Инструкция по бактериологическому и серологическому исследованиям при коклюше

Приложение 1
к приказу министерства здравоохранения
Нижегородской области и
Управления Нижегородской области
от 19 декабря 2012 г. N 3012/58-о

Порядок
взятия и транспортировки материала для бактериологической диагностики коклюша

1. Бактериологическое обследование с диагностической целью проводят в ранние сроки заболевания (но не позднее 3 недели) двукратно ежедневно или через день. Обследование при первичном обращении проводится до назначения лечения.

2. При госпитализации с подозрением на коклюш 2-кратное бактериологическое обследование на наличие возбудителя коклюша проводят в первые 3 дня поступления в стационар независимо от назначения антибиотиков.

3. Взятие материала может проводиться двумя способами: "кашлевыми пластинками" и заднеглоточными тампонами.

4. Забор материала заднеглоточными тампонами:

4.1. Взятие материала для исследования (носоглоточная слизь) осуществляется натощак или не ранее, чем через 2 часа после еды, а также до применения полоскания или других видов лечения.

4.2. Используются 2 заднеглоточных тампона одновременно - сухой, который сразу засевается на питательную среду, и увлажненный фосфатным буфером с углем (согласно инструкции по бактериологическому и серологическому исследованиям при коклюше и паракоклюше (1984)), который доставляется в бактериологическую лабораторию в течение 3 часов, где засевается на питательные среды.

4.3. Техника забора материала: шпателем, находящимся в левой руке, фиксируют корень языка, правой рукой вводят тампон в полость рта за корень языка, не касаясь слизистой языка, щек, миндалин. Кончиком тампона и его выпуклой частью касаются задней стенки глотки, делая два штриха справа - налево. Тампон извлекают из полости рта, также не касаясь слизистой языка, щек, миндалин.

4.4. Коммерческие транспортные среды для взятия материала на коклюш не применяются.

4.5. При заборе материала на коклюш можно использовать стерильные сухие ватные тампоны коммерческие (на деревянных палочках, не использовать дакроновые тампоны) или приготовленных # в лабораторных условиях с учетом требований инструкции по бактериологическому и серологическому исследованиям при коклюше и паракоклюше (1984). Тампоны должны иметь форму "капли", а не "веретена".

4.6. При невозможности доставки исследуемого материала в баклабораторию в установленные сроки, т.е. не позднее 3-х часов (удаленные территории, проведение обследования во второй половине дня, праздники), материал засевается на питательные среды и термостатируется при температуре 37°C до утра следующего дня, но не более 1 суток.

5. Метод "кашлевых пластинок":

5.1. Используют только с диагностической целью при наличии кашля. У детей грудного возраста взятие материала рекомендуется брать заднеглоточным тампоном.

5.2. Взятие материала "кашлевыми пластинками" производят на 2 чашки с питательной средой КУА. Во время приступа кашля левой рукой снимают крышку чашки, а правой подносят ее ко рту на расстоянии 10 - 12 см так, чтобы капельки слизи из дыхательных путей попали на поверхность среды. Чашку в таком положении держат некоторое время (в течение 6 - 8 кашлевых толчков). При непродолжительном покашливании можно эту чашку поднести повторно. На питательную среду не должны попадать слюна, рвотные массы, мокрота. Затем чашку с питательной средой закрывают крышкой и доставляют в лабораторию.

5.3. При невозможности доставки исследуемого материала в баклабораторию, материал помещается в термостат при температуре 37°C до утра следующего дня, но не более 1 суток.

6. Для обеспечения биологической безопасности и поддержания оптимальной температуры (+4°C - +37°C) в условиях термоконтейнеров осуществляется транспортировка:

- чашек с питательными средами и пробирок с увлажненными тампонами как из лаборатории к месту хранения, так и врачом к пациенту

- материал для исследования как на чашках, так и на тампонах в пробирках к месту посева.

7. В холодное время необходимо принимать меры по предотвращению замораживания материала (использование грелок).

8. В направлении материала на исследование указывается: наименование учреждения, направившего материал на исследование, фамилия, имя, отчество, возраст и домашний адрес обследуемого, причина обследования, дата заболевания, дата и время взятия материала, число обследований, наименование материала и метод его забора, подпись лица, взявшего материал.

9. Ответ при бактериологическом исследовании на коклюш выдается не ранее 5 суток.

> Порядок взятия и транспортировки материала для ПЦР-исследования на коклюш, паракоклюш и бронхосептикоз

Содержание Приказ Министерства здравоохранения Нижегородской области и Управления Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей.

Откройте актуальную версию документа прямо сейчас или получите полный доступ к системе ГАРАНТ на 3 дня бесплатно!

Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.

Комплексное исследование, направленное на диагностику коклюша и паракоклюша, а также на оценку эффективности вакцинации против коклюша.

Возбудители коклюша, паракоклюша; комплексное обследование.

Синонимы английские

Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis; comprehensive examination.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь, мазок из носоглотки, мазок из зева (ротоглотки).

Как правильно подготовиться к исследованию?

• За 3-4 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) не употреблять пищу, не пить, не чистить зубы, не полоскать рот/горло, не жевать жевательную резинку, не курить. За 3-4 часа до взятия мазков из носа не закапывать капли/спреи и не промывать нос. Взятие мазков оптимально выполнять утром, сразу после ночного сна.

Общая информация об исследовании

Коклюш представляет собой острую антропонозную бактериальную инфекцию. Возбудитель – Bordetella pertussis (палочка Борде - Жонгу), мелкая неподвижная грамотрицательная коккобацилла, строгий аэроб. Инфекция передается воздушно-капельным путём. Источником инфекции является больной человек с любой формой инфекционного процесса.

В течении заболевания выделяют следующие периоды: инкубационный период (длительностью от нескольких дней до двух недель), катаральный (от 5-8 до 11-14 дней), пароксизмальный, или спазматический (2-8 недель), разрешения (2-4 недели) и реконвалесценции (2-6 месяцев). Наиболее характерными для коклюша являются проявления, характеризующие пароксизмальный период заболевания. К ним относятся сухой спастический кашель, цианоз носогубного треугольника, акроцианоз, возможна рвота, лихорадка, слабость, в гемограмме – лейкоцитоз, лимфоцитоз. Следует отметить, что наиболее тяжело заболевание протекает у детей раннего возраста, возможно развитие осложнений со стороны бронхолегочной и нервной систем. У взрослых и лиц после вакцинации коклюш чаще протекает в легкой, атипичной форме, как правило, без осложнений.

Паракоклюш – это острая бактериальная инфекция респираторного тракта, поражающая детей и взрослых. Возбудителем инфекции является аэробная палочка Bordetella parapertussis. Клинические проявления данного заболевания схожи с картиной коклюша, характерна более стертая смена периодов, легкое течение, редкое развитие осложнений, преимущественно у детей.

Диагностика коклюша и паракоклюша основана на клинико-эпидемиологических данных, результатах изменений в клиническом анализе крови и подтверждается лабораторными методами. В клинической лабораторной диагностике данных заболеваний применяют несколько методов: бактериологический метод для выявления роста колоний возбудителей коклюша/паракоклюша; серологический метод, направленный на определение суммарных антител к данным возбудителям; метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) – для выявления генетического материала возбудителя коклюша.

Бактериологическое обследование является первым этапом диагностики, но позволяет выявлять возбудителей только на ранних сроках заболевания, в первые 2-3 недели.

Метод ПЦР является высокоэффективным в диагностике коклюша, позволяет выявлять фрагменты ДНК возбудителя B. pertussis в исследуемом биоматериале, обладает высокой диагностической специфичностью, достигающей 100 %. Использование данного метода рекомендовано в первые три недели от начала клинических проявлений заболевания, то есть в катаральный и ранний пароксизмальный период. В более поздние сроки заболевания диагностическая чувствительность метода падает. Следует отметить, что в отличие от других лабораторных методов ПЦР эффективна на фоне лечения антибактериальными препаратами. Также она используется при обследовании детей раннего возраста, в отличие от более старших детей и взрослых, когда возможно возрастание числа ложноположительных результатов. У лиц, вакцинированных против коклюша, положительный результат данного метода может свидетельствовать о транзиторном носительстве патогена, а не об активной форме заболевания.

Серологическое обследование позволяет выявлять в сыворотке крови специфические антитела, направленные к антигенам возбудителей B. pertussis и B. parapertussis. Они могут быть обнаружены с помощью реакции непрямой гемагглютинации (РНГА).

При выборе РНГА в качестве диагностического теста при подозрении на коклюш и паракоклюш следует учитывать клинический период заболевания, возраст пациента и наличие предшествующей вакцинации. Для подтверждения диагноза необходимо определение нарастания титра антител в четыре и более раза в парных сыворотках, взятых с интервалом 10-14 дней. Реакцию ставят параллельно с коклюшным и паракоклюшным антигеном. Серологическое обследование рекомендовано применять в период 3-6 недель от начала первых клинических симптомов заболевания, характеризующий пароксизмальный период коклюша. Данный метод не рекомендуется применять детям до 3 месяцев, так как иммунная система новорождённых в это время ещё незрелая и могут быть обнаружены материнские антитела в низких титрах. Также не рекомендуется проводить серологическое исследование лицам в течение 1 года после вакцинации против коклюша вследствие невозможности различить иммунный ответ на вакцинацию или на первичную инфекцию. Титр антител к B. pertussis может быть определен для оценки эффективности прививки против коклюша у детей.

Для чего используется исследование?

• Для комплексной лабораторной диагностики коклюша и паракоклюша.
• Для диагностики коклюша в первые три недели от начала заболевания, характеризующие катаральный и ранний пароксизмальный период, а также на фоне лечения антибактериальными препаратами.
• Для диагностики коклюша и паракоклюша в спазматический (пароксизмальный) период заболевания.
• Для оценки эффективности вакцинации против коклюша.

Когда назначается исследование?

• При клинических проявлениях коклюша/паракоклюша: сухой спастический кашель, сопровождающийся глубоким свистящим вдохом, рвотой, цианозом носогубного треугольника, акроцианоз, лихорадка, слабость, насморк, слезотечение.
• При обследовании лиц, находившихся в тесном контакте с больными коклюшем/паракоклюшем.
• При оценке эффективности вакцинации против коклюша.

Что означают результаты?

1. anti-Bordetella pertussis

Титр: после вакцинации: 1:160.

2. anti-Bordetella parapertussis

Титр: Bordetella pertussis, ДНК

Результат: не обнаружено.

Причины положительного результата:

• коклюш;
• паракоклюш;
• транзиторное носительство;
• иммунный ответ после вакцинации.

Причины отрицательного результата:

• отсутствие коклюша/паракоклюша;
• неэффективная вакцинация против коклюша;
• снижение иммунологического ответа после вакцинации;
• ложноотрицательные результаты.

Что может влиять на результат?

• Клинический период заболевания, возраст пациента, наличие предшествующей вакцинации;
• применение антибактериальных препаратов в зависимости от стадии (периода) заболевания и применяемого метода лабораторной диагностики;
• особенности иммунного ответа у новорождённых детей;
• предшествующая вакцинация.



• При интерпретации результатов обследования необходимо учитывать методы диагностики, возраст пациентов, клиническую стадию (период) заболевания, предшествующую вакцинацию.
• Для комплексной оценки полученных результатов их необходимо сопоставлять с эпидемиологическими, клиническими и другими лабораторными данными.

• Посев на Bordetella pertussis/parapertussis
• Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с микроскопией мазка крови при выявлении патологических изменений)

Кто назначает исследование?

Инфекционист, педиатр, пульмонолог, оториноларинголог, терапевт, врач общей практики.

ВНИМАНИЕ! САЙТ ЛЕКЦИИ.ОРГ проводит недельный опрос. ПРИМИТЕ УЧАСТИЕ. ВСЕГО 1 МИНУТА.

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: мокрота, слизь из носоглотки. Материал берут стерильным ватным тампоном из носоглотки больного ребенка. Для взятия материала у малень­ких детей тампон, приготовленный на тонкой эластичной про­волоке, вводят через нос.

МЕТОДЫДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование(схема 14.2.2). Бактерио-скопический метод как таковой при диагностике коклюша не применяется. Для быстрого обнаружения и идентификации Bordetella pertussis используют иммунофлюоресцентный метод (см. ниже).

Бактериологическое исследование.Основной метод лабора­торной диагностики коклюша. Материал для посева берут с помощью носоглоточного тампона или методом "кашлевых пластинок". Для этого в момент появления кашля открытую чашку Петри с питательной средой подносят ко рту ребенка и держат в течение 6—8 кашлевых толчков. Правильное и раннее взятие материала позволяет выделить возбудителя в начальном периоде болезни от 80—90 % больных. Материал засевают на КУА или кровяные среды — картофельно-глицериновый кро­вяной агар (среда Борде—Жангу) и молочно-кровяной агар. В питательные среды добавляют пенициллин для угнетения роста посторонней микрофлоры. Колонии B.pertussis на указан­ных средах обычно появляются через 48—72 ч культивирова­ния. В.parapertussis — несколько раньше: через 24—72 ч. Борде-теллы образуют мелкие (диаметром около 1 мм) выпуклые влажные блестящие колонии. На КУА колонии имеют серова­то-кремовый цвет, а на среде Борде—Жангу приобретают жем­чужный или ртутный блеск. Колонии В.parapertussis более круп­ные. На среде Борде—Жангу и молочно-кровяном агаре они образуют ограниченную зону гемолиза. Из колоний, выросших на чашках, готовят мазки, окрашивают их по методу Грама и микроскопируют. При наличии в мазках овоидных грамотри-цательных палочек ставят ориентировочную реакцию агглюти­нации с коклюшной и паракоклюшной сыворотками. Затем подозрительные колонии пересевают в пробирки для дальней­шего изучения чистых культур.

Идентификацию выделенной культуры производят на осно­вании комплексного изучения морфологических, культураль-ных, биохимических и серологических свойств (табл. 14.2.2). В отличие от других бордетелл B.pertussis не растет на простом питательном агаре и не изменяет цвета специальных питатель­ных сред.

Таблица 14.2.2. Дифференциальные признаки Bordetella spp.

Признак

В. per­tussis

В. parapertussis

В. bron- chisep- tica

на агаре (простом) — + +

окраска
на агаре с тирозином + +

Ярко-коричневая окраска Изменение окраски:

КУА— Буро-коричневая —

кровяного агара — Потемнение —

родового (общего) 7 7 7

видового (специфического) 1 14 12

Условные обозначения: (+) — наличие признака; (—) — отсутст­вие признака; цифрами обозначены номера антигенов.

Для определения уреазы в агглютинационные пробирки вносят 0,3 мл 2 % раствора мочевины, 0,3 мл густой суспензии испытуемой культуры и 2—3 капли 0,1 % спиртового раствора фенолфталеина. В положительном случае через 20—30 мин появляется малиновое окрашивание, указывающее на расщеп­ление мочевины уреазой.

Серологическую идентификацию бордетелл, дифференциа­цию видов и определение сероваров (серотипирование) прово­дят в реакции агглютинации с адсорбированными факторными сыворотками. При этом исходят из того, что антиген (фактор) 7 является родовым, а антиген (фактор) 1 присущ только В.рег-tussis, 14 — В.parapertussis и 12 — B.bronchiseptica.

При бактериологической диагностике коклюша может воз­никнуть необходимость дифференциации бордетелл от Haemo­philus influenzae. H.influenzae часто встречается на слизистой оболочке дыхательных путей и вызывает пневмонии и другие воспалительные заболевания дыхательных путей. В отличие от бордетелл H.influenzae растет только на кровяных питательных средах — кровяном агаре, "шоколадном" агаре Левинталя, со­держащих гемин и коэнзим дегидрогеназы. Бактериологичес­кое исследование продолжается не менее 5 дней.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие имолекулярно-биологические исследования. Иммуно­химические исследования. Метод ИФ: тампоном делают два мазка, высушивают их на воздухе и фиксируют на пламени. Один мазок обрабатывают флюоресцирующими противокок-

люшными антителами, другой — паракоклюшными антитела­ми. Препараты микроскопируют в люминесцентном микроско­пе, просматривая не менее 50 полей зрения. О положительном результате свидетельствует обнаружение темных бактериаль­ных клеток с четким светящимся венчиком.

Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих моле­кул можно поставить предварительный диагноз.

Серодиагностика.Реакции агглютинации и РСК применяют в основном для ретроспективного подтверждения диагноза и дифференциальной диагностики атипичных форм коклюша. Агглютинины в крови больных появляются на 3—4-й неделе заболевания в титрах 1:20 и выше. В условиях массовой вак­цинации детей против коклюша диагностическое значение имеет нарастание титра антител в динамике болезни, поэтому реакцию ставят повторно через 4—5 дней.

• Микробиологическая диагностика дифтерии

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: мазки со слизистой оболочки зева и носа, пленки с поверхности миндалин и но­соглотки. Материал берут двумя ватными стерильными тампо­нами, один из которых используют для приготовления мазков, другой — для посева.

Бактериоскопическое исследование(схема 14.2.3). Мазки ок­рашивают по методу Грама, метиленовым синим по Леффлеру, по Нейссеру. Для Corynebacterium diphtheriae характерно нали­чие полярно расположенных зерен волютина и расположение в виде буквы "V" (см. рис. 2.2.4). Corynebacterium pseudodiphth-eriae и дифтероиды не имеют зерен волютина или содержат их не на концах, а по длине палочки. Кроме того, сами бактерии располагаются в виде частокола. Применение люминесцентной микроскопии позволяет повысить эффективность исследова­ния. При этом C.diphtheriae можно отличить от других корине-бактерий по коричнево-красному свечению зерен волютина, которое они приобретают после окраски флюорохромом кори-фосфином. Цитоплазма этих бактерий дает зеленое или желтое свечение. Однако C.diphtheriae часто изменяют свою морфоло­гию, в частности при санации зева антибиотиками. В настоя­щее время бактериоскопическое исследование при дифтерии практически не используют в связи с его низкой надежностью (высокой частотой ложноположительных и ложноотрицатель-ных результатов).

Бактериологическое исследование.Является ведущим мето-

дом диагностики дифтерии. Материал засевают на кровяной агар и элективные питательные среды, содержащие теллурит: среда Клауберга (питательный агар с теллуритом натрия, гли­церином и дефибринированной кровью) и др. На средах с теллуритом задерживается рост кокков и другой микрофлоры зева, что способствует размножению возбудителя дифтерии. На теллуритовой среде C.diphtheriae образует черные колонии (рис. 14.2.1; на вклейке) за счет восстановления теллурита (биовар gravis формирует колонии серовато-черного цвета с радиальной исчерченностью поверхности, напоминающие цве­ток маргаритки, биовар mitis — круглые выпуклые колонии черного цвета). Типичные колонии, представленные грамполо-жительными палочками булавовидной формы с характерным расположением, содержащими зерна волютина, пересевают на кровяной агар для получения чистой культуры.

Для подтверждения диагноза дифтерии в первую очередь необходимо установить токсигенность выделенной культуры (способность к продукции дифтерийного токсина). Наличие токсина определяют с помощью различных серологических реакций (преципитации в агаре, ИФА и др.). Применяют также метод ПЦР, позволяющий обнаружить присутствие у выделен­ных бактерий fox-гена, контролирующего синтез дифтерийного токсина. До последнего времени общепринятым методом оп­ределения токсигенности являлась реакция преципитации в агаре с антитоксической противодифтерийной сывороткой. Методы ИФА и ПЦР, разработанные в последние годы, явля­ются более чувствительными и позволяют получить результат в течение 3—5 ч.

Определение токсигенности в реакции преципитации: в чашку Петри с питательным агаром, содержащим 15—20 % лошадиной сыворотки, 0,3 % мальтозы и 0,03 % цистина, кладут полоску фильтровальной бумаги, пропитанную анти­токсической противодифтерийной сывороткой, содержащей 5000 АЕ/мл. Чашку подсушивают при 37 °С в течение 30 мин и засевают исследуемые культуры в виде перпендикулярных к бумаге штрихов на расстоянии 0,6—0,8 см от края бумаги. В качестве контроля используют заведомо токсигенную куль­туру. Посевы инкубируют при 37 "С до следующего дня. При размножении токсигенной культуры в месте соединения ток­сина с антитоксическими антителами в плотной питательной среде образуется преципитат в виде белых линий — "усов" (см. рис. 10.1.7).

Выделенную культуру идентифицируют и дифференцируют от сходных с ней непатогенных коринебактерий по морфоло­гическим особенностям, культуральным и биохимическим признакам: пробы на цистиназу, уреазу, ферментация углево­дов и др. (табл. 14.2.3). В случае выделения нетоксигенной культуры ставят дополнительную реакцию агглютинации с

Таблица 14.2.3. Биологические свойства коринебактерий

C.diphtheriae биовар grav/s + биовар mitts + C.xerosis ± C.pseudodiphtheriticum ±

__ + + + + _ +

Условные обозначения: (+) — 85—100 % штаммов положитель­ны, (±) — 16—84 % штаммов положительны; (—) — отсутствие признака.

противодифтерийной сывороткой с целью выявления видоспе-цифического антигена С. diphtheriae.

Для определения цистиназы (проба Пизу) в столбик питательного агара с цистином уколом засевают исследуемую культуру. Посевы инкубируют при 37 "С до следующего дня. C.diphtheriae вызывают почернение среды по ходу посева (в ре­зультате образования сульфида свинца), вокруг которого появ­ляется зона коричневого цвета, а на глубине 1 см от поверх­ности агара в среде образуется коричневое "облачко".

Для определения уреазы (проба Закса) готовят спирто­вой раствор мочевины и раствор индикатора — фенолового красного, которые перед употреблением смешивают в соотно­шении 1:9 и разливают по 1—2 мл в агглютинационные про­бирки. Затем исследуемые бактерии петлей вносят и растирают по стенке пробирки. После 20—30-минутной инкубации при 37 "С наблюдают расщепление мочевины уреазой, в результате чего среда приобретает красный цвет.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования.Биохими­ческие и молекулярно-биологические исследова­ния. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения tax-гена C.diphtheriae с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.

• Диагностические, профилактические и лечебные препараты

Преципитирующие антименингококковые сыворотки.Приме­няют с диагностической целью для обнаружения менингокок-кового антигена в спинномозговой жидкости (методом встреч­ного иммуноэлектрофореза).

Методические указания для студентов к практическому занятию № 35.

Тема занятия:Микробиологическая диагностика бордетеллиозов и клебсиеллезов.

Цель:Изучение методов микробиологической диагностики, терапии и профилактики коклюша и заболеваний, вызванных клебсиеллами.

Модуль 2. Специальная, клиническая и экологическая микробиология.

Содержательный модуль 10. Патогенные прокариоты и эукариоты.

Тема 5: Микробиологическая диагностика бордотеллиозов и клебсиеллезов.

Актуальность темы:

Возбудитель коклюша

Коклюш - инфекционная болезнь, вызываемая Bordetella pertussis, характеризующаяся приступами спазматического кашля. Наблюдается преимущественно у детей дошкольного возраста. Возбудитель коклюша был открыт в 1906 г. Ж. Борде и О. Жангу.

Таксономия. Возбудитель коклюша относится к отделу Gracilicutes, роду Bordetella.

Морфология и тинкториальные свойства. В. pertussis . мелкая овоидная грамотрицательная палочка с закругленными концами длиной 0,5-1,2 мкм. Спор и жгутиков не имеет, образует микрокапсулу.

Культивирование. В. pertussis - строгий аэроб, оптимальная температура для роста 37 0 С, рН среды 7,2; очень требовательна к питательным средам, растет на средах Борде-Жангу (картофельно-глицериновом агаре с добавлением крови), на которой образуются колонии, похожие на капельки ртути, и казеиново-угольном агаре (КУА), образуя серовато-кремовые колонии.

Ферментативная активность. В. pertussis биохимически инертна.

Антигенная структура. Бордетеллы имеют О-антиген, состоящий из 14 компонентов (факторов). В. pertussis обладает обязательными факторами 1, 7, а также 2, 3, 4, 5, 6 в различных комбинациях. В зависимости от их сочетания различают серова-ры В. pertussis.

Факторы патогенности. В. pertussis - эндотоксин, вызывающий лихорадку, белковый токсин, обладающий антифагоцитарной активностью и стимулирующий лимфоцитоз, ферменты агрессии, повышающие сосудистую проницаемость, обладающие гистамин-сенсибилизирующим действием, вызывающие гибель эпителиальных клеток. В адгезии бактерий принимают участие гемагглютинин, пили и белки наружной мембраны.

Резистентность. Возбудитель коклюша очень неустойчив в окружающей среде.

Восприимчивость животных. При интраназальном введении культуры В. pertussis белым мышам развивается пневмония.

Эпидемиология. Коклюш - антропонозное заболевание; источником инфекции являются больные люди (особенно опасные в начальной стадии болезни) и носители. Передача инфекции осуществляется воздушно-капельным путем. Заболевание встречается повсеместно. Болеют чаще дети дошкольного возраста. Особенно восприимчивы к коклюшу грудные дети, для которых он наиболее опасен. Осенью и зимой наблюдается повышение заболеваемости.

Патогенез. Входными воротами инфекции являются верхние дыхательные пути, где развивается катаральное воспаление. В результате постоянного раздражения токсином рецепторов дыхательных путей появляется кашель, в дальнейшем в дыхательном центре образуется очаг возбуждения и приступы кашля могут быть вызваны и неспецифическими раздражителями. В возникновении приступов кашля имеет также значение сенсибилизация организма к токсинам В. pertussis.

Клиническая картина. Инкубационный период составляет 2-14 дней. Появляются недомогание, невысокая температура тела, небольшой кашель, насморк. Позднее начинаются приступы спазматического кашля, заканчивающиеся выделением мокроты. Таких приступов может быть от 5 до 50 в сутки. Заболевание продолжается до 2 мес. Различают легкую, среднетяжелую и тяжелую формы коклюша.

Иммунитет. После перенесенного заболевания вырабатывается стойкий иммунитет, который сохраняется на протяжении всей жизни.

Микробиологическая диагностика. Материалом для исследования является слизь из верхних дыхательных путей. Основной метод диагностики бактериологический. Для ретроспективной диагностики применяют серологический метод (РА, РСК, РИГА).

Лечение. При тяжелых формах коклюша назначают антибиотики, нормальный гомологичный иммуноглобулин. Рекомендуются антигистаминные препараты, холодный свежий воздух.

Профилактика. Для специфической профилактики коклюша применяют адсорбированную коклюшно-дифтерийно-столбнячную вакцину (АКДС). Вводят ее детям начиная с 4 мес. Детям до 1 года и непривитым при контакте с больным вводят нормальный человеческий иммуноглобулин.

Возбудитель паракоклюша - Bordetella parapertussis - вызывает сходное с коклюшем заболевание воздухоносных путей у человека, но легче протекающее. По морфологическим признакам и условиям культивирования напоминает возбудитель коклюша.

Микробиологическое исследование при коклюше и паракоклюше

Мокрота, слизь из носоглотки

Сыворотка крови

Бактериоскопическое исследование

Бактериологическое исследование

Серодиагностика

Ответ

Ответ

Характер колоний

Мазок, окраска по Граму

3 этап

Рост на питательном агаре (пигмент)

Реакция агглютинации

Проба на уреазу

Окончательный ответ

Клебсиеллы

Бактерии получили название в честь Э. Клебса, который впервые описал микроб в 1875 г. Род Klebsiella относится к семейству Enterobacteriaceae, включает в себя 4 вида: K. pneumoniae, K. oxytoca, K. planticola, K. terrigena, которые отличаются по биохимическим свойствам.

Морфология и тинкториальные свойства. Клебсиеллы – не образующие спор неподвижные палочки, располагающиеся единично, парами или короткой цепочкой. Обычно они локализованы в капсуле, которая является характерным морфологическим признаком.

Культивирование. Клебсиеллы хорошо растут на простых питательных средах. На поверхности плотных питательных сред образуют куполообразные слизистые колонии. В жидких средах вызывают интенсивное помутнение.

Антигенная структура. Клебсиеллы имеют соматические О-антигены (более 10 серогрупп) и более 80 вариантов капсульных К-антигенов.

К факторам патогенности относятся: капсула полисахаридной природы, обладающая антифагоцитарной активностью; термостабильный и термолябильный энтеротоксины.

Экология и распространение. K. pneumoniae входит в состав факультативной микрофлоры кишечника, верхних дыхательных путей, влагалища; также обнаруживается на коже и слизистых оболочках. Клебсиеллы устойчивы к факторам окружающей среды благодаря наличию капсулы и могут в течение длительного времени сохраняться в почве, воде, помещениях. Клебсиеллы погибают при температуре 65 0 С через 60 мин, в растворах обычных дезинфицирующих веществ.

Патогенез и заболевание у человека. K. pneumoniae или палочка Фридлендера является возбудителем неспецифических инфекций дыхательных путей (бронхитов, пневмоний), органов мочевыводящей системы, пищевой токсикоинфекции. Этот микроб может также вызывать гнойные послеродовые осложнения, неонатальную инфекцию, которая проявляется в виде пневмоний у новорожденных, кишечной инфекции и токсико-септических состояний, заканчивающихся летальным исходом. Кроме того, клебсиеллы пневмонии могут вызывать менингит, сепсис, цистит и другие заболевания. Нередко штаммы клебсиелл являются возбудителями внутрибольничных инфекций.

K. ozaenae вызывает поражение слизистой оболочки носа и придаточных пазух, сопровождающееся выделением зловонного секрета.

K. oxytoca вызывает ВБИ в урологической клинике.

Клебсиеллы риносклеромы (K. rhinoscleromatis) – поражают слизистую оболочку носоглотки, гортани, трахеи, бронхов. В тканях образуются гранулемы с последующим рубцеванием. Болезнь протекает хронически. Возможны летальные исходы.

Иммунитет. Гуморальный иммунный ответ защитной активностью не обладает. В защите от инфекции главная роль принадлежит фагоцитозу, опсонизированному специфическими антителами клебсиелл.

Микробиологическая диагностика. Применяется бактериологический метод исследования, который предусматривает выделение чистой культуры возбудителя из мокроты, мочи, испражнений, крови, гноя, в зависимости от локализации процесса, путем посева исследуемого материала на лактозосодержащие дифференциальные питательные среды с последующим выделением чистой культуры возбудителя и его идентификации до вида и подвида. Идентификацию клебсиелл проводят по морфологическим, культуральным, биохимическим и серологическим признакам в РСК с сыворотками больных.

Профилактика и лечение. Средств специфической профилактики не существует. Профилактика осуществляется путем раннего выявления больных, изоляции их от здоровых людей. Для лечения используют клебсиеллезный бактериофаг и антибиотики широкого спектра действия, чему предшествует определение антибиотикограммы.

· Выучить дифференциацию возбудителя коклюша и паракоклюша по морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам.

· Выучить морфологию, культуральные, биохимические свойства клебсиелл.

· Выучить источники, пути передачи и некоторые клинические проявление бордотеллиозов и клебсиеллезов.

· Изучить методы микробиологической диагностики.

· Трактовать результаты микроскопического исследования.

· Ознакомиться с методами профилактики и специфической терапии.

Уметь:

· Забирать материал для исследования от больных

· Выделить чистую культуру

· Трактовать результаты микроскопического исследования

Теоретические вопросы:

· Патогенность для человека и животных. Факторы патогенности, токсины.

· Патогенез заболевания у людей, иммунитет.

· Специфическая профилактика и лечение

Практические задания, которые выполняются на занятии:

1. Микроскопия демонстрационных препаратов.

2. Изучение коллекции питательных сред.

3. Изучение биопрепаратов дл лабораторной диагностики и специфической профилактики коклюша.

4. Зарисовывание демонстрационных микропрепаратов в протокол.

5. Разбор схемы лабораторной диагностики коклюша и клебсиеллезной инфекции.

6. Оформление протокола.

Литература:

2. Тимаков В.Д., ЛевашевВ.С., Борисов Л.Б. Микробиология / Учебник.-2-е изд., перераб. и доп.- М.:Медицина, 1983,-512с.

3. Пяткин К.Д. Кривошеин Ю.С. Микробиология с вирусологией и иммунологией. - Киев: Вища школа, 1992. - 431с.

4. Медицинская микробиология / Под редакцией В.И. Покровского. -М.:ГЕОТАР-МЕД, 2001.-768с.

6. Черкес Ф.К., Богоявленская Л.Б., Бельскан Н.А. Микробиология. /Под ред. Ф.К. Черкес. – М.: Медицина, 1986. – 512 с.

7. Конспект лекции.

Дополнительная литература:

2. Тiтов М.В. Iнфекцiйнi хвороби. - К., 1995. – 321с.

3. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни. - М.: Медицина, 1990. - 559 с.

5. Павлович С.А. Медицинская микробиология в графах: Учеб. пособие для мед. ин-тов. – Мн.: Выш. шк., 1986. – 255 с.