Цитотоксические т-лимфоциты при вич

При ВИЧ-инфекции пациент регулярно сдает анализы крови.

Изначально они сдаются, чтобы подтвердить факт болезни. В дальнейшем – с целью её контроля.

Основные показатели – это:

• вирусная нагрузка (этот показатель меняется, в зависимости от прогрессирования болезни или успешности лечения);
• количество CD4 и соотношение CD4/ CD8 (отражает состояние иммунитета ВИЧ-инфицированных пациентов).

Проводятся также общеклинические исследования. Они нередко указывают на сопутствующие заболевания или побочные эффекты, развивающиеся в результате противовирусной терапии.

Общий анализ крови при ВИЧ: показатели

На основании ОАК при ВИЧ диагноз не ставится. Исследование имеет лишь вспомогательное значение.

Изменения наблюдаются в острой фазе ВИЧ. Снижается количество лейкоцитов. В наибольшей мере уменьшается концентрация в крови лимфоцитов. Но постепенно эти показатели восстанавливаются.

Следующие значительные изменения показателей ОАК можно будет выявить только на стадии СПИД.

В общеклиническом анализе крови может обнаруживаться:

• дефицит лейкоцитов;
• низкий уровень тромбоцитов;
• может понижаться гемоглобин и количество эритроцитов (хотя они обычно не опускаются ниже нормы);
• в лейкоцитарной формуле отмечается низкое содержание нейтрофилов и лимфоцитов.

Показатель СОЭ при ВИЧ

СОЭ – показатель, который возрастает при воспалительных реакциях в организме.

В норме он не должен превышать 10 мм/ч.

При недавнем заражении ВИЧ этот показатель может значительно возрастать. Дальше он постепенно приходит в норму.

СОЭ отражает активность иммунитета. Этот показатель соответствует уровню цитокинов. В том числе интерлейкина-6 и фактора некроза опухолей α. В дальнейшем по увеличению уровня СОЭ можно предположить повышение активности ВИЧ-инфекции. Потому что данный показатель возрастает в тот период, когда отмечается уменьшение числа CD4 клеток.

Но на практике СОЭ не имеет большого значения в диагностике. Потому что всем пациентам регулярно определяют уровень CD4 лейкоцитов. Их количество проверяется через каждые несколько месяцев.

СОЭ не является маркером острых интеркуррентных патологий при ВИЧ. Нередко даже значительное возрастание показателя до 100 мм в час и более не сопровождается никакими инфекциями или симптомами.

Биохимия крови при ВИЧ: показатели

Данный анализ не имеет большого значения в диагностике ВИЧ-инфекции. Он необходим в основном для оценки функции внутренних органов: почек, печени, поджелудочной железы и т.д.

Установлено, что у пациентов, страдающих ВИЧ, при снижении уровня CD4 в крови повышается уровень белка и альбумина. Остальные базовые показатели биохимического анализа крови у них в норме.

Однако на организм пациента влияет не только болезнь. Он постоянно принимает несколько антиретровирусных препаратов. Они могут оказывать побочные эффекты, влияя на функцию печени и почек.

В таких случаях возможно повышение в крови ряда показателей:

Чаще всего поражается печень. Потому что многие пациенты с ВИЧ наркозависимые. А наркотические вещества сами по себе оказывают гепатотоксическое действие.

Некоторые страдают также вирусным гепатитом С. В этом случае вероятность побочных эффектов со стороны печени возрастает.

Другие факторы риска:

• ожирение;
• пожилой возраст;
• высокий уровень трансаминаз на момент начала лечения;
• алкоголизм;
• низкий уровень тромбоцитов в крови;
• высокая вирусная нагрузка;
• недостаточность функции почек.

Признаки нарушения работы печени в биохимическом анализе крови при ВИЧ встречаются достаточно часто. Но тяжелая печеночная недостаточность развивается очень редко.

Такие случаи зафиксированы при использовании препаратов:

Иногда страдает функция почек. В этом случае возрастает уровень сывороточного креатинина. Причиной становится нарушение его секреции в проксимальных канальцах почек.

Такие побочные эффекты возможны при приеме:

• тенофира;
• атазанавира;
• индинавира (устаревший препарат, который почти не используется).

После отмены препаратов нефротоксические эффекты исчезают.

Вирусная нагрузка при ВИЧ: показатели

При острой ВИЧ-инфекции обычно отмечается стремительное увеличение виремии. Она достигает больше 100 миллионов копий РНК в мл.

Большинство патогенетических процессов происходят именно в эту фазу заболевания. Однако высокая вирусная нагрузка сохраняется недолго. Срабатывает иммунитет человека. А клетки, обеспечивающие репликацию вируса, погибают. Поэтому виремия начинает снижаться.

В течение нескольких недель она достигает значения, которое называют установочной точкой. Чем выше эта точка, тем хуже прогноз заболевания.

На величину установочной точки влияет:

• репликационная способность вируса;
• генетические факторы;
• врожденные особенности иммунитета.

В среднем после острого периода вирусная нагрузка составляет лишь 1% от исходного значения.

В дальнейшем она длительное время остается стабильной. Определяя уровень виремии через определенные промежутки времени, можно прогнозировать развитие заболевания. Исследования показывают, что если через 2 года вирусная нагрузка не превышает 1000 копий РНК в мл, то через 12 лет при естественном течении болезни у человека все ещё не будет стадии СПИДа.

Но если вирусная нагрузка через 2 года после инфицирования превышает 100 тысяч копий в мл, то 80% из них уже имеют СПИД-индикаторные заболевания.

От величины установочной точки зависит скорость падения уровня CD4-лимфоцитов. В норме этот показатель составляет от 435 до 1600 копий РНК в мл. В дальнейшем вирусная нагрузка возрастает.

Существует условная градация, когда её следует считать высокой, а когда – низкой.

Расшифровка – в таблице.

Показатель	Вирусная нагрузка
До 10 000 копий РНК	Низкая
От 10 до 100 тысяч копий РНК	Средняя
Более 100 000 копий РНК	Высокая

Обычно вирусная нагрузка коррелирует с уровнем CD4. Чем она выше, тем количество клеток иммунной системы в крови ниже. Вирусная нагрузка определяется регулярно. Она является показателем успешности лечения. Целью антиретровирусной терапии является достижение неопределяемого уровня виремии. То есть, тест ПЦР должен показывать отрицательные результаты.

Такие результаты могут быть достигнуты через 3-6 месяцев после начала лечения. Обычно неопределяемой считают нагрузку ниже 50 копий РНК в мл. Это граница чувствительности большинства тестов.

Показатели анализов при ВИЧ инфекции

При ВИЧ также сдают некоторые общеклинические анализы. Однако они нужны в большей мере для оценки функции внутренних органов, нежели для диагностики ВИЧ. Помимо общего и биохимического анализов крови сдаются анализы мочи.

Они помогают своевременно обнаружить поражение почек.

Некоторые препараты для антиретровирусной терапии способны спровоцировать почечную недостаточность. В этом случае уменьшается объем диуреза. Повышается плотность мочи.

Нефротоксические препараты также могут вызывать отложение конкрементов. В этом случае возможно появление солей в анализе мочи. Иногда в ней определяются эритроциты. Это происходит чаще после приступов почечной колики.

Иммунный статус при ВИЧ: показатели

При ВИЧ-инфекции страдают прежде всего показатели иммунитета.

В острой фазе заболевания происходит резкое снижение уровня CD4-лимфоцитов. Затем, после снижения виремии, количество этих клеток начинает постепенно восстанавливаться.

Однако без антиретровирусной терапии оно никогда не достигнет исходного уровня. Через неделю после заражения запускается каскад цитокиновых реакций. Наблюдается значительное возрастание количества цитокинов в крови. Они помогают держать под контролем инфекцию.

В этот же период увеличивается количество Т-лимфоцитов CD8. Они играют основную роль в сдерживании инфекции. А именно, убивают клетки, пораженные ВИЧ, с помощью цитолиза. Также они воздействуют они опосредованно, за счет увеличения продукции цитокинов.

На период возрастания популяции CD8-лимфоцитов приходится первичное уменьшение вирусной нагрузки. Т-клетки способны уничтожать вирус. Но он достаточно быстро мутирует, защищаясь от иммунитета. В дальнейшем иммунограмма для диагностики ВИЧ становится малоинформативной. Потому что показатели приближаются к нормальным значениям.

Если отклонения от нормы есть, то они незначительные. Обычно снижается общее число CD4-лимфоцитов.

Количество CD8-лимфоцитов может быть повышенным. Соотношение CD4/ CD8 уменьшается.

При ВИЧ оно составляет меньше единицы. Через несколько лет наступает стадия выраженного иммунодефицита (СПИД).

В этом случае в крови резко снижается количество CD4. В среднем у здорового человека их 800 до 1050 в мкл. Нормой считается содержание в крови CD4 от 500 до 1600 в мкл.

При ВИЧ их количество может снижаться до 200 в мкл и меньше. Общее количество Т-лимфоцитов уменьшается до 1000 и меньше в мкл.

Количество CD8 остается в пределах нормы. Поэтому соотношение CD4/ CD8 значительно уменьшается. В норме оно составляет 0,9-1,9. То есть, CD4 лимфоцитов должно быть в полтора-два раза больше, чем CD8. Но при ВИЧ их становится значительно меньше.

Антиретровирусную терапию обычно начинают при уровне CD4 ниже 350 в мкл.

Может также использоваться другой показатель для определения уровня иммунодефицита при ВИЧ. Это процент CD4 в общем количестве Т-лимфоцитов. Критическим значением является показатель 15%. Это означает, что следует начинать агрессивную антиретровирусную терапию. В том числе в случае, когда общее количество CD4 в иммунограмме остается высоким.

Существует прямая зависимость между вирусной нагрузкой и содержанием CD4 в крови. В среднем у человека на момент инфицирования этих клеток около 1000 в мл.

На пике острой фазы ВИЧ, когда вирусная нагрузка максимальная, количество CD4 снижается до 500 в мкл или меньше. Это происходит в среднем через 6 недель после инфицирования. Затем в течение последующих 9-12 месяцев начинается постепенное повышение CD4.

Оно достигает значения в 600-700 клеток в мл. Но затем снова начинает опускаться.

Снижение уровня CD4 происходит медленно, но неуклонно. В среднем через 5 лет после начала заболевания их уровень ниже 400 в мкл. Через 7 лет их уже меньше 200 в мкл.

По количеству этих клеток можно прогнозировать различные оппортунистические болезни. В прогностическом отношении имеет значение динамика изменения количества CD4.

В группу высокого риска входят пациенты, у которых число этих клеток уменьшается на 100 и более в мкл за 6 месяцев. Если за год их число снижается на 20-50 клеток в мкл, это средний риск.

Дифференцировку лейкоцитов с начала 80х годов прошлого века принято описывать по наличию различных CD-рецепторов на их поверхности. CD4 и CD8-рецепторы – это трансмембранные гликопротеины, названные по кодам кодирующих генов: первый кодируется геном CD4, второй – CD8.

Нас интересуют две субпопуляции в данном вопросе: Т-хелперы, которые экспрессируют на поверхности рецепторы CD45+, CD3+ и CD4+, и цитотоксические Т-лимфоциты, которые также несут свой специфический комплект рецепторов – CD45+, CD3+ и CD8+. В упрощенном виде лимфоциты можно называть соответственно CD4 и CD8.

Напомним, что вирус иммунодефицита человека для проникновения в клетку использует именно CD4-рецептор, T-хелперы обладают данным рецептором и страдают от ВИЧ. Не забываем, что тем же CD4-рецептором может обладать и ряд других клеток, например, моноциты, макрофаги, клетки микроглии, дендритные и некоторые другие.

Какое же значение имеет соотношение CD4 к CD8-клеткам? В общем случае у человека без ВИЧ изменения отражают фазы иммунного ответа на инфекционный агент. В острый период соотношение возрастает за счет увеличения доли и числа T-хелперов, а в период реконвалесценции нарастает уровень цитотоксических лимфоцитов, и соотношение падает. Вот эта фазность процессов может быть важна, ее иногда учитывают клиницисты.

При ВИЧ-инфекции история куда более запутанная — соотношение CD4 к CD8 обычно неуклонно падает с течением заболевания. В первые полгода-год инфекции в среднем CD4 могут снизиться на треть, а CD8 – вырасти на примерно ту же долю. С одной стороны, есть инфекционный агент, есть иммунный ответ, но с другой стороны, вирус непосредственно влияет негативно на уровень CD4-клеток. Потому принципы оценки соотношения CD4/CD8 не столь ясны, но все же некую информацию данное соотношение несет.

Некоторое время назад были даже попытки ставить диагноз ВИЧ-инфекции у младенцев в странах Африки по этому соотношению, но улучшение доступа к обычным методам диагностики позволило отказаться от использования столь косвенных параметров.

Статистически значимая связь снижения отношения CD4/CD8 для рисков различных неблагоприятных событий, не связанных со СПИД, была подтверждена группой под руководством Sergio Serrano-Villar в 2014 году. Медианное значение CD4/CD8 в контрольной группе составляло 0,7 (межквартильный размах 0,48-0,94) и сравнивалось с группой со значением 0,46 (0,31-0,68). Примечательно то, что соотношение CD4/CD8 позволяет оценивать риски для данного типа событий точнее, чем оценка надира уровня CD4-лимфоцитов или абсолютные, или относительные, значения уровня CD4-клеток.

Адаптировано hiv.plus (Serano-Vilar и др., 2104)

В других исследованиях (Ratnam и др., 2006) было показано, что это соотношение при значениях ниже 0,15 является независимым четким предиктором рисков возникновения воспалительного синдрома восстановления иммунитета (ВСВИ/IRIS), наряду с низким уровнем CD4 в абсолютном значении (менее 10%).

Субъекты с низким соотношением CD4/CD8, несмотря на успешную антиретровирусную терапию, могут представлять интерес для включения в клинические испытания, направленные на изучение аспектов снижения хронической иммунной активации.

Исследование большой канадской когорты (Mussini и др., 2015) показало, что при старте антиретровирусной терапии при медианном уровне 0,39 через год нормализация отношения CD4/CD8 наблюдалась лишь в 4,4% случаев, через два – 11,5%, а через пять лет – 29,4%.

Пожилой возраст и низкий надир (наиболее низкое наблюдаемое значение) уровня CD4 связаны с понижением шансов на нормализацию соотношения CD4 к CD8, а вот раннее начало терапии – значимо повышает эти шансы. Также было показано (Hurst J. и др., 2015), что динамика изменений отношения CD4 к CD8 хорошо отражает размер вирусного резервуара.

Адаптировано hiv.plus (Wei Lu и др., 2015)

Итого: отношение CD4/CD8 является признанным биомаркером иммунной активации и иммунного старения, что при ВИЧ-инфекции находит свое подтверждении в увеличении рисков различных неблагоприятных событий, не связанных с ВИЧ. В клинической практике вряд ли сегодня возможно как-то явно и четко трактовать как абсолютные значения CD4/CD8, так и динамику этого отношения. Однако использование данного соотношения в рамках определенных клинических исследований, как показала практика, вполне оправдано.

1. Serrano-Villar S, Pérez-Elías MJ, Dronda F. и др. Increased risk of serious non-AIDS-related events in HIV-infected subjects on antiretroviral therapy associated with a low CD4/CD8 ratio. PLoS One. 2014 Jan 30;9(1):e85798. PMID: 24497929.
2. Ratnam I, Chiu C, Kandala NB, Easterbrook PJ. Incidence and risk factors for immune reconstitution inflammatory syndrome in an ethnically diverse HIV type 1-infected cohort. Clin Infect Dis. 2006 Feb 1;42(3):418-27. Epub 2005 Dec 28. PMID: 16392092.
3. Hadrup SR, Strindhall J, Køllgaard T. и др. Longitudinal studies of clonally expanded CD8 T cells reveal a repertoire shrinkage predicting mortality and an increased number of dysfunctional cytomegalovirus-specific T cells in the very elderly. J Immunol. 2006 Feb 15;176(4):2645-53. PMID: 16456027.
4. Bruno G, Saracino A, Monno L, Angarano G. The Revival of an "Old" Marker: CD4/CD8 Ratio. AIDS Rev. 2017 Apr - Jun;19(2):81-88. PMID: 28182620.
5. Mussini C, Lorenzini P, Cozzi-Lepri A. и др. CD4/CD8 ratio normalisation and non-AIDS-related events in individuals with HIV who achieve viral load suppression with antiretroviral therapy: an observational cohort study. Lancet HIV. 2015 Mar;2(3):e98-106. PMID: 26424550.
6. Saracino A, Bruno G, Scudeller L, Volpe A. и др. Chronic inflammation in a long-term cohort of HIV-infected patients according to the normalization of the CD4:CD8 ratio. AIDS Res Hum Retroviruses. 2014 Dec;30(12):1178-84.PMID: 25360575.
7. Hurst J, Hoffmann M, Pace M. и др. Immunological biomarkers predict HIV-1 viral rebound after treatment interruption. Nat Commun. 2015 Oct 9;6:8495. PMID: 26449164.
8. Lu W, Mehraj V, Vyboh K. и др. CD4:CD8 ratio as a frontier marker for clinical outcome, immune dysfunction and viral reservoir size in virologically suppressed HIV-positive patients. J Int AIDS Soc. 2015 Jun 29;18:20052. PMID: 26130226.

Аннотация научной статьи по фундаментальной медицине, автор научной работы — Зурочка А.В., Черешнев В.А., Гаврилова Т.В., Шестакова Е.В., Квятковская С.В.

Нами было проведено иммунофенотипирование лимфоцитов методом проточной цитометрии у 150 больных ВИЧ-инфекцией . Все обследованные лица были распределены на три группы в зависимости от абсолютного числа CD3+CD4+ Т-лимфоцитов в периферической крови согласно классификации стадий ВИЧ-инфекции у взрослых и подростков в редакции CDC (США). Выявлено, что снижение абсолютного уровня Т-хелперов с каждой последующей стадией заболевания сопровождается падением относительного и абсолютного числа лимфоцитов, общего числа Т-лимфоцитов, снижением абсолютного уровня цитотоксических Т-лимфоцитов при повышении их относительного числа, как следствие, падением соотношения CD3+CD4+/CD3+CD8+, снижением уровня дважды позитивной субпопуляции, снижение относительного и абсолютного уровня αβТ-лимфоцитов и значительное падение абсолютного уровня γδТ-клеток при сохранном их относительном содержании. Все это также указывает на отсутствие иммунологической реактивности в ответ на длительно персистирующий в организме антиген.

Похожие темы научных работ по фундаментальной медицине , автор научной работы — Зурочка А.В., Черешнев В.А., Гаврилова Т.В., Шестакова Е.В., Квятковская С.В.

Abstract. We have performed immunophenotyping of lymphocytes in 150 HIV-positive patients, by means of flow cytometry. All the persons under study were classified into three groups, depending on absolute contents of CD3+CD4+T-lymphocytes in peripheral blood, according to HIV infection staging in adults and adolescents, as amended by CDC (USA). It was revealed that, at each subsequent stage of disease, a decrease in absolute numbers of T-helpers is accompanied by drop in relative and absolute numbers of lymphocytes, as well as in total T-lymphocyte numbers, and decreased amounts of absolute cytotoxic T-lymphocytes levels, combined with increase in their relative contents, along with decreased CD3+CD4+/CD3+CD8+ ratio, diminished levels of double-positive subpopulation, decrease in relative and absolute levels of αβТ-lymphocytes and significant drop in absolute levels of γδТ-cells, while their relative amounts remained normal. These findings demonstrate a pattern typical to the absence of immunological reactions in response to antigens persisting in the organism

ОЦЕНКА ЗАВИСИМОСТИ УРОВНЯ /оТ-КЛЕТОК У ВИЧ-ИНФИЦИРОВАННЫХ

ПАЦИЕНТОВ от уровня CD3+CD4+

Зурочка А.В.1, Гаврилова Т.В.2, Шестакова Е.В.3, Квятковская С.В.3, Миркина Т.В.3, Черешнев В.А.4

Самостоятельный курс клинической лабораторной диагностики ГОУ ВПО ЧелГМА Росздрава, г. Челябинск 2Пермская государственная медицинская академия имени академика Е.А. Вагнера, г. Пермь 3Клиника ГОУ ВПО ЧелГМА Росздрава, Центр по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями, г. Челябинск

Учреждение РАН НИИ иммунологии и физиологии Уро РАН, г. Екатеринбург

Резюме. Нами было проведено иммунофенотипирование лимфоцитов методом проточной цитометрии у 150 больных ВИЧ-инфекцией. Все обследованные лица были распределены на три группы в зависимости от абсолютного числа CD3+CD4+ Т-лимфоцитов в периферической крови согласно классификации стадий ВИЧ-инфекции у взрослых и подростков в редакции CDC (США). Выявлено, что снижение абсолютного уровня Т-хелперов с каждой последующей стадией заболевания сопровождается падением относительного и абсолютного числа лимфоцитов, общего числа Т-лимфоцитов, снижением абсолютного уровня цитотоксических Т-лимфоцитов при повышении их относительного числа, как следствие, падением соотношения CD3+CD4+/CD3+CD8+, снижением уровня дважды позитивной субпопуляции, снижение относительного и абсолютного уровня авТ-лимфоцитов и значительное падение абсолютного уровня у8Т-клеток при сохранном их относительном содержании. Все это также указывает на отсутствие иммунологической реактивности в ответ на длительно персистирующий в организме антиген.

Ключевые слова: ТуЬ-лимфоциты, ВИЧ-инфекция, Т-хелперы, цитотоксические Т-лимфоциты, иммунофенотипирование.

Zurochka A.V., Gavrilova T.V., Shestakova E.V., Kvyatkovskaya S.V., Mirkina T.V., Chereshnev V.A.

EVALUATION OF INTERDEPENDENCE BETWEEN yST-CELL LEVELS AND CD3+CD4+ T-LYMPHOCYTE coNTENTs iN HIv-INFEcTED RATIENTs

abstract. We have performed immunophenotyping of lymphocytes in 150 HIV-positive patients, by means of flow cytometry. All the persons under study were classified into three groups, depending on absolute contents of CD3+CD4+T-lymphocytes in peripheral blood, according to HIV infection staging in adults and adolescents, as amended by CDC (USA). It was revealed that, at each subsequent stage of disease, a decrease in absolute numbers of T-helpers is accompanied by drop in relative and absolute numbers of lymphocytes, as well as in total T-lymphocyte numbers, and decreased amounts of absolute cytotoxic T-lymphocytes levels, combined with increase in their relative contents, along with decreased CD3+CD4+/CD3+CD8+ ratio, diminished levels of double-positive subpopulation, decrease in relative and absolute levels of авТ-lymphocytes and significant drop in absolute levels of yS^cells, while their relative amounts remained normal. These findings demonstrate a pattern typical to the absence of immunological reactions in response to antigens persisting in the organism. (Med. Immunol., vol. 12, N 4-5, pp 425-428)

Keywords: PfS-lymphocytes, HIV infection, helper Т cells, cytotoxic T lymphocytes, immunophenotyping.

Адрес для переписки:

ySТ-лимфоциты впервые были описаны в середине 1980-х Saito et al. и Brenner et al. (1986) как гетерогенная субпопуляция Т-клеток с Т-клеточным рецептором, состоящим из у- и S-цепей (yS^R) [2, 4, 6]. У людей и многих животных большинство

Зурочка А.В. и др.

Т-клеток экспрессируют Т-клеточный рецептор, состоящий из а- и в-цепей, и лишь небольшое количество Т-клеток несет Т-клеточный рецептор с у- и S-цепями. В отличие от авТ-клеток, у8Т-клетки напрямую распознают белковые и небелковые фосфолиганды без участия главного комплекса гистосовместимости. ySТ-клетки участвуют в антимикробном иммунитете и обладают эффекторными функциями. Роль ySТ-клеток в иммунных процессах при различных заболеваниях и их взаимодействие с другими клетками организма до сих пор остаются до конца не выясненными. Но уже накопилось достаточно информации, которая доказывает необходимость существования подобной популяции клеток. Известно, что VS1+yS вовлечены в механизмы местной иммунной защиты при ВИЧ- и цитомегало-вирусной (ЦМВ) инфекции и при определенных бактериальных инфекциях [3]. Так же оказалось, что ySТ-клетки оказывают цитотоксическое действие с участием механизмов апоптоза [1, 7]. Приведенные выше факты свидетельствуют в пользу того, что для более полной характеристики Т-клеток пациента анализ следует проводить не только по таким специфическим и безусловно важным при ВИЧ-инфекции маркерам как CD3+, CD3+CD4+ и CD3+CD8+, но и по наличию субпопуляций авТ-клеток и yS^ клеток. Важность определения последних очевидна при ВИЧ-инфекции, сопровождающейся длительной персистенцией антигена в организме на фоне депрессии Т-клеточного звена иммунной системы, для контроля эффективности терапии, прогноза развития и течения заболевания.

Материалы и методы

Нами было проведено исследование иммунного статуса 150 больных ВИЧ-инфекцией, средний возраст которых составил 30,9±5,8 лет. Все пациенты находились на диспансерном учете в Центре по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями Клиники ЧелГМА г. Челябинска. Мы распределили больных на три группы согласно классификации стадий ВИЧ-инфекции у взрослых и подростков в редакции CDC (США). В первую группу вошло 23 пациента с абсолютным числом CD4+ Т-лимфоцитов в периферической крови более 500 клеток/мкл. Вторую группу составили 69 человек с абсолютным числом CD4+Т-лимфоцитов 200-499 клеток/мкл. Третью группу составили 53 пациента с абсолютным уровнем CD4^-лимфоцитов менее 200 клеток/мкл. Различие показателей в зависимости от пола в обследуемых группах не имело статистической значимости, в связи с чем мы сочли возможным объединить пациентов без учета их половой принадлежности.

Для определения общего количества лейкоцитов, подсчета абсолютного и относительного соотношения лимфоцитов, моноцитов и грану-лоцитов, а также популяционного и субпопуляционного состава лимфоцитов методом проточной цитометрии кровь брали из локтевой вены в вакуумную пробирку, содержащую антикоагулянт K3EDTA (1,5±0,15 мг на 1 мл крови). Подсчет общего числа лейкоцитов проводился с использованием одно-платформенной технологии с помощью гетерогенного гейтирования по панлейкоцитарному маркеру CD45+ и показателям светорассеяния с применением калибровочных частиц Flow-Count Fluorespheres фирмы Beckman Coulter, США. Популяции лимфоцитов выделяли при помощи гетерогенного гейтирования — область событий, имеющих яркую флуоресценцию CD45-FITC и низкий уровень сигнала светорассеяния под углом 90° (SS), моноцитов — область событий, имеющих менее яркую флуоресценцию CD45-FITC и более высокий уровень сигнала светорассеяния под углом 90°, гранулоци-тов — область событий, имеющих самую низкую флуоресценцию CD45-FITC и высокий уровень сигнала светорассеяния под углом 90°.

С целью определения популяционного состава лимфоцитов для окрашивания нами были использованы четырехпараметрические реагенты линии IQTest: CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5, а также смесь монопараметрических реагентов CD45-PC5, TCR Pan ав-PE, TCR Pan yS-FITC фирмы Beckman Coulter, США. Наличие пан-Т-лимфоцитарного маркера CD3+ при отсутствии CD19+ характерно для Т-лимфоцитов; коэкспрессия CD3+ и CD4+ — для Т-хелперно/ индукторных лимфоцитов; коэкспрессия CD3+ и CD8+ — для T-цитотоксических лимфоцитов; коэкспрессия CD3+ и CD4+CD8+ — для субпопуляции дубльпозитивных Т-лимфоцитов, экспрессия CD3+ при отсутствии экспрессии CD4+ и CD8+ — для дважды негативной субпопуляции Т-лимфоцитов, коэкспрессия CD45+ и TCR Pan ав — для авТ-лимфоцитов, коэкспрессия CD45+ и TCR Pan yS — для ySТ-лимфоцитов.

При анализе лейкограммы (табл. 1) нами выявлено падение от стадии к стадии общего уровня лейкоцитов, связанное с этом значительное снижение относительного и абсолютного числа лимфоцитов при переходе заболевания в последующие стадии и снижении уровня Т-хелперов, снижение абсолютного числа моноцитов, а также повышение относительного числа гранулоцитов в группах по сравнении с пациентами с уровнем Т-хелперов CD3+CD4+ более 500/мкл.

При анализе популяций лимфоцитов (табл. 2) нами выявлено значительное статистиче-

у8Т-клетки при ВИЧ-инфекции

ТАБЛИЦА 1. ПОКАЗАТЕЛИ ЛЕЙКОГРАММЫ ВИЧ-ИНФИЦИРОВАННЫХ ЛИЦ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ УРОВНЯ CD3+CD4+ (M±m)

Показатели обследованных лиц Группа 1 (CD3+CD4+ 500 клеток/мкл и более) Группа 2 (CD3+CD4+ 200-499 клеток/мкл) Группа 3 (СD3+CD4+ 199 и менее клеток/мкл)

n =28 n = 69 n = 53

Лейкоциты, х109/л 6,07±1,72 5,14±1,6* 4,4±1,7***

Гранулоциты, % 55,86±7,67 61,28±11,0* 63,4±13,9*

Гранулоциты, х109/л 3,45±1,3 3,24±1,47 2,93±1,46

Моноциты,% 8,11±1,79 8,41±2,9 8,7±2,8

Моноциты, 109/л 0,49±0,16 0,42±0,17* 0,38±0,17*

Лимфоциты, % 36,04±8,08 29,96±10,0* 25,1± 9,9***

Лимфоциты, х109/л 2,14±0,57 1,47±0,48* 1,04±0,36***

Примечание. * - достоверность различий показателей в группах 2 и 3 по сравнению с группой 1 по U-критерию Манна-Уитни (р Не можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

CD3+CD4-CD8-, абс 86,5±45,63 79,93±45,1 85,0±72,0

Примечание. * - достоверность различий показателей в группах 2 и 3 по сравнению с группой 1 по U-критерию Манна-Уитни: р