Сибирская язва отбор патологического материала почвы

Методические рекомендации по отбору проб почвы для бактериологического исследования на наличие возбудителя сибирской язвы и актиномицетов-антагонистов
(утв. Министерством здравоохранения СССР 27 сентября 1984 г.)

Возбудитель сибирской язвы преимущественно находится в почве на глубине от 1,2 до 2 м, так как именно на этом уровне осуществлялось в прошлом захоронение трупов сибиреязвенных животных. В результате ливневых паводковых потоков, эрозионных процессов или антропогенного воздействия возможен вынос возбудителя в поверхностный слой почвы, составляющий до 40 см и наиболее опасный в эпизоотическом и эпидемическом отношении. Кроме того, поверхностное загрязнение почвы происходит при падеже и вынужденном убое сибиреязвенных животных.

Систематическое бактериологическое исследование почвы в местах падежа, вынужденного убоя или захоронения сибиреязвенных животных является важным моментом в системе противоэпидемических мероприятий и позволяет осуществлять оперативное слежение за состоянием очагов сибирской язвы.

До настоящего времени отсутствуют унифицированные подходы к отбору проб почвы и соблюдению противоэпидемического режима при работе на участках, зараженных возбудителем сибирской язвы.

В настоящих методических рекомендациях излагаются методика отбора проб почвы с применением бура Малькова модифицированного авторами, меры личной профилактики, способы обеззараживания инструментария и остатков проб почвы.

Методика отбора проб почвы для бактериологического исследования на наличие возбудителя сибирской язвы и актиномицетов-антагонистов

Отбор проб почвы для бактериологического исследования на участках захоронения, в местах падежа или вынужденного убоя сибиреязвенных животных проводится по эпидемиологическим показаниям, а также при осуществлении динамического наблюдения за очагом. При контроле активности очага в местах захоронения отбор проб почвы следует проводить в летне-осенний период, наиболее благоприятный для вегетации возбудителя сибирской язвы. Необходимо максимально охватывать исследованиями весь участок очага как по площади, так и по глубине. Так как вероятность бактериологической находки возбудителя сибирской язвы в местах захоронения составляет 1-2%, число проб из одного очага должно составлять не менее 100.

Работа по отбору проб проводится в защитном костюме II типа с применением дезинфицирующих средств.

Бригада отборщиков проб почвы состоит из двух человек. К месту отбора проб она направляется на выделенном транспорте со специальной укладкой (приложение 1).

1. На территории очага выбирается участок размером от 8 до 16 в зависимости от площади захоронения.

2. Намечаются 5 точек отбора проб почвы (4 точки по углам и одна в центре) при отборе проб почвы на глубину до 2-х м или 6 точек (4 точки по углам и две в центре) при отборе проб на глубину до 1,6 м. При захоронении сибиреязвенных животных в траншеи отбор проб необходимо проводить в 5 или 6 точках (в зависимости от глубины отбора проб), расположенных по ходу траншеи.

3. Совком (ножом) производится расчистка намеченных точек отбора проб от мусора, листьев и травы.

4. Отбор проб почвы осуществляется при помощи модифицированного бура Малькова (приложение 2).

5. У места отбора проб почвы расстилается полиэтиленовая пленка размером не менее 100X100 см, над которой отобранная почва ссыпается в мешочки.

При динамическом наблюдении за очагом (в местах захоронения сибиреязвенных животных) отбор проб почвы производится на глубине 1,6-2 метров через каждые 10 см (рис. 1).

7. Вес каждой пробы, взятой в одной точке отбора, должен быть равен 40-50 г (2 столовых ложки).

8. Отобранные на каждой глубине из 5 или 6 точек пробы объединяются в один матерчатый мешочек, на котором простым карандашом отмечается глубина отбора пробы (10, 20, 30 см и т.д.). Полиэтиленовые мешочки не используются, так как это может привести к гибели возбудителя или изменению его свойств.

9. Пробу почвы для лабораторного исследования на наличие актиномицетов-антагонистов следует отбирать в одной из пяти точек на глубине 20 см весом 10 г в отдельный полиэтиленовый мешочек с целью создания благоприятных условий для сохранения и накопления актиномицетов-антагонистов.

10. Для определения химического состава почв пробу весом 100 г отбирают в матерчатый мешочек в одной точке на глубине 20 см на контрольном участке с однотипной структурой почв, расположенном в 100 м от скотомогильника.

11. Пронумерованные мешочки с пробами почвы для исследования на наличие возбудителя антракса помещают по 5-6 штук в металлические пеналы. В один из этих пеналов помещают пробу почвы, предназначенную для исследования на наличие актиномицетов. Пробу для химического анализа помещают в отдельный пенал.

12. После отбора проб остатки почвы, находящиеся на полиэтиленовой пленке, ссыпают в образовавшиеся шурфы. Сверху засыпают хлорной известью (200 г на каждый шурф) и увлажняют. Использованную полиэтиленовую пленку протирают ветошью, смоченной в 6% растворе перекиси водорода с 0,5% раствором моющего средства.

13. Пеналы с наружной стороны обрабатывают 6% раствором перекиси водорода с 0,5% раствором моющего средства.

14. Бур, лопатку и совок (нож) обжигают пламенем паяльной лампы, затем обрабатывают ветошью, смоченной 6% раствором перекиси водорода с 0,5% раствором моющего средства.

15. Отборщики обрабатывают обувь 6% раствором перекиси водорода с 0,5% раствором моющего средства и отправляются к месту стоянки транспорта, где снимают защитную одежду (маски, халаты, косынки) и помещают ее в клеенчатый мешок, обрабатывая руки в резиновых перчатках 6% раствором перекиси водорода с 0,5% моющего средства после каждой манипуляции. После снятия перчаток моют руки с мылом.

16. Пеналы оклеивают лейкопластырем, бур и лопатку помещают в чехол, выписывают направления.

Отобранные пробы почвы должны быть доставлены в лаборатории для исследования в течение 1-3 суток.

Примечание. В случае травмы с нарушением кожных покровов в процессе отбора проб почвы в очаге сибирской язвы необходимо промыть рану водой с мылом, обработать настойкой йода и наложить повязку. В дальнейшем предпринять меры по экстренной профилактике заболевания сибирской язвой.

При составлении "Рекомендаций" использованы:

1. Инструкция и методические указания по лабораторной и клинической диагностике, профилактике и лечению сибирской язвы у людей.

2. Организация мероприятий по профилактике сибирской язвы (методические рекомендации).

3. Методические указания по обнаружению возбудителя сибирской язвы в сырье животного происхождения и объектах внешней среды. Утв. Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 1.II # .79 г.

4. Инструкция о противоэпидемическом режиме работы с материалом, зараженным или подозрительным на зараженность возбудителями инфекционных заболеваний I-II групп.

5. Методические рекомендации по использованию актиномицетов-антагонистов для обеззараживания почв, загрязненных возбудителем сибирской язвы.

Зам. начальника Главного управления
карантинных инфекций Министерства
здравоохранения СССР

Откройте актуальную версию документа прямо сейчас или получите полный доступ к системе ГАРАНТ на 3 дня бесплатно!

Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.

Методические рекомендации по отбору проб почвы для бактериологического исследования на наличие возбудителя сибирской язвы и актиномицетов-антагонистов (утв. Министерством здравоохранения СССР 27 сентября 1984 г.)

Текст методических рекомендаций приводится по изданию Министерства здравоохранения СССР (Москва, 1984 г.)

Рекомендации разработаны сотрудниками Ростовского-на-Дону государственного научно-исследовательского противочумного института Т.Ф. Богдановой, Ю.Г. Киреевым, В.И. Прометным, М.С. Осиповой, Г.М. Поповым, А.И. Беспаловым

(утв. Министерством здравоохранения СССР 27 сентября 1984 г.)

Введение

Возбудитель сибирской язвы, попадая в почву, на протяжении многих десятилетий не только сохраняется, но и накапливается за счет многократных вегетаций и споруляций. При этом состояние инфицированности почвы представляет собой явление динамическое, подверженное изменчивости во времени количественном и качественном отношении под влиянием меняющихся условий окружающей среды. Наиболее благоприятными являются следующие физико-химические характеристики почв: температура не ниже 12-15°С, влажность в пределах 29-85%, рН - 5,3-7,3; наличие 1-14% гумуса, присутствие 14-38 мг фосфора 6-18 мг калия на 100 г почвы. В зависимости от перечисленных и целого ряда других факторов (антропогенное воздействие, наличие актиномицетов-антагонистов, влияние ризосферы высших растений) происходит накапливание возбудителя сибирской язвы в почве или сохранение единичных микробов с измененными культурально-морфологическими свойствами и сниженной вирулентностью.

Возбудитель сибирской язвы преимущественно находится в почве на глубине от 1,2 до 2 м, так как именно на этом уровне осуществлялось в прошлом захоронение трупов сибиреязвенных животных. В результате ливневых паводковых потоков, эрозионных процессов или антропогенного воздействия возможен вынос возбудителя в поверхностный слой почвы, составляющий до 40 см и наиболее опасный в эпизоотическом и эпидемическом отношении. Кроме того, поверхностное загрязнение почвы происходит при падеже и вынужденном убое сибиреязвенных животных.

Систематическое бактериологическое исследование почвы в местах падежа, вынужденного убоя или захоронения сибиреязвенных животных является важным моментом в системе противоэпидемических мероприятий и позволяет осуществлять оперативное слежение за состоянием очагов сибирской язвы.

До настоящего времени отсутствуют унифицированные подходы к отбору проб почвы и соблюдению противоэпидемического режима при работе на участках, зараженных возбудителем сибирской язвы.

В настоящих методических рекомендациях излагаются методика отбора проб почвы с применением бура Малькова модифицированного авторами, меры личной профилактики, способы обеззараживания инструментария и остатков проб почвы.

Методика отбора проб почвы для бактериологического исследования на наличие возбудителя сибирской язвы и актиномицетов-антагонистов

1. На территории очага выбирается участок размером от 8 до 16 м в зависимости от площади захоронения.

2. Намечаются 5 точек отбора проб почвы (4 точки по углам и одна в центре) при отборе проб почвы на глубину до 2 м или 6 точек (4 точки по углам и две в центре) при отборе проб на глубину до 1,6 м. При захоронении сибиреязвенных животных в траншеи отбор проб необходимо проводить в 5 или 6 точках (в зависимости от глубины отбора проб), расположенных по ходу траншеи.

3. Совком (ножом) производится расчистка намеченных точек отбора проб от мусора, листьев и травы.

4. Отбор проб почвы осуществляется при помощи модифицированного бура Малькова (приложение 2).

5. У места отбора проб почвы расстилается полиэтиленовая пленка размером не менее 100x100 см, над которой отобранная почва ссыпается в мешочки.

6. По эпидпоказаниям (при падеже или прирезке сибиреязвенного животного) определяется поверхностное загрязнение почвы возбудителем сибирской язвы путем отбора проб в каждой намеченной точке на глубине до 40 см. При этом количество проб составляет не более 20.

При динамическом наблюдении за очагом (в местах захоронения сибиреязвенных животных) отбор проб почвы производится на глубине 1,6-2 метров через каждые 10 см (рис.1).

7. Вес каждой пробы, взятой в одной точке отбора, должен быть равен 40-50 г (2 столовых ложки).

13. Пеналы с наружной стороны обрабатывают 6% раствором перекиси водорода с 0,5% раствором моющего средства.

16. Пеналы оклеивают лейкопластырем, бур и лопатку помещают в чехол, выписывают направления.

Отобранные пробы почвы должны быть доставлены в лаборатории для исследования в течение 1-3 суток.

Примечание. В случае травмы с нарушением кожных покровов в процессе отбора проб почвы в очаге сибирской язвы необходимо промыть рану водой с мылом, обработать настойкой йода и наложить повязку. В дальнейшем предпринять меры по экстренной профилактике заболевания сибирской язвой.

При составлении "Рекомендаций" использованы:

1. Инструкция и методические указания по лабораторной и клинической диагностике, профилактике и лечению сибирской язвы у людей.

Москва, 1980.

2. Организация мероприятий по профилактике сибирской язвы (методические рекомендации).

Кишинев, 1980.

5. Методические рекомендации по использованию актиномицетов-антагонистов для обеззараживания почв, загрязненных возбудителем сибирской язвы.

Киев, 1978.

Сибирская язва - особо опасная инфекционная болезнь животных и человека. Болезнь у животных протекает сверхостро, остро и подостро, а у свиней бессимптомно, в основном в локальной ангинозной форме. Болезнь у человека чаще всего проявляется как инфекция кожных покровов и лишь изредка осложняется сибиреязвенным сепсисом: вместе с тем может развиться и первичная генерализованная инфекция, проявляющаяся в легочной или кишечной форме.

Источник возбудителя инфекции - больное животное. Экскреты заболевших животных (кал, моча, кровянистые истечения из естественных отверстий) содержат бациллы, которые на воздухе превращаются в споры. Контаминированные сибиреязвенными спорами участки почвы и другие объекты внешней среды длительное время являются резервуарами и факторами передачи возбудителя инфекции.
Основной путь заражения животных - алиментарный - через корма и воду. Возможны также трансмиссивный и аспирационный пути заражения.
Заражение человека происходит при уходе за больными животными, в процессе их убоя, снятия шкур, разделки туш, кулинарной обработки мяса, уборки и уничтожения трупов, при хранении, транспортировке, первичной переработке и реализации контаминированного животного сырья. Возможно заражение человека при контакте с контаминированной почвой, а также аспирационным и трансмиссивным путями.

Порядок отбора проб для исключения сибирской язвы
При подозрении на сибирскую язву трупы животных не вскрывают. В лабораторию направляют ухо павшего животного со стороны, на которой лежит труп, предварительно перевязанное у основания шпагатом или другим материалом в двух местах и отрезанное между перевязками. Место разреза прижигают раскаленным металлическим предметом.
Если подозрение на сибирскую язву возникло в процессе вскрытия трупа или разделки туши, работу немедленно прекращают и направляют для исследования часть селезенки и пораженные лимфоузлы.
От трупов свиней для исследования берут участки отечной ткани, заглоточные или подчелюстные лимфоузлы.
Трупы мелких животных направляют в лабораторию целиком.
До получения результатов лабораторного исследования трупы, мясо или туши со всеми внутренними органами и шкурой оставляют на месте в условиях строгой изоляции.
Сроки исследования в ветеринарной лаборатории:
микроскопического - в день поступления материала,
бактериологического - до 3-х суток,
биологического - до 10 суток.
При получении положительных результатов микроскопического исследования биоматериала на сибирскую язву ветеринарная лаборатория немедленно дает предварительный ответ главному государственному ветеринарному инспектору АО (города) и владельцу животного.
Трупы животных, павших от сибирской язвы, а также все продукты убоя, полученные в случаях убоя больных сибирской язвой животных, сжигают; захоронение (зарывание) категорически запрещается.

Дезинфекция
Навоз, подстилку и остатки корма, загрязненные выделениями больных животных, сжигают. Навозную жижу в жижесборнике смешивают с сухой хлорной известью, содержащей не менее 25% активного хлора, из расчета 1 кг извести на каждые 20 л навозной жижи.
Для дезинфекции загрязненных возбудителем поверхностей применяют одно из следующих дезинфицирующих средств: 10%-ный горячий раствор едкого натра, 4%-ный раствор формальдегида, растворы хлорной извести, двутретиосновной соли гипохлорита кальция, нейтрального гипохлорита кальция, ДП-2, тексанита с содержанием 5% активного хлора, 10%- ный однохлористый йод (только для деревянных поверхностей), 7%-ный раствор перекиси водорода с добавлением 0,2% молочной кислоты и 0,2% ОП-7 или ОП-10, 2%-ный раствор глутарового альдегида.
Дезинфекцию указанными средствами (кроме однохлористого йода, перекиси водорода и глутарового альдегида) проводят трехкратно с интервалом в 1 ч. из расчета 1 л раствора на 1 кв. м в типовых помещениях и 2 л раствора на 1 кв. м в помещениях, приспособленных для содержания животных.
При применении однохлористого йода поверхность обрабатывают двукратно с интервалом 15-30 минут при норме расхода 1 л на 1 кв. м площади, а при использовании перекиси водорода и глутарового альдегида - двукратно, с интервалом в 1 ч. исходя из того же расчета.
После последнего нанесения раствора дезинфектанта помещение закрывают на 3 часа и затем проветривают. Кормушки и поилки обмывают водой.
Для дезинфекции поверхностей при низкой (минусовой) температуре применяют растворы хлорной извести, двутретиосновной соли гипохлорита кальция с содержанием 8% активного хлора, препарата ДП-2 и нейтрального гипохлорита кальция с содержанием 5% активного хлора. Указанные растворы готовят непосредственно перед применением на теплом (40-50 град. С) 15%-ном (при наружной температуре от 0 до минус 15 град. С) или 20%-ном (при температуре до минус 20 град. С) растворе поваренной соли.
Растворы наносят трехкратно с интервалом 1 ч при норме расхода 0,5-1 л на 1 кв. м. Для обеззараживания деревянных поверхностей применяют также 10%-ный раствор однохлористого йода - трехкратно с интервалом 15-25 минут по 0,3-0,4 л на 1 кв. м после предварительного увлажнения поверхностей 20%-ным раствором поваренной соли из расчета 0,5 л на 1 кв. м. Экспозиция во всех случаях - 12 часов после последнего нанесения дезраствора. По окончании экспозиции кормушки и поилки обмывают водой, помещение проветривают.
Почву на месте падежа, вынужденного убоя больного животного или вскрытия трупа животного, павшего от сибирской язвы, орошают раствором хлорной извести, содержащим 5% активного хлора, из расчета 10 л на 1 кв. м. После этого почву перекапывают на глубину 20-25 см, перемешивают с сухой хлорной известью, содержащей не менее 25-28% активного хлора, из расчета на 3 части почвы одну часть хлорной извести. После этого почву увлажняют водой.
Обеззараживание почвенных очагов сибирской язвы проводят бромистым метилом в соответствии с действующими инструкциями. После обеззараживания почвенный очаг считается ликвидированным и соответствующие ограничения снимаются.
Транспортные средства, использованные для перевозки больных сибирской язвой животных, продуктов их убоя или контаминированного сырья животного происхождения, обеззараживают в соответствии с действующей инструкцией "Проведение ветеринарной дезинфекции объектов животноводства".
Спецодежду, щетки, скребницы, ведра и другой мелкий инвентарь обеззараживают путем погружения на 4 часа в 1%-ный активированный раствор хлорамина, 4%-ный раствор формальдегида или кипятят в 2%-ном растворе кальцинированной соды не менее 90 мин.
Меховые изделия, кожаную, резиновую обувь и другие портящиеся при указанном выше методе дезинфекции вещи обеззараживают парами формальдегида в пароформалиновых камерах при расходе 250 мл формалина на 1 куб. м объема камеры, температуре 58-59 град. С и экспозиции 3 ч. Ценные меха обрабатывают в специальных герметических камерах бромистым метилом (в соответствии с инструкцией).

В лабораторию направляют ухо, отрезанное со стороны, на которой лежит труп животного, или мазок крови из надреза уха. Ухо туго перевязывают шпагатом у основания в двух местах и отрезают между перевязками. Место отреза на трупе прижигают. От трупов свиней направляют участки отечной ткани, заглоточные, подчелюстные и другие патологически измененные лимфоузлы. Если подозрение на сибирскую язву возникло при вскрытии трупа (кроме трупов свиней), на исследование направляют часть селезенки. Взятый патологический материал помещают в чистые пробирки или банки, а высушенные мазки - в чашки Петри, которые обертывают плотной бумагой. Мазки не фиксируют. Посуду с патологическим материалом упаковывают во влагонепроницаемую тару, опечатывают и отправляют в лабораторию с нарочным.

Сибирская язва: оздоровительные и профилактические мероприятия.

Очень важно полностью исключить доступ животных на учтенные инфицированные участки - места падежа животных от сибирской язвы и места захоронения трупов. Такие места необходимо огораживать, защищать посадкой колючих кустарников. Бактериологические исследования проб почвы позволяют контролировать эффективность ее санации. В известных неблагополучных по си-бирской язве пунктах и на угрожаемой территории обязателен контроль выполнения ветеринарно-санитарных требований при. проведении гидромелиоративных, строительных и других работ, связанных с выемкой и перемещением грунта. Потенциальная опасность заражения скота особенно велика при проведении таких работ вблизи животноводческих ферм и на пастбищах.

На всех территориях, где сохраняется опасность заражения, ежегодно проводят плановую профилактическую вакцинацию всех восприимчивых животных. Прививки рекомендуется проводить в период оптимального физиологического состояния поголовья. Так, весной вакцинацию начинают при восстановлении нормальной иимунореактивности животных, переведенных на пастбищное содержание. Затем, в течение всего пастбищного периода, необходимо ежемесячно проводить допрививку и ревакцинацию подрастающего молодняка. Осеннюю вакцинацию проводят до наступления холодов. Обязательно вакцинируют весь скот, поступивший из других хозяйств и закупленный у населения.

В случае вспышки сибирской язвы немедленно карантинируют соответствующий населенный пункт или хозяйство, ферму, участок пастбища, предприятие, перерабатывающее животное сырье. Запрещают ввод, вывод и перегруппировки животных, их убой на мясо, заготовку и вывоз продукции животноводства. Проводят клинический осмотр всего имеющегося поголовья, больных и подозрительных по заболеванию животных изолируют и немедленно начинают лечить. Всех подозреваемых в заражении клинически здоровых животных незамедлительно вакцинируют. Вылеченных животных иммунизируют через 14 дней после выздоровления.

Молоко от больных и подозрительных по заболеванию коров обеззараживают и уничтожают. Молоко от подозреваемых в заражении (клинически здоровых) коров допускают в пищу людям только после кипячения.

Трупы павших от сибирской язвы животных сжигают, их захоронение категорически запрещено. Места, где находились больные животные или лежали трупы, тщательно дезинфицируют, используя раствор хлорной извести, содержащий 5 % активного хлора, 4 %-ный раствор формальдегида, горячий (80 С) 10 %-ный раствор гидроокиси натрия, 10 %-ный раствор однохлористого йода. Для санации почвы используют сухую хлорную известь, газы бро-мистый метил или ОКЭБМ. Инфицированный навоз сжигают.

Карантин с неблагополучного пункта снимают через 15 дней с момента последнего случая падежа от сибирской язвы или выздоровления последнего больного животного.

При выявлении случаев сибирской язвы на мясокомбинатах или бойнях убой животных прекращают и проводят мероприятия, гарантирующие обеззараживание всех инфицированных объектов.

Все заготавливаемое кожевенное и меховое сырье небоенского происхождения должно быть исследовано (реакция преципитации) в ветеринарных лабораториях. При обнаружении инфицированного сырья на предприятиях по его заготовке и переработке работу этих предприятий немедленно останавливают и проводят дезинфекцию сырья и помещений.

Исследование на сибирскую язву включает микроскопию мазков из исходного материала, высевы на питательные среды, постановку тестов идентификации, метод флюоресцирующих антител, ПЦР (полимеразно-цепную реакцию), постановку биопробы и, при необходимости, реакции преципитации. У человека, кроме того, необходима постановка клинической кожно-аллергической пробы с сибиреязвенным аллергеном антраксином.

а) Взятие материала от животных. Для бактериологического исследования в лабораторию направляют ухо или мазок крови, полученный из надреза уха. Ухо отрезают с той стороны, на которой лежит труп. Предварительно его туго перевязывают шпагатом у основания в двух местах и отрезают между лигатурами. Место отреза уха на трупе прижигают. Отрезанное ухо заворачивают в пергаментную бумагу, смоченную в дезинфицирующем растворе. Если подозрение на сибирскую язву возникло при вскрытии трупа животного, вскрытие прекращают и на исследование направляют часть селезенки, от трупов свиней — участки отечной соединительной ткани, заглоточные, подчелюстные, а также другие лимфатические узлы.

б) Взятие материала от человека. Для бактериологического исследования забор материала у больных должен производиться по возможности до начала лечения. При кожной форме заболевания необходимо осторожно обработать спиртом кожу вокруг пораженного места и поверхность карбункула. Затем содержимое везикулы отсасывают стерильным шприцем, отделяемое язвы снимают с поверхности стерильным тампоном, смоченным физиологическим раствором, фрагменты отторгнутого струпа снимают влажным тампоном или пинцетом. При всех формах заболевания берут кровь в объеме 1-2 мл из вены. 1-2 капли крови непосредственно у постели больного засевают на питательные среды (агар и бульон Хоттингера, pH 7,2-7,5). При висцеральных формах сибирской язвы и менингите отбирают спинномозговую жидкость в количестве 0,5 мл в стерильную пробирку.

При подозрении на ингаляционное заражение исследуют также мазки из полости носа. Их берут сухими стерильными ватными тампонами на зондах. Тампон вводят легким движением по наружной стенке полости носа на глубину 2-3 см до нижней раковины. Затем его слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход под нижнюю раковину, делают вращательное движение и удаляют вдоль наружной стенки носа. После забора материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную одноразовую пробирку с физиологическим раствором. Погрузив рабочую часть зонда в физраствор, вращают зонд в течение 10-15 с, избегая разбрызгивания раствора. Вынимают зонд из раствора, прижимая его к стенке пробирки, и, отжав избыток жидкости, удаляют зонд и закрывают пробирку.

Для исследования методом ПЦР забор крови проводят натощак из локтевой вены одноразовой иглой (диаметр 0,8-1,1 мм) в одноразовый шприц объемом 5 мл или в стеклянную пробирку без антикоагулянта. При заборе в шприц кровь из него аккуратно (без образования пены) переносят в одноразовую стеклянную пробирку. Содержимое везикул, карбункулов в объеме 0,1-0,3 мл и фрагменты струпов массой 10,0-100,0 мг помещают в микропробирки с закручивающимися крышками или пробирки объемом 1,5 мл с защелкой, содержащие 0,1-0,2 мл транспортной среды. Спинномозговую жидкость после пункции одноразовой пункционной иглой отбирают в количестве 0,5 мл в стерильную пробирку типа Эппендорф с завинчивающейся крышкой или пробирку объемом 1,5 мл с защелкой.

Транспортирование материала для исследования методом ПЦР осуществляют в специальном термоконтейнере с охлаждающими элементами или в термосе со льдом при температуре 2-8°С в течение 6 ч (кровь — в течение 1 сут., плазму и сыворотку — в течение 3 сут.), в замороженном виде — в течение 1 сут. Недопустимо замораживание образцов цельной крови.

в) Взятие материала из сырья животного происхождения и из объектов внешней среды проводится в тех случаях, когда необходимо установить источник инфекции или фактор передачи для выявления обсемененности спорами возбудителя сибирской язвы отдельных объектов, а также в целях обнаружения микроба в местах старых скотомогильников при проведении строительных, мелиоративных, гидротехнических и других работ, связанных с выемкой и перемещением грунта.

г) Отбор проб шерсти. Для исследования шерсть отбирают из разных мест не менее 5 образцов массой около 2 г каждый (лучше брать пучки загрязненной шерсти). Если шерсть упакована в кипы, берут не менее 10 образцов из разных мест каждой кипы, а также скопившуюся внутри обшивки пыль. Образцы от одной кипы объединяют и упаковывают вместе.

д) Отбор проб кожи. Берут кусочки кожи размером 3x3 см с периферических участков шкурок. При наличии на внутренней стороне шкурки кровоподтеков или инфильтратов пробы берут и в этих местах.

е) Отбор проб почвы. Пробы почвы с мест вероятного обсеменения спорами возбудителя (мест вынужденного убоя скота, стоянок и водопоя животных) берут на глубине до 15 см, на территории скотомогильников — на глубине до 2 м при помощи почвенных буров.

ж) Смывы с объектов внешней среды. Смывы делают с мест наиболее вероятного обсеменения спорами возбудителя при помощи стерильного тампона, смоченного стерильной водой. Площадь смыва одним тампоном — около 100 см 2 . Тампоны затем помещают в пробирки, заливают стерильной водой (5 мл) и закрывают пробкой.

Отбор проб для исследования методом ПЦР осуществляется аналогично.

В сопроводительном документе к пробам указывают причину проведения исследования, какой материал и в каком количестве направляют, место и дату отбора материала; для проб шерсти и кормов дополнительно указывают происхождение, объем партии, вид упаковки и количество упаковочных единиц. К сопроводительному документу прилагают опись проб и место каждой пробы.

и) Подготовка проб к бактериологическому исследованию. Кусочки органов и тканей от трупов помещают в ступку, измельчают ножницами или пестиком, затем заливают 1-5 мл физиологического раствора, суспензию через марлевый тампон набирают в шприц или пастеровскую пипетку и переносят в пробирку или колбочку.

Воду с илистыми частицами фильтруют через 2 слоя марли, чистую воду исследуют без предварительной подготовки. С целью концентрирования микробов пробы воды можно профильтровать через мембранные фильтры (№3). Осадок с каждого фильтра соскабливают скальпелем, затем смывают 1-2 мл физиологического раствора и эту взвесь используют для исследования.

Тампоны, которыми делают смывы с объектов внешней среды, отжимают о стенки пробирки и удаляют, а оставшуюся жидкость подвергают исследованию.

Пробы почвы освобождают от корней, камешков и тщательно перемешивают. От каждой пробы берут 90-100 г почвы, помещают в колбу, заливают физиологическим раствором или дистиллированной водой из расчета получения 15-20 мл суспензии. Колбу закрывают, тщательно встряхивают в течение 25 мин, дают отстояться 1-2 мин и надосадочную жидкость переносят в пробирку для дальнейшего исследования. Пробы пищевых продуктов или кормов готовят аналогично.

Для проб из шкур кусочки массой 1 г помещают в фарфоровую ступку и заливают 1-2 мл физиологического раствора. Кусочки измельчают ножницами и оставляют при 20°С на 2-3 ч для размягчения материала. После этого пробы хорошо растирают пестиком в той же жидкости до получения волокнистой мезги, затем мезгу удаляют, предварительно отжав ее пестиком на внутренней боковой поверхности ступки.

От каждой пробы шерсти отбирают наиболее загрязненные части, измельчают ножницами, вместе с пылью помещают в колбу и заливают физиологическим раствором. Колбу закрывают, тщательно встряхивают в течение 10 мин, от грубых частиц можно освободиться путем фильтрации через 2-3 слоя марли.

Для избавления от посторонней микрофлоры пробы из объектов внешней среды, шерсти и кожи, пищевых продуктов подвергаются термической обработке на водяной бане при 80°С в течение 20 мин. Пробы от больного человека и животного из патологического материала, мяса животных и пр., где возбудитель сибирской язвы находится в вегетативной форме, не прогревают.

к) Предварительная обработка проб для исследования при помощи ПЦР. Для получения сыворотки пробирки с кровью отстаивают при комнатной температуре в течение 30 мин до полного образования сгустка. После этого сгусток обводят пастеровской пипеткой и оставляют при комнатной температуре до образования сыворотки. Затем сыворотку в объеме 1 мл переносят отдельными наконечниками с аэрозольным барьером или пастеровскими пипетками в стерильные пробирки объемом 1,5 мл. Сыворотка, содержимое везикул, отделяемое язв, фрагменты отторгнутого струпа, мазки из полости носа и спинномозговая жидкость не требуют предварительной обработки. Воду, смывы с объектов внешней среды, пробы почвы, пищевых продуктов или кормов, шкур, шерсти предварительно обрабатывают так же, как для бактериологического исследования, отбирая для исследования методом ПЦР 0,1-0,2 мл водной фазы образцов.

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 20.12.2019

Читайте также: