглютинации.

57. Эритроцитарные диагностикумы (эритроцитарный сальмонеллёзный О-диагностикум, эритроцитарный Vi-диагностикум).

Препараты диагностические. Содержат антигены. Представляют собой эритроциты (обработанные танином или формалином) с ад­сорбированными на них антигенами, извлеченными из бакте­рий. Применяются в РПГА (реакции пассивной гемагглютинации).

58 .Туберкулин, сухой очищенный туберкулин (РРD).

Препарат диагностический. Содержат аллерген. Получен из фильтрата бульонной культуры микобактерий путем добавления химических веществ, осаждающих белок, с последующей очисткой. Применяется для постановки кожно-аллергической пробы (реакция Манту).

59.Тулярин.

Препарат диагностический. Содержат аллерген. Представляет собой взвесь туляремийных бактерий (вакцинного штамма), убитых нагреванием. Используется для постановки кожно-аллергической пробы.

60.Бруцеллин.

Препарат диагностический. Содержат аллерген. Представляет собой фильтрат 3-недельных бульонных культур Br. melitensis, Br. abortus, Br. suis, убитых нагреванием. Используется для постановки кожно-аллергической пробы Бюрне.

Антраксин.

Препарат диагностический. Содержат аллерген. Представляет собой белково-полисахаридно-нуклеиновый комплекс, полученный при гидролизе сибереязвенных бацилл. Используется для постановки кожно-аллергической пробы.

62. Аллерген гемолитического стафилококка.

Последнее изменение этой страницы: 2016-08-01; Нарушение авторского права страницы

Иммунные диагностические сыворотки получают из крови животных (в основном кроликов), иммунизированных соот­ветствующими бактериями или антигенами.

Ι. Агглютинирующие сыворотки

Агглютинирующую сыворотку получают гипериммунизацией кроликов взвесью бактерий. В сыворотке определяют титр антител. Титром агглютини­рующей сыворотки называется то макси­мальное разведение ее, при котором происходит агглютинация с соответствую­щим микроорганизмом. Агглютинирующие неадсорбированные сыворотки применяются при идентифи­кации бактерий сначала в ориентировочной реакции агглютинации на стекле, далее в развернутой реакции агглютинации. Если изучаемый микроорганизм агглютинируется сывороткой до титра или до половины значения титра, его можно считать принадлежащим к тому виду, название которого указано на этикетке ампулы.

1. Агглютинирующая неадсорбированная брюшнотифозная сыворотка получается путем гипериммунизации животных взвесью S.enterica var. typhi. Применяется для серологической идентификации возбудителя брюшного тифа в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики брюшного тифа и паратифов.

2. Агглютинирующая неадсорбированная паратифозная В (паратифозная А) сывороткаполучается путем гипериммунизации животных взвесью S. enterica var.paratyphi B (var.paratyphi A). Применяется для серологической идентификации возбудителя паратифа В (паратифа А) в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики брюшного тифа и паратифов.

3. Агглютинирующая неадсорбированная сальмонелезная сыворотка Бреслауполучаетсяпутем гипериммунизации животных взвесью S. typhimurium Breslau. Применяется для серологической идентификации сальмонелл Бреслау в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики сальмонеллезов.

4. Агглютинирующая неадсорбированная дизентерийная сыворотка Флекснера (Зонне) получается путем гипериммунизации животных взвесью шигелл Флекснера (Зонне). Применяется для серологической идентификации шигелл Флекснера (Зонне) в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики бактериальной дизентерии.

5. Агглютинирующая неадсорбированная поливалентная эшнрихиозная ОКВ сывороткапредставляет собой смесь типовых эшерихиозных ОК сывороток О111:К58, О55:К59, О26:К60, О20:К84. Применяется в бактериологическом методе диагностики колиэнтерита в ориентировочной реакции агглютинации на стекле при отборе окрашенных колоний, выросших на средах Эндо или Левина, подозрительных на энтеропатогенные серовары.

6. Агглютинирующие неадсорбированные типовые эшерихиозные ОК сыворотки (О111, О55 и др.) получают путем гипериммунизации животных взвесью энтеропатогенных эшерихий соответствующего серовара. Применяются для серологической идентификации энтеропатогенных эшерихий в ориентировочной реакции агглютинации на стекле, далее в развернутой реакции агглютинации с живой культурой для определения термолабильного К- антигена и с кипяченой культурой для определения термостабильного О-антигена. Используются в бактериологическом методе диагностики колиэнтеритов.

7. Агглютинирующая неадсорбированная холерная О1 сыворотка получается путем гипериммунизации животных взвесью убитых возбудителей холеры. Применяется для серологической идентификации холерных вибрионов в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики холеры.

8. Агглютинирующая неадсорбированная бруцеллезная сыворотка получается путем гипериммунизации животных взвесью бруцелл. Применяется для серологической идентификации бруцелл в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики бруцеллеза.

9. Агглютинирующая неадсорбированная туляремийная сыворотка получается путем гипериммунизации животных взвесью туляремийных бактерий. Применяется для серологической идентификации возбудителя туляремии в реакции агглютинации. Используется в биобактериологическом методе диагностики туляремии.

10. Агглютинирующая неадсорбированная противодифтерийная сывороткаполучается путем гипериммунизации животных взвесью возбудителей дифтерии. Применяется для серологической идентификации коринебактерий дифтерии в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики дифтерии.

11. Агглютинирующая неадсорбированная коклюшная сывороткаполучается путем гипериммунизации животных взвесью возбудителей коклюша. Применяется для серологической идентификации возбудителей коклюша в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики коклюша.

12. Агглютинирующая неадсорбированная паракоклюшная сывороткапаракоклюша. Применяется для серологической идентификации возбудителей паракоклюша в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики паракоклюша.

13. Агглютинирующая неадсорбированная лептоспирозная сывороткаполучается путем гипериммунизации животных взвесью лептоспир. Применяется для серологической идентификации лептоспир в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики лептоспироза.

В настоящее время многие агглютинирую­щие сыворотки выпускаются адсорбированными монорецепторными, содер­жащими только специфические антитела-рецепторы, которые соответст­вуют определенному виду микроорганизма. Эти сыворотки используются только в реакции агглютинации на стекле и не требуют последующего разведения, т.е постановки развернутой реакции агглютинации.

Для получения таких сывороток применяют метод Кастелляни – метод адсорбции, который состоит в том, что при насыщении агглютинирующей сыворотки родственны­ми гетерогенными бактериями происходит адсорбция только группо­вых антител, а специфические антитела остаются в сыворот­ке. В зависимости от полноты истощения групповых агглютининов можно получить монорецепторные сыворотки – сыво­ротки, имеющие антитела только к одному рецептору-антигену.

1. Адсорбированная сальмонеллезная О сыворотка рецептор 9получается путем гипериммунизации животных взвесью убитых нагреванием сальмонелл группы D (например, S. enterica var. typhi). Полученная сыворотка содержит рецепторы 1, 9, 12. Далее проводят адсорбцию групповых рецепторов 1, 12 по методу Кастелляни. Применяется для определения групповой принадлежности сальмонелл к группе D в реакции агглютинации на стекле. Используется в бактериологическом методе диагностики тифо-паратифозных заболеваний и сальмонеллезной инфекции.

2. Адсорбированная сальмонеллезная О сыворотка рецептор 4получается путем гипериммунизации животных взвесью убитых нагреванием сальмонелл группы В (например S. enterica var.paratyphi B). Полученная сыворотка содержит рецепторы 1, 4, 5, 12. Далее проводят адсорбцию групповых рецепторов 1, 5, 12 по методу Кастелляни. Применяется для определения групповой принадлежности сальмонелл к группе В в реакции агглютинации на стекле. Используется в бактериологическом методе диагностики тифопаратифозных заболеваний и сальмонеллезной инфекции.

3. Адсорбированная сальмонеллезная Н сыворотка рецептор d получается путем гипериммунизации животных взвесью живой культуры S. enterica var. typhi . Полученная сыворотка содержит О рецепторы 1, 9, 12, Vi и H рецептор d. Далее проводят адсорбцию групповых рецепторов 1, 9, 12, Vi по методу Кастелляни. Применяется для определения видовой принадлежности сальмонелл к виду S. enterica var. typhi в реакции агглютинации на стекле. Используется в бактериологическом методе диагностики тифопаратифозных заболеваний.

4. Адсорбированная сальмонеллезная Н сыворотка рецептор i получается путем гипериммунизации животных взвесью живой культуры S.typhimurium Breslau. Полученная сыворотка содержит рецепторы О 1, 4, 5, 12 и H рецепторы i, 1, 2. Далее проводят адсорбцию групповых О рецепторов 1, 4, 5, 12 и Н рецепторов 1, 2 по методу Кастелляни. Применяется для определения видовой принадлежности сальмонелл к виду S. typhimurium Breslau в реакции агглютинации на стекле. Используется в бактериологическом методе диагностики сальмонеллезной инфекции.

ΙΙ. Преципитирующие сыворотки

Преципитирующие сыворотки получают гипериммунизацией животных преципитиногенами (белками, антигенами бактерий, экстрактами микробов). Титром преципитирующей сыворотки на­зывается то максимальное разведение ан­тигена, которое преципитируется цельной сывороткой

Преципитирующие сыворотки применяются при диагностике некоторых инфекционных заболеваний (менингит, сибир­ская язва, чума, туляремия, полиомиелит и др.); в судебно-медицинской практике для определения видовой принадлеж­ности белка, в санитарной практике для обнаружения соответствующих белковых веществ в продуктах при подо­зрении на фальсификацию.

1. Сыворотка преципитирующая белок человекаполучается путем гипериммунизации животных белком человека. Применяют для определения видовой принадлеж­ности белка в судебно-медицинской практике в реакции преципитации.

2. Сыворотка преципитирующая белок крупного рогатого скотаполучается путем гипериммунизации животных белком крупного рогатого скота. Применяют в судебно-медицинской практике для определения видовой принадлеж­ности белка; в санитарной практике для обнаружения соответствующих белковых веществ в продуктах при подо­зрении на фальсификацию в реакции преципитации.

3. Преципитирующая менингококковая сывороткаполучается путем гипериммунизации животных менингококковым антигеном. Применяют для обнаружения менингококкового антигена в ликворе больного в реакции преципитации.

4. Преципитирующая сибиреязвенная сыворотка получается путем гипериммунизации животных сибиреязвенным антигеном. Применяют для обнаружения сибиреязвенного антигена в исследуемом материале в реакции термопреципитации по Асколи.

ΙΙΙ. Гемолитическая сыворотка

Гемолитическую сыворотку получают путем гипериммунизации животных взвесью эритроцитов барана. Титром гемолитической сыворотки называется то ее мак­симальное разведение, которое в объеме 0,5 мл в присутствии комплемента в рабочей дозе вызывает гемолиз 0,5 мл 3%-ной взвеси эритро­цитов барана в течение часа при температуре 37°С. Гемолитическая сыворотка применяется в реакции связы­вания комплемента (РСК.) в индикаторной системе (гемоли­тическая сыворотка+эритроциты барана). Используют в серологической диагностике сифилиса, гонореи, микоплазменных, хламидийных инфекций, вирусных заболеваний и др.

ΙV. Комплемент

Комплемент представляет собой свежую или консервированную сыворотку морской свин­ки. Комплемент применяется в реакции связывания комплемента (РСК) и в реакции бактериолиза.

Перед постановкой каждого опыта проводят титрование комплемента и определяют его рабочую дозу.

Титромкомпле­мента является то его наименьшее количество, которое вызы­вает гемолиз 3%-ной взвеси эритроцитов барана в присутствии гемолитической сыворотки (в тройном титре) в течение 30 ми­нут при 37°С В реакции связывания комплемента применяют рабочую дозу комплемента, увеличенную в сравнении с титром на 20-25%. Практически в качестве рабочей дозы бе­рется то количество комплемента, которое находится во второй пробирке, в которой произошел гемолиз.

Дата добавления: 2015-01-19 ; просмотров: 10773 ; ЗАКАЗАТЬ НАПИСАНИЕ РАБОТЫ

Содержание: агглютинирующие антитела к антигенам шигелл.

Получение: путем иммунизации кроликов определенными видами и сероварами шигелл дизентерии Флекснера, Зонне, Бойда.

Применение: для диагностики в бактериологическом методе: постановке реакции агглютинации.

Семейство энтеробактерий. Таксономия. Общая характеристика. Морфология, культуральные, биохимические свойства. Антигенная структура.

Роды – Proteus Providencia Klebsiella Enterobacter Escherichia Shigella Salmonella

Морфология: грамотрицательные палочки, спор не образуют ( искл. Shigella и Klebsiella), подвижны за счет перитрихиально расположенных жгутиков, некоторые образуют капсулу.

Культуральные: растут на простых питательных средах, при 37 С, факультативные анаэробы

Биохимические: оксидазоотрицательные, обладают нитратредуктазой, ферментируют глюкозу с образование кислоты, некоторые с образованием газа, роды различаются по способности ферментировать лактозу, продуцировать сероводород, индол, расщеплять мочевину и т.д.

Антигенные: обладают соматическим О-антигеном, могут иметь жгутиковый Н-антиген, поверхностный К-антиген.

Микробиологическая диагностика сальмонеллезов.

Проводится бактериологическим и серологическим методом.

Материал для исследования: испражнения, рвотные массы, промывные воды, желчь, костные мозг, кровь, продукт питания

1. Посев в чашки с висмут-сульфитным агаром и в среды накопления (магниевая, селенитовая), из которых через 6-10 часов делают пересев на висмут-сульфитный агар. Инкубация 37С 24 ч

2. Макро- и микроскопическое изучение. Отбирают колонии черного цвета и пересевают на полиуглеводную среду Олькеницкого. Инкубация 37С 24 ч

Серологический метод: РНГА с сальмонеллезными поливалентными и групповыми диагностикумами

Брюшнотифозный ОН-диагностикум, получение, назначение.

Брюшнотифозный ОН – диагностикум взвесь бактерий S. Typhi, убитых обработкой формалином. Применяется для серодиагностики брюшного тифа в развернутой реакции агглютинации (РА) Видаля. Реакция основана на обнаружении в сыворотке крови больных людей антител-агглютининов, которые появляются в конце 1-й – начале 2-й недели заболевания. Позволяет оценивать динамику нарастания и длительность сохранения антител. Диагностическим титром реакции Видаля считается разведение сыворотки больного не ниже 1:200.

Сальмонеллы. Особенности антигенной структуры по Кауфману-Уайту. Патогенность для человека и животных.

Сальмонеллы обладают соматическим О-антигеном, жгутиковым Н-антигеном, некоторые К-антигеном. Дифференциация внутри рода проводится по антигенной структуре.

В основе классификации Кауфмана-Уайта лежит подразделение сальмонелл на серологические группы по общности строения О-антигена и внутри серогруппы – на серовары в соответствии со строением Н-антигена.

О-антиген состоит из R-ядра и боковой S-цепи. К s-цепи присоединяются сахара, которые называются рецепторами и обозначаются цифрами.

H-антиген является двухфазным. Его синтез кодируется двумя независимыми генами, работа одного из которых исключает работу другого. Поэтому в каждой клетке может быть синтезирована только одна фаза. Первая фаза обозначается буквами и считается специфической, вторая – цифрами, неспецифическая.

в таблице Кауфмана-Уайта серогруппы обозначаются цифрами согласно номеру группового рецепторов. А-2, В-4, С_1-С₄ – 6,7, D₁ – 9. Внутри серогруппы серовары расположены в алфавитном порядке.

Сальмонеллы являются возбудителями брюшного тифа и паратифа, а также вызывают сальмонеллез

Микробиологическая диагностика дизентерии. Серодиагностика.

РНГА с эритроцитарными шигеллезными диагностикумами

Материал: сыворотка крови

Компоненты: ИХН, сыворотка больного, эритроцитарный диагностикум

Реакцию ставят в планшетах. Вносят в лунки по 1 капле ИХН, разводят сыворотку, добавляют одинаковое количество эритроцитарного диагностикума. В контроль сыворотки добавляют только ИХН и сыворотку, в контроль диагностикума – ИХН и диагностикум. Помещают в термостат на 18-24 ч при 37С. Проводят макроскопический учет – положительный результат – зонтик – рыхлый садок их склеившихся эритроцитов на дне и боковых поверхностях лунок. Отрицательный – пуговка – плотный осадок их эритроцитов на дне.

Агглютинирующие ОВ коли-сыворотки поливалентные. Получение. Назначение.

Содержание: агглютинирующие антитела к О- и В-антигенам кишечной палочки.

Получение: гипериммунизация кролика О- и В-антигенами кишечной палочки.

Применение: для диагностики в бактериологическом методе, постановка реакции агглютинации- для идентификации энтеропатогенных эшерихий.

К диагностическим специфическим сывороткам, применяемым для обнаружения в тех или иных материалах антигенов или для определения вида и даже типа микроба или вируса, относятся агглютинирующие, преципитирующие и лизирующие (комплементсвязывающие). Такая классификация основана на функциональной способности специфических гамма-глобулинов склеивать (агглютинировать), осаждать (преципитировать), растворять (лизировать) соответствующие антигены.

Агглютинирующие сыворотки и технология их приготовления

Явление агглютинации впервые выявили Шарен и Роже в 1889 году. Однако только через несколько лет этому феномену было придано диагностическое значение. В 1896 году Грубер и Дургам установили возможность использования реакции агглютинации (РА) для определения вида микробов, выделенными от больных людей кишечными инфекциями. Указанные авторы, а также, в последующем Видаль (Widal F., 1896) и Грюнбаум (Grunbaurn A., I897) предложили использовать агглютинирующую способность сывороток крови больных для диагностики брюшного тифа, Вейль и Феликс -- для диагностики сыпного тифа, Раит -- для диагностики бруцеллеза, и другие.

Уже в первые годы после обнаружения феномена агглютинации в лабораторной практике наметились два направления его использования: определение по заведомо известным иммунным сывороткам вида выделенного микроба и обнаружение в исследуемых сыворотках крови больных специфических антител (агглютининов) с помощью известных стандартных антигенов (взвеси убитых микробов). Кроме того, было установлено, что не все виды микроорганизмов способны вызывать образование агглютининов в достаточно большом количестве. Например, микробы, образующие на плотных питательных средах колонии шероховатой формы, не образуют гомогенную суспензию, поэтому они как антигены не могут быть использованы в реакции агглютинации (возбудители сибирской язвы, туберкулеза, некоторые виды стрептококков и другие).

Наиболее широко агглютинирующие сыворотки применяют при дифференциации микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae, рода Brucella, Listeria, возбудителей риккетсиозных и вирусных инфекций.

Агглютинирующие сыворотки готовят путем гипериммунизации животных различными корпускулярными антигенами, введением их парентеральным путем. В качестве антигенов используют живые или убитые различными способами культуры соответствующих микробов. В связи с непостоянным содержанием антигенных компонентов у одного и того же вида бактерий желательно животных иммунизировать несколькими штаммами (2--3) этого вида микроба. Для получения поливалентных агглютинирующих сывороток прибегают к одновременному введению смеси антигенов из нескольких типов бактерий одного и того же вида. В процессе работы необходимо следить за однородностью популяции штамма, используемого для иммунизации. Лучшим способом сохранения агглютиногенных свойств является лиофильное высушивание.

В большинстве случаев для получения полноценных агглютинирующих сывороток используют в качестве антигенов культуры микробов в S-форме. Реже требуются О- или R-варианты. Для получения сывороток лучше использовать в качестве антигенов живые культуры бактерий или вирусов, в ряде случаев для иммунизации животных использовать вновь пересеянные (суточные) культуры микробов.

С целью изготовления антигенов соответствующие микробы выращивают на плотных питательных средах. Если это сальмонеллы или эшерихии, то микробный газон смывают физиологическим раствором через 18--20 часов культивирования при 37°С. Для бруцелл, туляремийных бактерий сроки культивирования составляют 48--72 часа, для лептоспир -- 8--10 суток.

В ряде случаев введение живых культур может вызывать тяжелую реакцию организма иммунизируемых животных, и даже их гибель. Поэтому, где это допустимо, животных иммунизируют убитыми взвесями микроорганизмов.

При получении агглютинирующих сывороток необходимо иметь в виду, что микробная клетка имеет очень сложную антигенную структуру. Она состоит из могочисленных антигенов, расположенных в различных местах тела клетки (соматические О- и К-антигены) и в ее жгутиковом аппарате (Н-антигены).

О-антиген термостабилен, он создает медленно выпадающую зернистую или комковатую агглютинацию, трудно разбивающуюся при встряхивании. О-агглютинирующие сыворотки склеивают микробные клетки по полюсам. При этом подвижность у таких микробов не утрачивается (например, у лептоспир и других подвижных микробов).

К-антигены располагаются в теле микробной клетки наиболее поверхностно и полностью прикрывают собой О-антигены. Это и объясняет инагглютинабильность культур, имеющих К-антигены. К-антигены термолабильны и состоят из нескольких фракций (Vi, В, L, А). Микробные клетки при К-агглютинации склеиваются между собой всей соприкасающейся поверхностью. Считают, что глубинные соматические или О-антигены проявляются в реакции агглютинации лишь у диссоциированных штаммов, находящихся в R-форме.

У подвижных жгутиковых микробов имеются Н-антигены. Они термолабильны и образуют с сыворотками крупный хлопьевидный осадок. Н-агглютинирующие сыворотки склеивают бактерии жгутиками, поэтому они становятся неподвижными.

Все указанные микробные антигены отличаются по химической природе, и поэтому они неодинаково чувствительны к действию температуры и химических веществ. Например, если О-антиген не разрушается при кипячении, автоклавировании и при воздействии спирта, ацетона, то Н-антигены разрушаются при 2,5-часовом кипячении и при обработке спиртом. Vi-антигены сальмонелл разрушаются при кипячении мгновенно, а при 60° С в течение 30 минут.

В тоже время поверхностные О- и К-антигены, а также жгутиковые Н-антигены относительно устойчивы к формалину, что широко используется при приготовлении формолвакцин.

Для получения диагностических агглютинирующих сывороток чаще всего используют кроликов. Иммунизацию в большинстве случаев проводят внутривенным способом в нарастающих дозах и интервалами в 4 суток. Обычно производят 3--4 инъекции анти гена.

Подкожный метод введения антигена применяют обычно для первичного введения в случае повышенной его токсичности. Пробное взятие крови с целью установления титров агглютининов проводят через 6--7 суток после последнего введения антигена. Следовательно, весь цикл иммунизации длится около месяца.

Примером получения диагностических сывороток может служить приготовление агглютинирующих О-коли-сывороток. В качестве продуцентов используют кроликов породы шиншилла весом 3--4 кг в возрасте 6--12 месяцев. После закупки здоровых кроликов выдерживают в карантине не менее 3--4 недель для исключения инфекционных заболеваний и адаптации к условиям фабрики. В качестве антигенов используют смывы физраствором агаровых 18--20-часовых культур соответствующих серовариантов эшерихий и подвергнутых кипячению или автоклавированшо в течение 2--2,5 часа. При этом каждый антиген готовится впрок в количестве, не обходимом на весь цикл гипериммунизации, и хранится в холодильнике при 4--5° С не более 30 суток. Антиген в концентрации 2 млрд микробных тел в 1 мл вводится кроликам в краевую ушную вену с интервалом в 3--5 суток в дозах 0,3; 0,6; 1,0; 2,0; 3,0 мл. Через 5--6 суток после последнего введения антигена у каждого кролика определяют титры антител. Ежели они соответствуют инструктивным требованиям, то от кроликов берут тотальным способом кровь, отстаивают сыворотку, консервируют борной кислотой, отстаивают не менее двух месяцев при температуре 4--5° С, после чего фильтруют через стерилизующие пластины или мембранные фильтры, проверяют на стерильность, разливают в ампулы и подвергают лиофильной сушке. Затем ампулы запаивают под вакуумом и сыворотки подвергают контролю, по внешнему виду, наличию, вакуума, содержанию влаги, растворимости, активности, и специфичности.

С целью получения О-сывороток иммунизируют кроликов внутривенно прокипяченными или спиртовыми антигенами соответствующих серотипов сальмонелл. Для получения Н-сывороток кроликов иммунизируют формалинизированными антигенами, используя по возможности культуры в однофазном состоянии по Н-антигену_.

Диагностические агглютинирующие сыворотки готовятся к лептоспирам, листериям, бруцеллам, кампилобактериям и другим микроорганизмам. Технология их изготовления аналогична описанным с учетом отдельных, особенностей в каждом конкретном случае, что регламентируется соответствующими инструкциями. [4, 16, 21]