Исследование на сибирскую язву в кожевенном сырье

Указания
по ветеринарно-санитарной обработке заготовляемого кожевенного и мехового сырья
(утв. Главным управлением животноводства и ветеринарии Минсельхоза СССР 30 декабря 1954 г., с изменением от 27 июля 1965 г.)

I. Общие положения

1. Агенты, сборщики, приемщики-заготовители обязаны перед выездом на заготовки кожевенного и мехового сырья предъявлять маршрутные листы главному ветеринарному врачу района для получения разрешения на заготовку указанного сырья в районе и отдельных его пунктах. Маршрутные листы с визой главного ветеринарного врача района подлежат предъявлению сельсовету, в населенных пунктах которого производят заготовку.

В квитанциях на заготавливаемое сырье указывают район, селение, фамилию, имя и отчество сдатчика кожи, его адрес, а также вид и консервировку кожевенного и мехового сырья. Квитанцию подписывают агент и сдатчик.

2. Сырьевщики, агенты и рабочие, соприкасающиеся с кожевенно-меховым сырьем, должны работать в халатах и рукавицах.

3. Каждую заготавливаемую шкуру биркуют. На бирке должны быть штамп районной заготовительной конторы и номер закупочной квитанции.

4. При сдаче кожевенного и мехового сырья на склад шкуры с каждой повозки, сдаваемые агентом, складывают в отдельный штабель.

Для приема, консервирования и хранения боенского сырья и свиных шкур на складах выделяют специальное помещение, в котором нельзя складывать кожевенно-меховое сырье небоенского (сборное) происхождения.

При складах и кожевенно-сырьевых предприятиях должен быть оборудован специальный изолятор (см. пункт 18).

5.* Исследованию на сибирскую язву подлежат шкуры небоенского происхождения лошадей, крупного и мелкого рогатого скота, ослов, лошаков, мулов, яков, буйволов, верблюдов, оленей, а также лося, дикой козы и енотовидных собак. Свиные шкуры небоенского происхождения подлежат исследованию в том случае, если на них имеются инфильтраты. В этом случае пробы для исследования берут с мест с инфильтратов.

6. Шкуры и меховое сырье боенского происхождения животных, указанных в пункте 5, шкуры свиней и каракулевых (смушковых) ягнят, а также животных всех других видов, не указанных в пункте 5, исследованию на сибирскую язву не подлежат.

Примечание. Сырье, подлежащее исследованию на сибирскую язву реакцией преципитации, подвергать каким-либо обработкам - отмочке, золке, дублению, квашению и т.п. - запрещается.

II. Отбор проб для исследования на сибирскую язву

7. Организации и предприятия обязаны отсылать пробы от заготовленного кожевенно-мехового сырья, указанного в пункте 5, в ветеринарные лаборатории для исследования на сибирскую язву.

Примечания. 1. Исследование кожевенного и мехового сырья по реакции преципитации производится бесплатно.

2. Ветеринарные лаборатории должны заблаговременно получать от обслуживаемых ими заготовительных организаций и предприятий информацию о годовых и квартальных планах заготовок кожевенно-мехового сырья, подлежащего исследованию.

8. До получения от лаборатории результатов исследования запрещается проводить перекладывание, сортировку или перевозку кожевенно-мехового сырья, от которого взяты пробы.

9. Отбор проб для исследования проводят специально подготовленные резчики-санитары заготовительных пунктов и сырьевых предприятий с соблюдением установленных ветеринарно-санитарных требований под руководством ветеринарного специалиста, обслуживающего предприятие.

Примечание. Резчик при взятии проб обязан работать в спецодежде: в сапогах, комбинезоне, головном уборе, перчатках и фартуке. Спецодежда подлежит периодической дезинфекции по указанию ветеринарных специалистов."

10. Для исследования берут пробы размером 5X5 см с периферических, незагнивших и незаплесневевших участков шкуры.

11. При отборе проб каждую шкуру маркируют на мездре порядковым номером и номером серии (краской, применяемой в кожзаготовительных организациях). Каждую пробу маркируют тем же номером кожи и серией посредством бумажных или фанерных прокладок. Пробы нанизывают вместе с номерами на шпагат или проволоку связками по 100 проб. К каждой связке прикрепляют бирку с указанием организации, серии, начального и последнего номеров проб. Серия состоит из 1000 проб.

III. Пересылка проб кожевенно-мехового сырья в лабораторию

12. Пробы доставляют с нарочным в лабораторию в специальной таре и с препроводительной ведомостью.

13. Тара для проб должна быть металлическая, внутри выстлана бумагой и закрыта крышкой, плотно охватывающей снаружи края тары. После упаковки тару пломбируют или опечатывают и помещают в тканевый чехол.

14. Препроводительную ведомость составляют по форме N 1 (см. приложение) в двух экземплярах, из которых первый со штампом или печатью ветеринарного учреждения или ветеринарного специалиста предприятия остается в лаборатории, второй - возвращается с распиской лаборатории о получении проб.

15. Тару из-под проб кожевенно-мехового сырья возвращают нарочному предприятия (заготовительного пункта) после автоклавирования в лаборатории.

IV. Исследование кожевенно-мехового сырья и последующие ветеринарно-санитарные мероприятия

О результатах исследования лаборатория немедленно сообщает ветеринарному специалисту, приславшему пробы.

17. В случае сомнительного или положительного результата исследования по указанию лаборатории соответствующая шкура должна быть немедленно изъята из штабеля (тюка) и от нее вторично посылают пробу в лабораторию для проверочно-контрольного исследования. Окончательное заключение о наличии положительной реакции лаборатория дает лишь после повторного проверочно-контрольного исследования изъятой кожи.

Шкуры с положительной реакцией преципитации складывают отдельно в том же изоляторе в закрытый металлический ящик. Изолятор запирают и пломбируют. Пломбир хранится у ветеринарного специалиста.

Кожевенно-меховое сырье, выделенное в изолятор, должно быть зарегистрировано ветеринарным специалистом в журнале учета.

19. Ветеринарный специалист, обслуживающий склад или заготовительный пункт, обязан выяснить, где заготовлена шкура, давшая положительную реакцию, и сообщить главному ветеринарному врачу района, а также лаборатории, проводившей исследование сырья, из какого пункта (хозяйства) выделена неблагополучная шкура.

20. Дезинфекцию изолированного сырья проводят по указанию и под непосредственным контролем ветеринарного специалиста, обслуживающего предприятие (заготовительный пункт), о чем делают соответствующую отметку в журнале учета.

Перевозка изолированного сырья, подлежащего дезинфекции, железнодорожным или водным транспортом запрещается.

С разрешения ветеринарного отдела областного (краевого) управления сельского хозяйства (или городского ветеринарного отдела) такое сырье, за исключением шкур, давших положительную реакцию, может быть допущено к перевозке на автомашине в пределах области (города) в непроницаемых ящиках, запломбированных ветеринарным персоналом, до ближайшего предприятия, имеющего дезинфекционное оборудование. Единичные шкуры, давшие положительную реакцию, уничтожают сжиганием на месте.

* П.п. 5 и 6 изложены в редакции от 27 июля 1965 г.

УКАЗАНИЯПОВЕТЕРИНАРНО-САНИТАРНОИОБРАБОТКЕ ЗАГОТОВЛЯЕМОГОКОЖЕВЕННОГОИМЕХОВОГОСЫРЬЯ

1. Общиеположения

Для приема, консервирования и хранения боенского сырья и свиных шкур на складах выделяют специальное помещение, в котором нельзя складывать кожевенно-меховое сырье не боенского (сборное) происхождения.

При складах и кожевенно-сырьевых предприятиях должен быть оборудован специальный изолятор (см. пункт 18).

5. Исследованию на сибирскую язву подлежат шкуры небоенского происхождения лошадей, крупного и мелкого рогатого скота, ослов, лошаков, мулов, яков, буйволов, верблюдов, оленей, а также лося, дикой козы и енотовидных собак. Свиные шкуры небоенского происхождения подлежат исследованию в том случае, если на них имеются инфильтраты. В этом случае пробы для исследования берут с мест с инфильтратов.

Примечание. Сырье, подлежащее исследованию на сибирскую язву реакцией преципитации, подвергать каким-либо обработкам отмочке, золке, дублению, квашению и т.п. — запрещается.

II. Отборпробдляисследованиянасибирскуюязву

1. Исследование кожевенного и мехового сырья по реакции-преципитации производится бесплатно.

10. Для исследования берут пробы размером 5X5 см с периферических, не загнивших и не заплесневевших участков шкуры.

III. Пересылка проб кожевенно-мехового сырья в лабораторию

12. Пробы доставляют с нарочным в лабораторию в специальной таре и с препроводительной ведомостью.

13. Тара для проб должна быть металлическая, внутри выстлана бумагой и закрыта крышкой, плотно охватывающей снаружи края тары.

После упаковки тару пломбируют или опечатывают и помещают в тканевый чехол.

14. Препроводительную ведомость составляют по форме № 1 (см. «Приложение) в двух экземплярах, из которых первый со штампом или печатью ветеринарного учреждения или ветеринарного специалиста предприятия остается в лаборатории, второй возвращается с распиской лаборатории о получении проб.

IV. Исследование кожевенно-мехового сырья и последующие ветеринарно-санитарные мероприятия

16. Поступившие в ветеринарную лабораторию пробы от шкур пресно сухой, сухосоленой и мокросоленой консервировки подлежат исследованию в течение не более 4 дней, от шкур парных и мороженых — не более 6 дней. О результатах исследования лаборатория немедленно сообщает ветеринарному специалисту, приславшему пробы.

18. При наличии положительной реакции на сибирскую язву хотя бы у одной шкуры в штабеле весь штабель под наблюдением ветеринарного специалиста подлежит изъятию в специальный изолятор и дезинфекции на месте. В случае, если выделенная по реакции преципитации шкура соприкасалась с другим кожевенным и меховым сырьем, находящимся на складе, то и это сырье также изолируют и дезинфицируют. Шкуры с положительной реакцией преципитации складывают отдельно в том же изоляторе в закрытый металлический ящик. Изолятор запирают и пломбируют. Пломбир хранится у ветеринарного специалиста. Кожевенно-меховое сырье, выделенное в изолятор, должно быть зарегистрировано ветеринарным специалистом в журнале учета.

В _____________________________________________ лабораторию

При этом направляются для исследования по реакции преципитации на сибирскую язву пробы кожевенного (мехового) сырья, принадлежащего___________________________________________________________

Адрес и телефон организации (предприятия) ___________________________

Реакцию преципитации применяют для диагностики сибирской язвы как при исследовании кожевенного сырья в лабораториях Асколи, так и в диагностических бактериологических лабораториях, как подсобную реакцию при бактериологических исследованиях на сибирскую язву.

Исследование кожевенного сырья на сибирскую язву при помощи реакции преципитации ведут холодным способом после предварительной стерилизации взятых проб. Доставленные в лабораторию пробы стерилизуют в автоклаве при 11/2 атмосферах в течение получаса или при 1 атмосфере в течение одного часа. После стерилизаций пробы охлаждают и затем измельчают. Измельчённые пробы должны быть весом не менее 1 г. Нумерация банок должна соответствовать номерам проб.

Экстрагирование проб производят холодным способом в материальных банках ёмкостью до 50 г.

Пробы от свиных шкур экстрагируют горячим способом в пробирках на водяной бане при кипячении в течение 30 минут.

Экстрагирующая жидкость разливается в отношении 1 : 10. В качестве экстрагирующей жидкости берут физиологический раствор (0,85% очищенной поваренной соли), к которому добавляют 0,3 о/о кристаллической карболовой кислоты для предотвращения роста бактерий и получения легко фильтруемых, прозрачных экстрактов. Лучшая температура для экстрагирования 8—14° С. Добавление карболовой кислоты особенно необходимо при температуре помещения от 14 до 20°С. Продолжительность экстрагирования—от 16 до 20 часов.

Экстракты фильтруют через воронки в укороченные бактериологические пробирки. В качестве фильтра употребляют асбестовую вату (нейтральную). Экстракты после фильтрации должны быть прозрачны. Если полученный фильтрат мутный, то допускается вторичная фильтрация экстрактов. При этом первую порцию второго фильтрата, который может содержать малое количество преципигиногена, выбрасывают.

Порядок применения сыворотки. Перед употреблением сыворотка должна быть проконтролирована посредством стандартного антигена и экстракта из заведомо сибиреязвенного материала (желателен материал такого же рода, как подвергаемый исследованию). Сыворотка должна давать ясно положительную реакцию через 30 секунд (до 1 минуты) со стандартным антигеном и до 5 минут—с экстрактом из заведомо сибиреязвенной кожи.

Лаборатории, применяющие преципитирующую сибиреязвенную сыворотку, должны иметь в своём распоряжении не менее 2—3 различных серий для взаимного контроля. Кожи, давшие положительную или сомнительную реакции на сибирскую язву, должны быть повторно экстрагированы и проверены повторно с двумя—тремя различными сериями сывороток. Сыворотка, употребляемая для реакции, должна быть прозрачной. Из фладсонов, с хорошо отстоявшейся сывороткой, возможно применение её без предварительного филь-трования при условии осторожного насасывания, без взбалтывания осадка на дне флакона. Сыворотки, имеющие муть даже после фильтрования через асбест, не должны применяться. Нельзя также применять сыворотки непосредственно после транспортировки или взбал-тывания их. В таких случаях сыворотке нужно дать отстояться не менее 10—15 дней, так как фильтрование не даёт той прозрачности, какая достигается путём отстоя. Сыворотка должна транспортироваться в тёплое время года (с 1 апреля по 1 ноября). В зимнее время сыворотку следует пережить в условиях, исключающих замораживание (в тёплом вагоне), так как тёплая упаковка <вата, войлок) не гарантируют от замораживания.

Соединение компонентов. Компоненты при реакции преципитации соединяют наслаиванием профильтрованных прозрачных экстрактов на разлитую и проконтролированную преципитирующую сыворотку. Сыворотку и экстракт для реакции берут по 0,25—0,3 см3. Можно наслаивать экстракт на разлитую сыворотку или подслаивать сыворотку под экстракт пастеровской пипеткой. Реакцию учитывают в зависимости от активности преципитирующей сыворотки в течение 10—15 минут. Реакцию с экстрактами из мокросолёного и сухосолёного сырья учитывают в течение 20 минут.

Диагностическую оценку реакции производят при проходящем свете на чёрном фоне. В тех пробирках, где граница между, сывороткой и экстрактами нерезко выражена, реакцию не учитывают и ставят вновь с тем же экстрактом.

Если материал был сибиреязвенным, то на месте соприкосновения экстракта с сывороткой через 1—15 минут появляется различной резкости серовато-белый диск (кольцо).

При сомнительных реакциях исследование повторяют. В тех случаях, когда вторично получается сомнительная реакция, исследуемая кожа считается сибиреязвенной.

Вся посуда для реакции преципитации должна быть чистой, прозрачной. Посуду промывают в тёплой солёной (1—2 о/о поваренной соли) воде при помощи волосяных ершей и щёток с последующим промыванием в чистой воде. Улелгутовские пробирки промывают в дестиллированной воде. После мытья посуду просушивают.

Ежедневно перед началом работы ставят следующие контроли:

а) преципитирующие сыворотки и стандартный антиген или экстракт из заведомо сибиреязвенной кожи (реакция положительная);

б) преципитирующие сыворотки и экстракт из заведомо здоровой кожи (реакция отрицательная);

в) нормальная сыворотка и экстракт из заведомо сибиреязвенной кожи или стандартный антиген (реакция отрицательная);

г) преципитирующая сыворотка и экстрагирующая жидкость (реакция отрицательная).

При исследовании методами преципитации лаборатория должна сообщить о положительных реакциях старшему районному (городскому) ветеринарному врачу, в район, откуда материал поступил на исследование.

1. Общие положения.

1. Осуществлять деятельности по заготовке кожевенного и мехового сырья могут организации, а также индивидуальные предприниматели, прошедшие прцедуру аттестации в Государственной службе ветеринарного и фитосанитарного благополучия Министерства здравоохранения и социальной защиты Приднестровской Молдавской Республики.

2. Каждую заготавливаемую шкуру биркуют.

3. При сдаче кожевенного и мехового сырья на склад организации-заготовителя шкуры с каждой транспортной единицы (автомобили, повозки) складывают в отдельный штабель.

4. Для приёма, консервирования и хранения боенского сырья и свиных шкур на складах выделяют специальное помещение, в котором нельзя складывать кожевенно-меховое сырье небоенского (сборное) происхождения.

5. В кожевенно-сырьевых организациях должен быть оборудован специальный изолятор (см. пункт 23 настоящих правил).

6. Исследованию на сибирскую язву подлежат шкуры небоенского происхождения лошадей, крупного и мелкого рогатого скота, ослов, лошаков, мулов, яков, буйволов, верблюдов, оленей, а также лося, дикой козы и енотовидных собак.

7. Шкуры и меховое сырьё боенского происхождения животных, указанных в пункте 6 настоящих правил, а также животных всех других видов, не указанных в пункте 6 настоящих правил, исследованию на сибирскую язву не подлежат.

8. Сырьё, подлежащее исследованию на сибирскую язву реакцией преципитации, запрещается подвергать каким-либо обработкам — отмочке, золке, дублению, квашению и т. п.

2. Отбор проб для исследования на сибирскую язву

10. До получения от лаборатории результатов исследования запрещается проводить перекладывание, сортировку или перевозку кожевенно-мехового сырья, от которого взяты пробы.

11. Отбор проб для исследования проводится ветеринарным специалистом организации или ветеринарным специалистом государственной ветеринарной службы, с соблюдением установленных ветеринарно-санитарных требований .

12. Для исследования берут пробы размером 5×5 см с периферических, незагнивших и незаплесневевших участков шкуры, при наличии инфильтратов (отёков) с мест инфильтратов.

13. При отборе проб каждую шкуру маркируют на мездре порядковым номером и номером серии (краской, применяемой в кожзаготовительных организациях).

14. Каждую пробу маркируют тем же номером кожи и серией посредством бумажных или фанерных прокладок.

15. Пробы нанизывают вместе с номерами на шпагат или проволоку связками по 100 проб. К каждой связке прикрепляют бирку с указанием организации, серии, начального и последнего номеров проб. Серия состоит из 1000 проб.

3. Пересылка проб кожевенно-мехового сырья в лабораторию

17. Тара для проб должна быть металлическая, внутри выстлана бумагой и закрыта крышкой, плотно охватывающей снаружи края тары.

18. После упаковки тару пломбируют или опечатывают и помещают в тканевый чехол.

20. Тару из-под проб кожевенно-мехового сырья возвращают нарочному организации после автоклавирования в лаборатории.

4. Исследование кожевенно-мехового сырья

и последующие ветеринарно-санитарные мероприятия.

24. При изъятии шкур в изолятор составляется акт по форме (Приложение № 2 к настоящим правилам).

26. Шкуры давшие положительную реакцию преципитации на сибирскую язву, складывают в изолятор в закрытый металлический ящик и уничтожают сжиганием.

27. При сжигании шкур составляется акт по форме (Приложение № 3 к настоящим правилам).

28. В случае, если выделенное по реакции преципмтации шкура соприкасалась с другим кожевенным и меховым сырьём, находящимся на складе, то и это сырьё также складывают в изолятор в закрытый металлический ящик и уничтожают сжиганием.

29. Изолятор запирает и пломбирует ветеринарный специалист огранизации или ветеринарный специалист государственной ветеринарной службы.

30. Пломбир хранится у ветеринарного специалиста организации или ветеринарного специалиста государственной ветеринарной службы.

31. Кожевенно-меховое сырьё, выделенное в изолятор, должно быть зарегистрировано государственным ветеринарным специалистом в журнале учёта.

33. Контроль за выполнением настоящих правил возлагается на Государственную ветеринарную службу и иные органы государственной власти в пределах компетенции установленной действующим законодательством Приднестровской Молдавской Республики.

34. Ответственность за нарушение настоящих правил устанавливается действующими нормативными правовым и актами Приднестровской Молдавской Республики.

к Ветеринарно-санитарным правилам по

обработке заготавляемого кожевенного

и мехового сырья в приднестровской

При этом направляютя для исследования по реакции преципитации на сибирскую язву пробы кожевенного (мехового) сырья, принадлежащего_________________________________

Адрес и телефон организации___________________________________________________

Сибирская язва — остропротекающая болезнь сельскохозяйственных животных многих видов. Болеет и человек. Возбудитель — Bacillus anthracis.

При постановке диагноза на сибирскую язву используют весь комплекс диагностических методов — эпизоотологический анализ, клинические, патологоанатомические и лабораторные исследования.

Общий принцип эпизоотологического анализа, или обследовав ния, хозяйства изложен в занятии 6. Возбудитель сибирской язвы может распространяться через секреты и экскреты больных животных, продукты убоя, трупы, а также посредством кровососущих насекомых. Особенно опасны места захоронения трупов животных и стоячие водоемы.

Если болезнь возникла в период стойлового содержания животных, выясняют условия их кормления и происхождение кормов (споры сибирской язвы могут быть занесены с корнеплодами, сеном и мясокостной мукой); если в пастбищный период — обследуют участки, где паслись животные. Необходимо выяснить, велись ли вблизи фермы или пастбищ земляные работы, и собрать сведения за предельно большой срок о случаях появления сибирской язвы в данной местности.

Клиническое обследование животных начинают с измерения температуры тела (при сибирской язве она повышена). Болезнь выражается также отказом от корма, резким припуханием лимфатических узлов, отеком подчелюстного пространства, у дойных коров — Маститом. У свиней обнаруживают разлитую отечность тестоватой Консистенции в подчелюстном пространстве.

При патологоанатомическом исследовании отмечают характерные для сибирской язвы признаки: отсутствие трупного окоченения, сильное вздутие трупа, отеки в подкожной клетчатке, пенисто-кровянистые истечения из естественных отверстий, синюшную окраску видимых слизистых оболочек и кровоизлияния на них. Однако следует иметь в виду, что весь комплекс указанных изменений наблюдают не всегда, поэтому окончательный диагноз устанавливают только после лабораторного исследования.

Лабораторная диагностика при сибирской язве включает в себя микроскопию мазков из исходного патологического материала, выделение чистой культуры посевом на питательные среды, биопробу. При необходимости ставят реакцию преципитации, идентифицируют выделенные культуры культурально-биохимическими методами.

Для исследования на сибирскую язву в лабораторию направляют ухо, перевязанное у основания, или мазок крови, взятой из надреза уха; от трупов свиней — участки отечной соединительной ткани и заглоточные, а также другие лимфатические узлы с характерными патологоанатомическими изменениями. Если подозрение на сибирскую язву возникло при вскрытии трупа животного (кроме трупов свиней), вскрытие прекращают и на исследование направляют часть селезенки.

Мазки микроскопируют немедленно, результаты срочно сообщают в хозяйство, направившее материал. Мазки фиксируют этиловым спиртом с добавлением 3 % пероксида водорода, окрашивают по Граму, на капсулы — по методу Ребигера, Михина, Ольта или Романовского— Гимзы и на споры — по методу Пешкова, Ауески, Трихинелье и Златогорова. Если в лаборатории есть люминесцирующие сыворотки, используют метод флюоресцирующих антител.

Посевы из исходного материала делают в МПБ и на МПА или в бульон и на агар Хоттингера. Посевы инкубируют 18. 24 ч при температуре 37 °С, при отсутствии роста выдерживают при той же температуре еще 48 ч.

После суточного роста сибиреязвенных бактерий МПБ остается прозрачным, на дне образуется рыхлый осадок, напоминающий комок ваты. При встряхивании пробирки бульон не мутнеет, осадок разбивается на мелкие хлопья. Мазки из бульонной культуры окрашивают по Граму и исследуют под микроскопом. В мазках обнаруживают цепочки, состоящие из сибиреязвенных палочек.

На плотных питательных средах возбудитель сибирской язвы образует плоские матово-серые шероховатые колонии. Центр колоний затемнен, периферия бахромчатая, с локонообразными отростками.

Для биопробы используют лабораторных животных, восприимчивых к сибирской язве: белых мышей, кроликов, морских свинок. Исследуемый материал суспендируют в небольшом объеме 0,9%-го раствора хлорида натрия, вводят двум белым мышам в дозе 0,2. 0,5 мл под кожу спины ближе к корню хвоста или 0,5. 1,0 мл двум морским свинкам подкожно в область живота. За животными, зараженными суспензией из исходного материала или культурой возбудителя, наблюдают в течение 10 сут. Зараженные животные гибнут через 1. 3 сут, иногда позже. Трупы вскрывают, делают мазки и посевы на питательные среды из крови сердца, селезенки, печени, а также инфильтрата, образовавшегося на месте инъекции исследуемого материала.

Сроки исследований: микроскопического — в день поступления материала, бактериологического—до 3 сут, биологического (биопроба) — 10 сут.

Кожевенное сырье на сибирскую язву исследуют в реакции преципитации (РП). Перед ее постановкой свежий патологический материал предварительно выдерживают в термостате в течение 18. 20 ч, несвежий сразу экстрагируют горячим или холодным способом. При этом следует учитывать, что в экстрактах, полученных горячим способом, меньше преципитиногенов.

При горячем способе экстрагирования кусочки исследуемого материала (1. 2г) помещают в пробирку или колбу, заливают 0,9%-м раствором хлорида натрия в соотношении 1 : 10 и кипятят 30. 40 мин на водяной бане. При холодном кусочки материала (1. 2г) растирают в ступке с песком, переносят в колбу или баночку, заливают 0,9%-м фенолизированным раствором хлорида натрия в соотношении 1 : 10 и оставляют на 16. 18 ч при температуре 20 ± 2 °С.

Полученные экстракты фильтруют через асбестовую вату до ' прозрачности, при этом первые капли фильтрата удаляют.

РП ставят методом наслаивания или подслаивания.

При наслаивании в уленгутовскую пробирку наливают 0,2. 0,3 мл прозрачной преципитирующей сибиреязвенной сыворотки, затем осторожно наслаивают равное количество экстракта так, чтобы между. Компонентами образовалась ясно выраженная граница (тонкая прямая линия). При подслаивании в уленгутовскую пробирку сначала вносят 0,2. 0,3 мл экстракта, затем под него осторожно пастеровской пипеткой подслаивают равное количество преципитирующей сыворотки.

Если при соединении компонентов резко выраженная граница между ними отсутствует, опыт повторяют. Одновременно ставят контроль преципитируюшей сибиреязвенной сыворотки со стандартным сибиреязвенным антигеном: при положительной реакции в течение 1. 2 мин после соединения компонентов появляется характерное кольцо.

РП считают положительной, если через 1. 2 мин и не позже чем через 15 мин на границе между компонентами появилось тонкое беловатое кольцо.

При отрицательном результате РП с экстрактом, полученным горячим способом, опыт повторяют с экстрактом, полученным холодным способом.

Последнее изменение этой страницы: 2017-01-28; Нарушение авторского права страницы

Читайте также: