Окраска сибирской язвы по граму

"Хочешь быть здоровым? Будь им!" А.Г. Свияш

Сибирская язва

Сибирская язва (карбункул злокачественный, антракс) — особо опасная инфекционная болезнь сельскохозяйственных и диких животных всех видов, а также человека. Болезнь протекает сверхостро (у овец), остро, подостро и ангинозно (у свиней). Характеризуется интоксикацией, развитием серозно-геморрагического воспаления кожи, лимфатических узлов и внутренних органов,протекающая в кожной или септической форме (также у животных встречается кишечная и легочная форма).

Возбудитель сибирской язвы — бацилла антрацис (Bacillus anthracis). Она представляет собой крупную спорообразующую грамположительную палочку размером 5—10 х 1—1,5 мкм. Бациллы сибирской язвы хорошо растут на мясопептонных средах, содержат капсульный и соматический антигены и способны выделять экзотоксин, представляющий собой белковый комплекс, состоящий из вызывающего отёк — повышение концентрации цАМФ, протективного — взаимодействует с мембранами клеток, опосредует активность др. компонентов — и летального -цитотоксический эффект, отёк лёгких — компонентов. Капсула — антифагоцитарная активность.

Сибиреязвенная бактерия вне организма при доступе кислорода воздуха образует споры, вследствие чего обладает большой устойчивостью к высокой температуре, высушиванию и дезинфицирующим веществам. Споры могут сохраняться годами; пастбище, заражённое испражнениями и мочой больных животных, может долгие годы сохранять сибиреязвенные споры. Вегетативные формы сибиреязвенной палочки быстро погибают при кипячении и воздействии обычных дезинфектантов. При автоклавировании споры при температуре 110 °C гибнут лишь через 40 мин. Сухой жар при температуре 140 °C убивает споры через 2,5—3 ч. Прямые солнечные лучи споры сибирской язвы выдерживают в течение 10—15 суток. Спороцидным действием обладают также активированные растворы хлорамина, горячего формальдегида, перекиси водорода.

Эпидемиология

Источником инфекции являются больные сельскохозяйственные животные: крупный рогатый скот, лошади, ослы, овцы, козы, олени, верблюды, у которых болезнь протекает в генерализованной форме. Домашние животные — кошки, собаки — мало восприимчивы.

Сибирская язва у животных характеризуется следующими особенностями:
короткий инкубационный период, обычно не превышающий 3—4 дня;
выраженная клиника в виде тяжёлого лихорадочного состояния, упадка сердечно-сосудистой деятельности, менингеальных явлений, кровавого поноса и рвоты;
стремительное развитие инфекционного процесса, заканчивающегося гибелью животных в течение, как правило, первых 2—3 суток.

Крупный рогатый скот и лошади: как правило протекает остро и подостро. Характеризуется: (септическая форма) резким повышением температуры, апатией, снижением продуктивности, отеками головы, шеи и подгрудка. (кишечная форма) апатия, отказ от корма, кровавый понос и рвота, тимпания. Свиньи:(ангинозная форма) встречается только у свиней протекает бессимптомно изменения можно обнаружить только при ветеринарно-санитарной экспертизе туш по характерному катарально-геморрагическому воспалению лимфатических узлов.

Эпизоотии сибирской язвы территориально привязаны к почвенным очагам — хранилищам возбудителей. Первичные почвенные очаги образуются в результате непосредственного инфицирования почвы выделениями больных животных на пастбищах, в местах стойлового содержания животных, в местах захоронения трупов (скотомогильники) и т. п. Вторичные почвенные очаги возникают путем смыва и заноса спор на новые территории дождевыми, талыми и сточными водами. Заражение может произойти при участии большого числа факторов передачи.

К ним относятся: выделения и шкуры больных животных, их внутренние органы, мясные и другие пищевые продукты, почва, вода, воздух, предметы внешней среды, обсеменённые сибиреязвенными спорами. Восприимчивость к сибирской язве у человека не зависит от возрастных, половых и других физиологических особенностей организма; она связана с путями заражения и величиной инфицирующей дозы.

Патогенез

Воротами инфекции для сибирской язвы обычно является повреждённая кожа. В редких случаях бацилла внедряется через слизистые оболочки дыхательных путей и желудочно-кишечного тракта. На месте внедрения возбудителя в кожу возникает сибиреязвенный карбункул в виде очага серозно-геморрагического воспаления с некрозом, отёком прилегающих тканей и регионарным лимфаденитом. Местный патологический процесс обусловлен действием экзотоксина сибиреязвенной палочки, отдельные компоненты которого вызывают выраженные нарушения микроциркуляции, отёк тканей и коагуляционный некроз.

Вне зависимости от входных ворот инфекции первая стадия представляет собой локализованное поражение регионарных лимфатических узлов, вторая стадия — генерализацию процесса.

Генерализация инфекции с прорывом возбудителей сибирской язвы в кровь и развитием септической формы происходит при кожной форме сибирской язвы чрезвычайно редко.

Сибиреязвенный сепсис обычно развивается при внедрении возбудителя через слизистые оболочки дыхательных путей или желудочно-кишечного тракта. В этих случаях нарушение барьерной функции трахеобронхиальных или мезентериальных лимфатических узлов приводит к генерализации процесса. Бактериемия и токсинемия могут явиться причиной развития инфекционно-токсического шока.

В основе патогенеза лежит действие экзотоксина возбудителя, который состоит по крайней мере из трех компонентов, или факторов:
первого (I) эдематозного (воспалительного) фактора;
второго (II) протективного (защитного) фактора;
третьего (III) летального фактора. Добавление ко II фактору I фактора увеличивает иммуногенные свойства, а добавление III фактора — снижает их.

Смесь I и II факторов вызывает увеличение воспалительной реакции и отека за счет увеличения проницаемости капилляров. Смесь II и III факторов усиливает действие летального фактора и приводит к гибели морских свинок, крыс и мышей. Смесь трех факторов сибиреязвенного токсина (I, II, III) оказывает воспалительное (эдематозное) и летальное действие. Морфологической сущностью сибиреязвенного сепсиса является острое серозно-геморрагическое, геморрагическое и реже — фибринозно-геморрагическое воспаление.

Лейкоцитарная реакция в очагах воспаления при сепсисе выражена слабо или отсутствует. В органах иммуногенеза (селезенка, лимфоузлы, вилочковая железа) имеется подавление иммунной защиты организма с замещением лимфоидной ткани макрофагами и наличие примитивной защитной реакции в виде макрофагального незавершенного фагоцитоза возбудителя.

Клиническая картина

Продолжительность инкубационного периода колеблется от нескольких часов до дней, чаще всего составляет 2—3 дня. Заболевание может протекать в локализованной (кожной и висцеральной) или генерализованной (септической) форме.

Кожная форма сибирской язвы

Встречается в 98—99 % всех случаев сибирской язвы. Наиболее частой ее разновидностью является карбункулёзная форма, реже встречаются эдематозная, буллёзная и эризипелоидная формы заболевания. Поражаются преимущественно открытые части тела; особенно тяжело протекает болезнь при локализации карбункулов на голове, шее, слизистых оболочках рта и носа.

Клиника генерализации сибиреязвенной инфекции вне зависимости от формы — кожной или висцеральной, при крайнем многообразии проявлений в начальном периоде болезни в терминальной стадии однотипна: она сопровождается выходом в периферическую кровь сибиреязвенных микробов, концентрация которых достигает сотен тысяч и миллионов бактериальных клеток в 1 мм³ крови, что может рассматриваться как сибиреязвенный сепсис (см.), и представляет собой клинику токсическо-инфекционного шока: тяжелые нарушения свертывающей и антисвертывающей систем крови, ацидоз, острая почечная недостаточность, падение температуры тела ниже нормы, сильнейшая интоксикация.

Обычно карбункул бывает один, но иногда их количество доходит до 10—20 и более. На месте входных ворот инфекции последовательно развивается пятно, папула, везикула, язва. Безболезненное пятно красновато-синего цвета и диаметром 1—3 мм, имеющее сходство со следом от укуса насекомого, через несколько часов переходит в папулу медно-красного цвета. Нарастают зуд и ощущение жжения.

Через 12—24 ч папула превращается в пузырёк диаметром 2—3 мм, заполненный жидкостью, которая темнеет и становится кровянистой. При расчёсывании или самопроизвольно пузырёк лопается, и на его месте образуется язва с тёмно-коричневым дном, приподнятыми краями и серозно-геморрагическим отделяемым. Через сутки язва достигает 8—15 мм в диаметре. В результате некроза центральная часть язвы через 1—2 недели превращается в чёрный безболезненный плотный струп, вокруг которого выражен воспалительный валик красного цвета. Внешне струп напоминает уголёк в пламени, что и послужило поводом для названия этой болезни. Это поражение получило название карбункула.

Септическая форма сибирской язвы

Септическая форма встречается довольно редко. Заболевание начинается остро с потрясающего озноба и повышения температуры до 39—40 °C. Наблюдаются выраженные тахикардия, одышка, тахипноэ, боли в груди и кашель с выделением пенистой кровянистой мокроты. Определяются признаки пневмонии и выпотного плеврита. При развитии инфекционно-токсического шока возникает геморрагический отёк лёгких.

В крови и мокроте обнаруживают большое количество сибиреязвенных бактерий. У части больных появляются боли в животе, присоединяются тошнота, кровавая рвота, жидкий кровянистый стул. В последующем развивается парез кишечника, возможен перитонит. Обнаруживаются симптомы менингоэнцефалита. Инфекционно-токсический шок, отёк и набухание головного мозга, желудочно-кишечное кровотечение и перитонит могут явиться причиной летального исхода уже в первые дни заболевания.

Диагностика

Диагноз ставится на основе клинико-эпидемиологических и лабораторных данных. Лабораторная диагностика включает бактериоскопический и бактериологический методы, а в целях ранней диагностики — иммунофлюоресцентный. Применяют также аллергологическую диагностику сибирской язвы путем внутрикожной пробы с антраксином, дающей положительные результаты после 5-го дня болезни. Материалом для лабораторного исследования являются содержимое везикул и карбункулов, а также мокрота, кровь, испражнения и рвотные массы при септической форме. Сибирскую язву различают с сапом, банальными фурункулами и карбункулами, чумой, туляремией, рожей, пневмониями и сепсисом иной этиологии.

Лечение и профилактика

Этиотропную терапию сибирской язвы проводят антибиотиками. Назначают пенициллин. В патогенетической терапии используют коллоидные и кристаллоидные растворы, плазму, альбумин, глюкокортикостероиды. Хирургические вмешательства при кожной форме болезни недопустимы: они могут привести к генерализации инфекции.

Профилактические мероприятия осуществляют в тесном контакте с ветеринарной службой. Выявленных больных животных следует изолировать, а их трупы сжигать; инфицированные объекты необходимо обеззараживать. Для дезинфекции шерсти и меховых изделий применяется камерная дезинфекция. Лица, находившиеся в контакте с больными животными или заразным материалом, подлежат активному врачебному наблюдению в течение 2 недель. Важное значение имеет вакцинация людей и животных сухой живой сибиреязвенной вакциной. Одна из первых таких вакцин, вакцина Ланге, создана Иваном Николаевичем Ланге.

Прогноз

Прогноз во многом определяется формой заболевания, в целом является условно неблагоприятным и возможен летальный исход даже при адекватном и своевременном лечении.

При отсутствии соответствующего лечения кожной формы летальность 10—20 %. При легочной форме заболевания в зависимости от штамма возбудителя летальность может превышать 90—95 %, даже при соответствующем лечении. Кишечная форма — около 50 %. Сибиреязвенный менингит — 90 %.

"Мутагенные штаммы сибирской язвы, в последних модификациях, не проявляются внешне, их чрезвычайно сложно обнаружить, устойчивы к любым противовирусным препаратам и антибиотикам, устойчивы к высоким дозам радиации, и, в связи с этим развитие синтеза бактерии сибирской язвы является одним из наиболее успешных направлений в развитии бактериологического оружия"[источник не указан 57 дней]

Основным источником инфекции являются больные травоядные животные, от которых человек заражается при непосредственном контакте, алиментарным, аэрогенным или трансмиссивным путями. Чаще всего возникает кожная форма инфекции с образованием характерного сибиреязвенного карбункула в виде уголька (anthrax), реже – кишечная, легочная, септическая формы. Методы микробиологической диагностики сибирской язвы отражены в схеме 6.

Схема 6. Микробиологическая диагностика сибирской язвы

Материал: отделяемое карбункула или язвы, испражнения, моча, мокрота, кровь

Аллергодиагностика Постановка внутрикожной аллергической пробы с тулярином. Учет через 24-48 часов.

Выявление сибиреязвенного антигена Постановка реакции термопреципитации Асколи с преципитирующей противосибириязвенной сывороткой

Генодиагностика. ПЦР

Микроскопический метод.Мазки из исследуемого материала окрашивают по Граму, Романовскому-Гимзе, Ребитеру (капсула), а также люминесцирующей сибиреязвенной сывороткой. Обнаружение в препаратах окруженных капсулой крупных грамположительных ба­цилл в виде цепочек дает возмож­ность поставить предварительный диагноз сибирской язвы (рис.11 а). В качестве экспресс-метода диагностики применяется РИФ, с помощью которой выявляют характерные сибиреязвенные бациллы в виде палочек со светящимся жел­то-зеленым ободком (рис. 11 б.).

Капсулообразование можно выявить путем биопробы или при посевах в бульон Хоттингера, на специальную среду, содержащую раствор Хенкса и 40 % стерильной сыворотки крупного рогатого скота, МПА с 0,7 % бикарбоната натрия, среду Буза (3%голодный агар с 15% дефибринированной крови барана), а также в дефибринированную лошадиную кровь. Посевы выращивают в течение 18-24 часов при температуре 37 0 С в атмосфере 5-7% СО_2.

А б

Рис. 11. Возбудитель сибирской язвы(Bacillus anthracis). а - окраска по Граму, б – РИФ. х630

Рис. 12. Колония Bacillus anthracis. х56

Идентификацию выделен­ной культуры Bacillus anthracis (3-й день исследования) и ее дифференциацию от сходных непатогенных бацилл проводят путем посева уколом в желатину (разжижение в виде елочки, перевернутой вершиной вниз), изучения биохимических свойств, фаголизабельности и заражения животных. Определяют также чувствительность культуры к ан­тибиотикам.

Биологические свойства возбудителя сибирской язвы и сходных с ним бацилл отражены в табл. 7.

Наличие сибиреязвенного антигенав разложившемся трупе жи­вотного, коже (свежей, сухой, выделанной) и изделиях из нее, шкурках, мехе, шерсти определяют с помощью реакциитермо­преципитациипо Асколи.Исследуемый материал измельчают, за­ливают 10 —20-кратным объемом физиологического раствора, кипятят в течение 10-45 мин., после чего фильтруют. Полученный экстракт осторожно наслаивают на преципитирующую сибиреязвенную сыворотку в узкой преципитационной пробирке. На границе экстракта и преципитирующей сыворотки в течение 1- 5 мин в случае положительной реакции появляется кольцо белого цвета (преципитат). Контроли включают постановку реакций с заведомо положительной и отрицательной сывороткой, нормальной сывороткой и т.д.

Биопроба.Исследуемымматериалом подкожно заражают двух белых мышей., которые погибают через 24-48 ч после заражения. В мазках из внутренних органов и крови обнаружива­ют типичные капсульные бациллы. Проводится бактериологическое исследование трупа белой мыши с целью выделения чистой культуры сибиреязвенных бацилл.

Таблица 7. Дифференциально-диагностические признаки сибиреязвенной и других бацилл

Признак	Вид микроорганизмов
Bacillus anthracis	Bacillus cereus	Bacillus mycoides	Bacillus thuringiensis	Bacillus subtilis	Bacillus Megaterium
Капсула	+	-	-	-	-	-
Подвижность	-	+	-	+	+	+
Гемолиз	-	+	-	+	-	+
Рост в анаэробных условиях	+	+	+	+	-	-
Лецитиназа	+	+	+	+	-	-
Аргининдегидролаза	-	V	V	+	-	-
Нитpaтpeдyктaзa	+	+	+	+	+	-
Патогенность для мышей	+	-	-	-	-	-
Ферментация до кислоты:
глицерина	-	V	+	+	+	+
маннита	-	-	-	-	+	+
салицина	-	V	+	+	+	+

Серологический методвыполняетсяв тех случаях, когда не удается обнаружить возбудителя в материале. Для определения антител в сыворотке крови больного использу­ют реакции латекс-агглютинации и РНГА с протективным сибиреязвенным антигеном.

Аллергический метод – постановка внутрикожной аллергической пробы с аллергеном сибиреязвенной бациллы - антраксином. Результаты учитывают через 24 ч. Пробу считают положительной при наличии гиперемии и инфильтрата диаметром более 15 мм.

У павшего животного при подозрении сибирской язвы также берут пробу крови. Если количества крови недостаточно, то проводят следующие манипуляции. Ухо со стороны, на которой лежал труп, перевязывают шпагатом в двух местах, ближе к основанию и отсекают между перевязкой. Места разреза прижигают калёным железом. Затем отрезанное ухо помещают в герметичный пакет и в термос. Вскрытие трупа недопустимо ! Если вскрытие сделано, то с предосторожностью отбирают лимфатические узлы, кусочки селезёнки и печени, помещают в двойные герметичные полиэтиленовые пакеты и в термос. От свиней пробы крови не берут. В качестве патологического материала используют кусочки воспалённой ткани в области отёка и заглоточные лимфатические узлы.

Для исследования кожевенного сырья от каждой кожи отрезают участок величиной 3х3 см и надевают на бечёвку, маркируют и обеззараживают в камере Крупина при 0,7 атм. в течение 1 часа 45 минут.

5.2. Лабораторные исследования

В ве­те­ри­нар­ных ла­бо­ра­то­ри­ях в за­ви­си­мо­сти от их ос­на­ще­ния мо­гут быть про­ве­де­ны сле­дую­щие ис­сле­до­ва­ния: мик­ро­ско­пия маз­ков, бак­те­рио­ло­ги­че­ские ис­сле­до­ва­ния с це­лью вы­де­ле­ния чис­той куль­ту­ры и изу­че­ния их свойств, иден­ти­фи­ка­ция вы­де­лен­ной куль­ту­ры, био­про­ба на ла­бо­ра­тор­ных жи­вот­ных, се­ро­ло­ги­че­ские ис­сле­до­ва­ния.

5.2.1. Мик­роскопические ис­сле­до­ва­ния. Из дос­тав­лен­но­го па­то­ло­ги­че­ско­го ма­те­риа­ла де­ла­ют маз­ки, фик­си­ру­ют эти­ло­вым спир­том с до­бав­ле­ни­ем 3% пе­ре­ки­си во­до­ро­да, ок­ра­ши­ва­ют по Гра­му и на кап­су­лу - по Ми­хи­ну, Ре­би­ге­ру, Оль­ту или Ро­ма­нов­ско­му-Гим­за; при на­ли­чии лю­ми­нес­цент­ных сы­во­ро­ток ис­поль­зу­ют ме­тод флюо­рес­ци­рую­щих ан­ти­тел.

В мас­ках, ок­ра­шен­ных по Грам­у, Bac. anthracis - грам­по­ло­жи­тель­ная па­лоч­ка (пря­мая). Па­лоч­ки рас­по­ла­га­ют­ся ко­рот­ки­ми це­поч­ка­ми или по­пар­но, кон­цы их, об­ра­щен­ные друг к дру­гу, рез­ко об­руб­ле­ны, сво­бод­ные кон­цы обыч­но за­круг­ле­ны. В от­дель­ных слу­ча­ях (ча­ще в маз­ках от сви­ней) фор­ма мик­ро­бов си­бир­ской яз­вы мо­жет быть не­ха­рак­тер­ной (ко­рот­кие тол­стые или изо­гну­тые, ино­гда зер­ни­стые па­лоч­ки со взду­ти­ем по­се­ре­ди­не или на кон­це, воз­мож­но на­ли­чие "те­ней" мик­ро­бов).

В ок­ра­ше­нных спе­ци­аль­ны­ми ме­то­да­ми маз­ках из па­то­ло­ги­че­ско­го ма­те­риа­ла и сре­ды ГКИ си­би­ре­яз­вен­ные па­лоч­ки ок­ру­же­ны кап­су­лой.

В фик­си­ро­ван­ных пре­па­ра­тах кап­су­лы ба­цилл хо­ро­шо ок­ра­ши­ва­ют­ся все­ми спо­со­ба­ми: Ми­хи­на, Ре­би­ге­ра, Оль­та, Ро­ма­нов­ско­го-Гим­зы, Бур­це­ва, Ио­не, Ка­уф­ма­на.

Окраска по Михину. Мазок окрашивают леффлеровской метиленовой синью в течение 2-3 минут, при этом его подогревают до появления паров. Краску быстро смывают водой, а мазок высушивают фильтровальной бумагой. Бациллы - тёмно-синие, капсулы- светло-розовые.

Окраска по Ребигеру. 15-20 г генцианвиолета растворяют в 100-150 мл 40% формалина, тщательно и многократно взбалтывают и дают отстоятся несколько часов, затем фильтруют. Полученным раствором окрашивают нефиксированные мазки. Бациллы -тёмно-фиолетовые, капсулы фиолетово-розового цвета.

Окраска по Ольту. В 100 мл кипящей дистиллированной воды растворяют 3 г сафранина, после охлаждения фильтруют. Красят 1-2 мин. Бациллы - красные, капсулы - жёлтые.

Окраска по Романовскому-Гимзе. На фиксированный мазок наносят краску, выдерживают в течение 15-20 минут и быстро смывают. Бациллы тёмно-синие, капсула розовая или бледно-розовая.

По ре­зуль­та­там мик­ро­ско­пи­че­ско­го ис­сле­до­ва­ния не­мед­лен­но да­ют пред­ва­ри­тель­ный от­вет. В слу­чае об­на­ру­же­ния кап­суль­ных форм ба­цилл ди­аг­ноз на си­бир­скую яз­ву счи­та­ют ус­та­нов­ле­нным и даль­ней­шие ис­сле­до­ва­ния про­дол­жа­ют в со­от­вет­ст­вии с ин­ст­рук­ци­ей.

5.2.2. По­сев на пи­та­тель­ные сре­ды. По­се­вы из ис­ход­но­го па­то­ло­ги­че­ско­го ма­те­риа­ла де­ла­ют в МПБ и на МПА или в буль­он и на агар Хот­тин­ге­ра (рН 7,4). Од­но­вре­мен­но мож­но де­лать по­се­вы на диф­фе­рен­ци­аль­но-ди­аг­но­сти­че­скую сре­ду с 0,01 % фе­нол­фта­ле­ин­фос­фа­та на­трия, а так­же на же­ла­тин, кро­вя­ной буль­он и агар, сре­ду ГКИ (60 % сте­риль­но­го рас­тво­ра Хен­кса без ан­ти­био­ти­ков и 40 % сте­риль­ной не­кон­сер­ви­ро­ван­ной сы­во­рот­ки круп­но­го ро­га­то­го ско­та, инак­ти­ви­ро­ван­ной при 56-58 0 С в те­че­нии 30 мин, рН 7,2-7,4).

По­се­вы ин­ку­би­ру­ют 18-24 ч при тем­пе­ра­ту­ре 37-38 (С и при от­сут­ст­вии рос­та вы­дер­жи­ва­ют при той же тем­пе­ра­ту­ре еще 48 часов.

5.2.3.Био­ло­ги­че­ская проба. Ис­сле­дуе­мый па­то­ло­ги­че­ский ма­те­ри­ал (в день по­сту­п­ле­ния) сус­пен­ди­ру­ют в не­боль­шом объ­е­ме 0,9%-но­го рас­тво­ра на­трия хло­ри­да, вво­дят двум бе­лым мы­шам в до­зе 0,2-0,5 мл под ко­жу спи­ны бли­же к кор­ню хво­ста или 0,5-1 мл двум мор­ским свин­кам под­кож­но в об­лас­ти жи­во­та. Ги­бель жи­вот­ных на­сту­па­ет че­рез 1-3 сут, ино­гда поз­же.

5.2.4. Ок­ра­ска си­би­ре­яз­вен­ных спор. Для этой це­ли ис­поль­зу­ют ме­то­ды: Ау­е­ски, Зла­то­го­ро­ва, Дор­не­ра, Пеш­ко­ва, Мюл­ле­ра, Тру­хи­льо, Клей­на, Шеф­фе­ра, Фул­то­на и др. Луч­ше ок­ра­ши­ва­ют­ся спо­ры ме­то­дом Ау­е­ски и осо­бен­но Тру­хи­льо.

5.2.5. Реакция преципитации по Асколи.

Реакцию ставят в уленгутовской пробирке. Для этого в уленгутовскую пробирку вносят 0,2-0,3 мл прозрачной преципитирующей сибиреязвенной сыворотки и затем осторожно наносят равное количество экстракта проб специально подготовленного (горячий или холодный способ) патологического материала. При положительной реакции через 10-12 минут на границе соединения компонентов обнаруживают характерный серовато-белый диск (преципитирующее кольцо).

5.2.6. Иден­ти­фи­ка­ция воз­бу­ди­те­ля си­бир­ской яз­вы.

Применительно к возбудителю сибирской язвы имеется большая группа микробов-сапрофитов, близкородственных Bac.anthracis по основным культурально-морфологическим и биохимическим свойствам (Bac. anthracoides, Bac.pseudoanthracis, Bac. cereus, Bac. mesentericus, Bac.megaterium, Bac. subtilis, Bac. mycoides).

Идентификацию про­во­дят по сле­дую­щим при­зна­кам: мор­фо­ло­гия мик­ро­ба, вклю­чая на­ли­чие кап­сул в маз­ках из ис­ход­но­го па­то­ло­ги­че­ско­го ма­те­риа­ла или ор­га­нов пав­ших под­опыт­ных жи­вот­ных (сапрофиты капсул не имеют); куль­ту­раль­ные свой­ст­ва; па­то­ген­ность для ла­бо­ра­тор­ных жи­вот­ных (ги­бель хо­тя бы од­но­го из двух ла­бо­ра­тор­ных жи­вот­ных, за­ра­жен­ных сус­пен­зи­ей из ис­ход­но­го па­то­ло­ги­че­ско­го ма­те­риа­ла или по­лу­чен­ной куль­ту­рой воз­бу­ди­те­ля, с по­сле­дую­щим вы­де­ле­ни­ем ее из ор­га­нов мы­ши или мор­ской свин­ки. Сапрофиты непатогенны для морских свинок и кроликов)

При на­ли­чии в маз­ках ха­рак­тер­ных мор­фо­ло­ги­че­ских и куль­ту­раль­ных свойств и кап­сул из ис­ход­но­го па­то­ло­ги­че­ско­го ма­те­риа­ла даль­ней­шее изу­че­ние куль­ту­ры не про­во­дят. В слу­чае по­лу­че­ния не­чет­ких ре­зуль­та­тов по од­но­му из пер­вых двух свойств, не до­жи­да­ясь ре­зуль­та­тов био­про­бы, оп­ре­де­ля­ют чув­ст­ви­тель­ность куль­ту­ры к си­би­ре­яз­вен­ным бак­те­рио­фа­гам и пе­ни­цил­ли­ну.

Про­ба бак­те­рио­фа­гом ос­но­ва­на на использовании сибиреязвенных бактериофагов (вирусов сибиреязвенных бацилл), которые при взаи­мо­дей­ст­вии с си­би­ре­яз­ве­ной куль­ту­рой вызывают её разрушение (ли­зис). Сибиреязвенные бактериофаги не лизируют сапрофитные бациллы. Ре­ак­ция вы­со­ко­спе­ци­фич­на и при­ме­ня­ют её для иден­ти­фи­ка­ции воз­бу­ди­те­ля си­бир­ской яз­вы и диф­фе­рен­циа­ции его сапрофитных бацилл.

Тест "жем­чуж­но­го оже­ре­лья.

Сибиреязвенные бациллы при посева на мясо-пептонный агар с пенициллином имеют вид жемчужного ожерелья. Спорообразующие сапрофитные аэробные микробы в аналогичных условиях вырастают в виде обычных форм.

Вы­де­лен­ную куль­ту­ру от­но­сят к Bac. anthracis при на­ли­чии кап­сул в маз­ках из ис­ход­но­го па­то­ло­ги­че­ско­го ма­те­риа­ла или ор­га­нов пав­ше­го за­ра­жен­но­го жи­вот­но­го и дру­гих ха­рак­тер­ных мор­фо­ло­ги­че­ских и куль­ту­раль­ных свойств воз­бу­ди­те­ля: при от­сут­ст­вии кап­сул, но на­ли­чии дру­гих харак­тер­ных мор­фоло­ги­че­ских и куль­ту­раль­ных свойств воз­бу­ди­те­ля, чув­ст­ви­тель­ность его к си­би­ре­яз­вен­но­му фа­гу и пе­ни­цил­ли­ну.

5.2.7. Постановка диагноза.

Ди­аг­ноз на си­бир­скую яз­ву у жи­вот­но­го счи­та­ют ус­та­нов­ленным в од­ном из сле­дую­щих слу­ча­ев:

- об­на­ру­же­ние кап­суль­ных форм Bac. anthracis в па­то­ло­ги­че­ском ма­те­риа­ле;

- ги­бель хо­тя бы од­но­го ла­бо­ра­тор­но­го жи­вот­но­го из двух, за­ра­жен­ных сус­пе­зи­ей из ис­ход­но­го па­то­ло­ги­че­ско­го ма­те­риа­ла, с по­сле­дую­щим вы­де­ле­ни­ем из его ор­га­нов куль­ту­ры Bac. anthracis да­же при от­сут­ст­вии рос­та куль­ту­ры воз­бу­ди­те­ля из па­то­ло­ги­че­ско­го ма­те­риа­ла;

168.Bacillus anthracis: мазок из культуры (окраска по Граму).

Сибирская язва встречается повсеместно, чаще в районах, где много зараженных животных. Возбудитель сибирской язвы в присутствии кислорода образует споры, обладающие высокой устойчивостью. Тропический климат способствует быстрому спорообразованию, что приводит к значительному обсеменению почвы. В этих условиях главный источник инфекции – зараженные пастбища, где споры сохраняют жизнеспособность многие годы. В странах с умеренным климатом споры образуются медленнее, а вегетативные формы легко уничтожаются другими бактериями почвы. Здесь зараженность пастбищ невысока, инфекция обычно передается через продукты животноводства, ввозимые из-за границы (шерсть, шкуры и костная мука). Наиболее восприимчивы к сибирской язве овцы, козы, крупный рогатый скот и лошади. Не зарегистрировано случаев передачи инфекции от человека к человеку.

Bacillus anthracis – неподвижная грамположительная спорообразующая палочка длиной 4—10 мкм; это одна из наиболее крупных патогенных бактерий. В мазках из тканей бактерии заключены в капсулу и располагаются короткими цепочками; при культивировании на средах Bacillus anthracis теряют капсулу и выстраиваются в длинные цепочки (снимок). В присутствии кислорода они образуют овальные споры, окруженные двойной оболочкой. Bacillus anthracis – единственный патогенный вид среди распространенных повсеместно бактерий рода Bacillus.

169.Bacillus anthracis в капиллярах легкого (окраска по Граму; х 880).

Легочная форма сибирской язвы у человека встречается редко. Заражение происходит при вдыхании частиц меха или шерсти, обсемененных спорами. Болезнь начинается и протекает остро: возникают кровохарканье и острые дыхательные нарушения, приводящие к смерти в течение 2-3 дней.
На аутопсии выявляют отек легких и распространенную геморрагическую бронхопневмонию. В препарате, окрашенном по Граму (снимок), видно большое количество крупных палочек темно-синего цвета.

170.Кожная форма сибирской язвы (ранняя стадия): сибиреязвенная пустула.

Кожная форма возникает у 98% больных сибирской язвой. Поражаются преимущественно открытые части тела. Человек может заразиться непосредственно от животного, но чаще — через продукты животноводства (шкуры, шерсть, мех, костную муку и т. д.).
Сибирская язва – профессиональное заболевание грузчиков: возбудитель проникает в кожу при трении зараженной шкуры о шею. В месте внедрения образуется зудящая папула; через 1—2 дня вокруг нее появляются везикулы с кровянистым содержимым. Возникающий вокруг первичного очага отек (характерный признак сибирской язвы) может захватывать обширные участки подкожной клетчатки. Кожа сохраняет обычную окраску либо становится ярко-красной. В крови при посеве можно обнаружить Bacillus anthracis.

171.Сибиреязвенный карбункул на шее.

С течением времени папула превращается в везикулу, вскрывается и подсыхает с образованием толстого черного струпа. Позже струп захватывает везикулы, окружающие папулу. Струп плотно спаян с подлежащими тканями и постепенно отторгается в течение 2—3 недель, оставляя глубокую язву, которая медленно заполняется грануляционной тканью и рубцуется. Сибиреязвенные карбункулы безболезненны, нагнаиваются редко (только в случае присоединения вторичной инфекции).
В центре зоны некроза содержится большое количество возбудителей. Капсула бактерий и образуемый ими экзотоксин препятствуют ф-гоцитозу. Бактериемия может развиться независимо от локализации первичного очага.

172.Сибиреязвенный карбункул на предплечье.
Подобная локализация процесса встречается у мясников, заразившихся при разделке туш, и садовников, использовавших зараженную костную муку. Отек бывает незначительным. Как видно на снимке, струп начинает отторгаться.

173.Сибиреязвенный карбункул на спине.
Поражения ног и туловища встречаются в 1,9% случаев сибирской язвы. Эта женщина работала на фабрике, выпускающей малярные кисти. Болезнь началась с легкого недомогания, в области левой лопатки появилась папула, окруженная везикулами. К моменту, когда был сделан снимок, везикулы уже вскрылись, а на их месте образовался струп, плотно спаянный с подлежащими тканями.