Определение токсигенности возбудителя дифтерии проводят в

Генетические структуры, управляющие синтезом дифтерийного токсина, функционируют независимо от всех органоидов, обеспечивающих жизнедеятельность микробов. В связи с этим коринебактерии могут терять ген tox, и, собственно, патогенные свойства. В лабораторных условиях доказана возможность конверсии нетоксигенных штаммов коринебактерии в токсигенные с помощью бактериофага, содержащего геном токсигенности. Этот феномен получил название лизогенной конверсии. Лизогенные штаммы возбудителей обладают теми же свойствами, что и циркулирующие в коллективах возбудители заболевания. Имеются данные, что в естественных условиях лизогенная конверсия коринебактерии происходит очень редко. Поэтому выделяемые от здоровых людей нетоксигенные штаммы дифтерийных палочек эпидемической опасности не представляют. Наряду с корйнебактериями дифтерии существует несколько видов микроорганизмов,имеющих сходные с ними морфологические и некоторые биохимические свойства. Это так называемые ложно-дифтерийные микробы (С. ulceran, Sf. С. pseudodiphteriticae (Hofmani), ulceran, Sf. С. pseudodiphteriticae (Hofmani), С. xeroxis)

108.Эпидемиология дифтерии.Источником инфекции при дифтерии являются люди - больные или здоровые носители токсигенных дифтерийных микробов. Наибольшую эпидемическую опасность представляют больные дифтерией зева, носа и гортани, активно выделяющие возбудителей заболевания во внешнюю среду с выдыхаемым воздухом. Незначительное в этом отношении значение играют больные дифтерией глаз, кожи, раны и других локализаций, способные распространять инфекцию контактным путем (через руки, предметы быта). Инфицирующая способность здоровых носителей токсигенных коринебактерий в десятки раз ниже, чем больных с поражением тканей органов респираторного тракта. Однако отсутствие у них каких-либо внешних признаков наличия носительства патогенных микробов не позволяет контролировать распространение ими инфекции и осуществлять в этих случаях противоэпидемические мероприятия. Здоровых носителей токсигенных дифтерийных палочек выявляют только в случаях массовых обследований организованных коллективов, осуществляемых по эпидемическим показаниям. В результате не менее 90% заболеваний дифтерией связаны с инфицированием от здоровых носителей коринебактерии. Различают 5 видов носительства возбудителей дифтерии: транзиторное (однократно выявляемое), кратковременное (продолжающееся до 2 нед), средней продолжительности (от 15 сут до 1 мес), затяжное (до 6 мес) и хроническое (более 6 мес). Восприимчивость людей к дифтерии определяется наличием антитоксического дифтерийного иммунитета. Содержание в крови 0,03 АЕ/мл специфических антител обеспечивает их защиту от заболевания. Однако оно не препятствует формированию носительства патогенных микробов.

Патогенез дифтерии.

Входными воротами возбудителей дифтерии могут быть практически все области покровов (кожи и слизистых) макроорганизма. Однако наиболее часто ими является слизистая оболочка ротоглотки, намного реже - гортани, носа, конъюнктив, половых органов, раневая поверхность, кожа и др. Токсигенные коринебактерии фиксируются на клетках тканей, размножаются и в процессе жизнедеятельности продуцируют экзотоксин, оказывающий местное и общее воздействие, обусловливающее практически все проявления патологического процесса. Микробные клетки за пределы тканей, являющихся воротами инфекции, как правило, не распространяются и непосредственного участия в поражении макроорганизма непринимают. Дифтерийный экзотоксин состоит из нескольких фракций, каждая из которых обладает самостоятельным биологическим действием. Одна из них - гиалуронидаза: разрушает гиалуроновую кислоту капилляр и повышает их проницаемость. Это ведет к выходу за пределы сосудов жидкой части крови, пропитыванию пораженных тканей плазмой, содержащей наряду с другими компонентами фибриноген. Вторая - некротоксин - вызывает некроз эпителия на месте ворот инфекции, сопровождающийся выделением из эпителиальных клеток тромбокиназы. Последняя способствует ревращению фибриногена в фибрин и образованию на поверхности пораженных тканей фибринной пленки. Небные миндалины, в отличие от других органов, покрыты многорядным эпителием. В результате образующаяся при дифтерии фибринная пленка проникает глубоко внутрь эпителиального покрова и плотно спаяна с тканями. Третья фракция дифтерийного токсина - истинный дифтерийный токсин (основной его компонент) способен вытеснять из клеточных структур цитохром Б и таким образом блокировать в них процессы клеточного дыхания и синтеза белковых молекул. Наиболее чувствительными к этим изменениям являются миокард, капилляры и нервные клетки. В кардиомиоцитах развиваются явления миокардиодистрофии с последующим их некрозом, миолизом и развитием инфекционно-токсического миокардита. Поражение капилляров при дифтерии сопровождается инфекционно- токсическим шоком. Повреждение нервных клеток сопровождается дистрофическими изменениями швановских клеток и демиэлинизацией нервных волокон. Наряду с отмеченным, общее действие дифтерийного токсина проявляется явлениями общей интоксикации.

Последнее изменение этой страницы: 2017-01-19; Нарушение авторского права страницы

151 . Заболевание дифтерией вызывает:

а) Corynebacterium diphtheriae нетоксигенный штамм

б) Corynebacterium diphtheriae токсигенный штамм (+)

в) Corynebacterium xerosis

г) Corynebacterium minutissimum

д) Mycobacterium bovis

152. Решающим для заключения о выделении возбудителя дифтерии является:

а) морфология клетки

б) ферментативная активность

в) подтверждение токсигенности в реакции преципитации (+)

15 3. Определение токсигенности коринебактерии проводится:

а) по внешнему виду подозрительных колоний

б) по биохимическим свойствам

в) по результатам пробы Пизу

г) по результатам реакции преципитации в геле (+)

д) по результатам пробы Заксе

15 4. Морфологические особенности коринебактерий позволяют:

а) установить видовую принадлежность

б) предположить род (+)

в) определить биовар

г) оценить токсигенность

155. Заключение по результатам бактериологического исследования на дифтерию отрицательное, если выделен:

а) атоксигенный штамм C . diphtheriae биовар mitis (+)

б) токсигенный штамм C . diphtheriae биовар mitis

в) токсигенный штамм C . diphtheriae биовар gravis

г) токсигенный штамм C . diphtheriae биовар intermedius

д ) токсигенный штамм C. diphtheriae

156. Заключение по результатам бактериологического исследования на дифтерию положительное, если выделен:

а) атоксигенный штамм C . diphtheriae тип gravis

б) токсигенный штамм C . diphtheriae тип mitis (+)

в) атоксигенный штамм С. ulcerans

д) атоксигенный штамм C . diphtheriae биовар mitis

г) атоксигенный штамм C . diphtheriae биовар intermedius

157. Температура хранения музейных культур коринебактерий (градусов Цельсия):

158. Какой тест является решающим в бактериологическом исследовании на дифтерию:

а) ферментация глюкозы

б) расщепление крахмала

в) определение токсигенности (+)

г) уреазная активность

159. Обязательными условиями при заборе материала на дифтерию являются:

а) своевременность взятия материала

б) отдельные тампоны для зева и носа

в) трехкратное исследование

г) взятие до начала антибиотикотерапии

в) все перечисленное (+)

160. Какой из представителей рода Corynebacterium ферментирует цистин:

б) C . diphtheriae (+)

г) C. minutissimum

161. В отличие от возбудителя дифтерии дифтероиды могут давать положительный тест на:

а) ферментацию глюкозы

д) ферментацию крахмала

162. В мазках возбудитель дифтерии имеет вид:

б) биполярных овоидных палочек

в) метахроматических полиморфных палочек (+)

д) изогнутых палочек правильной формы

163. К какой группе по типу дыхания принадлежит возбудитель дифтерии:

а) облигатный анаэроб

б) факультативный анаэроб (+)

г) облигатный аэроб

д) оксигенный фототроф

164. При отсутствии роста колоний на средах первичного посева при подозрении на дифтерию отрицательный ответ выдают через:

165. Кратность обследования больных с острыми воспалительными явлениями в носоглотке на дифтерию:

д) по желанию лечащего врача

166. Контингент лиц, обследуемых на дифтерию:

а) больные с воспалениями носоглотки

б) больные лакунарной ангиной с налётом на миндалинах

в) больные инфекционным мононуклеозом

г) больные некротической ангиной

д) всё перечисленное (+)

167. Для взятия материала на дифтерию используют:

б) тампоны, смоченные физ. раствором

в) тампоны, смоченные пептонной водой

д) все перечисленное

168. Забор материала на дифтерию производится:

в) через 10 мин после еды

г) через 30 мин после еды

д) независимо от приёма пищи

169. Забор материала при заболевании дифтерией производится:

а) из носовых ходов

в) с конъюнктивы

д) все перечисленное (+)

170. Средой для культивирования коринебактерий дифтерии является:

а) кровяной теллуритовый агар (+)

б) кровяной агар

в) среда Чистовича

д) среда Ресселя

171. Для возбудителя дифтерии характерно все, КРОМЕ:

а) грамположительные палочки

б) располагаются, в основном, под углом

в) содержат зерна волютина

г) не образуют споры

д) располагаются, в основном, частоколом (+)

173. Питательной средой для культивирования нейссерий является:

в) щелочной агар

г) сывороточный агар (+)

д) среда Клауберга II

174. Материалом для бактериологического исследования на менингит может служить:

а) мазок с миндалин

б) спинномозговая жидкость (+)

в) отделяемое из носа

г) соскоб с кожи

175. Препарат, который используется для подавления роста грамположительных кокков при культивировании менингококка:

б) теллурит калия

176. Забор материала на менингококк из зева производится:

а) через 30 мин после еды

в) через 10 мин после еды

д) независимо от приёма пищи

177. Дифференцированным методом окраски мазков для менингококка является:

а) окраска по Граму

б) окраска по Граму в модификации Калины (+)

в) окраска по Цилю-Нильсену

г) окраска по Бурри-Гинсу

д) окраска по Нейссеру

178. Забор носоглоточной слизи на менингококк следует производить:

в) с задней стенки глотки (+)

г) с полости рта

д) методом кашлевых пластинок

179. По морфологическим свойствам нейссерии являются:

а) грамположительными палочками

б) грамотрицательными диплококками (+)

180. Устойчивость менингококка к физическим и химическим факторам следующая:

а) устойчив к изменению температуры

б) устойчив к дезинфицирующим веществам

в) легко погибает при охлаждении и высыхании (+)

г) устойчив к высушиванию

д) устойчив к нагреванию и охлаждению

181. Оптимальный температурный диапазон роста менингококка составляет:

182. Универсальной средой для культивирования менингококков является:

а) питательный агар

б) “шоколадный” агар

в) питательный агар с 20% сыворотки (+)

183. Температурные условия транспортировки патологического материала при подозрении на менингококковую инфекцию:

б) комнатная температура

184. В состав среды Эндо входят следующие компоненты:

1. основной фуксин

3. тиосульфат натрия

4. сульфит натрия

7. соли желчных кислот

Выберите правильный набор компонентов:

185. Чашки Петри при сборе материала на коклюш методом “кашлевых” пластинок удерживаются от больного на расстоянии:

186. Какая питательная среда применяется для культивирования бордетелл:

а) кровяной агар

б) казеиново-угольный агар (+)

в) желточно-солевой агар

г) кровяной теллуритовый агар

д) молочно-солевой агар

187. Какое заболевание вызывает Bordetella pertussis :

18 8. Морфология возбудителя коклюша:

а) грамположительные палочки

б) грамотрицательные овоидные палочки (+)

в) грамотрицательные кокки

г) грамположительные кокки

189. Какое заболевание вызывает Bordetella parapertussis :

190. Как выглядят стафилококки в мазке:

а) грамотрицательные кокки в скоплениях

б) грамотрицательные кокки в цепочках

в) грамположительные кокки в скоплениях (+)

г) грамотрицательные диплококки

д) грамположительные кокки в цепочках

191. Какая из перечисленных сред является элективной для стафилококков:

а) Сывороточный агар

б) Желточно-солевой агар (+)

в) мясо-пептонный агар

г) кровяной агар

192. Для какого вида стафилококков характерно наличие плазмокоагулазы:

б ) s . epidermidis

в) s . saprophiticus

193. На какой среде определяют гемолитические свойства стафилококка:

а) кровяно-теллуритовом агаре

б) агаре с 5% крови (+)

в) шоколадном агаре

г) сывороточном агаре

д) желточно-солевом агаре

194. Морфология какого из перечисленных кокков представлена длинными цепочками:

195. Какой из перечисленных видов стафилококков чаще вызывает заболевание у людей:

б ) s . epidermidis

в) s . saproph y ticus

196. Отрицательный результат какого теста применяется для дифференциации стрептококков от стафилококка:

а) редукция метиленового синего в молоке

г) ферментация глюкозы

д) редукция нитратов

197. Укажите питательные среды, наиболее часто используемые для культивирования стафилококков:

а) кровяной агар, желточно-солевой агар (+)

б) сывороточный бульон, желчный бульон

в) кровяной агар, среда Эндо

г) сывороточный бульон, среда Клауберга

д) желточно-солевой агар, среда Блаурокка

198. Отличительными свойствами вида s . aureus являются положительные тесты:

а) маннит, лецитиназа, уреаза

б) маннит, уреаза, сахароза

в) лецитиназа, уреаза, сахароза

г) маннит, лецитиназа, плазмокоагулаза (+)

д) лецитиназа, плазмокоагулаза, сахароза

199. В микропрепарате из бульонной культуры клетки стрептококков имеют характерное расположение:

д) по четыре клетки

200. На каких плотных средах возможно получить рост стрептококков

б) среда Чистовича

г) среда Клауберга

201. Для выявления носительства стафилококка исследованию подлежат:

а) мокрота, кровь

б) слизь из носа, слизь из зева (+)

г) слизь из носа, ликвор

202. Для выделения пневмококка используют питательную среду:

а) желточно-солевой агар

б) кровяно-теллуритовый агар

д) молочно-солевой агар

203. Клетки пневмококков в микропрепарате представляют собой:

а) крупные кокки в триадах

б) мелкие кокки в цепочках

в) диплококки ланцетовидной формы (+)

г) диплококки бобовидной формы

д) мелкие кокки в гроздьевидных скоплениях

204. В микропрепарате клетки коринебактерий располагаются:

б) параллельно друг другу

в) под углом друг к другу (+)

20 5. Дифтерийный токсин блокирует:

а) дыхательный центр

б) синтез белка в клетке (+)

в) передачу нервных импульсов в синапсах

г) транспорт воды и ионов

20 6. Для коринебактерий дифтерии характерна:

а) продукция экзотоксина всеми штаммами

б) продукция экзотоксина некоторыми штаммами (+)

в) продукция эндотоксина всеми штаммами

г) продукция эндотоксина некоторыми штаммами

д) продукция экзотоксина и эндотоксина одновременно

207. Для возбудителя дифтерии не характерно морфологическое свойство:

б) однородная морфология (+)

в) взаиморасположение под углом друг к другу

г) биполярное окрашивание

208. Возбудитель дифтерии не обладает следующим свойством:

а) биполярное окрашивание

в) продукция цистиназы

г) продукция уреазы (+)

д) продукция экзотоксина

209. Для дифтерийных палочек характерно наличие:

г) зёрен волютина (+)

210. Для определения токсигенности возбудителя дифтерии используется:

Дифтерию вызывают токсигенные штаммы Corynebacterium diphtheriae или палочки Леффлера, не токсигенные штаммы заболевания не вызывают. Дифтерийный токсин по своим свойствам относится к сильнодействующим ядам, уступая лишь ботулитическому и столбнячному. Под воздействием токсина нарушается синтез белков во внутренних органах больного, что приводит к структурным и функциональным нарушениям, демиелинизация нервных волокон – к параличам и парезам. Способность к токсинообразованию проявляют лишь лизогенные штаммы C.diphtheriae, инфицированные бактериофагом (р-фаг), несущим ген tox, кодирующий структуру токсина дифтерии. Передача бактериофагом гена tox нетоксигенным штаммам C.diphtheriae, обитающим в носоглотке и накопление их в популяции, может сопровождаться развитием вспышки дифтерии.

Наиболее таксономически близкими к виду C.diphtheriae являются C.ulcerans и C.рseudotuberculosis, природные патогены крупного и мелкого рогатого скота, лошадей. Кроме того, на слизистой ротоглотки и носа часто встречается палочка Гофмана (C.pseudodiphtheriticum), не обладающая патогенностью и токсигенностью для человека. Поэтому основной задачей лабораторной диагностики дифтерии является выявление токсигенных штаммов дифтерии и дифференцировка возбудителя дифтерии от других коринебактерий, нормальных обитателей носо- и ротоглотки. Все микроорганизмы рода Corynebacterium – грамположительные полиморфные палочки, не образующие спор, хорошо растущие в аэробных условиях при 37°С. При окраске метиленовым синим в клетках C.diphtheriae отмечается внутриклеточная исчерченность, что объясняется наличием зерен волютина. Окраска по Граму не используется из-за вариабельности окрашивания клеток. По форме колоний и некоторым биохимическим свойствам C.diphtheriae подразделяются на культурально-биохимические варианты – gravis, mitis, intermedius, однако все они обладают способностью вырабатывать дифтерийный токсин. Тяжесть течения заболевания не связана с биохимическим вариантом C.diphtheriae. Токсигенные штаммы дифтерии более чувствительны к антибиотикам, чем не токсигенные.

Показания к обследованию

Профилактическое обследование – выявление источников инфекции, группы населения с повышенным риском заболевания; наблюдение за циркуляцией токсигенных штаммов в популяции; лица, поступающие в детские дома, школы интернаты, специализированные учреждения для детей и взрослых;
обследования по эпидемическим показаниям – лица с подтвержденным контактом с больным дифтерией или при эпидемии дифтерии в данной местности;
диагностические исследования – при подозрении на заболевание дифтерией (тонзиллит, назофарингит или ларингит который протекает с налетами псевдомембранозного характера).

Дифференциальная диагностика. Заболевания, сопровождающиеся тонзиллитом (инфекционный мононуклеоз, ангины стрептококковой, стафилококковой этиологии и др.).

При культуральных исследованиях возбудитель C.diphtheriae дифференцируется от других коринебактерий, в первую очередь C.pseudodiphtheriticum, C.ulcerans, C.pseudotuberculosis.

Материал для исследований

Мазок из ротоглотки и носа, при подозрении на дифтерию редких локализаций (глаз, рана, ухо и т.д.) – материал с пораженных участков, а также с миндалин и носа – культуральные исследования, обнаружение специфического фрагмента гена tox;
сыворотка крови – выявление АТ.

Этиологическая лабораторная диагностика включает посев клинического материала с изучением токсигенных свойств на среде для определения токсигенности и биохимической идентификацией возбудителя, обнаружение АГ (дифтерийного токсина), выявление специфических АТ к дифтерийному токсину, обнаружение специфического фрагмента гена tox.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики и особенности интерпретации их результатов. Микроскопические исследования выполняют только для идентификации выделенной культуры. Микроскопия биологического материала не проводится.

Для посева используют материал соответствующих локализаций. Изучение токсигенных свойств на среде для определения токсигенности выполняют при использовании метода встречной иммунодиффузии токсина и антитоксических АТ в плотной питательной среде. При отсутствии линий преципитации на среде для определения токсигенности через 48 ч инкубации культура признается не токсигенной. Для биохимической идентификации используется тест с цистиназой (среда Пизу), определение уреазной и сахаролитической (сахароза, глюкоза, крахмал) активности.

при обнаружении специфических линий преципитации на среде для определения токсигенности через 24–48 ч, положительной пробе на цистиназу, отрицательной пробе на уреазу, характерных культуральных и биохимических свойств дается заключение о выделении токсигенного штамма C.diphtheriae принадлежащего к культурально-биохимическому варианту gravis, mitis;
при отсутствии специфических линий преципитации на среде для определения токсигенности через 48 ч, положительной пробе на цистиназу, отрицательной пробе на уреазу, характерных культуральных и биохимических свойств дается заключение о выделении не токсигенного штамма C.diphtheriae принадлежащего к соответствующему культурально-биохимическому варианту;
при наличии линий преципитации на среде для определения токсигенности, идентичных линиям контрольного штамма дифтерии, положительных проб на цистиназу, уреазу, ферментации глюкозы и крахмала, отсутствие ферментации сахарозы, отсутствие редукции нитратов в нитриты, культуру относят к виду C.ulcerans, токсигенный вариант;
при выделении дифтероидов ответ выдается отрицательный.

При посеве возбудитель C.diphtheriae дифференцируется от других коринебактерий, в первую очередь C.pseudodiphtheriticum, C.ulcerans, C.pseudotuberculosis. Для выявления дифтерийного токсина используют методы РНГА или ИФА. Это исследование не является обязательным в практических бактериологических лабораториях, однако может использоваться как дополнительное для выдачи предварительного ответа. Метод также позволяет определить относительное (условное) количественное содержание токсина в исследуемой пробе.

Для выявления специфических АТ используют методы РПГА и РНГА. Метод РПГА используется для изучения напряженности противодифтерийного иммунитета. Условно-защитным титром АТ принят титр 1:20.

У больных определение титра АТ к АГ дифтерийной палочки в сыворотке крови методом РНГА проводится в двух пробах крови, собранных в начале заболевания и через 7–10 дней. Нарастание титра АТ в 3–4 раза во второй сыворотке относительно первой свидетельствует о перенесенной инфекции. Исследование используется преимущественно для ретроспективной диагностики дифтерии.

Обнаружение гена токсигенности (tox) методом ПЦР – наиболее быстрый и надежный метод лабораторной диагностики, однако он не дает информацию о способности микроорганизма к экспрессии дифтерийного токсина. Описаны случаи нетоксигенных штаммов дифтерии, несущих в себе

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

Возбудители дифтерии, коклюша, легионеллеза.

Э. Клебс (1883) обнаружил возбудитель в плёнках из ротоглотки, через год Ф. Лёффлер выделил его в чистой культуре. Спустя несколько лет был выделен специфический дифтерийный токсин (Э. Ру и А. Йерсен, 1888), обнаружен антитоксин в крови больного и получена антитоксическая противодифтерийная сыворотка (Э. Ру, Э. Беринг, Ш. Китазато, Я.Ю. Бардах, 1892-1894). Её применение позволило снизить летальность от дифтерии в 5-10 раз. Г. Рамон (1923) разработал противодифтерийный анатоксин. В результате проводимой иммунопрофилактики заболеваемость дифтерией резко снизилась; во многих странах она даже была ликвидирована.

Род Corynebacterium включает более 60 видов, большинство из которых являются условно-патогенными, обнаруживаемых на слизистых оболочках и кожных покровах.

Морфология и тинкториальные свойства. Дифтерийные бактерии — тонкие слегка изогнутые палочки длиной 3—5 мкм, шириной 0,3 мкм с характерным расположением в мазках: попарно, под углом друг к другу, напоминая цифру V. Концы палочек имеют булавовидные утолщения, содержащие зерна волютина (тельца Бабеша—Эрнста). Эти зерна, являющиеся запасными питательными веществами, служат одним из дифферен-щиально-диагностических признаков при идентификации дифтерийных палочек. Бактерии дифтерии грамположительны, неподвижны, не образуют спор, некоторые штаммы имеют микрокапсулу. Для возбудителя дифтерии характерен полиморфизм.Наряду с типичными формами дифтерийной палочки, можно обнаружить карликовые, кокковидные, толстые с колбовидным утолщением на концах, гигантские, клиновидные, нитевидные, ветвящиеся и другие формы. На поверхности дифтерийной палочки имеются фимбрии, облегчающие адгезию к эпителию слизистой оболочки.

Для окрашивания мазков дифтерийных бактерий применяют щелочной метиленовый синий Леффлера и окраску по методу Нейссера для выявления зерен волютина, которые приобретают синий цвет, выделяются на желтоватом фоне бактериальной клетки, по полюсам. Зерна волютина можно наблюдать и с помощью люминесцентной микроскопии.

Культивирование и ферментативные свойства. Дифтерийная палочка хорошо растёт при 36-37°С; оптимум рН 7,4-8,0. Коринебактерии являются факультативными анаэробами Питательные среды должны содержать аминокислоты, витамины, ионы металлов (Са2+, Mg2+ Fe2+ и др.), играющие роль ростовых факторов. На сывороточных средах (например, среде Лёффлера) дают рост уже через 10-12 ч; за это время контаминирующая микрофлора обычно не успевает развиться. Наибольшее распространение получили среды с теллуритом, так как возбудитель резистентен к высоким концентрациям теллурита калия или натрии, ингибирующим рост сопутствующей микрофлоры.

Культивирование на теллуритовых средах дает возможность обнаруживать и дифференцировать бактерии дифтерии по характеру роста: колонии типа gravis — серовато-черные, матовые с радиальной исчерченностью и неровными краями, типа mitis — черные, гладкие, выпуклые над поверхностью; бактерии типа intermedius образуют колонии мелкие, блестящие, черные с прозрачными краями. Деление дифтерийных бактерий па три типа (gravis — тяжелый, mitis — средний, intermedius — промежуточный) обусловлено культуральными и биохимическими особенностями возбудителя.

При идентификации возбудителя дифтерии определяют ферментативные свойства, позволяющие дифференцировать его от других коринебактерий.

Ферментативная активность микроорганизмов изучается путем определения ферментов цистиназы, уреазы, способности расщеплять до кислоты глюкозу, сахарозу, крахмал. В редких случаях, когда необходимо идентифицировать C.ulcerans, добавляется тест на восстановление нитратов в нитриты.

Таким образом, выделенный микроорганизм является возбудителем дифтерии, если он обладает токсигенными свойствами, определенным спектром ферментативной активности (расщепление глюкозы, крахмала, отсутствие разложения сахарозы, наличие фермента цистиназы, отсутствие фермента уреазы) и характерными морфолого - культуральными признаками (образование колоний черного или серого цвета на кровяно - теллуритовых средах, с учетом, при необходимости, морфологии клеток - полиморфные, не образующие спор палочки).

Антигенная структура и токсинообразование.По антигенной структуре дифтерийные бактерии неоднородны и делятся на 11 сероваров. Однако экзотоксин, продуцируемый дифтерийными палочками и являющийся основным фактором патогенности, антигенно тождествен у различных сероваров. Токсинообразование связано с состоянием лизогении, т. е. токсигенность присуща только штаммам, содержащим умеренный фаг, гены которого детерминируют способность клетки вырабатывать экзотоксин. Элиминация фага ведет к потере токсинообразования. В лабораторных условиях доказана возможность конверсии нетоксигенных штаммов коринебактерии в токсигенные с помощью бактериофага, содержащего геном токсигенности.

Резистентность. Коринебактерии дифтерии устойчивы к факторам окружающей среды, высыханию и могут долго сохранять жизнеспособность, например, на мягких игрушках — до 3 мес. Дезинфицирующие вещества (5% раствор карболовой кислоты, 1% раствор сулемы и др.) убивают коринебактерии дифтерии в течение 1—10 мин. Температура 60 °С приводит к их гибели в течение 10 мин, прямой солнечный свет — в течение нескольких часов.

Дифтерийные бактерии чувствительны к пенициллину, эритромицину, тетрациклину и другим антибиотикам.

Патогенность для животных. К дифтерийному экзотоксину чувствительны морские свинки. Токсигенность коринебактерии определяется внутрикожным методом, позволяющим на одной морской свинке изучить токсигенность нескольких штаммов. При подкожном введении дифтерийных бактерий свинка погибает на 2—5-й день. На вскрытии обнаруживаются резкое увеличение и гиперемия надпочечников — специфическое действие экзотоксина.

Патогенез и клиника. Входными воротами инфекции являются слизистые оболочки поверхности зева, дыхательных путей, носоглотки и носа; реже процесс локализуется на слизистых глаз, наружных половых органах у девочек, раневой поверхности кожи.

Размножение возбудителя происходит в области входных ворот. Токсигенные штаммы бактерий выделяют экзотоксин и ферменты, провоцируя формирование очага воспаления. Местное действие дифтерийного токсина выражается в коагуляционном некрозе эпителия, развитии гиперемии сосудов и стаза крови в капиллярах, повышении проницаемости сосудистых стенок. Экссудат, содержащий фибриноген, лейкоциты, макрофаги и нередко эритроциты, выходит за пределы сосудистого русла. На поверхности слизистой оболочки в результате контакта с тромбопластином некротизированной ткани фибриноген превращается в фибрин. Фибриновая плёнка прочно фиксируется на многослойном эпителии зева и глотки, но легко снимается со слизистой оболочки, покрытой однослойным эпителием, в гортани, трахее и бронхах. Вместе с тем при лёгком течении заболевания воспалительные изменения могут быть ограничены лишь простым катаральным процессом без формирования фибринозных налётов.

Нейраминидаза возбудителя значительно потенцирует действие экзотоксина. Основную его часть составляет гистотоксин, блокирующий синтез белка в клетках и инактивирующий фермент трансферазу, ответственную за образование полипептидной связи.

Дифтерийный экзотоксин распространяется по лимфатическим и кровеносным сосудам, обусловливая развитие интоксикации, регионарного лимфаденита и отёка окружающих тканей. В тяжёлых случаях отёк нёбного язычка, нёбных дужек и миндалин резко суживает вход в глотку, развивается отёк шейной клетчатки, степень которого соответствует тяжести болезни. Токсинемия приводит к развитию микроциркуляторных нарушений и воспалительно-дегенеративных процессов в различных органах и системах - сердечно-сосудистой и нервной системах, почках, надпочечниках. Связывание токсина со специфическими рецепторами клеток проходит в виде двух фаз - обратимой и необратимой.

В обратимую фазу клетки сохраняют свою жизнеспособность, а токсин может быть нейтрализован антитоксическими антителами.

В необратимую фазу антитела уже не могут нейтрализовать токсин и не препятствуют реализации его цитопатогенной активности.

В результате развиваются общетоксические реакции и явления сенсибилизации. В патогенезе поздних осложнений со стороны нервной системы определённую роль могут играть аутоиммунные механизмы.

Антитоксический иммунитет, развивающийся после перенесённой дифтерии, не всегда защищает от возможности повторного заболевания. Антитоксические антитела оказывают защитный эффект в титрах не менее 1:40.

Инкубационный период длится 2—7 дней. Заболевание различается по форме —

Иммунитет. После заболевания длительное время сохраняется антимикробный и антитоксический иммунитет. Грудные дети дифтерией не болеют, так как у них имеется пассивный иммунитет от матери. Наиболее восприимчивы дети в возрасте от 1 года до 5—6 лет. Для выявления антитоксического противодифтерийного иммунитета используется внутрикожная проба Шика. У детей, восприимчивых к дифтерии, на предплечье в месте введения малых доз дифтерийного токсина через 48 ч появляются покраснение и инфильтрат, что свидетельствует об отсутствии антитоксинов в крови.

Лабораторная диагностика.

· бактериологическое исследование материала из очага воспаления;

· исследование крови (серологический метод) на выявление специфических антител против возбудителя дифтерии. Обязательно определение специфических антител в процессе болезни с интервалом в 10-14 дней. Диагностическое значение имеет нарастание концентрации антител в 4 раза и более.

· Метод иммуноферментного анализа применяют для количественного и качественного определения специфических иммуноглобулинов различных классов.

Бактериологическое исследование проводят с целью лабораторной диагностики дифтерийной инфекции, выявления источников инфекции и наблюдения за распространенностью токсигенных коринебактерии дифтерии.

ВЗЯТИЕ И ДОСТАВКА МАТЕРИАЛА

1. Успех бактериологического исследования в значительной степени зависит от своевременного и правильного взятия материала.

2. Взятие материала должны производить специально обученные медицинские работники лечебно - профилактических учреждений.

3. При исследовании на дифтерию обследуют ротоглотку и нос. При дифтерии редких локализаций (глаз, ухо, рана, кожа, влагалище) помимо пораженных участков, следует брать материал также с миндалин и из носа.

4. Взятие материала осуществляют с помощью стерильных ватных сухих тампонов. Для их приготовления используют деревянные или металлические палочки, на один из концов которых плотно накручивается слой гигроскопической ваты.

5. Материал из ротоглотки и носа берут отдельными тампонами, натощак или не ранее, чем через два часа после еды, с использованием шпателя, не касаясь тампоном языка и внутренних поверхностей щек и зубов. Одним тампоном собирают материал с пораженных участков ротоглотки - миндалин. При наличии налетов, материал следует брать с границы пораженных и здоровых тканей, слегка нажимая на них тампоном. Для взятия материала из носа используют другой тампон, который вводят сначала в один, а потом в другой носовой ход, не касаясь крыльев носа снаружи.

6. При ларингоскопии материал (слизь, пленка) собирают непосредственно из гортани. Материал с пораженных участков кожи следует собирать сухим тампоном после удаления корочек или струпа.

7. Тампоны должны быть доставлены в лабораторию не позднее 3-х часов с момента взятия материала. При проведении обследования контингентов в отдаленных отбактериологических лабораторий районах, рекомендуется засевать материал на чашки с питательной средой или использовать транспортную среду.

Для бактериологического исследования берут материал из-под пленки, а если ее нет (или при обследовании на носительство) — слизь из зева и носа двумя тампонами раздельно. Предварительную бактериоскопию мазка с тампона проводят только по требованию лечащего врача. Посев делают на избирательные питательные среды параллельно: на свернутую сывороткуи среду Клауберга. Наличие роста и обнаружение при окраске по Леффлеру коринебактерий с характерной морфологией и расположением позволяют проводить дальнейшую идентификацию по биохимическим, антигенным свойствам и определению токсигенности. Последнее исследование имеет особенно важное значение при изучении культур, выделенных от бактерионосителей. Носители чаще всего выделяют нетоксигенные штаммы; заболевание же вызывают только токсигенные дифтерийные палочки.

Читайте также: