Методика бактериологического исследования кормов на пастереллез

1.1. Бактериологическое исследование кормов на обнаружение энтерококков проводят для уточнения этиологии желудочно-кишечных заболеваний сельскохозяйственных животных и птицы (молодняка).

1.2. Метод основан на двухэтапном посеве на ингибирующие среды, подавляющие рост грамотрицательных и частично грамположительных микробов.

1.3. Пробы корма отбираются согласно общепринятым методам.

2.1. В колбу с 450 мл стерильного физиологического раствора помещают 50 г корма (разведение 1:10), тщательно встряхивают на шуттель-аппарате 30 минут. Из полученной взвеси готовят последовательные разведения 1:100, 1:1000, 1:10000. Из каждого разведения вносят по 1 мл в пробирки с щелочно-полимиксиновой средой (приложение 1). Посевы инкубируют в термостате при 37° в течение 16 - 24 часов.

2.2. Из пробирок с измененным цветом среды в зеленый или желтый делают посев на плотную молочно-ингибиторную среду МИС (приложение 1) в бактериологических чашках. Посевы инкубируют в термостате при 37° в течение 24 - 48 часов.

2.3. Через 24 - 48 часов изучают рост колоний на среде МИС, идентифицируя разные виды и варианты энтерококков: Str. faecalis и его варианты образуют на молочно-ингибиторной среде круглые, выпуклые, с ровными краями, черные, с металлическим блеском колонии. Str. faecalis var. liquefaciens имеет способность кроме того образовывать вокруг колоний зону просветления с ободком помутнения по ее периферии. Str. faecium на среде МИС растет в виде мелких, сероватых, иногда почти бесцветных колоний.

2.4. У выделенных культур со среды МИС определяют морфологические и культурально-биохимичеcкие свойства согласно (таблица 1) основных дифференциальных признаков энтерококков и сходных с ними микроорганизмов.

2.5. Патогенные свойства энтерококков определяют биологической пробой на белах мышах. Для этого заражают внутрибрюшинно трех мышей массой 18 - 20 г в дозе 0,5 см 3 суспензией суточной культуры со скошенного МПА, с концентрацией бактерий, соответствующей 5 ЕД по оптическому стандарту мутности. Для смыва культур с МПА и получения суспензии необходимой концентрации используют физиологический раствор. Патогенные культуры обычно вызывают гибель одной или более мышей в первые 3-е суток после заражения. Наблюдение за подопытными животными ведут в течение 5 суток.

3.1. Корма, в которых обнаружены патогенные энтерококки, запрещается использовать без термической обработки. Их подвергают проварке при температуре не ниже 100° в течение 1 часа в соответствии с действующими Правилами бактериологического исследования кормов.

1. Щелочно-полимиксиновая среда

среду А: МПБ - 280 мл, хлорид натрия - 4,0 г, глюкоза - 8,0 г, дрожжевой экстракт - 16 мл.

раствор Б: натрий углекислый (Na₂CO₃) - 4,4, дистиллированная вода - 50 мл.

раствор В: калий двузамещенный фосфорнокислый (K₂НРO₄) - 2,0, дистиллированная вода - 50 мл.

Среду А, растворы Б и В стерилизуют при 5 атм. 12 - 15 минут.

После стерилизации их смешивают и добавляют 1,6 мл 1,6 %-ного щелочного раствора бромтимолблау (1,6 г бромтимолблау растворяют в 33 мл 0,4 %-ного раствора едкого натра и объем доводят до 100 мл дистиллированной водой) и 200000 ЕД полимиксина.

Среду разливают по 5 мл в пробирки. Хранят в холодильнике 7 - 10 дней.

2. Молочно-ингибиторная среда (МИС)

К 850 мл стерильного 2 %-ного МПА (при температуре не более 55°) добавляют 150 мл стерильного снятого молока, 12,5 мл 0,01 %-ного водного раствора кристаллического фиолетового (ингибитор), 10 мл 2 %-ного водного раствора теллурата калия, смешивают и разливают в чашки Петри.

3. Дрожжевой экстракт

250 г прессованных пекарских (свежих) дрожжей растворяют в 500 мл дистиллированной воды и автоклавируют текучим паром 30 минут. После остывания помещают в холодильник для отстаивания (на 4 - 5 суток), затем надосадочную жидкость сливают в стеклянную посуду. К этой жидкости добавляют 1,25 мл 0,01 %-ного водного раствора кристаллического фиолетового из расчета на 100 мл и стерилизуют текучим паром 20 - 30 минут. Хранят в холодильнике 1 месяц.

Дифференциальные признаки энтерококков и сходных с ними микроорганизмов

1.1. Пастереллезы - различные по локализации и характеру течения инфекционные болезни сельскохозяйственных, домашних и диких животных, птиц и человека, вызываемые бактериями рода Pasteriolla который включает в себя шесть видов: P.multocida, P.haemolytica, P.ureae, P.pneumotropica, P.aerogenes, P.gallinarum.

1.2. Ведущее этиологическое значение в инфекционной патологии животных и птиц принадлежит двум видам: P.muluocide, P.haemolytice.

P.muluocida является возбудителем геморрагической септицемии животных, холеры птиц, а также легочных пастереллезов, осложняющих респираторные инфекции вирусной и микоплазменной этиологии.

P.haemoytica вызывает у крупного рогатого скота и овец всех возрастов пневмонии, а также септицемию новорожденных ягнят.

Кроме перечисленных заболеваний эти два вида могут выделяться у коров и свиноматок при абортах, у овец и коров - при маститах, у телят и ягнят - при артритах и других локальных патологических процессах.

1.3. Краткие сведения о других видах пастерелл.

P.pneumotropica является возбудителем энзоотического заболевания мышей, кроликов и других лабораторных грызунов, которое проявляется поражением органов дыхания и образованием абсцессов.

P.ureae часто выделяют от человека при хроническом атрофическом насморке.

P.gallinarum встречается как комменсал верхних дыхательных путей птиц и иногда крупного и мелкого рогатого скота; имеет низкую вирулентность и чаще ассоциирует с хроническими респираторными инфекциями птиц.

P.aerogenes является постоянным обитателем кишечного тракта свиней.

1.4. Диагноз на пастереллезы устанавливают на основании эпизоотологических данных, клинических признаков, патологоанатомических изменений и результатов лабораторного исследования.

1.5. Лабораторная диагностика пастереллезов включает микроскопию мазков и отпечатков, выделение культур пастерелл и их идентификацию и при необходимости постановку биопроб.

1.6. Для исследования в лабораторию направляют 2 - 3 трупа мелких животных, от крупных животных - сердце с перевязанными сосудами, части селезенки, печени, почек, экссудат из грудной полости и трубчатую кость. При поражении легких берут также их кусочки (5×5 см) на границе нормального и измененного участков, миндалины, бронхиальные, средостенные и заглоточные лимфатические узлы.

Патологический материал берут от павших (не позднее 3 - 5 ч после гибели) или убитых животных, не подвергавшихся лечению антибактериальными препаратами.

Для диагностики пастереллеза у птиц в лабораторию направляют, кроме свежих трупов, 5 - 6 живых птиц с явными признаками болезни. Больную птицу убивают в лаборатории и делают высевы из костного мозга, сердца, печени и селезенки.

1.7. Взятие и доставку материала осуществляют в соответствии с действующими Правилами взятия патологического материала, крови, кормов, и пересылки их для лабораторного исследования.

2.1. посевы из патологического материала, перечисленного в п. 1.6, делают в МПБ и на МПА или бульон и агар Хоттингера рН 7,2 - 7,4 с добавлением 10 % нормальной сыворотки крови лошади (см. приложение пп. 1 - 4) или 5 - 10 % аминопептида-2.

2.1.1. Посев в пробирки с жидкими и твердыми питательными средами проводят пастеровской пипеткой. Пробирки с посевами инкубируют при 37 - 38° в течение 20 - 48 часов.

2.1.2. Одновременно с посевами из каждого органа делают мазки-отпечатки, фиксируют 10 - 15 мин смесью равных объемов этилового спирта и эфира, окрашивают по Леффлеру или Романовскому-Гимза и микроскопируют. В мазках из патологического материала пастереллы выглядят овоиды или короткие палочки с закругленными концами и заметной биполярностью, вокруг которых может быть видна прозрачная капсула.

2.2. В жидких питательных средах рост пастерелл сопровождается сначала слабым помутнением, затем через 24 - 36 часов возможно просветление среды и выпадение на дно пробирки осадка, поднимающегося при встряхивании в виде косички.

На сывороточном агаре или агаре с аминопептидом-2 пастереллы растут в виде прозрачных, средней (диаметром до 3 мм), округлых с ровными краями колоний слизистой консистенции, серого цвета.

На простых питательных средах без добавления сыворотки крови пастереллы растут не всегда удовлетворительно.

У выделенных культур изучают культуральные, тинкториальные и морфологические свойства. В мазках из культур при окраске по Граму пастереллы имеют вид грамотрицательных овоидов или коккобактерий, расположенных одиночно и попарно.

Идентификацию выделенных культур проводят по ферментативным свойствам и подвижности.

2.3.1. Суточную агаровую культуру высеевают в среды Гисса с глюкозой, маннитам, сахарозой, маннозой, в ПМА, молоко, желатин, на кровяной сывороточной МПА или агар Хоттингера (см. приложение п. 5), в МПБ с 1 % нитрата калия, в среду с мочевиной (см. приложение п. 6).

2.3.2. Для определения редукции нитратов исследуемые культуры засевают в МПБ с 1 % нитрата калия и выращиванием в течение 48 - 72 ч.

Затем в пробирку добавляют 1 см 3 2 %-ного водного раствора крахмала, 1 см 3 1 %-ного раствора йодистого калия и 1 - 2 капли 5 %-ного водного раствора серной кислоты и взбалтывают.

При положительной реакции среда приобретает окраску от темно-синего до коричневого цвета; при отрицательной - цвет среды желтый или слабо синий.

2.3.3. Индол выявляют с помощью индикаторных бумажек или по методу Легаль-Вейла. Индикаторные бумажки готовят из полосок фильтровальной бумаги длиной 10 - 12 см, пропитывая их горячей щавелевой кислотой, высушивают в термостате и хранят в банке с притертой пробкой.

С целью выявления индола в пробирку с МПБ после засева культуры под ватную пробку помещают полоску индикаторной бумажки с таким расчетом, чтобы нижний ее конец не касался среды, и инкубируют при 37 °С 24 - 72 ч. При выделении индола нижняя часть бумажки приобретает розовую окраску.

Метод Легаль-Вейла. В пробирку с суточной бульонной культурой пастерелл вносят 4 - 5 капель 5 %-ного водного раствора нитропруссида натрия, перемешивают и добавляют вначале такой же объем 40 %-ного водного раствора N₂OH, а спустя 1 - 2 мин 4 - 5 капель ледяной уксусной кислоты. При наличие индола бульонная культура приобретает сине-зеленую окраску.

2.3.4. Для определения уреазы в пробирку, содержащую среду с мочевиной, закапывают 2 - 3 капли 24-часовой изучаемой бульонной культуры. Посевы культивируют 20 - 24 ч. при 37 °С. При наличии фермента уреазы происходит покраснение среды.

2.3.5. Все виды пастерелл неподвижны, не свертывают молоко, не разжижают желатин, редуцируют нитраты, ферментируют с образованием кислоты без выделения глаза глюкозу, маннозу, сахарозу.

P.agrogenes в отличие от других видов ферментирует углеводы с выделением газа.

На кровяном сывороточном МПА или агаре Хоттингера P.haemolytica образует колонии с отчетливой зоной гемолиза, которая лучше просматривается после снятия колонии со среды. Остальные виды пастерелл гемолиза не вызывает.

2.3.6. Основные дифференцирующие признаки видов рода пастерелла представлены в таблице.

Методические указания по лабораторной диагностике
пастереллезов животных и птиц

(утв. Главным управлением ветеринарии от 20 августа 1992 г. № 22-7/82)

1. Общие положения

1.3. Краткие сведения о других видах пастерелл.

P.ureae часто выделяют от человека при хроническом атрофическом насморке.

P.aerogenes является постоянным обитателем кишечного тракта свиней.

2. Выделение и идентификация культур

Идентификацию выделенных культур проводят по ферментативным свойствам и подвижности.

P.agrogenes в отличие от других видов ферментирует углеводы с выделением газа.

2.3.6. Основные дифференцирующие признаки видов рода пастерелла представлены в таблице.

Методические указания: Дизентерия, болезни пчел, болезни рыб

· МУК по лабораторной диагностике аэромоноза (краснухи) карпов

· Временная инструкция по борьбе с вибриозом рыб

· МУК по лабораторной диагностике цитробактериоза пчел

· МУК по бактериологической диагностике порошковидного расплода пчел

· Инструкция о мероприятиях по предупреждению и ликвидации болезней, отравлений и основных вредителей пчел

· МУК по лабораторной диагностике американского гнильца, европейского гнильца, парагнильца, септицемии и сальмонеллеза пчел

· МУК по определению патогенности аэромонад по степени ДНКазной активности

6. Методические указания по диагностике сибирской язвы:

· МУК 4.2.2413-08 Лабораторная диагностика и обнаружение возбудителя сибирской язвы

7. Методики и ГОСТы по исследованию туберкулеза, бруцеллеза, паратуберкулеза:

· методические рекомендации Псевдотуберкулез и Иерсиниоз 2005

· МУ 3.1.1.2438-09 Профилактика инфекционных болезней, кишечные инфекции Эпидемиологический надзор и профилактика псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза

· Наставление по диагностике туберкулеза животных 2002

· ГОСТ 26072-89 Животные и птица сельскохозяйственные Методы лабораторной диагностики туберкулеза

· Наставление по диагностике бруцеллеза животных 2003

· ГОСТ 26073-84 Животные сельскохозяйственные Методы лабораторной дигностики паратуберкулеза

· Наставление по диагностике паратуберкулеза (паратуберкулезного энтерита) животных

· ГОСТ 27318-87 Животные сельскохозяйственные Методы идентификации атипичных микобактерий

· Наставление по диагностике бруцеллеза животных и Рекомендации по дифференциальной диагностике бруцеллеза и иерсиниоза и меры по их профилактике

· Методы диагностики и борьбы с бруцеллезом собак, вызываемым Brucella canis

8. Методики и ГОСТы по исследованию воды:

· Рыбоводно-биологические нормы для эксплуатации прудовых хозяйств

· МУК 4.2.1884-04 Санитарно микробиологический и санитарно-паразитологический анализ воды поверхностных водных объектов

· ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная Технические условия

· МУК 4.2.1018-01.4.2 Методы контроля. биологические и микробиологические факторы. Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды.

· МУ 2.1.5.800-99 Организация госсанэпидемнадзора за обеззараживанием сточных вод

· СанПиН 2.1.5.980-00.2.1.5 Водоотведение населенных мест, санитарная охрана водных объектов. гигиенические требования к охране поверхностных вод. Санитарные правила и нормы.

· МУК 4.2.1884-04 Методы контроля. биологические и микробиологические факторы. Санитарно-микробиологический и санитарно-паразитологический анализ воды поверхностных водных обьектов.

· ГОСТ 31942-2012 Вода Отбор проб для микробиологического анализа

· МУ 2.1.5.800-99 Водоотведение населенных мест, санитарная охрна водоемов Организация госсанэпидемнадзора за обеззараживание сточных вод

· МУ 2.1.4.682-97 Питьевая вода и водоснабжение населенных мест Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества

· ГОСТ 18963-73 Вода питьевая Методы санитарно-бактериологического анализа

· ГОСТ Р 51232-98 Вода питьевая Общие требования к организации и методам контроля качества

· МУ 2.1.4.1057-01.2.1.4 Питьевая вода и водоснабжение населенных мест. Организация внутреннего контроля качества санитарно-микробиологических исследований воды.

· ГОСТ 18963-73 Вода питьевая Методы санитарно-бактериологического анализа

Методики и ГОСТЫ по исследованию кормов животного и растительного происхождения

· ГОСТ 20083-74 Дрожжи кормовые Технические условия

· ГОСТ 28178-89 Дрожжи кормовые Методы испытаний

· Методика индикации бактерий рода Протеус в кормах животного происхождения

· Методика бактериологического исследования кормов на пастереллы

· Правила бактериологического исследования кормов

· Указания о лабораторных исследованиях импортных кормов и кормовых добавок

· ГОСТ 31744-2012 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных етод подсчета колоний Clostridium perfringens

· ГОСТ Р 51095-97 Премиксы Технические условия

· ГОСТ 80-96 Жмых подсолнечный Технические условия

· ГОСТ 30134-97 Дрожжи кормовые Метод ускоренного обнаружения сальмонелл

· ГОСТ 20083-74 Дрожжи кормовые Технические условия

· ГОСТ 31878-2012 Корма для животных Метод обнаружения и подсчета бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий). метод наиболее вероятного числа.

· Методика бактериологического исследования кормов на энтерококки

· ГОСТ 25311-82 Мука кормовая животного происхождения Методы бактериологического анализа

· ГОСТ 10273-2013 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных Горизонтальный метод обнаружения условно-патогенной бактерии Yersinia enterocolitica

· ГОСТ Р 51426-99 Микробиология. Корма, Комбикорма. Комбикормовое сырье Общее руководство по приготовлению разведений для микробиологических исследований

· ГОСТ Р 55453-2013 Корма для непродуктивных животных Общие технические условия

· ГОСТ 25311-82 Мука кормовая животного происхождения Методы бактериологического анализа

10. Методики и ГОСТы по исследованию спермы:

· Ветеринарно-санитарные правила для племпредприятий (станций) и пунктов искусственного осеменения сельскохозяйственных животных

· ГОСТ 32198-2013 средства воспроизводства Сперма Методы микробиологического анализа

· ГОСТ 32222-2013 Средства воспроизводства Сперма Методы отбора проб

· МУК по лабораторному исследованию спермы производителей, а также препаратов и инструментов, применяемых при искусственном осеменении животных на бактериальную загрязненность 1970

· Методика исследования спермы на туберкулез

· Методика исследования спермы на бруцеллез

· Методика микробиологического исследования замороженной спермы быков племпредприятий

· МУК по ветеринарно-санитарному контролю качества замороженной спермы быков производителей с целью ее сертификации

· ГОСТ 20909.2-75 Сперма быков неразбавленная Методы микробиологических исследований

· ГОСТ 32277-2013 Средства воспроизводства сперма Методы испытаний физических свойств и биологического, биохимического, морфологического анализов

11. Методические указания по санитарно-зоогигиеническим исследованиям:

· МУК по контролю качества дезинфекции объектов, подлежащих ветеринарному надзору

· Санитарные правила для холодильников

· Правила проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора

· МУК 2657-84 по санитарно-бактериологическому контролю на предприятиях общественного питания и торговли пищевыми продуктами

· Рекомендации по санитарно-бактериологическому исследованию смывов с поверхностей объектов, подлежащих ветеринарному надзору

· МУ 2657-82 по санитарно-бактериологическому контролю на предприятиях общественного питания и торговли пищевыми продуктами

· Правила проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора

· Ветеринарно-санитарные правила подготовки к использованию в качестве органических удобрений навоза, помета и стоков при инфекционных и инвазионных болезнях животных

· Методика бактериологического контроля качества дезинфекции при туберкулезе животных

12. Методические указания Почва:

· МУК 2293-81 по санитарно-микробиологическому исследованию почвы

· Методы микробиологического контроля почвы. Методические рекомендации

· Методические указания по санитарно-микробиологическому исследованию почвы

· Инструкция по санитарно-микробиологическом контролю тушек, мяса птицы, птицепродуктов, яиц и яйцепродуктов на птицеводческих и птицеперерабатывающих предприятиях

· ГОСТ 31468-2012 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы Метод выявления сальмонелл

· Правила взятия патологического материала, крови, кормов и пересылки их для лабораторного исследования

· ГОСТ 32149-2013 Пищевые продукты переработки яиц сельскохозяйственной птицы Методы микробиологического анализа

· ГОСТ Р 54374-2011 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)

· ГОСТ 7702.2.7-2013 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы Методы выявления бактерий рода Proteus

· ГОСТ Р 54674-2011 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы Метод выявления и определения Staphylococcus aureus

· МУК по определению чувствительности к антибиотикам возбудителей инфекционных болезней сельскохозяйственных животных 1971

· МУК по патоморфологической диагностике болезней животных, птиц и рыб в ветеринарных лабораториях

14. Справочная литература:

· Санитарно-гигиенические исследования воды в животноводстве Учебное пособие

· Методы санитарно-бактериологического исследования воды 1958

· Санитарные и ветеринарные правила для молочных ферм, колхозов, совхозов и подсобных хозяйств

· Инструкция по порядку и периодичности контроля за содержанием микробиологических и химических загрязнителей в мясе, птице, яйцах и продуктах их переработки

· МУК 4.2.734-99 Методы контроля Микробиологический мониторинг производственной среды

· МУК 4.2.2316-08 Методы контроля бактериологических питательных сред

· Инструкция по санитарно-микробиологическому контролю производства пищевой продукции из рыбы и морских беспозвоночных

· ГОСТ 30425-97 Консервы Метод определения промышленной стерильности

· Постановление главного государственного санитарного врача РФ об утверждении санитарно-эпидемиологических правил СП 1.3.3118-13 «Безопасность работы с микроорганизмами 1-2 групп патогенности (опасности)

· МУ 4.2.2723-10.4.2 Биологические и микробиологические факторы. Лабораторная диагностика сальмонеллезов, обнаружение сальмонелл в пищевых продуктах и объектах окружающей среды

Купить бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Цена на этот документ пока неизвестна. Нажмите кнопку "Купить" и сделайте заказ, и мы пришлем вам цену.

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль"

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
Курьерская доставка (7 дней)
Самовывоз из московского офиса
Почта РФ

Правила регламентируют единые методы бактериологического исследования кормов животного и растительного происхождения, комбикормов и рыбной муки

Дата введения	01.02.2020
Добавлен в базу	01.02.2017
Актуализация	01.02.2020

10.06.1975	Утвержден	Главное управление ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР
Издан	Издательство Колос	1976 г.
Разработан	ВНИИ ветеринарной санитарии Минсельхоза СССР

Чтобы бесплатно скачать этот документ в формате PDF, поддержите наш сайт и нажмите кнопку:

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА СССР

ГЛАВНОЕ УПРАВЛЕНИЕ ВЕТЕРИНАРИИ

Разработаны Всесоюзным научно-исследовательским институтом ветеринарной санитарии и сиециалистамн Главного управления ветеринарии МСХ СССР.

Утверждены Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 10 нюни 1975 г.

& Мпистерство сельского хозяйства СССР, 1976

шечной палочки по О-антигену с целью установления энзоотических типов.

Для приготовления антигена каждую предназначенную для типизации суточную агаровую культуру (пробирка со скошенным агаром) смывают стерильным физиологическим раствором хлористого натрия, доводят суспензию бактерий до концентрации 5—6 млрд/мл и кипятят в водяной бане в течение 1 ч. Вода должна полностью закрывать уровень культуры в пробирках.

На чистое обезжиренное стекло наносят пастеровской пипеткой по капле каждой комплексной О-сыво-ротки, разведенной физиологическим раствором 1 :5, и по капле исследуемого антигена. Затем хорошо перемешивают стеклянной палочкой или петлей. Реакция протекает при комнатной температуре в течение 3 мин при покачивании стекла.

В том случае, когда антиген агглютинируется всеми комплексными сыворотками, его проверяют с физиологическим раствором для исключения самоагглютннацин. Самоагглютиннруюшие антигены для серотипнэации непригодны.

Антигены, давшие четко выраженную агглютинацию на стекле с комплексной коли сывороткой, исследуют в капельной реакции агглютинации с отдельными разведенными 1 :10 тнпоспецифическими сыворотками, входящими в состав комплексной сыворотки.

2.5.6. Если антиген из исследуемой культуры агглютинируется в капельной РА с одной или двумя-тремя мо-носыворотками, то его проверяют с этими же сыворотками в пробирочной РА, так как реакция на стекле имеет лишь ориентировочное значение.

Для постановки пробирочной РА типослсцнфичсскнс О-сыворотки, агглютинирующие антиген из исследуемой культуры в РА на стекле, разводят физиологическим раствором, начиная с 1 : 100 до предельного титра сыворотки, указанного на этикетке, и во все пробирки добавляют по 2 капли антигена (концентрация 5—6 млрд, бактериальных тел по бактерийному стандарту), приготовленного нз убитой нагреванием агаровой культуры обнаруженных бактерий.

Одновременно ставят контроля: I. Антиген 4- физиологический раствор (для исключения самоагглютина-ции) и 2. Сыворотка, разведенная 1 :100, без антигена (для исключения явления флоккуляции).

Штатив с пробирками встряхивают и ставят в термостат при 37® С на 12—16 ч, затем выдерживают при комнатной температуре 18—24 ч. Реакция учитывается при помощи лупы или агглютиноскоиа. Принадлежность к О-группе определяют по нанвысшему разведению тн-поспецифической агглютинирующей сыворотки, вызывающей агглютинацию антигена исследуемой культуры, которое должно быть не ниже половины предельного титра типоспецнфнческой сыворотки. Сыворотка и антиген в контроле не должны образовывать хлопьев.

2.6. Исследования на анаэробы

2.6.1. 50 г корма растирают в стерильной ступке с физиологическим раствором и засевают в несколько пробирок со средой Кнтт-Тароцци, молоком и по две чашки со средами Вильсон-Блера и кровяным агаром по Цейслеру. Для уничтожения вегетативных форм по одной пробирке с жидкими средами прогревают при температуре 80° С в течение 20 мин. Посевы помещают в термостат при температуре 37® С. Чашки должны находиться в специальных аппаратах для анаэробных культур или в эксикаторе, куда заранее вносят тот или иной поглотитель кислорода.

2.6.2. Результаты посевов регистрируют в первый же день. Почернение среды Вильсон-Блера в течение 1—3 ч после посева, свертывание молока с образованием ноздревато-губчатого сгустка и прозрачной сыворотки в течение 6 ч, а также быстрое начало роста на среде Китт-Тароцци (через 4—5 ч) при обильном газообразовании является характерным для клоетриднум перф-рингенс.

Рост клостридиум ботулинум, наблюдаемый обычно на 2—3-й день, характеризуется помутнением среды Китт-Тароцци, образованием осадка и запахом прогорклого масла.

При обнаружении роста на среде Китт-Таршши производят микроскопическое исследование и выделение чистой культуры посевом на 2—3 чашки с кровяным агаром по Цейслеру, которые выдерживают в анаэробных условиях при температуре 37° С в течение 24— 48 ч, после чего’просматривают рост в чашках и отбирают культуры, которые классифицируют по морфологическим и биохимическим свойствам, указанным в приложении 2 и 3.

Биологическую пробу проводят на морских свинках или белых мышах путем внутрибрюшинного заражения бульонной культурой. При положительном результате подопытные животные гибнут через 12—48 ч.

2.6.3. Для идентификации отдельных возбудителей или типов одного вида ставят опыт нейтрализации токсина специфической сывороткой. Для этого минимальную смертельную дозу культуры в смеси с 0.2—0.5 мл соответствующей тнпоспецифнческой сыворотки выдерживают в термостате 45 мин и вводят мышам внутрибрю-шинно. Для контроля испытуемую культуру или фильтрат вводят мышам без сыворотки. Вид и тип мнхроба определяют по выживаемости мышей, получивших соответствующую сыворотку.

2.6.4. При исследовании кормов на ботулизм (наличие токсинов) в качестве подопытных животных используют белых мышей. При этом могут быть применены два способа:

а) нейтрализация токсина противоботулиновой сывороткой (антитоксином). Корм предварительно растирают в ступке со стерильным физиологическим раствором (1:4) и настаивают в течение 1—2 часов при комнатной температуре. Настой центрифугируют н фильтруют через ватно-марлевый фильтр. К 0,5 мл фильтрата добавляют 0,2 мл поливалентной противоботулиновой сыворотки. Смесь выдерживают I ч при комнатной температуре, затем одному животному вводят подкожно 0,5 мл фильтрата, другому — смесь фильтрата с сывороткой в той же дозе.

Аналогичное испытание может быть проведено с 6—7-суточной культурой, выращенной на печеночном бульоне. В этом случае пастеровской пипеткой отсасывают верхний слой культуры, который фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Далее поступают как указано выше;

2.6.5. Положительным результатом биологической пробы по первому и второму способам, считают гибель мышей, наступившую как от фильтрата не обработанного лротивоботулиновой сывороткой, так и от фильтрата не подвергнутого кипячению.

3. ОЦЕНКА КОРМОВ

3.1. Комбикорма используют сельскохозяйственным животным при отрицательных результатах исследования на сальмонеллы, энтсропатогсиные типы кишечной палочки и токсипообразуюшие анаэробы при условии его соответствия другим показателям действующих стандартов.

3.2. Мясо-костную и рыбную муку используют сельскохозяйственным животным при общей бактериальной об-семененности не более 500 тыс. микробных тел в 1 г и отрицательных результатах исследования на сальмонеллы, энтеропатогенные типы кишечной палочки и протея, а также токеннообразующие анаэробы при условии соответствия другим показателям действующих стандартов.

3.3. При установлении в кормах анаэробных микроорганизмов и их токсинов такие е С 30 мин и оставляют отстаиваться в холодильнике при +4—5 а С в течение 4—6 суток. Мадосадочную жидкость разливают do флаконы по 50—100 мл. Па каждые 100 мл экстракта добавляют 1,25 мл 0,01%-ного водного раствора кристаллического фиолетового, вновь прогревают при 100' С 30 мин в автоклаве.

Примечание. Экстракт можно готовить из сухих дрожжей, при 5том на I кг сухих дрожжей необходимо брать 6 л дистиллированной воды. Готовый экстракт должен храниться в холодильнике.

Читайте также:

Методика бактериологического исследования кормов на пастереллез

1. Общие положения

2. Выделение и идентификация культур

Оглавление